阅读说明：本技术 一种乳杆菌组合物及其用途 (Lactobacillus composition and application thereof ) 是由 赵湘江 潘立 于 2018-05-28 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种乳杆菌组合物,含鼠李糖乳杆菌菌株和格氏乳杆菌菌株,可以抵抗细菌性阴道病和各种阴道感染。本发明组合物对细菌性阴道疾病效果显著,且安全无毒、稳定性好、可长期保存。较目前其他市售制剂,本组合物中菌株均能有效定植,植入阴道后可协同发挥作用,可形成阴道微生态,相对于单菌株的作用更为明显。(The invention discloses a lactobacillus composition which contains lactobacillus rhamnosus strain and lactobacillus gasseri strain and can resist bacterial vaginosis and various vaginal infections. The composition has obvious effect on bacterial vaginosis, is safe and nontoxic, has good stability and can be stored for a long time. Compared with other current commercial preparations, the bacterial strains in the composition can be effectively planted, can synergistically play a role after being implanted into a vagina, can form vaginal microecology, and has more obvious effect compared with a single bacterial strain.)

一种乳杆菌组合物及其用途

技术领域

本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种乳杆菌组合物及其用途，特别是用于制备 治疗妇科病的药物。

背景技术

健康妇***道内存在多种微生物，它们与宿主、环境之间构成了相互制约、相互协调、 动态平衡的***微生态系统。健康妇女的***菌群主要由乳杆菌构成，包括鼠李糖乳杆 菌、詹氏乳杆菌、格氏乳杆菌、卷曲乳杆菌、***乳杆菌等。正常情况下乳杆菌对*** 可以起到保护作用，当***微生态的乳杆菌紊乱可以导致致病菌入侵而产生***炎。

细菌性***病(BV)的发生是由于***菌群失调，寄主自身的乳杆菌减少而导致其他条件性病原微生物如加德纳菌、各种厌氧菌、弯曲弧菌等大量繁殖，通常BV以加德 纳菌为主的一种混合感染。应用抗生素治疗可暂时缓解BV的症状，但也使本已减少的 乳杆菌进一步减少，加重***微生态失调，从而使BV反复复发。如何控制复发、彻底 根治细菌性***病是妇产科医生亟需解决的棘手问题。

目前市面已有制品并非我国妇***道优势菌群，定植能力较差，也不能维持稳定的活 菌量，不能完全满足妇科临床的需求。健康妇***道内存在多种乳杆菌，单一菌种作为 ***菌群调节时也较难起到良好的作用效果，即使单一菌种存在良好的产酸能力、产H₂O₂能力，及与***上皮细胞粘附的能力，但是单一菌种在重新定植进入***菌群时也存在困难，难以长期发挥作用。当多个菌种在***内成功定植，协同发挥作用是乳杆菌持续 作用的重要基础，也是乳杆菌能够发挥疗效的关键因素，同时能有效形成***微生态系 统。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种乳杆菌组合物，该组合物能有效协同发挥作用， 该组合物菌株来源于健康人体，具有活跃稳定的生物学特性，为抑菌能力强的鼠李糖乳 杆菌和格氏乳杆菌组合。

本发明的技术方案如下：

一种乳杆菌组合物，包含鼠李糖乳杆菌菌株和格氏乳杆菌菌株，其特征在于，其中所述鼠李糖乳杆菌(RD-0060)保藏编号为CGMCC No.14184，保藏在中国微生物菌种 保藏管理委员会普通微生物中心；所述格氏乳杆菌(RD-0046)保藏编号为CGMCC No.14109，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

进一步，所述组合物还可以包含乳糖糖、微晶钎维素、淀粉、预交化淀粉、二氧化硅、硬酯酸镁等药学上可接受的药用辅料，也可不含药用辅料。

一种所述的乳杆菌组合物用于制备预防和/或治疗妇科疾病。

一种所述的乳杆菌组合物用于制备预防和/或治疗***疾病药物的用途。

进一步，所述***疾病致病菌包括加德纳氏菌、梭菌、白色念珠菌、阿托波菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、沙门氏菌中的一种或几种的组合。

一种所述的乳杆菌组合物用于制备具有***上皮细胞粘附功能的药物中的用途。

一种所述的乳杆菌组合物用于制备具备调节***菌群平衡的药物中的用途。

本发明两种乳杆菌鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)RD-060和格氏乳杆菌 (Lactobacillus gasseri)RD-0046均从中国健康育龄妇***道分泌物中筛选而来，经大量 实验证明，具有较强的产酸、产H₂O₂能力、及与***上皮细胞粘附的能力。在上述预防和/或治疗妇科疾病药物，特别是预防和/或治疗***致病菌药物、预防和/或治疗*** 疾病药物、调节***菌群平衡的药物、具有***上皮细胞粘附功能的药物中均能发挥其 因自身特性而具有良好的药用效果。

采用上述技术方案产生的有益效果在于：(1)本发明的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)RD-060和格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)RD-0046菌株可以独立并协同 抵抗细菌性***病和各种***感染，包括白色念珠菌性***炎，淋病，病毒性***炎，以及泌尿道感染等。(2)本发明的菌株直接采集于健康人体，具有活跃稳定的生物学特 性，无需驯化和复壮工艺，直接进入制剂工艺即可。(3)本发明的菌株具有抑制加德纳 氏菌、梭菌、白色念珠菌、阿托波菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、 沙门氏菌等作用，与目前市售制剂相比具有明显优势，植入时菌株定植能力强，能有效 发挥作用。(4)可有效形成***微生态，这与单一菌种定植效果有明显区别。

保藏信息

本发明的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)RD-060从中国健康育龄妇*** 道分泌物中筛选得来，其中鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)RD-0060保藏单位 中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地点中国北京，保藏编号CGMCCNo.14184，保藏日期2017年05月24日；其中格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)RD-0046保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地点中国北京，保藏编 号CGMCC No.14109，保藏日期2017年05月10日。

附图说明

图1：组合物抑菌的菌饼图—金色葡萄球菌；

图2：组合物抑菌的菌饼图—梭菌；

图3：格氏乳杆菌RD-0046的基因组DNA提取结果图；

图4：格氏乳杆菌RD-0046的PCR产物扩增结果图；

图5：鼠李糖乳杆菌RD-0060的基因组DNA提取结果图；

图6：鼠李糖乳杆菌RD-0060的PCR产物扩增结果图。

具体实施方式

以下实施例中所用的试验试剂耗材，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；以下实施例中的％为质量百分含量。

以下实施例中所用到的细菌培养基，可以按如下方法配制：

1、肉汤固体培养基(MRS)配制：

(1)将琼脂粉配成溶液，1.5g/100ml去离子水；

(2)加入MRS培养基17.91g/100ml琼脂溶液，混匀；

(3)放入灭菌锅，1.0MPa蒸汽灭菌20分钟；

(4)待培养基温度降至室温后倒入培养皿，根据培养皿大小约10ml/个或20ml/个；

(5)于超净台内操作。冷却后成琼脂状，标记培养基名称及配制日期，放于4℃冰箱待用。

2、肉汤液体培养基(MRS)配制：

(1)将MRS培养基加入去离子水，比例为17.9l g/100ml；

(2)放入灭菌锅，1.0MPa蒸汽灭菌20分钟；

(3)待灭菌锅无压力后取出，分装至EP管中，每个1.0ml。标记培养基名称及配 制日期，放于4℃冰箱待用。

实施例1、鼠李糖乳杆菌RD-060冻干菌粉的制备

将鼠李糖乳杆菌RD-060在pH 6.5的肉汤液体培养基(MRS)中生长，使用100升 规模的发酵罐发酵，厌氧培养。在平台期早期收集菌体，其活菌数达到约1.0×10⁹CFU/ml 以上。通过离心分离收集菌体，用磷酸缓冲液洗涤后，与冻干保护剂(包括脱脂奶粉和 蔗糖等)混合。然后，将混合物置于冷冻干燥机中冷冻干燥。样品在-40℃下冷冻约2小 时，然后在-20℃下真空干燥20-30小时，再在30℃干燥3-5小时。干粉在放入干燥剂的 铝箔袋分装，并冷藏贮藏。将冻干粉进行活菌计数，活菌数应当在1.0×10¹⁰CFU/g以上。

实施例2、格氏乳杆菌RD-0046冻干菌粉的制备

将格氏乳杆菌RD-0046在pH 6.5的肉汤液体培养基(MRS)中生长，使用100升规 模的发酵罐发酵，厌氧培养。在平台期早期收集菌体，其活菌数达到约1.0×10⁹CFU/ml 以上。通过离心分离收集菌体，用磷酸缓冲液洗涤后，与冻干保护剂(包括脱脂奶粉和 蔗糖等)混合。然后，将混合物置于冷冻干燥机中冷冻干燥。样品在-40℃下冷冻约2小 时，然后在-20℃下真空干燥20-30小时，再在30℃干燥3-5小时。干粉在放入干燥剂的 铝箔袋分装，并冷藏贮藏。将冻干粉进行活菌计数，活菌数应当在1.0×10¹⁰CFU/g以上。

实施例3、组合物的制备

分别取100g鼠李糖乳杆菌RD-060冻干菌粉、100g格氏乳杆菌RD-0046的菌粉以及2.3kg微晶纤维素和10g硬脂酸镁混合，填充于2号硬胶囊，每个胶囊填充220mg～250mg， 做成乳杆菌组合物胶囊，并冷藏贮藏。计数确认单一菌的活菌数应当在1.0×10⁸CFU/g 以上。

实施例4、组合物的制备

分别取10g鼠李糖乳杆菌RD-060冻干菌粉、100g格氏乳杆菌RD-0046的菌粉以及2.4kg微晶纤维素和10g二氧化硅混合，填充于2号硬胶囊，每个胶囊填充220mg～250mg， 做成乳杆菌组合物胶囊，并冷藏贮藏。计数确认鼠李糖乳杆菌RD-060的活菌数在 1.0×10⁷CFU/g以上，格氏乳杆菌RD-0046的活菌数应当在1.0×10⁸CFU/g以上。

实施例5、组合物的制备

分别取100g鼠李糖乳杆菌RD-060冻干菌粉、10g格氏乳杆菌RD-0046的菌粉以及2.4kg微晶纤维素和10g硬脂酸镁混合，填充于2号硬胶囊，每个胶囊填充220mg～250mg， 做成乳杆菌组合物胶囊，并冷藏贮藏。计数确认鼠李糖乳杆菌RD-060的活菌数在 1.0×10⁸CFU/g以上，格氏乳杆菌RD-0046的活菌数应当在1.0×10⁷CFU/g以上。

实施例6、组合物的制备

分别取100g鼠李糖乳杆菌RD-060冻干菌粉、100g格氏乳杆菌RD-0046的菌粉以及2.3kg乳糖和10g硬脂酸镁混合，填充于2号硬胶囊，每个胶囊填充220mg～250mg，做 成乳杆菌组合物胶囊，并冷藏贮藏。计数确认单一菌的活菌数应当在1.0×10⁸CFU/g以 上。

实施例7、组合物的制备

分别取10g鼠李糖乳杆菌RD-060冻干菌粉、100g格氏乳杆菌RD-0046的菌粉以及2.4kg乳糖和10g硬脂酸镁混合，填充于2号硬胶囊，每个胶囊填充220mg～250mg，做 成乳杆菌组合物胶囊，并冷藏贮藏。计数确认鼠李糖乳杆菌RD-060的活菌数在 1.0×10⁷CFU/g以上，格氏乳杆菌RD-0046的活菌数应当在1.0×10⁸CFU/g以上。

实施例8、组合物的制备

分别取10g鼠李糖乳杆菌RD-060冻干菌粉、100g格氏乳杆菌RD-0046的菌粉以及2.4kg乳糖和10g硬脂酸镁混合，填充于2号硬胶囊，每个胶囊填充220mg～250mg，做 成乳杆菌组合物胶囊，并冷藏贮藏。计数确认鼠李糖乳杆菌RD-060的活菌数在 1.0×10⁷CFU/g以上，格氏乳杆菌RD-0046的活菌数应当在1.0×10⁸CFU/g以上。

实施例9、组合物的毒性考察

5只SPF级昆明种小鼠，每只小鼠***给药0.3ml乳杆菌组合物悬浮菌液(大于 1×10⁹CFU/只鼠)。按2015版中国药典要求，每天测量每只小鼠体重，并观察、记录 每只小鼠注射前后的行为和生理等变化。结果显示7天内所有动物体重均有增加，未见 明显中毒症状，活动行为无异常，无动物死亡，认为该乳杆菌组合物无毒性。

实施例10、组合物对致病菌的抑菌能力实验

***炎症往往与致病菌相关，比加德纳氏菌、梭菌、白色念珠菌、阿托波菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、沙门氏菌等相关，因此将组合物、单一菌 及上市品(定君生)分别与金色葡萄球菌、梭菌进行体外抑菌试验考察。

①对金色葡萄球菌的抑菌能力考察

将鼠李糖乳杆菌RD-060、格氏乳杆菌RD-0046、组合物(鼠李糖乳杆菌RD-060和 格氏乳杆菌RD-0046)、上市品(定君生)分别在肉汤固体培养基(MRS)中培养48h， 用圆形取样器形成8mm固体菌饼培养物。

将金色葡萄球菌液涂布在甘露醇氯化钠琼脂平皿中，然后将上述菌饼放置在含有金 色葡萄球菌的固体培养基中，并于37℃培养24h，24h观察抑菌圈大小，结果如下：

——	组合物	鼠李糖乳杆菌	格氏乳杆菌	上市品(定君生)
					菌圈大小	15.4mm	14.3mm	13.2mm	10.7mm

其中组合物抑菌的菌饼图见说明书附图图1。

对于好氧致病菌金色葡萄球菌的抑菌能力分别为组合物(鼠李糖乳杆菌RD-060和格 氏乳杆菌RD-0046)>鼠李糖乳杆菌RD-060>格氏乳杆菌RD-0046>上市品(定君生)。

①对梭菌的抑菌能力考察

将鼠李糖乳杆菌RD-060、格氏乳杆菌RD-0046、组合物(鼠李糖乳杆菌RD-060和 格氏乳杆菌RD-0046)、上市品(定君生)分别在肉汤固体培养基(MRS)中培养48h， 用圆形取样器形成8mm固体菌饼培养物。

将梭菌液涂布在哥伦比亚琼脂培养基平皿中，然后将上述菌饼放置在上述含有梭菌 的哥伦比亚琼脂培养基平皿中，并于37℃下厌氧培养24h，24h观察抑菌圈大小，结果 如下：

——	组合物	鼠李糖乳杆菌	格氏乳杆菌	上市品(定君生)
					菌圈大小	35.3mm	29.8mm	30.2mm	26.4mm

其中组合物菌饼图见说明书附图图2。

对于梭菌的抑菌能力分别为组合物(鼠李糖乳杆菌RD-060和格氏乳杆菌RD-0046)> 鼠李糖乳杆菌RD-060>格氏乳杆菌RD-0046>上市品(定君生)。

实施例11、组合物的食蟹猴***定植实验

选择4只健康动物按体重进行分层随机分组，分成2组，对照组动物2只(动物编 号为XX-01、XX-02)，实验组2只(动物编号为XX-03、XX-04)。其中实验动物为由 苏州西山中科实验动物有限公司提供的雌性食蟹猴。试验方法如下：

在可观察到正常***的猴子月经后，连续5天***给甲硝唑栓剂(200mg/只)，然后将实施例3制备的胶囊再连续5天植入细菌。每周对动物的***进行一次观察，检 查***分泌物的颜色，性状及分泌量及测定***分泌物pH，取2只无菌聚酯棉签取样， 其中一只棉签用于***分泌物清洁度镜检，另一支棉签用于菌群分析。

***菌的分离和纯化培养：将采集的***分泌物，在2mL D-Hanks缓冲液中振荡，以磷酸盐缓冲液做梯度稀释，分别涂布于MRS琼脂板上并且在37℃，厌氧条件下培养 24～48h。记录单菌落形态等信息，重新划线MRS琼脂板以得到纯化的菌落并进行生化 和分子鉴定。

分子生物学方法鉴定(16SrDNA基因序列分析)：对所分离纯化出的菌株进行16SrDNA的序列扩增、测序及分析，将鉴定为16SrDNA片段的PCR扩增产物使用切 胶回收法对目的片段纯化后进行测序。将测得的16SrDNA基因序列使用NCBI中的 BLAST工具与GenBank数据库中的已知序列进行比对分析，当比对同源性大于或等于 99％，则鉴定为同一物种。

实验结果及分析***粘膜及分泌物一般观察：植入后每周观察一次，结果发现所有试验动物***粘膜分泌物未发现明显异常。

(1)***分泌物pH值测定：在胶囊给药后，大部分实验组动物***分泌物pH值明显低于上市品对照组(定君生)，且相对于植入前明显下降，pH值测定结果如下表所示：

(2)***分泌物清洁度：植入前后相比，对照组***清洁度略有降低；而实验组在给 药植入后，***分泌物清洁度明显优于对照组，可见到数量不等的革兰氏阳性***杆菌， 清洁度明显高于对照组。***分泌物清洁度判定结果如下表所示：

Ⅰ～Ⅲ为清洁程度，Ⅲ表示洁净度最低。

将实验组分泌物进行扩增分离纯化，经过***菌群分析，从实验组全部2只动物***分泌物中均发现鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)RD-0060和格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)RD-0046，分离出的乳杆菌的信息如图所示为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)RD-0060和格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)RD-0046，测序信息参见核苷酸和氨基酸序列表，因此可以看出鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus) RD-0060和格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)RD-0046可以有效定植于中华食蟹猴*** 内。

对比发现，组合物的定植后清洁度和pH均明显优于上市品定君生，分离表明组合物 能有效定植，复方双菌也将在***内协同产生作用，形成生态菌群。

两株菌定植分离的16SrDNA片段PCR扩增产物的电泳图：

格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)RD-0046的基因组DNA提取结果见说明书附图 图3；

格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)RD-0046的PCR产物扩增结果见说明书附图图 4。

鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)RD-0060基因组DNA提取结果见说明书附 图图5；

鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)RD-0060的PCR产物扩增结果见说明书附 图图6。

实施例12、组合物的细胞粘附

组合物可用于细菌性***炎的治疗。在***内用药时，将与***上皮细胞粘附产生 作用。

将单一菌株RD-0046\RD-0060于MRS培养基培养后，组合物制剂于MRS培养基培 养后分别与体外培养的VK2/E6E7人***上皮细胞孵育2h、4h，培养结束后清洗未粘附 的细菌，然后用tritonx-100裂解细胞，制成混悬菌液，梯度稀释后接种于MRS琼脂培养 板上，厌氧培养48小时后统计每平板的菌落数，计算粘附率，以粘附细菌除以初始细菌 得到粘附率。

数据显示，组合后可有相互促进与细胞的黏附，这对发生协同作用产生积极效果。

序列表

<110> 赵湘江

<120> 一种乳杆菌组合物及其用途

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1480

<212> DNA

<213> 格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)

<400> 1

attcctggtc taccttagac ggctgactcc tataaagggt tatcccaccg gctttgggtg 60

ttacagactc tcatggtgtg acgggcggtg tgtacaaggc ccgggaacgt attcaccgcg 120

gcgtgctgat ccgcgattac tagcgattcc agcttcgtgt aggcgagttg cagcctacag 180

ttcgaactga gaacggcttt cagagatccg cttaccttcg caggttcgct tctcgttgta 240

ccgtccattg tagcacgtgt gtagcccagg tcataagggg catgatgact tgacgtcatc 300

cccaccttcc tccggtttgt caccggcagt ctcattagag tgcccaactt aatgatggca 360

actaatgaca agggttgcgc tcgttgcggg acttaaccca acatctcacg acacgagctg 420

acgacagcca tgcaccacct gtctcagcgt ccccgaaggg aacacctaat ctcttaggtt 480

tgcactggat gtcaagacct ggtaaggttc ttcgcgttgc ttcgaattaa accacatgct 540

ccaccgcttg tgcgggcccc cgtcaattcc tttgagtttc aaccttgcgg tcgtactccc 600

caggcggagt gcttaatgcg ttagctgcag cactgagagg cggaaacctc ccaacactta 660

gcactcatcg tttacggcat ggactaccag ggtatctaat cctgttcgct acccatgctt 720

tcgagcctca gcgtcagttg cagaccagag agccgccttc gccactggtg ttcttccata 780

tatctacgca ttccaccgct acacatggag ttccactctc ctcttctgca ctcaagttca 840

acagtttctg atgcaattct ccggttgagc cgaaggcttt cacatcagac ttattgaacc 900

gcctgcactc gctttacgcc caataaatcc ggacaacgct tgccacctac gtattaccgc 960

ggctgctggc acgtagttag ccgtgacttt ctaagtaatt accgtcaaat aaaggccagt 1020

tactacctct atctttcttc actaccaaca gagctttacg agccgaaacc cttcttcact 1080

cacgcggcgt tgctccatca gacttgcgtc cattgtggaa gattccctac tgctgcctcc 1140

cgtaggagtt tgggccgtgt ctcagtccca atgtggccga tcagtctctc aactcggcta 1200

tgcatcattg ccttggtaag ccgttacctt accaactagc taatgcaccg caggtccatc 1260

caagagtgat agcagaacca tcttttaaac tctagacatg cgtctagtgt tgttatccgg 1320

tattagcatc tgtttccagg tgttatccca gtctcttggg caggttaccc acgtgttact 1380

cacccgtccg ccgctcgctt gtatctagtt tcatttggtg caagcaccaa attcatctag 1440

gcaagctcgc tcgactgcat gtatagcatg ccgccactgg 1480

<210> 2

<211> 1506

<212> DNA

<213> 鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)

<400> 2

aatttttgtc caccttagac ggctcgctcc ctaaaagggt tacgccaccg gcttcgggtg 60

ttacaaactc tcatggtgtg acgggcggtg tgtacaaggc ccgggaacgt attcaccgcg 120

gcgtgctgat ccgcgattac tagcgattcc gacttcgtgt aggcgagttg cagcctacag 180

tccgaactga gaatggcttt aagagattag cttgacctcg cggtctcgca actcgttgta 240

ccatccattg tagcacgtgt gtagcccagg tcataagggg catgatgatt tgacgtcatc 300

cccaccttcc tccggtttgt caccggcagt cttactagag tgcccaacta aatgctggca 360

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atcaaaagat gtcaagacct ggtaaggttc ttcgcgttgc ttcgaattaa accacatgct 540

ccaccgcttg tgcgggcccc cgtcaattcc tttgagtttc aaccttgcgg tcgtactccc 600

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gcattcatcg tttacggcat ggactaccag ggtatctaat cctgttcgct acccatgctt 720

tcgagcctca gcgtcagtta cagaccagac agccgccttc gccactggtg ttcttccata 780

tatctacgca tttcaccgct acacatggag ttccactgtc ctcttctgca ctcaagtttc 840

ccagtttccg atgcacttcc tcggttaagc cgagggcttt cacatcagac ttaaaaaacc 900

gcctgcgctc gctttacgcc caataaatcc ggataacgct tgccacctac gtattaccgc 960

ggctgctggc acgtagttag ccgtggcttt ctggttggat accgtcacgc cgacaacagt 1020

tactctgccg accattcttc tccaacaaca gagttttacg acccgaaagc cttcttcact 1080

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cgtaggagtt tgggccgtgt ctcagtccca atgtggccga tcaacctctc agttcggcta 1200

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caaaagcgat agcttacgcc atctttcagc caagaaccat gcggttcttg gatttatgcg 1320

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tcacccgtcc gccactcgtt caaaattaaa tcaagatgca agcacctttc aataatcaga 1440

actcgttcga cttgcatgta ttaggcacgc cgccagcgtt catcctgacc agaaaaaaaa 1500

actcat 1506