阅读说明：本技术 一种用于抗鸡球虫病的卵黄抗体及其制备方法和装置 (Egg yolk antibody for resisting chicken coccidiosis and preparation method and device thereof ) 是由 徐前明 赵玉洁 卞传忠 孙裴 路桂霞 孔浩然 吴尚桦 王桂军 王勇 施之强 章翔 于 2019-09-27 设计创作，主要内容包括：本发明公开一种卵黄抗体及其制备方法和装置,利用本发明试验对象,对柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和毒害艾美尔球虫进行虫体复壮,增殖,将球虫按等比例混合后,经超声波破碎方法制备抗原,所得抗原溶液和等体积的弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂分别混匀后,先后对蛋鸡进行3次免疫,3次免疫后对所收集的鸡蛋蛋黄中卵黄抗体提取纯化、鉴定和抗体效价评估；分别开展不同卵黄粉制备工艺的研究,冻干粉制备效果明显高于喷粉技术,且该制备出该工艺中的卵黄与稀释液配比关系,冻干温度曲线等参数条件,其成本相对较低,制备效率高,抗体损失率仅为10%,抗体效价高,而高温喷粉后抗体效价呈高度下降趋势,该方法明显优于高温喷粉技术制备卵黄粉。(The invention discloses a yolk antibody and a preparation method and a device thereof, wherein by utilizing the test object of the invention, the Eimeria tenella, the Eimeria maxima and the Eimeria necatrix are rejuvenated and proliferated, the coccidia are mixed according to equal proportion, then the antigen is prepared by an ultrasonic crushing method, the obtained antigen solution is respectively and uniformly mixed with equal volume of Freund's complete adjuvant and Freund's incomplete adjuvant, then 3 times of immunization is carried out on laying hens, and after 3 times of immunization, the yolk antibody in the collected egg yolk is extracted, purified, identified and evaluated; the research of different yolk powder preparation processes is respectively carried out, the preparation effect of freeze-dried powder is obviously higher than that of a powder spraying technology, the yolk and diluent proportion relationship, the freeze-drying temperature curve and other parameter conditions in the preparation process are relatively low in cost, the preparation efficiency is high, the loss rate of the antibody is only 10%, the antibody titer is high, the antibody titer is highly reduced after high-temperature powder spraying, and the method is obviously superior to the method for preparing yolk powder by the high-temperature powder spraying technology.)

一种用于抗鸡球虫病的卵黄抗体及其制备方法和装置

技术领域

本发明涉及预防鸡球虫病的卵黄抗体制备技术领域，更具体涉及一种用于抗鸡球虫病的卵黄抗体及其制备方法和装置。

背景技术

鸡球虫病（Avian coccidiosis）是由艾美耳属（Eimeria）的一种或多种球虫寄生于鸡的肠道上皮细胞内引起的一种寄生性原虫病。该病呈全球性分布，给养鸡业造成了巨大的经济损失。1870年，Rivolta和 Eimer首次报道了鸡的肠道内有球虫寄生，目前鸡球虫病是我国集约化养鸡场最为多发、危害严重且防治困难的疾病之一。长期以来，防治鸡球虫病的主要手段是应用化学药物，但球虫极易产生耐药性，在用药期间仍然暴发球虫病的现象时有发生。近年来，随着人们生活水平的提高，药物残留对人体健康的威胁日益受到关注。此外，球虫疫苗的研制和应用尚存在许多关键性问题，免疫预防鸡球虫病在短期内还难以推广应用。欧盟诸国已禁止将抗球虫化学合成药作为饲料添加剂使用，中国计划将在2020年在饲料中添加抗球虫药。近年来卵黄抗体抗动物疾病逐渐被人们重视，卵黄抗体不仅有抑杀球虫的作用，还可促进雏鸡生长，因而未来卵黄抗体在鸡球虫病防治中有望具有广阔的发展前景。总之，卵黄抗体在鸡球虫病的预防和治疗过程中具有良好的应用前景，可以替代抗生素或化学药物的使用，减少球虫的耐药性，是一种新型的绿色环保型化学药物替代品。

卵黄抗体IgY的特点包括：具有良好的稳定性，耐热、耐酸、耐碱，抗离子强度，并具有一定抗酶解能力。研究表明，IgY能够抵抗幼龄动物肠道中胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的消化。家禽免疫系统的特性决定小剂量的抗原便可发挥作用，因此可以用少量抗原在较长时间获得大量高滴度特异性抗体。母鸡每年产蛋280枚/只，含IgY约为100～150mg/枚，故利用蛋鸡生产卵黄抗体是具有极大生产潜力的。此外，特异性IgY抗体制备还具有经济、易操作和产量大等优点。但是，现有的制备纯化卵黄抗体的方法仍需改进，高温喷雾法容易导致卵黄抗体的活性灭活，功能散失等等。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供了一种用于抗鸡球虫病的卵黄抗体及其制备方法和装置。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：

一种卵黄抗体的制备方法，包括：利用基于球虫制备的抗原免疫蛋鸡，从蛋鸡的鸡蛋蛋黄中提取卵黄抗体。

可选的，所述球虫包括以下至少3种及以上：

柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和毒害艾美尔球虫。

可选的，所述利用基于球虫制备的抗原免疫蛋鸡，包括：

将柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和毒害艾美尔球虫的卵囊进行纯化，调整卵囊浓度为1×10⁸个/ml的混合液，然后进行多次超声波破碎，其中，超声波破碎的工作时间为3秒，每次间隔8秒，总时长30分钟；

将超声波破碎后的抗原液与免疫增强剂等体积混匀，对200日龄蛋鸡进行肌注免疫，其中，1×10⁶个/羽，每隔10天免疫1次，共进行5次免疫。

可选的，所述从鸡蛋蛋黄中提取卵黄抗体，包括：

收集5次免疫后的鸡蛋，去掉蛋清，按照体积比1:7加入蒸馏水稀释，充分搅匀；于4℃温度条件下静置使脂质充分沉淀，取上层液体，低温超速离心机离心，收集上清液，其中，离心机转速为10000rmp/min，离心时间25min。

可选的，还包括：

取上清液，加入饱和硫酸胺溶液使终浓度为50%，静置30min，以8000rmp/min的转速进行离心，留沉淀液；

将饱和硫酸铵溶液和浓度为0.1mol/L、pH为7.6的碳酸盐缓冲液按比例为1:2进行混合得到混合液，将沉淀液加入混合液中，混匀静置30分钟使终浓度为30%，去上清后将沉淀物溶于0.1 mol/L、pH为7.6的磷酸缓冲液（PBS）中，得到纯化抗体。

可选的，所述从鸡蛋蛋黄中提取卵黄抗体，包括：

将鸡蛋去上清后，将蛋黄在无菌条件下分装于玻璃器皿中，放入干燥机里低温下冻结，获得冻干卵黄抗体粉。

可选的，所述从鸡蛋蛋黄中提取卵黄抗体，包括：

将鸡蛋去上清后，加蛋黄液60%的灭菌水稀释，搅拌均匀后，置入-40℃冻干机中冷冻4小时，然后转入-15℃温度下冷冻15小时；再将获得的冻干物转移到10℃下放置1.5小时，最后转移至36℃干燥4小时，获得冻干卵黄抗体粉。

为实现上述目的，还提供一种上述任一项所述制备方法制得的卵黄抗体。

为实现上述目的，还提供一种所述卵黄抗体在制备防治鸡球虫病的制剂中的应用。

为实现上述目的，还提供一种卵黄抗体的制备装置，所述装置用于实现上述任一项所述的方法。

本发明相比现有技术具有以下优点：对柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和毒害艾美尔球虫进行虫体复壮，增殖，然后将柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和毒害艾美尔球虫混合后，超声波破碎制备抗原用于免疫蛋鸡，然后从鸡蛋蛋黄中提取纯化卵黄抗体，操作简单，成本低，制备效率高，抗体效价高。

附图说明

图1为本发明实施例提供的一种用于抗鸡球虫病的卵黄抗体的制备方法的流程示意图；

图2为本发明实施例提供的一种IgY电泳分析结果示意图；

图3为本发明实施例提供的一种免疫后卵黄中的抗体效价的消长规律示意图；

图4为本发明实施例提供的一种不同加工方法对卵黄中的抗体效价的影响示意图。

具体实施方式

下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

参见图1，表示鸡球虫卵黄抗体制备流程，包括：

S101，柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和毒害艾美尔球虫增殖与复壮；

S102，柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和毒害艾美尔球虫抗原制备；

S103，免疫后的卵黄抗体的提取、纯化、鉴定和抗体效价评估；

S104，鸡球虫卵黄抗体粉制备工艺研制。

具体的，一种卵黄抗体的制备方法，可以为：利用基于球虫制备的抗原免疫蛋鸡；从蛋鸡的鸡蛋蛋黄中提取卵黄抗体。

具体的，所述球虫包括下述至少3种及以上：柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和毒害艾美尔球虫。

利用基于球虫制备的抗原免疫蛋鸡，包括：将柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和毒害艾美尔球虫的卵囊进行纯化，调整卵囊浓度为1×10⁸个/ml的混合液，然后进行多次超声波破碎，其中，超声波破碎的工作时间为3秒，每次间隔8秒，总时长30分钟；将超声波破碎后的抗原液与免疫增强剂等体积混匀，对200日龄蛋鸡进行肌注免疫，其中，1×10⁶个/羽，每隔10天免疫1次，共进行5次免疫。

从鸡蛋蛋黄中提取卵黄抗体，包括：收集5次免疫后的鸡蛋，去掉蛋清，按照体积比1:7加入蒸馏水稀释，充分搅匀；于4℃温度条件下静置使脂质充分沉淀，取上层液体，低温超速离心机离心，收集上清液，其中，离心机转速为10000rmp/min，离心时间25min。

在实际应用中，还包括：取上清液，加入饱和硫酸胺溶液使终浓度为50%，静置30min，以8000rmp/min的转速进行离心，留沉淀液；将饱和硫酸铵溶液和浓度为0.1mol/L、pH为7.6的碳酸盐缓冲液按比例为1:2进行混合得到混合液，将沉淀液加入混合液中，混匀静置30分钟使终浓度为30%，去上清后将沉淀物溶于0.1 mol/LpH7.6的磷酸缓冲液（PBS）中，得到纯化抗体。

另外，从鸡蛋蛋黄中提取卵黄抗体，包括：

将鸡蛋去上清后，将蛋黄在无菌条件下分装于玻璃器皿中，放入干燥机里低温下冻结，获得冻干卵黄抗体粉。具体为：将鸡蛋去上清后，加蛋黄液60%的灭菌水稀释，搅拌均匀后，置入-40℃冻干机中冷冻4小时，然后转入-15℃温度下冷冻15小时；再将获得的冻干物转移到10℃下放置1.5小时，最后转移至36℃干燥4小时，获得冻干卵黄抗体粉。

为实现上述目的，还提供一种上述任一项所述制备方法制得的卵黄抗体。

为实现上述目的，还提供一种所述卵黄抗体在制备防治鸡球虫病的制剂中的应用。

为实现上述目的，还提供一种卵黄抗体的制备装置，所述装置用于实现上述任一项所述的方法。

可见，对柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和毒害艾美尔球虫进行虫体复壮，增殖，然后将柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和毒害艾美尔球虫混合后，超声波破碎制备抗原用于免疫蛋鸡，然后从鸡蛋蛋黄中提取纯化卵黄抗体，操作简单，成本低，制备效率高，抗体效价高。利用本发明试验对象，对柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和毒害艾美尔球虫进行虫体复壮，增殖，然后将柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和毒害艾美尔球虫按等比例（1×10⁵卵囊/）混合后，经超声波破碎方法制备抗原，所得抗原溶液和等体积的弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂分别混匀后，先后对蛋鸡进行3次免疫免疫，3次免疫后对所收集的鸡蛋蛋黄中卵黄抗体进行提取纯化、鉴定和抗体效价评估；分别开展不同卵黄粉制备工艺的研究，冻干粉制备效果明显高于喷粉技术，且该制备出该工艺中的卵黄与稀释液配比关系，冻干温度曲线等参数条件，其成本相对较低，制备效率高，抗体损失率仅为10%，抗体效价高，而高温喷粉后抗体效价呈高度下降趋势，该方法明显优于高温喷粉技术制备卵黄粉。

本发明具体是通过以下方式实现的：一种三价卵黄抗体的制备方法，对柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和毒害艾美尔球虫进行虫体复壮，增殖。然后将柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和毒害艾美尔球虫混合后，超声波破碎制备抗原免疫蛋鸡，然后从鸡蛋蛋黄中提取纯化卵黄抗体。

1.1免疫原的制备与免疫蛋鸡

柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和毒害艾美尔球虫卵囊经过纯化后，调整卵囊浓度为1×10⁸个/ml的混合液，然后进行超声波破碎，工作时间3秒，间隔8秒，总时长30分钟。将等体积抗原与新型免疫增强剂（弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂）混匀，对200日龄蛋鸡进行肌注免疫，1×10⁶个/羽，每隔10天免疫1次，共进行5次免疫。

1.2采用水洗法对卵黄抗体初步分离

收集5免后的鸡蛋，去掉蛋清，按照体积比1:7加入蒸馏水稀释，充分搅匀；4℃静置使脂质充分沉淀。稀释液出现明显的分层现象，取上层液体，低温超速离心机离心，转速设为10000rmp/min，离心时长25min，收集上清。

1.3 饱和硫酸胺方法IgY的纯化

取上清液，缓缓加入饱和硫酸胺溶液使终浓度为50%，尽量避免产生气泡，静置30min，8000rmp/min离心留沉淀。缓缓加入饱和硫酸铵溶液和0.1mol/L、pH7.6的碳酸盐缓冲液混合液中（比例为1:2），混匀静置30分钟使终浓度为30%，去上清，沉淀物溶于0.1 mol/L、pH7.6的磷酸缓冲液（PBS），纯化抗体经SDS-PAGE电泳鉴定，结果如图2所示，表示抗体纯化结果，其中，M：蛋白Marker；1：提纯的IgY。所提纯的IgY经鉴定后有66 kD左右目的条带出现，与预期结果相符。

1.4鸡球虫卵黄抗体间接ELISA方法的建立（包括S103）

免疫后鸡蛋经饱和硫酸铵纯化后，所制备的卵黄抗体采用间接ELISA方法检测，采用方阵滴定法确定球虫抗原的最佳稀释度，同时确定酶标二抗稀释浓度和反应时间等参数，运用所建立的方法检测待检的卵黄抗体。

1.4.1包被抗原的制备

同上述1.1中免疫原的制备与免疫蛋鸡的方法，区别在于调整抗原浓度为0.9mg/mL。

1.4.2 间接ELISA方法的建立

（1）抗原最佳稀释度的筛选：

将包被抗原分别作1:50、1:100、1:200、1:400和1:800倍稀释，过夜包被；用PBST洗板四次，5%的脱脂奶粉封闭，37℃温育2h。PBST缓冲液洗涤3次，分别加入1:50、1:100、1:200、1:400和1:800倍稀释的纯化的卵黄抗体，37℃温育1h；PBST缓冲液洗涤3次，再加入1:700辣根过氧化物酶标记兔抗鸡二抗，37℃温育1h；依据OD_{450 nm}的数据计算P(阳性)/N(阴性)比值，比值最大为最佳包被条件。结果显示抗原在1:100倍稀释下，P/N值最佳，故选择1:100倍为最佳抗原包被浓度。

（2）酶标二抗浓度及反应时间的筛选

用1g/L的BSA溶液稀释辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡至1∶5000、1∶10000、1∶15000和1∶20000倍做二抗，在37℃孵育30 min、60 min、90min及120 min，确定最佳二抗反应条件。在完成二抗反应后加入显色底液TMB50μL/孔，分别在37℃避光反应5min、10min、15min和20min时加入2mol/L的硫酸溶液终止反应，确定最佳显色时间。

1.5运用所建立的ELISA方法检测免疫不同阶段的抗体水平

每孔加入纯化的卵黄抗体（0.0090mg/mL）100μL，4℃过夜。用PBST洗板4次，5%的脱脂奶粉封闭，37℃温育2h。洗涤液洗板3次，每孔加入以倍比稀释的一抗100μL， 37℃温育1h。洗涤液洗板3次，加HRP标记的二抗，100μL/孔，37℃温育1h。洗涤液洗板4次，加TMB显色液，100μL/孔，避光反应10min。加入2mol/L硫酸溶液50μL/孔终止反应，测定OD_450mm的值。检测结果如图3所示，表示免疫后抗体消长规律：从五免10后，卵黄抗体水平呈上升趋势，五免60d后达到最高值，抗体最高效价是1:25600。之后有短时间较大幅度的下降，随后稳步上升到一定水平。此外，结果还显示，免疫后的卵黄抗体高滴度抗体可维持三个月以上，这极大地提高了卵黄抗体的产量。

1.6 抗鸡球虫三价卵黄抗体冻干粉的制备

1.6.1 卵黄粉冻干技术的建立（包括S104）

鸡蛋去上清后，将蛋黄无菌条件下分装于玻璃器皿中，放入干燥机里低温下快速冻结，冻干筛选出的参数如下：加蛋黄液60%的灭菌水稀释，搅拌均匀后，置入-40℃冻干机中迅速冷冻，作用4小时，然后转入-15℃冷冻15小时；再将冻干物转移到10℃下作用1.5小时，最后转移至36℃ 4小时，可获得卵黄粉产品。将收集的冷冻干燥卵黄抗体粉装入封口袋，密封保存。

1.6.2 高温喷粉对照试验

该试验参照蛋黄脂质沉淀后，向上清过滤中添加8%麦芽糊精作为保护剂，充分搅匀，然后喷雾干燥，其条件是：进风温度150-170℃，蠕动泵20-22 rmp/min，风速频率50-60 Hz。

1.6.3 抗鸡球虫三价卵黄抗体冻干粉中的抗体活性评估

冻干粉经间接ELISA方法检测其抗体水平，评价卵黄抗体在冻干前后损耗情况，以高温喷粉作对照试验。经所建立的间接ELISA方法检测，发现冻干卵黄粉中抗体活性仍较高，是蛋黄液中的90%活力，而采用高温喷粉方式制备的卵黄粉活性仅是卵黄液中的抗体活性30%，结果见图4，表示不同工艺制备球虫卵黄抗体粉效果评价。

1.7本发明制备的卵黄抗体治疗雏鸡球虫病效果的评估

将18日龄肉杂鸡随机分成6组，分别为白对照组（不感染不治疗）、红对照组（感染不治疗）、阴性卵黄对照组（感染给正常的蛋黄）、药物治疗组、高免卵黄治疗a组和b组，每组22只。除白对照组外，其他组别均接受1×10⁴个/只攻虫试验，攻虫后3天开始对试验组进行治疗，其中高免卵黄治疗a组每只口服10ml卵黄液，b组为5ml卵黄液，药物治疗组接受0.25g/只浓度治疗。分别计算存活率、平均增重、每克粪便卵囊排出数、病变减少率和抗球虫指数等为指标，综合评价卵黄抗体治疗鸡球虫感染效果。结果如下：

（1）在相对增重方面：

由表1可知，与红对照组和阴性卵黄治疗组相比，其他各卵黄抗体添加组和药物治疗组试验鸡的平均增重均有显著的增加，其中药物（盐酸氯丙嗪）)治疗组和高免卵黄治疗a组的增重最多，相对增重率分别为83.30%和106%，与其他组相比差异显著((P<0.05)，由此可以看出IgY添加对雏鸡产生的被动免疫保护效果较好，与药物盐霉素的治疗效果相差不大。

表1卵黄抗体对球虫感染鸡的增重效果的影响

组别	平均增重（g）	相对增重率（%）
			白对照组	11.02±9.89<sup>bc</sup>	100
红对照组	-13.06±15.77<sup>adef</sup>	0
			阴性卵黄对照组	-6.29±17.35a<sup>df</sup>	0
高免卵黄治疗a组	11.71±14.24<sup>bc</sup>	106
			高免卵黄治疗b组	4.94±12.48<sup>b</sup>	44.70
药物治疗组	9.18±18.80<sup>bc</sup>	83.30

注：同一列内标不同字母者表示差异显著(P<0.05)；标相同字母者表示差异不显(P>0.05)。

（2）在卵囊减少率方面：

如表2所示，除空白对照组外，其余各组均有不同数量的卵囊排出，其中红对照组和阴性对照组排出卵囊量最多，其他各试验组卵囊产量均有不同程度的下降。高免卵黄治疗a、药物治疗组、和b组的卵囊减少率分别为99.99%、99.98%和97.40%，且卵囊产量比起红对照组有着较大幅度的降低。

表2 卵黄抗体治疗对球虫感染鸡的卵囊产量影响

组别	卵囊产量（个）	相对卵囊产量（%）	卵囊减少率（%）
				白对照组	0	0	0
红对照组	1.45x10<sup>7</sup>	100	0
				阴性卵黄对照组	9.30x10<sup>6</sup>	66.2	33.80
高免卵黄治疗a组	1.50x10<sup>4</sup>	0.01	99.99
				高免卵黄治疗b组	3.70x10<sup>5</sup>	2.60	97.40
药物治疗组	2.70x10<sup>4</sup>	0.02	99.98

（3）在病变情况方面

如表3所示，每组每只鸡感染1×10⁴个孢子化卵囊后，红对照组病变最为严重，平均病变记分达到3.13，高免卵黄治疗a组和药物治疗组的盲肠病变显著减轻(P<0.05)，病变减少率分别达到40%和60%，但药物治疗组尚有一定的优势。其他各组病变虽有减轻，但均不显著。

表3 各组别鸡病变记分

组别	病变记分	病变减少率（%）
				白对照组	0	0
红对照组	3.13±1.533<sup>be</sup>	0
				阴性卵黄对照组	2.75±0.707<sup>e</sup>	12
高免卵黄治疗a组	1.88±0.835<sup>a</sup>	40
				高免卵黄治疗b组	2.13±0.991	32
药物治疗组	1.25±0.707<sup>ab</sup>	60

注：同一列内标不同字母者表示差异显著(P<0.05)；标相同字母者表示差异不显(P>0.05)。

（4）抗球虫指数的评估

如表4所示，从总体上看各试验组的ACI均高于红对照组，其中高免卵黄治疗a组和药物治疗组ACI较高，分别为187.30和170.80，而高免卵黄治疗b组相对偏低，红对照组和阴性卵黄对照组最低。就ACI指标而言，免疫保护效果较好的为高免卵黄治疗a组和药物治疗组，其余组别的免疫保护效果较差。

表4各组别的抗球虫指数ACI比较

组别	存活率	相对增重率	病变值	卵囊值	ACI
						白对照组	100%	100%	0	0	200
红对照组	77%	0	31.3	40	5.7
						阴性卵黄对照组	86%	0	27.5	30	28.5
高免卵黄治疗a组	100%	106	18.7	0	187.3
						高免卵黄治疗b组	100%	44.7	21.2	1	123.5
药物治疗组	100%	83.3	12.5	0	170.8

将扩增纯化的多型艾美耳球虫活卵囊按照一定的比例混合为免疫原，对240日龄蛋鸡进行肌注免疫，免疫5次后，对每个阶段免疫后的鸡蛋采用饱和硫酸按法提取卵黄抗体，提取IgY的最适水稀释倍数和最适pH值进行了优化，建立了鸡蛋中IgY的提取及纯化方法。再通过SDS-PAGE电泳法对提纯的抗球虫IgY进行纯度测定；建立的间接ELISA方法进行鸡蛋抗体水平的动态监测；筛选冻干参数建立鸡球虫卵黄抗体粉制备技术。结果表明，卵囊5免后卵黄中抗体水平逐渐上升，短暂时间内的小幅度下降，60d达到峰值。SDS-PAGE分析表明，提纯的卵黄抗体由纯度达98%，效价可达1:25600/mg。采用冻干技术制备的鸡球虫卵黄抗体粉中抗体活性存活率为95%以上，且明显优于高温喷粉技术。所制备的鸡球虫卵黄抗体治疗鸡球虫效果显著，这为研制和生产抗鸡球虫卵黄抗体及其应用奠定了坚实的基础，同时为解决临床治疗球虫化学药物导致耐药和药物严重残留问题提供新的手段。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。