杜仲多糖锶络合物及其制备方法和应用
阅读说明：本技术 杜仲多糖锶络合物及其制备方法和应用 (Eucommia polysaccharide strontium complex and preparation method and application thereof ) 是由 唐斌 邓雨晴 马粉波 彭颖 贺文琪 李思敬 于 2019-08-02 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种杜仲多糖锶络合物及其制备方法和应用。一种杜仲多糖锶络合物的制备方法,包括如下步骤：在控制pH为9～11的条件下,将杜仲多糖和水溶性锶盐在水中反应,得到反应液；在反应液中加入有机沉淀剂,然后静置反应,再经固液分离,收集沉淀,得到杜仲多糖络合物。上述杜仲多糖锶络合物的毒性较小且具有较好的骨修复和关节病防治效果。(The invention relates to an eucommia polysaccharide strontium complex and a preparation method and application thereof. A preparation method of eucommia polysaccharide strontium complex comprises the following steps: reacting eucommia ulmoides polysaccharide and water-soluble strontium salt in water under the condition that the pH value is controlled to be 9-11 to obtain a reaction solution; adding an organic precipitator into the reaction solution, standing for reaction, performing solid-liquid separation, and collecting precipitate to obtain the eucommia ulmoides polysaccharide complex. The eucommia polysaccharide strontium complex has low toxicity and good bone repair and joint disease prevention and treatment effects.)
技术领域
本发明涉及生物医药领域，特别是涉及一种杜仲多糖锶络合物及其制备方法和应用。
背景技术
锶对骨骼的形成有重要的作用，锶能促进成骨细胞和多功能干细胞的增殖、改善骨代谢等，然而，游离的锶离子在体内具有毒性，对锶的应用很难得到发展。
发明内容
基于此，有必要提供一种毒性较小且具有较好的骨修复和关节病防治效果的杜仲多糖锶络合物的制备方法。
此外，还提供一种杜仲多糖锶络合物及其应用。
一种杜仲多糖锶络合物的制备方法，包括如下步骤：
在控制pH为9～11的条件下，将杜仲多糖和水溶性锶盐在水中反应，得到反应液；及
在所述反应液中加入有机沉淀剂，然后静置反应，再经固液分离，收集沉淀，得到杜仲多糖络合物。
在其中一个实施例中，所述杜仲多糖与所述水溶性锶盐中的锶元素的质量摩尔比为60g:1mol～250g:1mol。
在其中一个实施例中，所述在控制pH为9～11的条件下，将杜仲多糖和水溶性锶盐在水中反应的步骤包括：
将所述杜仲多糖和所述水溶性锶盐分别溶解在水中，得到杜仲多糖的水溶液和水溶性锶盐的水溶液；在持续搅拌和控制pH为9～11的条件下，向所述杜仲多糖的水溶液中加入所述水溶性锶盐的水溶液，然后继续在pH为9～11的条件下搅拌反应1小时以上。
在其中一个实施例中，所述杜仲多糖的水溶液的浓度为0.5g/mL～1.5g/mL；及/或，所述水溶性锶盐的水溶液中的锶元素的浓度为1.5mol/L～2mol/L；及/或，所述有机沉淀剂与所述反应液的体积比为2:1～5:1。
在其中一个实施例中，所述水溶性锶盐为氯化锶；及/或，所述有机沉淀剂为无水丙酮或无水乙醇。
在其中一个实施例中，所述静置反应的时间为24小时以上。
在其中一个实施例中，所述控制pH为9～11的条件下，将杜仲多糖和水溶性锶盐在水中反应的步骤中，使用氢氧化钠作为pH调节剂。
在其中一个实施例中，所述将杜仲多糖和水溶性锶盐在水中反应的步骤是在10℃～40℃下进行的。
在其中一个实施例中，还包括使用乙醇清洗所述沉淀的步骤。
在其中一个实施例中，所述使用乙醇清洗所述沉淀步骤包括：依次使用不同浓度的乙醇清洗所述沉淀，再将所述沉淀干燥。
上述杜仲多糖锶络合物的制备方法制备得到的杜仲多糖锶络合物。
上述杜仲多糖络合物在制备骨修复材料中的应用。
实验证明：上述杜仲多糖锶络合物的制备方法通过按照上述步骤能够制备得到具有较好的骨修复和关节病防治效果的杜仲多糖锶络合物，且相对于游离的锶离子，杜仲多糖锶络合物具有较小的毒性。
附图说明
图1为一实施方式的杜仲多糖络合物的制备方法的流程图；
图2为实施例1的产物和对比例3的杜仲多糖的XRD图；
图3为实施例1得到的产物和对比例3的杜仲多糖的红外光谱图；
图4为实施例1的产物的扫描电镜图；
图5为对比例3的杜仲多糖的扫描电镜图；
图6为巨噬细胞分别在实施例1的杜仲多糖锶络合物配制的培养液以及对照实验中的培养第三天的柱状图。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
如图1所示，一实施方式的杜仲多糖锶络合物的制备方法，包括如下步骤：
步骤S110：在控制pH为9～11的条件下，将杜仲多糖和水溶性锶盐在水中反应，得到反应液。
通过控制pH为9～11，以使反应能够顺利的进行，而生成杜仲多糖锶络合物。
具体地，杜仲多糖与水溶性锶盐中的锶元素的质量摩尔比为60g:1mol～250g:1mol。锶元素过多，会使得络合物中有大量锶离子的残留，而导致该材料在体内产生危害作用。若锶元素加少，则杜仲多糖则过量，络合反应不充分。
在其中一个实施例中，步骤S110包括：将杜仲多糖和水溶性锶盐分别溶解在水中，得到杜仲多糖的水溶液和水溶性锶盐的水溶液；在持续搅拌和控制pH为9～11的条件下，向杜仲多糖的水溶液中加入水溶性锶盐的水溶液，然后继续在pH为9～11的条件下搅拌反应1小时以上。优选地，将杜仲多糖和水溶性锶盐分别溶解在水中的步骤中使用的水为去离子水，以尽可能地减少杂质，提高产物的纯度。
可以理解，在其它实施例中，步骤S110的不限于为上述步骤，在其它实施例中，还可以将杜仲多糖的水溶液加入到水溶性锶盐的水溶液中；或者，直接将杜仲多糖和水溶性锶盐加入到水中搅拌反应。
在其中一个实施例中，杜仲多糖的水溶液的浓度为0.5g/mL～1.5g/mL，杜仲多糖的水溶液的浓度最大为1.5g/ml，而溶液浓度过小，会使得杜仲多糖的含量太少，导致络合反应难以发生。水溶性锶盐的水溶液中的锶元素的浓度为1.5mol/L～2mol/L，锶离子浓度过大，盐的水解程度减小，溶液中的氢离子增多，从而影响pH，导致生成的络合物不稳定。锶浓度过低，配位键的形成较少，反应不完全。
其中，水溶性锶盐可以为本领域常用的、能够溶解在水中的锶盐，例如氯化锶或硝酸锶，优选地，水溶性锶盐为氯化锶，氯化锶能够使制备得到杜仲多糖锶络合物中的副产物较少，纯度较高，且几乎无毒。
具体地，步骤S110中，使用氢氧化钠或氢氧化钾作为pH调节剂。可以理解，pH调节剂不限于为氢氧化钠，在其它实施例中，pH调节剂还可以为氨水等，然而杜仲多糖本身里含有钠和钾，用氢氧化钠或者氢氧化钾调解不会产生多余的杂质，而氨水可能会给体系引入新的杂质。在其中一个实施例中，pH调节剂为浓度为1.5mol/L～2mol/L的氢氧化钠水溶液或浓度为1.5mol/L～2mol/L的氢氧化钾水溶液。氢氧化钠和氢氧化钾均为强碱，浓度增大会造成杜仲多糖的局部氧化，浓度过低将造成加入的体积过大，使得反应体系中各物质的浓度降低过多，反应不易发生。
具体地，将杜仲多糖和水溶性锶盐在水中反应的步骤是在室温条件下进行的。其中，在本文中，室温指的是10℃～40℃。
步骤S120：在反应液中加入有机沉淀剂，然后静置反应，再经固液分离，收集沉淀，得到杜仲多糖络合物。
通过加入有机沉淀剂，然后静置反应，以使反应液中的杜仲多糖络合物沉淀。有机沉淀剂可以为本领域常用的有机沉淀剂。具体地，有机沉淀剂为无水丙酮或无水乙醇。优选地，有机沉淀剂为无水乙醇，相对于无水丙酮，无水乙醇的毒性较小，使得制备得到杜仲多糖锶络合物也具有较小毒性，且无水乙醇较为廉价，有利于降低生产成本。
具体地，静置反应的时间为24小时以上，以使反应液中的杜仲多糖络合物能尽可能地沉淀下来。
具体地，有机沉淀剂与反应液的体积比为2:1～5:1，以在不浪费较多有机沉淀剂的前提下达到洗去杂质的目的。
进一步地，步骤S120之后，还包括使用乙醇清洗沉淀的步骤，以对杜仲多糖络合物进行纯化处理。使用乙醇清洗以清洗掉沉淀中的氯化锶，提高杜仲多糖络合物的纯度。
具体地，使用乙醇清洗沉淀步骤包括：依次使用不同浓度的乙醇清洗沉淀，再将沉淀干燥。在其中一个实施例中，将沉淀干燥的步骤中，干燥温度为37℃～45℃。
在其中一个实施例中，依次使用不同浓度的乙醇清洗沉淀的步骤包括：使用体积百分浓度为80％的乙醇、体积百分浓度为60％的乙醇以及体积百分浓度为40％的乙醇依次与沉淀混合，每次搅拌混合至少30分钟。具体地，每种浓度的乙醇与步骤S110得到的反应液的体积比为2.5:1～5:1，以达到有效的洗涤目的。
实验证明：上述杜仲多糖锶络合物的制备方法制备得到的杜仲多糖锶络合物通过锶与杜仲多糖大分子的络合反应，能够避免游离锶离子的毒性。同时，制备得到的杜仲多糖锶络合物还具备两者各自特性，并使锶能在体内有效释放，发挥锶对炎症减轻、骨细胞增殖的作用，能够较好的辅助治疗骨关节炎。且上述杜仲多糖锶络合物能改变骨的免疫环境，促进骨修复相关细胞的增殖与分化。能通过调节骨免疫在骨修复上起到重要作用。
一实施方式的杜仲多糖锶络合物的制备方法制备得到的杜仲多糖锶络合物。该杜仲多糖锶络合物具有较好的骨修复和关节病防治效果，且具有较小的毒性。
上述杜仲多糖络合物能够用于在制备骨修复材料，以使该骨修复材料具有较好的骨修复和关节病防治效果，且具有较小的毒性。
以下为具体实施例部分(以下实施例如无特殊说明，则不含有除不可避免的杂质以外的其它未明确指出的组分。)：
实施例1
本实施例的杜仲多糖锶络合物的制备过程如下：
(1)将杜仲多糖溶解在去离子水中，配制成浓度为1g/mL的杜仲多糖的水溶液；将氯化锶溶解在去离子水中，配制成浓度为1.8mol/L的氯化锶的水溶液；将氢氧化钠溶解在去离子水中，配制成浓度为1.8mol/L的氢氧化钠水溶液。
(2)在室温的条件下，在持续搅拌和使用氢氧化钠水溶液控制的pH值为10的条件下，按照杜仲多糖与锶元素的质量摩尔比为150g:1mol，向杜仲多糖的水溶液中加入氯化锶的水溶液，待氯化锶的水溶液加入完成后，继续在pH值为10和室温下搅拌反应1小时，得到反应液。
(3)在反应液中加入有机沉淀剂，然后静置24小时，经过滤，收集沉淀。其中，有机沉淀剂为无水乙醇，有机沉淀剂与反应液的体积比为2:1。
(4)将沉淀与体积百分浓度为80％的乙醇混合，并搅拌30分钟，然后过滤得到滤渣；将滤渣与体积百分浓度为60％的乙醇混合，并搅拌30分钟，接着过滤，再将滤渣与体积百分浓度为40％的乙醇混合，并搅拌30分钟，再过滤，收集固体，将固体在41℃下干燥12小时，得到杜仲多糖锶络合物，其中，步骤(4)中每种浓度的乙醇与沉淀的体积质量比为3.5:1。
实施例2
本实施例的杜仲多糖锶络合物的制备过程如下：
(1)将杜仲多糖溶解在去离子水中，配制成浓度为0.5g/mL的杜仲多糖的水溶液；将氯化锶溶解在去离子水中，配制成浓度为2mol/L的氯化锶的水溶液；将氢氧化钠溶解在去离子水中，配制成浓度为1.5mol/L的氢氧化钠水溶液。
(2)在室温的条件下，在持续搅拌和使用氢氧化钠水溶液控制的pH值为9的条件下，按照杜仲多糖与锶元素的质量摩尔比为60g:1mol，向杜仲多糖的水溶液中加入氯化锶的水溶液，待氯化锶的水溶液加入完成后，继续在pH值为9和室温下搅拌反应2小时，得到反应液。
(3)在反应液中加入有机沉淀剂，然后静置25小时，经过滤，收集沉淀。其中，有机沉淀剂为无水乙醇，有机沉淀剂与反应液的体积比为3:1。
(4)将沉淀与体积百分浓度为80％的乙醇混合，并搅拌40分钟，然后过滤得到滤渣；将滤渣与体积百分浓度为60％的乙醇混合，并搅拌30分钟，接着过滤，再将滤渣与体积百分浓度为40％的乙醇混合，并搅拌50分钟，再过滤，收集固体，将固体在37℃下干燥12小时，得到杜仲多糖锶络合物，其中，步骤(4)中每种浓度的乙醇与沉淀的体积质量比为2.5:1。
实施例3
本实施例的杜仲多糖锶络合物的制备过程如下：
(1)将杜仲多糖溶解在去离子水中，配制成浓度为1.5g/mL的杜仲多糖的水溶液；将氯化锶溶解在去离子水中，配制成浓度为1.5mol/L氯化锶的水溶液；将氢氧化钠溶解在去离子水中，配制成浓度为2mol/L的氢氧化钠水溶液。
(2)在室温的条件下，在持续搅拌和使用氢氧化钠水溶液控制的pH值为11的条件下，按照杜仲多糖与锶元素的质量摩尔比为250g:1mol，向杜仲多糖的水溶液中加入氯化锶的水溶液，待氯化锶的水溶液加入完成后，继续在pH值为11和室温下搅拌反应3小时，得到反应液。
(3)在反应液中加入有机沉淀剂，然后静置30小时，经过滤，收集沉淀。其中，有机沉淀剂为无水乙醇，有机沉淀剂与反应液的体积比为3:1。
(4)将沉淀与体积百分浓度为80％的乙醇混合，并搅拌35分钟，然后过滤得到滤渣；将滤渣与体积百分浓度为60％的乙醇混合，并搅拌50分钟，接着过滤，再将滤渣与体积百分浓度为40％的乙醇混合，并搅拌30分钟，再过滤，收集固体，将固体在45℃下干燥12小时，得到杜仲多糖锶络合物，其中，步骤(4)中每种浓度的乙醇与沉淀的体积质量比为5:1。
实施例4
本实施例的杜仲多糖锶络合物的制备过程如下：
(1)将杜仲多糖溶解在去离子水中，配制成浓度为0.8g/mL的杜仲多糖的水溶液；将氯化锶溶解在去离子水中，配制成浓度为1.6mol/L氯化锶的水溶液；将氢氧化钠溶解在去离子水中，配制成浓度为1.6mol/L的氢氧化钠水溶液。
(2)在室温的条件下，在持续搅拌和使用氢氧化钠水溶液控制的pH值为10的条件下，按照杜仲多糖与锶元素的质量摩尔比为100g:1mol，向杜仲多糖的水溶液中加入氯化锶的水溶液，待氯化锶的水溶液加入完成后，继续在pH值为10和室温下搅拌反应3小时，得到反应液。
(3)在反应液中加入有机沉淀剂，然后静置26小时，经过滤，收集沉淀。其中，有机沉淀剂为无水乙醇，有机沉淀剂与反应液的体积比为4:1。
(4)将沉淀与体积百分浓度为80％的乙醇混合，并搅拌30分钟，然后过滤得到滤渣；将滤渣与体积百分浓度为60％的乙醇混合，并搅拌30分钟，接着过滤，再将滤渣与体积百分浓度为40％的乙醇混合，并搅拌30分钟，再过滤，收集固体，将固体在38℃下干燥12小时，得到杜仲多糖锶络合物，其中，步骤(4)中每种浓度的乙醇与沉淀的体积质量比为4:1。
实施例5
本实施例的杜仲多糖锶络合物的制备过程如下：
(1)将杜仲多糖溶解在去离子水中，配制成浓度为1.2g/mL的杜仲多糖的水溶液；将氯化锶溶解在去离子水中，配制成浓度为1.7mol/L氯化锶的水溶液；将氢氧化钠溶解在去离子水中，配制成浓度为1.6mol/L的氢氧化钠水溶液。
(2)在室温的条件下，在持续搅拌和使用氢氧化钠水溶液控制的pH值为9的条件下，按照杜仲多糖与锶元素的质量摩尔比为200g:1mol，向杜仲多糖的水溶液中加入氯化锶的水溶液，待氯化锶的水溶液加入完成后，继续在pH值为9和室温下搅拌反应2小时，得到反应液。
(3)在反应液中加入有机沉淀剂，然后静置28小时，经过滤，收集沉淀。其中，有机沉淀剂为无水乙醇，有机沉淀剂与反应液的体积比为5:1。
(4)将沉淀与体积百分浓度为80％的乙醇混合，并搅拌30分钟，然后过滤得到滤渣；将滤渣与体积百分浓度为60％的乙醇混合，并搅拌30分钟，接着过滤，再将滤渣与体积百分浓度为40％的乙醇混合，并搅拌30分钟，再过滤，收集固体，将固体在38℃下干燥12小时，得到杜仲多糖锶络合物，其中，步骤(4)中每种浓度的乙醇与沉淀的体积质量比为3:1。
实施例6
本实施例的杜仲多糖络合物的制备过程与实施例1的杜仲多糖络合物的制备过程相似，区别在于，本实施例中没有进行步骤(4)。
实施例7
本实施例的杜仲多糖络合物的制备过程与实施例1的杜仲多糖络合物的制备过程相似，区别在于，步骤(3)中有机沉淀剂为无水丙酮。
实施例8
本实施例的杜仲多糖络合物的制备过程与实施例1的杜仲多糖络合物的制备过程相似，区别在于，本实施例中用硝酸锶代替氯化锶。
实施例9
本实施例的杜仲多糖络合物的制备过程与实施例2的杜仲多糖络合物的制备过程相似，区别在于，本实施例的步骤(2)的杜仲多糖与锶元素的质量摩尔比为55g:1mol。
实施例10
本实施例的杜仲多糖络合物的制备过程与实施例3的杜仲多糖络合物的制备过程相似，区别在于，本实施例的步骤(2)的杜仲多糖与锶元素的质量摩尔比为255g:1mol。
实施例11
本实施例的杜仲多糖络合物的制备过程与实施例1的杜仲多糖络合物的制备过程相似，区别在于，本实施例中用氢氧化钾代替氢氧化钠。
对比例1
对比例1的杜仲多糖锶络合物的制备过程与实施例2的杜仲多糖锶络合物的制备过程相似，区别在于，对比例1的步骤(2)中pH控制为8.5。
对比例2
对比例2的杜仲多糖锶络合物的制备过程与实施例3的杜仲多糖锶络合物的制备过程相似，区别在于，对比例1的步骤(2)中pH控制为11.5。
对比例3
对比例3为杜仲多糖。
(1)XRD测试：
图2为实施例1的产物和对比例3的杜仲多糖的XRD图，从图中可以看出。从图2中可以看出，相较于对比例3的杜仲多糖的XRD结果，实施例1的杜仲多糖锶的XRD结果显示出不同的峰位置，表明掺入锶后杜仲多糖的结晶度发生变化。XRD表征证实了锶成功地引入了杜仲多糖中并形成新的复合物-杜仲多糖锶络合物。
其中，实施例2～11得到的产物具有与实施例1的产物相似的XRD图，在此不再重复提供图谱，即实施例2～11也得到了杜仲多糖锶络合物。对比例1和对比例2得到的产物与对比例3的杜仲多糖的XRD相似，对比例1和对比例3的产物也仍然为杜仲多糖。
(2)红外光谱测试：
图3为实施例1得到的产物和对比例3的杜仲多糖的红外光谱图，从图3中可以看出，相对于对比例3的杜仲多糖，实施例1得到的杜仲多糖锶络合物的基本骨架基本没有发生变化。
其中，实施例2～11得到的产物具有与实施例1的产物相似的红外光谱图，对比例1和对比例2得到的产物的红外光谱图与对比例3的杜仲多糖的红外光谱图相似，在此不再赘述。
(3)扫描电镜测试：
使用扫描电镜对实施例1的产物和对比例3的杜仲多糖进行扫描，图4和图5分别为实施例1的杜仲多糖锶络合物及对比例3的杜仲多糖的扫描电镜图，从图4和图5中可以看出，与对比例3的杜仲多糖相比，实施例1的杜仲多糖锶络合物的粒径更小，分布更均匀，这可能是因为掺入锶有利于优化杜仲多糖的无序结构。
(4)纯度测试：采用EDS(Energy Dispersive Spectrometer)方法测试实施例1～11得到杜仲多糖锶络合物的锶的质量百分比，记作W1；计算反应物中的锶元素的质量百分含量W2，其中，W2＝水溶性锶盐中的锶元素的质量*100％/(水溶性锶盐的质量+杜仲多糖的质量)，杜仲多糖锶络合物的纯度＝W1*100％/W2。其中，实施例1～11的杜仲多糖锶络合物的纯度如表1所示：
表1
纯度(％)
实施例1
96.2％
实施例2
95.5％
实施例3
94％
实施例4
97.6％
实施例5
95.3％
实施例6
83.9％
实施例7
96％
实施例8
95％
实施例9
92.3％
实施例10
92％
实施例11
96％
从表1中可以看出，实施例1制备的杜仲多糖锶络合物的纯度为96.2％，而实施例6的杜仲多糖络合物的纯度仅为83.9％，这说明经过乙醇纯化后得到的杜仲多糖锶络合物具有更高的纯度。且实施例11的杜仲多糖锶络合物的纯度为96％，与实施例1相当，这说明氢氧化钠和氢氧化钾作为pH调节剂对杜仲多糖锶络合物的纯度影响不大。实施例2制备的杜仲多糖锶络合物的纯度为95.5％，而实施例9制备的杜仲多糖锶络合物的纯度仅为92.3％，实施例3制备得到杜仲多糖锶络合物的纯度为94％，而实施例10制备得到的杜仲多糖锶络合物的纯度仅为92％，这说明杜仲多糖与锶元素的质量摩尔比太大或太小都会对杜仲多糖锶络合物的纯度有不利影响。
(5)巨噬细胞实验：
将实施例1～11的杜仲多糖锶络合物、对比例1的产物及对比例2的产物、和对比例3的杜仲多糖作为样品，分别用含有质量百分浓度5％的FBS的DMEM培养基配制成浓度为10μg/ml、50μg/mL、100μg/mL、500μg/mL的样品溶液，并将未添加样品的含有质量百分浓度5％的FBS的DMEM培养基作为对照液。
取小鼠巨噬细胞RAW264.7(由于巨噬细胞RAW264.7在骨的免疫环境调节中具有重要作用，并且它的分化以及增殖对骨细胞的具有调节作用，因此，采用该细胞进行实现)，用细胞刮刀刮下后并吹打制成单细胞悬液。在计数板上计数后，用含有体积百分浓度为5％的FBS(胎牛血清)的DMEM培养基稀释，然后种入96孔板中，孔板的每孔中的细胞大约为5000个，且每孔加入100μL细胞悬浮液。然后将96孔板放置在二氧化碳培养箱中培养24小时，再将96孔板中的培养基吸出，接着向96孔板的孔中分别加入200μL上述样品溶液作为实验组，加入200μL的对照液作为对照实验，每种浓度的样品溶液设置平行的四个孔，例如，实施例1的杜仲多糖锶络合物配制成浓度为10μg/ml、50μg/mL、100μg/mL、500μg/mL的四个样品溶液，每种浓度的样品溶液四个孔，每个孔中的样品溶液为200μL。
采用细胞计数试剂盒-8检测巨噬细胞在第三天的细胞增殖率，细胞计数试剂盒-8检测的原理为：成分WST-8被细胞脱氢酶生物还原为可溶于培养基的橙色甲产物，并且产生的甲的量与活细胞的数量成正比。运用酶标仪对每孔吸光度进行测量，得到吸光度值，通过吸光度值反映细胞增殖率，其中，对照实验的巨噬细胞在第三天的吸光度值如表2所示，对照实验组的巨噬细胞在第三天的吸光度值如表3所示：
表2
第三天
对照实验
0.30
表3
从表2～表3中可以看出，杜仲多糖锶络合物在第三天的时候能明显观察到对巨噬细胞增殖的促进作用，同时相比较起来其在浓度为50ug/ml～100ug/ml时促进作用最明显。但高浓度时，杜仲多糖锶络合物对细胞增殖有抑制作用。其中，实施7和实施例8的吸光度值低是因为无水丙酮和硝酸锶具有毒性，从而导致其吸光度较低。实施例6的吸光度值低是因为实施例6的产物没有经过步骤(4)，致使产物中含有氯化锶，而氯化锶对细胞增殖具有一定的抑制作用。
其中，图6为巨噬细胞分别在实施例1的杜仲多糖锶络合物配制的培养液以及对照实验中的培养第三天的柱状图，从图6中可以看出，实施例1的含有杜仲多糖锶溶液的浓度为10μg/mL～100μg/mL的细胞培养基中培养的细胞增殖效果显著，且与对照组具有显著性差异，因此，制备的杜仲多糖锶络合物对细胞的增殖具有促进作用。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。