阅读说明：本技术 一种菌剂组合物及其应用 (Bacterium agent composition and application thereof ) 是由 陈林 王溢 于 2019-11-08 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种复合菌剂颗粒,其配方如下所示：瑞士乳杆菌菌粉(5-10重量份)、3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷(3-5重量份)、硬脂酸镁(1-2重量份)、无水磷酸三钠(2-3重量份)、羟丙甲基纤维素(5-10重量份)、黄原胶(1-3重量份)、蔗糖(200重量份)。(The invention discloses a composite microbial inoculum particle, which has the following formula: lactobacillus helveticus bacterium powder (5-10 parts by weight), 3, 4-dihydroxy benzoic acid-3-O-alpha-L-rhamnoside (3-5 parts by weight), magnesium stearate (1-2 parts by weight), anhydrous trisodium phosphate (2-3 parts by weight), hydroxypropyl methyl cellulose (5-10 parts by weight), xanthan gum (1-3 parts by weight) and sucrose (200 parts by weight).)

一种菌剂组合物及其应用

技术领域

本发明涉及一种菌剂组合物及其应用，尤其涉及一种调理厌食症的菌剂组合物。

背景技术

人类的身体上栖息着无数微生物，其中微生态系统为最主要、最为复杂的系统。当人的免疫力下降时，益生菌对人体健康起着重要的作用。在无菌的啮齿动物和鸟类身上已经被证实了这一观点。微生物定植对营养、体内生长、诱导和调节免疫、内分泌平衡，中枢神经系统的成熟以及行为起着重要的作用。目前微生物群落最大的生态位点是人类的肠道，肠道微生态的结构以及多样性等对人和动物的健康起着至关重要的作用。而胃部的细菌也是非常重要的。胃酸ph值低，细菌经过胃部到达肠道，肠道起到吸收的作用，当胃肠道微生态的结构或多样性发生失调时，将会导致各种疾病的发生。

厌食症是以各种原因引起的长期食欲不振、食量减退，然后逐渐出现身体消瘦，智力发育缓慢，免疫力降低，易引发各种疾病的病症，是常见病和多发病。中医认为病变脏腑均以脾胃为主，其病机为脾失健运，脾胃互为表里，脾主运化，胃主受纳，脾不和则食不化，胃不和则不思食。故在治疗上，多以调理脾胃为基本法则，而微生物对胃排空和小肠推进实验，探讨其增进消化功能都具有重要的生物学及医学意义。

本发明旨在提出一种针对厌食症有效的复合菌剂颗粒。

发明内容

本发明的目的是提供一种针对厌食症有效的复合菌剂颗粒。

瑞士乳杆菌(Lactobacillushelveticus),最早从西方奶酪中分离出来，乳酸杆菌属,0.6-1.0x2.0-6.0微米,单个或成链,用次甲基蓝染色无异染粒(这一点与德氏乳杆菌、保加利亚乳杆菌、赖氏乳杆菌和乳酸乳杆菌不同)。在琼脂平板上,菌落直径2~3mm或更小,通常不透明,白色到浅灰色,粗糙到假根状。在厌氧和5%CO₂条件下洋菜划线培养的生长物大量增加,在含吐温80或油酸钠的培养基中菌落较大或较光滑。

本发明实施例选用的瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)NS8分离自锡林郭勒地区的Koumiss，为市售产品，购买获得。

倒心盾翅藤(AspidopterysobcordataHemsl.)系金虎尾科盾翅果属木质藤本植物,主要分布于我国的海南、云南等地高海拔山地森林边的灌丛中。该属全世界共20种,我国约8种,其中,两种供药用。贵州盾翅藤(A.cavalerieilevl.)的叶入药,主治小儿疳积。倒心盾翅藤藤入药,其性涩、凉,有消炎利尿、清热排石之功效,民间主要用于治疗***、膀胱炎、***、风湿骨痛、产后体虚、食欲不振等疾病。

雷玉等从倒心盾翅藤中的1个新鼠李糖苷（中草药 Chinese Traditional andHerbal Drugs 第50卷第5期 2019 年3 月），平面结构为：3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷。

本发明人发现该3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷可以和瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)NS8具有协同改善厌食症的作用。

本发明所需要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现。

一种复合菌剂颗粒，其特征在于，其包括：

瑞士乳杆菌，3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷。

作为优选，所述瑞士乳杆菌为述瑞士乳杆菌NS8。瑞士乳杆菌(Lactobacillushelveticus)NS8分离自锡林郭勒地区 的Koumiss，由中国科学院心理健康重点实验室行为生物学实验室分离鉴定并保存，为市售产品。

瑞士乳杆菌NS8培养方法：取一环乳酸菌接种到 MRS 固体培养基中划线，37℃厌氧培养24 h。挑取平板中长势较好的单菌落接种至 MRS 液体培养基中活化，厌氧培养 成5*10⁷（CFU/ml）瑞士乳杆菌NS8种子液。将瑞士乳杆菌NS8种子液逐步放大至大罐发酵，离心，冷冻干燥后制得菌粉。

本发明的3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷参考该文献（倒心盾翅藤中的1个新鼠李糖苷，中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第50 卷第 5 期 2019年3 月）的方法，从倒心盾翅藤中分离提取获得。

所述复合菌剂颗粒配方如下所示：

瑞士乳杆菌菌粉（5-10重量份）、3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷（3-5重量份）、硬脂酸镁（1-2重量份）、无水磷酸三钠（2-3重量份）、羟丙甲基纤维素（5-10重量份）、黄原胶（1-3重量份）、蔗糖（200重量份）。

制备方法如下：

（1）备料:各种物料过40目筛备用。

（2）糖颗粒制备：将蔗糖（200重量份）、黄原胶（1-3重量份）加入到卧式混合机混合15分钟，加入纯化水搅拌后置于摇摆制粒机上过30目筛制粒，再将湿粒置干燥机中干燥，实际温度控制在40℃-60℃；将干燥好的颗粒过30目筛。水分应不超过1.5%。

（3）复合菌剂颗粒制备：将瑞士乳杆菌菌粉（5-10重量份）、3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷（3-5重量份）、羟丙甲基纤维素（5-10重量份）放入卧式混合机内开启搅拌，混合均匀，加入水适量，搅拌30min，颗粒过30目整粒，35℃-40℃干燥30分钟。

（4）总混：将复合菌剂颗粒、硬脂酸镁（1-2重量份）和无水磷酸三钠（2-3重量份）混合30-60分钟。

本发明的优点：

本发明人发现该3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷可以和瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)NS8协同作用于胃部，具有协同改善厌食症的作用。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

本发明的具体实施例如以下说明。

瑞士乳杆菌NS8菌粉 制备 ：

瑞士乳杆菌NS8培养方法：取一环乳酸菌接种到 MRS 固体培养基中划线，37℃厌氧培养24 h。挑取平板中长势较好的单菌落接种至 MRS 液体培养基中活化，厌氧培养 成5*10⁷（CFU/ml）瑞士乳杆菌NS8种子液。将瑞士乳杆菌NS8种子液逐步放大至大罐发酵，离心，冷冻干燥后制得菌粉。

3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷制备 ：

本发明的3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷参考该文献（倒心盾翅藤中的1 个新鼠李糖苷，中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第50 卷第 5 期 2019 年3月）的方法，从倒心盾翅藤中分离提取获得。

实施例1：

复合菌剂颗粒处方如下所示：

瑞士乳杆菌菌粉（5重量份）、3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷（5重量份）、硬脂酸镁（1重量份）、无水磷酸三钠（3重量份）、羟丙甲基纤维素（10重量份）、黄原胶（1重量份）、蔗糖（200重量份）

制备方法如下：

（1）备料:各种物料过40目筛备用。

（2）糖颗粒制备：将蔗糖、黄原胶加入到卧式混合机混合15分钟，加入纯化水搅拌后置于摇摆制粒机上过30目筛制粒，再将湿粒置干燥机中干燥，实际温度控制在40℃；将干燥好的颗粒过30目筛。水分应不超过1.5%。

（3）复合菌剂颗粒制备：将瑞士乳杆菌菌粉、3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷、羟丙甲基纤维素放入卧式混合机内开启搅拌，混合均匀，加入水适量，搅拌30min，颗粒过30目整粒，35℃-40℃干燥30分钟。

（4）总混：将复合菌剂颗粒、硬脂酸镁和无水磷酸三钠混合30分钟。

实施例2：

复合菌剂颗粒处方如下所示：

瑞士乳杆菌菌粉（7重量份）、3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷（4重量份）、硬脂酸镁（1重量份）、无水磷酸三钠（2重量份）、羟丙甲基纤维素（8重量份）、黄原胶（2重量份）、蔗糖（200重量份）

制备方法如下：

（1）备料:各种物料过40目筛备用。

（2）糖颗粒制备：将蔗糖、黄原胶加入到卧式混合机混合15分钟，加入纯化水搅拌后置于摇摆制粒机上过30目筛制粒，再将湿粒置干燥机中干燥，实际温度控制在40℃-60℃；将干燥好的颗粒过30目筛。水分应不超过1.5%。

（3）复合菌剂颗粒制备：将瑞士乳杆菌菌粉、3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷、羟丙甲基纤维素放入卧式混合机内开启搅拌，混合均匀，加入水适量，搅拌30min，颗粒过30目整粒，35℃干燥30分钟。

（4）总混：将复合菌剂颗粒、硬脂酸镁和无水磷酸三钠混合50分钟。

实施例3

复合菌剂颗粒处方如下所示：

瑞士乳杆菌菌粉（10重量份）、3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷（5重量份）、硬脂酸镁（1重量份）、无水磷酸三钠（3重量份）、羟丙甲基纤维素（9重量份）、黄原胶（2重量份）、蔗糖（200重量份）

制备方法如下：

（1）备料:各种物料过40目筛备用。

（2）糖颗粒制备：将蔗糖、黄原胶加入到卧式混合机混合15分钟，加入纯化水搅拌后置于摇摆制粒机上过30目筛制粒，再将湿粒置干燥机中干燥，实际温度控制在60℃；将干燥好的颗粒过30目筛。水分应不超过1.5%。

（3）复合菌剂颗粒制备：将瑞士乳杆菌菌粉、3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷、羟丙甲基纤维素放入卧式混合机内开启搅拌，混合均匀，加入水适量，搅拌30min，颗粒过30目整粒，35℃干燥30分钟。

（4）总混：将复合菌剂颗粒、硬脂酸镁和无水磷酸三钠混合60分钟。

实施例4

对比例1：同实施例3的配方，不加瑞士乳杆菌

对比例2：同实施例3的配方，不加3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷

对比例3：同实施例3的配方，不加入瑞士乳杆菌，3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷

实施例5

厌食症的研究：

选用购买的Wistar 大白鼠建模，SPF级，雌雄各半，体质量60-75g。

动物分组及建立厌食症大鼠模型：取大白鼠80 只，按体质量分层随机分为8组，每组10只。各组喂特制饲料开始建立厌食症模型（大鼠厌食症特制饲料: 采用鱼松、奶粉、白糖、玉米粉、黄豆粉、鲜鸡蛋、鲜肥肉按1∶1∶1∶1∶2∶1.8∶2比例配制，混匀，捏成饼干状，每块约20 g，晾干，冷藏）。所有大鼠均单独喂养，自由进食饮水。于第8天根据造模大鼠体质量和进食量调整各组大鼠，使每组大鼠体质量、进食量均匀。

将这8组大鼠分别为实施例1组、实施例2组、实施例3组、对比例1组、对比例2组、对比例3组、阴性对照组和阳性对照组。实施例和对比例按照0.3 g· kg^-1·d剂量喂养，阴性对照组继续特制饲料喂养，阳性对照组给与药江中健胃消食片设1.0 g·kg^-1·d剂量喂养。建好模的大鼠再连续喂养3周，观察动物一般状态，称量记录从第1周到第3周结束这8组厌食症大鼠的体质量、摄食量。测试结果如下表1、表2所示。

第3周喂养结束，***轻度麻醉动物，结扎贲门，取全胃，小心收集胃液，1000 g离心20 min，吸取上清液，测定游离酸度、总酸度及胃蛋白酶活性。计算游离酸和总酸浓度，计算公式: 游离酸(mol·L^-1) = 游离酸滴定终点消耗的NaOH 溶液毫升数; 总酸度(mmol·L^-1) = 两次滴定消耗的NaOH毫升数; 总酸排出量( mmol·L^-1)=总酸度×每小时胃液量。测试结果如下表3所示。

表1 ：对大鼠体质量的影响( x̅±s，n=10)

表2 ：对大鼠进食量的影响(x̅±s，n=10)

表3 对大鼠游离酸和总酸的影响(x̅±s，n=10)

从表1、2、3可以看出同时加入瑞士乳杆菌，3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷可明显增加幼龄厌食模型大鼠体质量和饮食量(P＜0.05）,提高胃液中总酸及游离酸含量(实施例1-3组和阴性对照相比P＜0.05），单独添加瑞士乳杆菌或者3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷都可以略提高体质量和饮食量，总酸及游离酸含量(对比例1-3组和阴性对照相比)。所以，本发明发现瑞士乳杆菌，3,4-二羟基苯甲酸-3-O-α-L-鼠李糖苷具有协同改善厌食症的作用。

实施例5

功能性奶粉制备：

将90份乳粉和10份复合菌剂颗粒混合均匀即可制备得到具有改善厌食症效果的功能性奶粉。

需要说明的是，以上所述仅为本发明的优选具体的实施例，若依本发明的构想所作变动，其产生的功能作用，仍未超出说明书所涵盖的精神时，均应在本发明的范围内。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。