阅读说明：本技术 黄芪黄精当归组合物及其在调节肠道微生物中的用途 (Astragalus membranaceus, rhizoma polygonati and angelica sinensis composition and application thereof in regulating intestinal microorganisms ) 是由 魏来 梁桥星 葛小菲 于 2018-06-20 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种黄芪黄精当归组合物,黄芪黄精当归组合物在调节肠道微生物中的用途及其在制备药物中的应用,所述药物为治疗与肠道菌群紊乱相关疾病的药物。(The invention provides an astragalus, polygonatum and angelica composition, application of the astragalus, polygonatum and angelica composition in regulating intestinal microorganisms and application of the composition in preparing a medicament, wherein the medicament is a medicament for treating diseases related to intestinal flora disorder.)

黄芪黄精当归组合物及其在调节肠道微生物中的用途

技术领域

本发明属于医药保健领域，具体涉及黄芪黄精当归组合物在改善和调节肠道微生物中的用途。

背景技术

人体内共生着大量微生物，尤其人体肠道内有1000-1150种约100万亿细菌，是人体最重要的“内生环境因素”，其数目是人体自身细胞数目的10倍左右。在正常情况下，肠道微生物处于一个动态平衡的生态环境，正常菌群不仅在消化、免疫和抗病毒方面发挥着不可替代的作用，而且肠道微生物的改变与机体健康或疾病特别是一些慢性疾病的发生具有极为密切的关系。当代社会环境下，人们工作强度大，生活压力大，人体长期处于各种应激状态，常常会导致肠道微生物失调，表现为肠道微生物在种类、数量、比例和生物学特性上的异常变化。菌群失调又反过来通过影响机体对营养物质的吸收削弱肠道的屏障功能，进一步加重疾病，形成一种恶性循环。研究证实，人体的多种疾病如长期腹泻、便秘、肠道炎症、消化道溃疡、糖尿病、高血压、高血脂、肿瘤等的发病都与肠道微生物密切相关。虽然目前还不清楚究竟是肠道微生物菌群的变化引起了代谢类疾病的发生，还是代谢类疾病的发生导致了肠道微生物菌群的变化，但是有一点可以肯定：通过改变肠道微生物菌群的构成，对人体的健康产生影响，同时也可能对某些疾病的治疗提供帮助。目前，肠道微生物已被认为是多种疾病的可能治疗靶标。

专利文献CN 106620189 A提供了一种改善肠道微生物结构的方法，及其在制备药物、营养品、保健品、食品、饮料等过程中的应用。此发明采用基于高通量测序技术以及多变量统计学方法找出了与宿主代谢密切相关的肠道细菌类群，如肠道中产短链脂肪酸的细菌大多为有益菌，其可以通过增加肠道中短链脂肪酸的含量起到抗炎、保护肠屏障功能、调节人体代谢与免疫等作用。短链脂肪酸产生菌包括布劳特氏菌属、Allobaculum、普氏菌属、拟杆菌属或Butyricimonas。肠道中产内毒素的细菌大多为有害菌，其可以通过增加肠道中内毒素含量引起炎症、损害肠屏障功能、引起人体代谢与免疫失调等作用。产生内毒素的细菌包括变形菌门的细菌。

目前为止，科学家已发现的肠道有益菌大体上可分成三大类，其中包括：乳杆菌类(如嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、拉曼乳杆菌等)；双歧杆菌类(如长双歧杆菌、短双歧杆菌、卵形双歧杆菌、嗜热双歧杆菌等)；革兰氏阳性球菌(如粪链球菌、乳球菌、中介链球菌等)。

人体生物学是由人体基因组和人体微生物组两部分组成的，其中人体基因组的改变是极为困难的，但是人体肠道内微生物构成的改变相对比较容易。目前高热量饮食、快节奏生活，使得一部分人出现肠道微生物紊乱的情况，除非紧急情况，多数人会选择通过饮食进行调节，已有研究表明一些中药及一些药食同源的食品可以调节人体或动物的肠道微生物。如专利文献CN 105596445 A涉及丹皮赤芍在调节肠道微生物中的用途，发明人研究发现，丹皮赤芍不仅可以调节肠道微生物，且没有任何副作用，可以长期服用。又如专利文献CN 102987383 B提供了一种由药食同源食品组成的组合物，所述组合物可用于平衡主体中肠道微生物结构，改善代谢综合征。

在本发明中，发明人对黄芪黄精当归组合物能否调节肠道微生物做了相关研究。黄芪，性微温，味甘，归肺、脾、肝、肾经，有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。目前临床中用于治疗高血压病、缺血性心脏病、急性肾小球肾炎、幽门螺旋杆菌阳性胃溃疡、银屑病、糖尿病、慢性鼻炎和骨质疏松等。黄精，性平，味甘，归脾、肺、肾经，具有补气养阴，健脾，润肺，益肾的功效。药理学研究显示，黄精有抗病原微生物的作用、抗疲劳、抗氧化、延缓衰老的作用、抗病毒、抑制血糖升高的作用。当归，性温，味甘辛，归心、肝、脾经，其根可入药，是最常用的中药之一。当归主要含蔗糖、多种氨基酸、挥发油以及正丁烯、内酯、烟酸、阿魏酸和半萜类化合物，还含有维生素A、维生素E、挥发油、精氨酸及多种矿物质，常用于补血活血，调经止痛，润燥滑肠。

专利文献CN 201510008559.3和专利文献CN 201610212026.1都涉及到将黄芪、黄精和当归与其他中药配伍制备成保健品或保健酒。通过检索发明人也没有发现涉及黄芪黄精当归组合物或黄芪黄精当归组合物在调节肠道微生物中的用途的现有技术，因此，在本发明中发明人对黄芪黄精当归组合物能否调节肠道菌群及具体改善的菌种做了细致的研究。

发明内容

在本发明中，发明人研究发现，黄芪黄精当归组合物能显著提高肠道内有益菌的数量，同时抑制有害菌的数量，可调节肠道微生物。现阶段未见关于黄芪黄精当归组合物在调节肠道微生物方面的研究和报道。

因此，本发明一个目的是提供一种黄芪黄精当归组合物；本发明另一个目的是提供一种黄芪黄精当归组合物在调节肠道微生物中的用途；本发明还一个目的是提供一种黄芪黄精当归组合物在制备药物中的应用，所述药物均为治疗与肠道菌群紊乱相关疾病的药物。

本发明提供一种中药组合物，所述中药组合物原料药包括黄芪、黄精和当归。

本发明提供一种中药组合物，所述中药组合物原料药由黄芪、黄精和当归组成。

本发明所述的中药组合物中，所述原料药黄芪、黄精、当归的质量份数比为15-60：10-40：10-40。

优选的，所述的原料药中黄芪、黄精、当归的质量份数比为30-60：20-40：20-40。

在本发明优选实施方式中，黄芪15份、黄精10份、当归10份或黄芪30份、黄精20份、当归20份或黄芪60份、黄精40份、当归40份。

本发明所述的中药组合物是由原料药的药粉或原料药的提取物混合制备而成。

优选的，所述的中药组合物中还包括药剂学上可接受的辅料，所述辅料选自：载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、润湿剂。

优选的，所述的中药组合物的剂型选自：片剂、胶囊、丸剂、注射剂、吸入剂、含片、栓剂、乳剂、纳米颗粒、凝胶剂、粉剂、悬乳液、乳膏剂、胶冻剂、喷雾剂等。

优选的，所述的中药组合物可采取的给药方式选自：口服、肠道给、皮下注射、肌肉注射、静脉注射、鼻腔给药、透皮给药、结膜下给药、眼球内给药、眼眶给药、眼球后给药、视网膜给药、脉络膜给药、鞘内注射等。

本发明提供一种中药组合物在调节肠道微生物中的用途。

根据所述的中药组合物在调节肠道微生物中的用途，可以是选择性的增加肠道中细菌的数量，所述细菌选自：肠杆菌属(Enterobacter)、乳杆菌属(Lactobacillus)、链霉菌属(Streptomyces)、茎菌属(Caulobacter)、脱硫弧菌属(Desulfovibrio)、奇异菌属(Atopobium)、棒状杆菌属(Corynebacterium)、密螺旋体属(Treponema)、螺杆菌属(Helicobacter)、拟杆菌属(Bacteroides)、念珠藻属(Nostoc)、海杆菌属(Marinobacter)、纤维杆菌属(Fibrobacter)、短波单胞菌属(Brevundimonas)、卟啉单胞菌属(Porphyromonas)、无色菌属(Achromobacter)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、普氏菌属(Prevotella)中的一种或两种以上的组合；

优选的，所述细菌选自：肠杆菌属、乳杆菌属、链霉菌属中的一种或两种以上的组合；

更优选的，所述细菌选自：Enterobacter hormaechei、Enterobacter sp.MGH 6、Enterobacter sp.MGH 10、Enterobacter sp.MGH 33、Enterobacter sp.BIDMC93、Enterobacter sp.ST121:950178628、Lactobacillus sp.UMNPBX12、Lactobacillussp.UMNPBX14、Lactobacillus johnsonii、Lactobacillus sp.UMNPBX6、Lactobacillustaiwanensis、Lactobacillus gasseri、Lactobacillus sp.UMNPBX19、Streptomycessp.MMG1064、Streptomyces sp.NRRL WC-3701、Streptomyces purpurogeneiscleroticus、Streptomyces sp.b94、Caulobacter sp.CCH4-E1、Pedobacter himalayensis、Pedobacteragri、Desulfovibrio piger、Desulfovibrio sp.G11、Desulfovibrio sp.An276、Desulfovibrio sp.6_1_46AFAA、Atopobium minutum、Corynebacterium doosanense、Corynebacterium xerosis、Paenibacillus sp.7541、Paenibacillus sp.P32E、Paenibacillus sp.Soil724D2、Treponema succinifaciens、Helicobacter sp.CLO-3、Helicobacter typhlonius、Bacteroides sp.HPS0048、Nostoc sp.'Peltigeramembranacea cyanobiont'210A、Nostoc sp.'Peltigera malacea cyanobiont'DB3992、Nostoc sp.NIES-4103、Marinobacter sp.EhN04、Fibrobacter sp.UWH9、Fibrobactersp.UWR3、Brevundimonas sp.Leaf280、Porphyromonas sp.COT-052OH4946、Achromobactersp.ATCC35328中的一种或两种以上的组合。

根据所述的中药组合物在调节肠道微生物中的用途，可以是选择性的抑制肠道中细菌的数量，所述细菌选自：志贺氏杆菌属(Shigella)、链球菌属(Streptococcus)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、瘤胃球菌属(Ruminococcus)、丁酸弧菌属(Butyrivibrio)、假丁酸弧菌属(Pseudobutyrivibrio)、毛螺菌科菌属(Lachnospiraceae bacterium)、肠球菌属(Enterococcus)、真杆菌属(Eubacterium)、短螺菌属(Brachyspira)、粪芽孢菌属(Coprobacillus)、梭菌属(Clostridium)、副杆菌属(Parabacteroides)、厌氧原体属(Anaeroplasma)、粪球菌属(Coprococcus)中的一种或两种以上的组合；

优选的，所述细菌选自：志贺氏杆菌属、链球菌属、嗜血杆菌属、丁酸弧菌属、毛螺菌科菌属、短螺菌属、梭菌属中的一种或两种以上的组合；

更优选的，所述细菌选自：Shigella sp.FC569、Shigella sp.FC1172、Shigellaflexneri、Streptococcus sp.HMSC034B04、Streptococcus sp.FDAARGOS_192、Streptococcus sobrinus、Streptococcus sp.HMSC076H08、Streptococcus orisratti、Streptococcus orisasini、Streptococcus sp.1004_SSPC、Streptococcussp.HMSC073A12、Streptococcus salivarius、Streptococcus sp.HMSC036H09、Streptococcus plurextorum、Streptococcus sp.HMSC068H01、Streptococcussp.HMSC072E12、Streptococcus porci、Streptococcus sp.SR4、Streptococcusgallolyticus、Streptococcus criceti、Streptococcus intermedius、Streptococcussp.HMSC034E12、Streptococcus equinus、Streptococcus sp.ACC21、Streptococcussp.GMD2S、Haemophilus sp.HMSC066D03、Ruminococcus callidus、Ruminococcussp.YE71、Butyrivibrio sp.M55、Butyrivibrio sp.INlla18、Butyrivibrio sp.AE3003、Butyrivibrio sp.VCB2006、Butyrivibrio sp.VCD2006、Butyrivibrio sp.AC2005、Butyrivibrio sp.WCD3002、Butyrivibrio sp.LB2008、Butyrivibrio proteoclasticus、Butyrivibrio sp.INlla21、Butyrivibrio fibrisolvens、Butyrivibrio sp.YAB3001、Butyrivibrio sp.AE2015、Butyrivibrio sp.NC3005、Butyrivibrio sp.FCS006、Butyrivibrio sp.NC2002、Butyrivibrio sp.AE3009、Butyrivibrio sp.WCD2001、Butyrivibrio sp.LC3010、Butyrivibrio sp.TB、Butyrivibrio sp.FC2001、Butyrivibriosp.MC2013、Butyrivibrio sp.WCE2006、Butyrivibrio sp.AE2005、Pseudobutyrivibriosp.C4、Pseudobutyrivibrio xylanivorans、Pseudobutyrivibrio sp.MD2005、Pseudobutyrivibrio sp.OR37、Pseudobutyrivibrio sp.AR14、Pseudobutyrivibrioruminis、Pseudobutyrivibrio sp.ACV-2、Pseudobutyrivibrio sp.LB2011、Pseudobutyrivibrio sp.49、Lachnospiraceae bacterium YSD2013、Lachnospiraceaebacterium NC2004、Lachnospiraceae bacterium oral taxon 500、Lachnospiraceaebacterium 3-1、Lachnospiraceae bacterium NLAE-zl-G231、Lachnospiraceaebacterium 2_1_46FAA、Lachnospiraceae bacterium MA2020、Lachnospiraceaebacterium NK3A20、Lachnospiraceae bacterium COE1、Lachnospiraceae bacteriumMC2017、Lachnospiraceae bacterium 9_1_43BFAA、Lachnospiraceae bacterium P6B14、Lachnospiraceae bacterium TF01-11、Lachnospiraceae bacterium A4、Lachnospiraceae bacterium P6A3、Lachnospiraceae bacterium 28-4、Lachnospiraceaebacterium AB2028、Lachnospiraceae bacterium XBB1006、Lachnospiraceae bacteriumC6A11、Lachnospiraceae bacterium VE202-12、Lachnospiraceae bacterium FD2005、Lachnospiraceae bacterium ND2006、Lachnospiraceae bacterium G11、Lachnospiraceae bacterium XBD2001、Lachnospiraceae bacterium RM5、Lachnospiraceae bacterium XPB1003、Lachnospiraceae bacterium C7、Lachnospiraceae bacterium NK4A136、Lachnospiraceae bacterium AC2014、Lachnospiraceae bacterium NC2008、Lachnospiraceae bacterium NE2001、Lachnospiraceae bacterium AC2031、Lachnospiraceae bacterium C10、Lachnospiraceae bacterium 6_1_63FAA、Lachnospiraceae bacterium AC2012、Lachnospiraceae bacterium MD2004、Lachnospiraceae bacterium A10、Lachnospiraceae bacterium YSB2008、Lachnospiraceae bacterium KHCPX20、Lachnospiraceae bacterium 1_1_57FAA、Enterococcus saccharolyticus、Enterococcusgilvus、[Eubacterium]rectale、Eubacterium sp.14-2、Eubacterium xylanophilum、Eubacterium plexicaudatum、Eubacterium oxidoreducens、[Eubacterium]cellulosolvens、Eubacterium ruminantium、Eubacterium uniforme、Eubacteriumcallanderi、[Eubacterium]eligens、[Eubacterium]hallii、Eubacterium ventriosum、Brachyspira sp.G79、Brachyspira alvinipulli、Brachyspira innocens、Brachyspirasuanatina、Brachyspira murdochii、Brachyspira intermedia、Brachyspirahyodysenteriae、Brachyspira pilosicoli、Coprobacillus sp.D7、Fusobacteriumsp.OBRC1、Clostridium sulfidigenes、Clostridium sp.USBA 49、Clostridiumsp.Marseille-P2415、Clostridium sp.1_1_41A1FAA、Clostridium puniceum、Clostridium acetireducens、Clostridium argentinense、Clostridiaceae bacteriumMS3、Clostridium hydrogeniformans、Clostridium cellulovorans、Lachnoclostridiumphytofermentans、Clostridium sp.HMSC19B01、Clostridium kluyveri、[Clostridium]amygdalinum、[Clostridium]methoxybenzovorans、Clostridium tetanomorphum、Clostridium chauvoei、Clostridium acidisoli、Clostridium celatum、Clostridiumdisporicum、Clostridium sp.C8、Clostridium sp.DMHC 10、Clostridiumcollagenovorans、Clostridiales bacterium CHKCI001、Clostridium cadaveris、Clostridium uliginosum、Clostridium cavendishii、Clostridium saudiense、Clostridium chromiireducens、Clostridium sp.ATCC 25772、Clostridium nigeriense、Clostridium sp.L2-50、Clostridium sp.KNHs209、Clostridium paraputrificum、[Clostridium]polysaccharolyticum、Clostridiales bacterium VE202-18、Clostridiumintestinale、Clostridium lundense、Clostridium saccharobutylicum、Clostridiumsaccharoperbutylacetonicum、Clostridium frigidicarnis、Clostridium sp.CL-2、Clostridium sp.DSM 8431、Clostridium septicum、Clostridium taeniosporum、Clostridiales bacterium 1_7_47FAA、Clostridium perfringens、Clostridium sp.ND2、Clostridium neonatale、Clostridium gasigenes、Clostridium sp.7_2_43FAA、Clostridium fallax、Clostridiales bacterium VE202-29、Clostridium sp.HMSC19A10、Clostridiales bacterium VE202-09、Clostridium thermobutyricum、Clostridiabacterium UC5.1-1D10、Clostridium baratii、Clostridium sp.Ade.TY、Clostridiumsp.HMSC19B04、Clostridium sp.IBUN125C、Parabacteroides sp.D25中的一种或两种以上的组合。

根据所述的中药组合物在调节肠道微生物中的用途，可以是选择性的抑制肠道中病毒的数量，所述病毒选自：链球菌病毒(Streptococcus virus)、肠球菌噬菌体(Enterococcus phage)、乳酸杆菌噬菌体(Lactobacillus phage)、肠杆菌噬菌体(Enterobacteria phage)中的一种或两种以上的组合；

优选的，所述病毒选自：链球菌病毒；

更优选的，所述病毒选自：Streptococcus virus 7201、Streptococcus virus C1中的一种或两种的组合。

本发明提供一种中药组合物在制备药物中的应用，所述药物为治疗与肠道菌群紊乱相关疾病的药物，优选的，所述的疾病选自：长期腹泻、便秘、肥胖、食物过敏、胰腺炎、肝损伤、肠道炎症包括克罗恩病、肠易激综合征、消化道溃疡、肾结石、糖尿病包括妊娠期糖尿病、类风湿性关节炎、白塞病、心血管疾病、脑血管疾病包括中风、肿瘤、瘫痪、眼病、多发性硬化症、强直性脊柱炎、帕金森症、焦虑、自闭症、抑郁症、慢性疲劳症。本发明所述的中药组合物是组合物原料药的药粉或组合物原料药的提取物，优选的，所述的中药组合物为组合物原料药的提取物。

本发明所述的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)按重量配比称取各原料药；

(2)制成药粉或通过提取得到原料药提取物；

(3)取原料药的药粉或原料药的提取物混合制备而成，或取原料药的药粉或原料药的提取物，加一种或多种药剂学上可接受的辅料制备而成。

优选的，所述步骤(2)中药粉为将原料药粉碎至200-1200目；更优选的，所述步骤(2)中药粉为将原料药粉碎至800-1200目。

所述步骤(2)提取方法选自：溶剂浸提法、渗漉法、煎煮法、回流法、连续回流法、超声提取法、超临界流体萃取法、水蒸气蒸馏法、升华法、树脂吸附分离法、凝胶色谱分离法；

在本发明优选实施方式中，提取方法选自：溶剂浸提法、煎煮法、树脂吸附分离法。

附图说明

图1黄芪黄精当归组合物改变的肠道微生物物种

具体实施方式

实施例1黄芪黄精当归组合物药粉的制备

处方：黄芪60g、黄精40g、当归40g。所需的中药饮片黄芪、黄精、当归均购自广东省中医院，取相应处方剂量的药物，放入低温干燥箱中进行干燥，温度范围：30-40℃，湿度范围：10-20％RH，使得药物表面水分≤0.5％，随即将烘干的药物趁热及时输入粉碎机内进行粉碎，粉碎至900目，将药粉进行灭菌处理后真空包装待用。

实施例2乙醇浸提法制备黄芪黄精当归组合物提取物

处方：黄芪15g、黄精10g、当归10g。取相应处方剂量的药物，将药物粉碎至20目的药粉，药物粗粉用80％乙醇溶液提取3次，提取液过滤后进行减压浓缩得药物浓缩液，将浓缩液过吸附柱进行洗脱，吸附柱填料为HPD100，先用纯化水洗涤，除去杂质，再用60％、70％、80％乙醇洗脱得洗脱液，减压浓缩洗脱液，脱色处理，精制，减压浓缩至浸膏，经冷冻干燥后得中药组合物提取物。

实施例3水煎煮法制备黄芪黄精当归组合物提取物

处方：黄芪30g、黄精20g、当归20g。取相应处方剂量的药物，置适宜煎器中，加水约600ml浸没药材1h，煮沸后加热0.5h，分离煎出液，药渣继续进行二次煎煮，煎出液体与第一次煎出液混合，用量筒量取体积，若体积超过600ml则将煎出液进一步煮沸浓缩至约600ml，达到相应体积后将煎出液煮沸，并做真空包装至7-8小袋，放入4℃保存待用。

实施例4黄芪黄精当归组合物对肠道微生物的影响

本实验以实验用猴子为实验对象，实验药物分别为按照实施例3制备的黄芪黄精当归组合物提取物，给药方式为经鼻灌胃给药，灌胃为每天一次，连续14天。采集灌胃14天中每天、灌胃前后各1天的粪便。实验标准如下：猴子饲养按照非灵长类实验动物饲养标准执行，每天早上8点对动物笼底进行冲洗，将一不锈钢网放入动物笼底，之后等待猴子自行排便，排便后核对猴子ID，对粪便进行拍照，使用采便管采集粪便，注意采集过程中避开与网面接触的粪便，之后放入-80℃冰箱保存。

DNA的提取采用强力粪便DNA提取试剂盒(Qiagen，USA)进行提取，每个样品提取100ng DNA，用非接触式超声波破碎仪制成300-400bp的DNA片段，使用高通量测序平台文库构建定向优化试剂盒VAHTS Nano DNA Library Prep Kit for Illumina(Vazyme，中国)进行测序，测序深度达3千万-5千万每个样品，对每个测序读数进行质量控制，对于非人源序列采用Kraken及Bracken进行分析，以自定义的数据库作为参考，此数据库包括在2017年12月22日前RefSeq中所有的细菌、古细菌、病毒、真菌和原生动物的基因组。

实验结果如表1所示，对实验结果进行统计后发现，此中药组合物对肠道微生物的影响包括选择性的增加肠道中一些细菌的数量，同时抑制肠道中另外一些细菌的数量以及抑制肠道中一些病毒的数量来发挥作用。

表1黄芪黄精当归组合物改变的肠道微生物物种