阅读说明：本技术 一种预防宠物2型糖尿病的复合微生态制剂及其应用 (Compound microecological preparation for preventing type 2 diabetes of pets and application thereof ) 是由 德艳艳 廖洪 龙谭 于 2019-10-22 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种预防宠物2型糖尿病的复合微生态制剂及其应用,包括益生菌混合物,余量用低聚木糖和菊粉补足,所述低聚木糖和菊粉的添加质量比为1:1；所述益生菌混合物包括动物双歧杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、嗜热双歧杆菌和长双歧杆菌,所述动物双歧杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、嗜热双歧杆菌和长双歧杆菌的数量比为1:1:1:1:1。本发明使用的复合微生态制剂所包含的动物双歧杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、嗜热双歧杆菌、长双歧杆菌,菊粉和低聚木糖,协同作用增加肠道益生菌,调节肠道菌群平衡,主要用于预防宠物T2DM的发生,同时具有改善肠道菌群,减少慢性炎症的产生,起到促进健康,提高机体免疫力的功能,预防和改善胰岛素抵抗,从而起到预防宠物2型糖尿病的作用。(The invention discloses a composite microecological preparation for preventing type 2 diabetes of pets and application thereof, wherein the preparation comprises a probiotic mixture, and the balance of probiotic mixture is complemented by xylooligosaccharide and inulin, wherein the addition mass ratio of the xylooligosaccharide to the inulin is 1: 1; the probiotic mixture comprises bifidobacterium animalis, lactobacillus casei, lactobacillus paracasei, bifidobacterium thermophilum and bifidobacterium longum, and the number ratio of the bifidobacterium animalis to the lactobacillus casei to the lactobacillus paracasei to the bifidobacterium thermophilum to the bifidobacterium longum is 1:1:1:1: 1. The bifidobacterium animalis, the lactobacillus casei, the lactobacillus paracasei, the bifidobacterium thermophilum, the bifidobacterium longum, the inulin and the xylooligosaccharide contained in the composite microecological preparation have synergistic effects of increasing intestinal probiotics and regulating the balance of intestinal flora, are mainly used for preventing T2DM of pets, and simultaneously have the functions of improving the intestinal flora, reducing the generation of chronic inflammation, promoting health, improving the immunity of organisms and preventing and improving insulin resistance, thereby having the function of preventing type 2 diabetes of pets.)

一种预防宠物2型糖尿病的复合微生态制剂及其应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种预防宠物2型糖尿病的复合微生态制剂及其应用。

背景技术

糖尿病是因缺乏胰岛素而引起的一种代谢紊乱性疾病，肥胖中老年犬、猫易发。宠物糖尿病分为1型、2型、3型。1型糖尿病又称为胰岛素依赖型糖尿病，患病犬猫通常因为胰岛β细胞发育异常或受损，无法分泌胰岛素，需终生使用胰岛素治疗。2型糖尿病又称为非胰岛素依赖型糖尿病，患病犬猫通常是胰岛素靶细胞上受体敏感度降低及数目减少导致胰岛素抵抗以及细胞功能紊乱，造成胰岛素的相对不足。2型糖尿病主要容易发生于猫。3型糖尿病又称为继发性糖尿病，通常由于炎症以及手术等其他已知疾病对胰岛的破坏造成胰岛素拮抗以及葡萄糖不耐受。其中2型糖尿病除遗传外，多由于宠物缺乏运动，食入过多导致的肥胖引起。有研究表明，糖尿病患者的肠道菌群出现肠杆菌科细菌等有害菌丰度增加，而双歧杆菌、乳酸菌等有益菌丰度下降。因此调节肠道菌群可改善糖尿病患者的血糖水平。目前，采用益生菌或者益生元改善、纠正糖尿病患者肠道菌群研究较多，并且临床试验取得了一定效果。但是，目前尚无宠物用预防或改善2型糖尿病的微生态制剂。

研究表明，慢性炎症因子表达水平升高是胰岛素抵抗导致的2型糖尿病的原因之一，而肥胖宿主体内的肠道菌群发生了显著变化并与慢性炎症的产生相关，因此肥胖宠物预防糖尿病改善血糖极为重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种增加肠道益生菌、调节肠道菌群平衡、预防和改善胰岛素抵抗的预防宠物2型糖尿病的复合微生态制剂及其应用。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种预防宠物2型糖尿病的复合微生态制剂，其特征在于：包括益生菌混合物，余量用低聚木糖和菊粉补足，所述低聚木糖和菊粉的添加质量比为1:1；所述益生菌混合物包括动物双歧杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、嗜热双歧杆菌和长双歧杆菌，所述动物双歧杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、嗜热双歧杆菌和长双歧杆菌的数量比为1:1:1:1:1。

进一步的，所述动物双歧杆菌菌株活菌数≥2.0×10¹⁰CFU/g、干酪乳杆菌活菌数≥2.0×10¹⁰CFU/g、副干酪乳杆菌活菌数≥2.0×10¹⁰CFU/g、嗜热双歧杆菌活菌数≥2.0×10¹⁰CFU/g、长双歧杆菌活菌数≥2.0×10¹⁰CFU/g。

进一步的，所述干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌在pH为3.0的模拟胃酸中培养2h时存活率大于60％。

进一步的，所述动物双歧杆菌、嗜热双歧杆菌、长双歧杆菌在pH为3.0的模拟胃酸中培养2h时存活率大于50％。

进一步的，所述干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、动物双歧杆菌、嗜热双歧杆菌、长双歧杆菌在0.2％的3号胆盐中培养2h时菌株存活率均大于20％。

本发明的另一个目的是提供一种预防宠物2型糖尿病的复合微生态制剂的应用，所述复合微生态制剂用于预防宠物犬、猫由于肥胖导致的2型糖尿病。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明使用的复合微生态制剂所包含的动物双歧杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、嗜热双歧杆菌、长双歧杆菌，菊粉和低聚木糖，协同作用增加肠道益生菌，调节肠道菌群平衡，主要用于预防宠物T2DM的发生，同时具有改善肠道菌群，减少慢性炎症的产生，起到促进健康，提高机体免疫力的功能，预防和改善胰岛素抵抗，从而起到预防宠物2型糖尿病的作用。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

一种预防宠物2型糖尿病的复合微生态制剂，包括益生菌混合物，余量用低聚木糖和菊粉补足，低聚木糖和菊粉的添加质量比为1:1；益生菌混合物包括动物双歧杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、嗜热双歧杆菌和长双歧杆菌，动物双歧杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、嗜热双歧杆菌和长双歧杆菌的数量比为1:1:1:1:1。

动物双歧杆菌菌株活菌数≥2.0×10¹⁰CFU/g、干酪乳杆菌活菌数≥2.0×10¹⁰CFU/g、副干酪乳杆菌活菌数≥2.0×10¹⁰CFU/g、嗜热双歧杆菌活菌数≥2.0×10¹⁰CFU/g、长双歧杆菌活菌数≥2.0×10¹⁰CFU/g。

干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌在pH为3.0的模拟胃酸中培养2h时存活率大于60％。

动物双歧杆菌、嗜热双歧杆菌、长双歧杆菌在pH为3.0的模拟胃酸中培养2h时存活率大于50％。

干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、动物双歧杆菌、嗜热双歧杆菌、长双歧杆菌在0.2％的3号胆盐中培养2h时菌株存活率均大于20％。

一种预防宠物2型糖尿病的复合微生态制剂的应用，复合微生态制剂用于预防宠物犬、猫由于肥胖导致的2型糖尿病。

实施例2

本发明提供的预防宠物2型糖尿病的复合微生态制剂的五种菌株耐酸耐胆盐特性研究，具体步骤如下：

(1)动物双歧杆菌、嗜热双歧杆菌、长双歧杆菌的耐酸耐胆盐特性研究：3种菌株操作方法相同，以动物双歧杆菌菌株为例，向1支菌种斜面试管中加入5ml的无菌水，将斜面菌落洗下，混匀后，按1％的接种量接入摇瓶培养基中，在37℃静置培养培养14-16h；

摇瓶培养基的制备：摇瓶培养基中各原料的质量百分比为：葡萄糖1.0％，酵母浸出粉1.0％，示蛋白胨0.5％，胰蛋白胨0.5％，L-半胱氨酸盐酸盐0.05％，微量盐4％，然后pH值调至7.4，在115℃条件下，灭菌20min备用。

微量盐配方：0.2g/LCaCl₂，0.48g/LMgSO₄，10g/LNaHCO₃，1.0g/LKH₂PO₄，1.0g/LK₂HPO₄，2.0g/LNaCl；

耐酸特性研究：以10％接种量将菌液加入人工胃液中，37℃条件下静置培养，分别于0、1、2h取样测定菌株存活率。

耐胆盐特性研究：以10％的接种量将菌液加入到含0.2％的3号胆盐的人工肠液中，37℃条件下静置培养，分别于0、1、2h取样测定菌株存活率。

(2)干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌耐酸耐胆盐特性研究：2种菌株操作方法相同，以干酪乳杆菌为例，向1支菌种斜面试管中加入5ml的无菌水，将斜面菌落洗下，混匀后，按1％的接种量接入摇瓶培养基中，在37℃静置培养培养14-16h；

摇瓶培养基的制备：摇瓶培养基中各原料的质量百分比为：葡萄糖1.0％，酵母浸出粉1.0％，示蛋白胨0.5％，胰蛋白胨0.5％，L-半胱氨酸盐酸盐0.05％，微量盐4％，然后pH值调至7.0，在115℃条件下，灭菌20min备用。

微量盐配方：0.2g/LCaCl₂，0.48g/LMgSO₄，10g/LNaHCO₃，1.0g/LKH₂PO₄，1.0g/LK₂HPO₄，2.0g/LNaCl；

耐酸特性研究：以10％接种量将菌液加入人工胃液中，37℃条件下静置培养，分别于0、1、2h取样测定菌株存活率。

耐胆盐特性研究：以10％的接种量将菌液加入到含0.2％的3号胆盐的人工肠液中，37℃条件下静置培养，分别于0、1、2h取样测定菌株存活率。

菌种耐酸特性研究结果详见下表1：

表1益生菌在人工胃液中存活率

由上表1可知，干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌的耐胃酸效果较好，在pH为3.0的胃酸中培养2h时存活率仍高于60％。而动物双歧杆菌菌株、嗜热双歧杆菌、长双歧杆菌的耐胃酸特性略差些，但其在pH为3.0的胃酸中培养2h时存活率也达到50％。表明该五种菌株对胃酸的耐受特性较好，可抵抗胃酸并大量存活。

菌种耐胆盐特性研究结果详见下表2：

表2人工肠液(含胆盐)处理结果

由上表2可知，动物双歧杆菌菌株、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、嗜热双歧杆菌、长双歧杆菌在0.2％的3号胆盐中培养2h时菌株存活率高于20％，有一定的耐胆盐能力。

实施例3

实验复合微生态制剂对T2DMSD大鼠血糖的影响；

通过采用动物试验，从而观察复合微生态制剂对T2DMSD大鼠血糖水平是否有改善效果。试验所用复合微生态制剂包括动物双歧杆菌菌株活菌数≥2.0*10¹⁰CFU/g、干酪乳杆菌活菌数≥2.0*10¹⁰CFU/g、副干酪乳杆菌活菌数≥2.0*10¹⁰CFU/g、嗜热双歧杆菌活菌数≥2.0*10¹⁰CFU/g、长双歧杆菌活菌数≥2.0*10¹⁰CFU/g，余量分别用低聚木糖和菊粉补足，其中低聚木糖和菊粉的质量比为1:1。

本动物实验共18只小鼠。第一组：T2DMSD大鼠复合微生态制剂治疗组；第二组：T2DMSD大鼠未治疗对照组；第三组：SD大鼠健康对照组。每组6只。测定空腹血糖和餐后2h血糖。

给药方案：治疗组：T2DMSD大鼠饮水服用复合微生态制剂，每日早晚各1次，连用30天；T2DMSD大鼠未治疗对照组：不给药治疗；空白对照组：不使用药物治疗。30天后测定SD大鼠空腹血糖和餐后2h血糖，考察复合微生态制剂对改善糖尿病血糖的作用。

治疗组、疾病未治疗对照组及健康对照组临床观察及治疗情况统计见表3、表4；

表3为空腹血糖记录情况

表4为餐后2h血糖记录情况

由上表3和表4可知，空腹血糖值，治疗组正常率在67％，疾病未治疗组空腹血糖值均高于正常值7.0mmol/L，健康对照组血糖SD大鼠血糖均正常；餐后2h血糖值，治疗组和疾病未治疗组均超出正常值11.1mmol/L，由上表可以明确得知，连续服用30天对T2DM大鼠具有降糖作用，但并不能使其血糖完全达到正常值。继续服用或者联合治疗药物可取得更好效果，因此，本发明可以用于预防宠物2型糖尿病以减少宠物2型糖尿病的发生。

本发明筛选出的动物双歧杆菌菌株、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、嗜热双歧杆菌和长双歧杆菌，均为健康动物肠道内的原籍菌，具有增强动物机体免疫力、调节肠道菌群平衡的益生作用；

本发明是专用于预防肥胖宠物由于肠道菌群失调导致的胰岛素抵抗，而引起2型糖尿病。T2DMSD大鼠进行复合微生态制剂的治疗后，可改善空腹血糖，因此该制剂主要用于预防宠物T2DM的发生。同时具有改善肠道菌群，减少慢性炎症的产生，起到促健康，提高机体免疫力的功能。

尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。