阅读说明：本技术 荧光分光光度计、分光测定方法以及荧光分光光度计用控制软件 (Fluorescence spectrophotometer, spectrometry method, and control software for fluorescence spectrophotometer ) 是由 渡边康之 于 2017-04-28 设计创作，主要内容包括：荧光分光光度计(1)具备：光源部(11),其能够向试样配置部(12)发出多个波长的光；检测部(13),其对来自试样配置部(12)的光中的规定波长范围内的光的强度进行测定；激发波长输入部(30),其用于受理多个激发波长的输入；测定波长范围决定部(221),其与所述多个激发波长对应地决定与各激发波长对应的透射光测定波长范围和发光测定波长范围；空白测定执行部(222),其接收空白测定的执行指示,来使光源部(11)按顺序发出所述多个激发波长的光,并测定穿过了试样配置部(12)的透射光测定波长范围内的光的强度；以及实际测定执行部(223),其接收实际测定的执行指示,来使光源部(11)按顺序发出多个激发波长的光,并测定穿过了试样配置部(12)的透射光测定波长范围内的光的强度和从所述试样配置部发出的发光测定波长范围内的光的强度。(a fluorescence spectrophotometer (1) is provided with: a light source unit (11) that can emit light of a plurality of wavelengths to the sample arrangement unit (12); a detection unit (13) that measures the intensity of light within a predetermined wavelength range from among the light from the sample arrangement unit (12); an excitation wavelength input unit (30) for receiving input of a plurality of excitation wavelengths; a measurement wavelength range determination unit (221) that determines a transmission light measurement wavelength range and a light emission measurement wavelength range corresponding to each excitation wavelength, in accordance with the plurality of excitation wavelengths; a blank measurement execution unit (222) that receives an instruction to execute blank measurement, causes the light source unit (11) to emit light of the plurality of excitation wavelengths in order, and measures the intensity of light within the measurement wavelength range of transmitted light that has passed through the sample arrangement unit (12); and an actual measurement execution unit (223) that receives an instruction to execute actual measurement, causes the light source unit (11) to emit light of a plurality of excitation wavelengths in order, and measures the intensity of light in the measurement wavelength range of transmitted light that has passed through the sample arrangement unit (12) and the intensity of light in the measurement wavelength range of emitted light from the sample arrangement unit.)

荧光分光光度计、分光测定方法以及荧光分光光度计用控制 软件

技术领域

本发明涉及一种荧光分光光度计、分光测定方法以及荧光分光光度计用控制软件。特别是，涉及一种能够在利用不同的多个波长的激发光进行测定时较佳地使用的荧光分光光度计、分光测定方法以及荧光分光光度计用控制软件。

背景技术

对有机EL发光设备、光催化剂、利用了光反应的分子传感器之类的功能性物质设计分子结构以吸收特定波长的光来达成目标功能。具体地说，以具有吸收特定波长的光而跃迁到激发态、释放特定波长的荧光或磷光而返回到基态的电子状态的方式对分子结构进行设计。从作为功能性物质的试样释放出的光的光子数与照射到该试样的光的光子数之比被称为外量子效率。另外，从试样释放出的光的光子数与该试样所吸收的光的光子数之比被称为内量子效率。外量子效率、内量子效率被用作用于评价功能性物质的一个指标。

通过使用荧光分光光度计来照射特定波长的激发光并测定从试样发出的荧光或磷光的强度，由此求出外量子效率、内量子效率。荧光分光光度计具备具有光源和分光部的激发光源部、用于收集从试样发出的荧光或磷光的积分球以及具有分光部和检测器的检测部。在通过使用荧光分光光度计进行测定来求出外量子效率、内量子效率时，首先进行空白(blank)测定。在空白测定中，例如向只封入了用于使实际试样溶解的溶剂(空白试样)的比色池(cuvette cell)照射激发光，并测定穿过了比色池的光(透射光)的强度(强度A)。接着，向封入了使实际试样溶解于上述溶剂的实际试样溶液的比色池照射激发光，并测定穿过了比色池的光(透射光)的强度(强度B)。另外，还测定从实际试样溶液发出的荧光或磷光的强度(强度C)。在测定后，根据强度A～C分别求出光子数A～C。根据光子数C与光子数A之比求出外量子效率，根据光子数C与从光子数A减去光子数B所得到的光子数A-B之比求出内量子效率(例如专利文献1)。

荧光分光光度计大多是接收来自专用的控制软件的指示而进行动作。当使用者启动控制软件并指示开始测定时，显示用于输入测定条件的画面。当使用者输入了激发光的波长、透射光的测定波长范围以及荧光(或磷光)的测定波长范围等测定条件时，接下来催促使用者将封入了空白试样的比色池放置于荧光分光光度计的规定位置。当使用者已放置比色池并指示开始空白测定时，控制软件使分光光度计的激发光源部向比色池内的空白试样照射由使用者指定的波长的激发光，在检测部中在由使用者输入的波长范围内测定穿过了该空白试样的透射光的强度。当结束空白试样的测定时，催促使用者放置封入了实际试样溶液的比色池。当使用者已放置比色池并指示开始测定时，控制软件向比色池内的实际试样溶液照射由使用者指定的波长的激发光，分别在由使用者输入的波长范围内测定穿过了实际试样溶液的透射光的强度和从该实际试样溶液发出的荧光或磷光的强度。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2013-72727号公报

发明内容

发明要解决的问题

近年来，正在进行具有多个功能的功能性物质的研究。也就是说，正在进行针对不同的多个波长的光发出荧光或磷光的物质的研究。在这种研究中，针对不同的多个波长的激发光进行上述的空白测定和实际测定。另外，存在以下情况：针对单一功能的功能性物质也在多个波长下进行上述的空白测定和实际测定，以搜索使外量子效率或内量子效率最高的最佳的激发光波长。

在荧光分光光度计中使用的大多数的比色池为玻璃制品或塑料制品，光吸收特性存在少许的个体差异。因此，如果在空白测定和实际测定中使用不同的比色池，则在空白测定时和实际测定时比色池的光吸收量产生差异，从而测定精度降低。因而，为了高精度地进行测定，需要在空白测定和实际测定中使用相同的比色池。

在通过以往使用的上述控制软件针对多个波长的激发光进行测定的情况下，针对第一种波长的光分别执行空白测定和实际测定，接着，针对第二种波长的光分别执行空白测定和实际测定。此时，存在以下问题：必须重复进行在第一种波长下的空白测定结束后清洗比色池并封入实际试样溶液来进行实际测定、在实际测定结束后再次清洗比色池并封入空白试样来进行第二种波长下的空白测定之类的处理，比色池的清洗、空白试样或试样溶液的封入以及比色池的放置费力费时。另外，存在以下问题：由于很多的控制软件针对各波长的激发光独立地执行测定，因此在每当进行一种波长的激发光的测定时，都需要输入激发光的波长、透射光的测定波长范围以及荧光(或磷光)的测定波长范围，从而费力费时。

在此，列举对作为液体的空白试样和实际试样进行测定的情况为例进行了说明，但是在将气体试样或固体试样封入试样容器并进行测定的情况下也存在上述同样的问题。另外，例如在将光功能性物质蒸镀在基板上而形成的固体试样的情况下，不将该固体试样封入试样容器就能够进行测定，但是在这样的情况下，也是在每次测定时都必须重复放置空白试样(仅为基板)和实际试样(蒸镀了光功能性物质的基板)，从而费力费时。

本发明要解决的课题在于提供一种能够针对多个波长的激发光简单地进行空白测定和实际测定的荧光分光光度计、利用荧光分光光度计的测定方法以及荧光分光光度计控制软件。

用于解决问题的方案

为了解决上述问题而完成的本发明的第一方式所涉及的荧光分光光度计具备：

a)试样配置部，其用于配置试样；

b)光源部，其能够向所述试样配置部发出多个波长的光；

c)检测部，其对来自所述试样配置部的光中的、规定波长范围内的光的强度进行测定；

d)激发波长输入部，其用于受理由使用者进行的多个激发波长的输入，所述多个激发波长是所述多个波长中的一部分或全部；

e)测定波长范围决定部，其与被输入的所述多个激发波长对应地，按照预先决定的规则来决定与各激发波长对应的透射光测定波长范围和发光测定波长范围；

f)空白测定执行部，其接收由使用者进行的空白测定的执行指示，来对所述光源部和所述检测部进行控制以执行如下的空白测定：使所述光源部按顺序发出所述多个激发波长的光，针对各激发波长的光测定穿过了所述试样配置部的所述透射光测定波长范围内的光的强度；以及

g)实际测定执行部，其接收由使用者进行的实际测定的执行指示，来对所述光源部和所述检测部进行控制以执行如下的实际测定：使所述光源部按顺序发出所述多个激发波长的光，针对各激发波长的光测定穿过了所述试样配置部的所述透射光测定波长范围内的光的强度和从所述试样配置部发出的所述发光测定波长范围内的光的强度。

在所述光源部中也能够使用以下的光源部等适当的光源部：将发出包括所述多个激发波长的波长范围内的连续光的灯等连续光源与分光器组合而成的光源部；具有分别发出所述多个激发波长中的一个波长的光的多个单色光源的光源部；以及将发出包括所述多个激发波长的光的不连续光的不连续光源与分光器组合而成的光源部。

对所述规定的波长范围内的光的强度进行测定的检测部基于来自外部的控制来测定所指定的波长范围的光的强度。

对利用本发明所涉及的荧光分光光度计进行测定的过程进行说明。

首先，受理由使用者进行的多个激发波长的输入。关于该处理，除了使使用者输入激发波长本身以外，还能够利用以下方法等各种方法来进行：一览显示多个激发波长并让使用者从该一览显示中选择多个激发波长；或者预先准备将测定对象的试样的名称或种类与多个激发波长或透射光测定波长范围及发光测定波长范围对应起来的表等，让使用者输入试样的名称或种类来读出与该名称或种类相对应的多个激发波长等。

接着，测定波长范围决定部与由使用者输入的多个激发波长对应地，按照预先决定的规则来决定与各激发波长对应的穿过了试样配置部(使用者在试样配置部配置的空白试样和实际试样)的光(透射光)和从试样配置部(使用者在试样配置部配置的实际试样)发出的荧光或磷光(发光)的测定波长范围。在此所说的预先决定的规则例如能够设为以与各激发波长相比短预先决定的波长的波长为下限波长且以与各激发波长相比长预先决定的波长的波长为上限波长来决定透射光测定波长范围、并将以该透射光测定波长范围的上限波长为下限波长的规定波长宽度的范围决定为发光的测定波长范围等。也可以如上述那样让使用者输入试样的名称或种类后读出与该名称或种类相对应的透射光和发光的测定波长范围。另外，也可以让使用者输入发光的测定波长范围的上限波长和下限波长。

接着，当使用者将空白试样放置到试样配置部并指示执行空白测定时，空白测定执行部使光源部和检测部进行动作，来从该光源部按顺序发出多个激发波长的光，针对各激发波长的光测定穿过了试样配置部(配置于试样配置部的空白试样)的透射光测定波长范围内的光的强度。

当在结束了所有激发波长的空白测定之后使用者将实际试样放置于试样配置部并指示执行实际测定时，实际测定执行部使光源部和检测部进行动作，来从光源部按顺序发出多个激发波长的光，针对各激发波长的光测定穿过了试样配置部(配置于试样配置部的实际试样)的透射光测定波长范围内的光的强度和从试样配置部发出的发光测定波长范围内的光的强度。

在本发明所涉及的分光光度计中，针对多个激发波长依次进行空白测定，接着，针对多个激发波长依次进行实际测定，因此只是在关于所有激发波长的空白试样的测定结束后将空白试样更换为实际试样即可，能够简单地进行测定。另外，由于分析者只是在测定开始前输入多个激发波长即可，因此与利用以往的装置进行的测定相比能够减轻分析者的劳力和时间。

另外，为了解决上述问题而完成的本发明的第二方式是一种分光测定方法，使用了具有光源部、试样配置部以及检测部的荧光分光光度计，在所述分光测定方法中，

a)受理由使用者进行的多个激发波长的输入；

b)与所述多个激发波长对应地，按照预先决定的规则来决定与各激发波长对应的透射光测定波长范围和发光测定波长范围；

c)执行如下的空白测定：使所述光源部按顺序发出所述多个激发波长的光，针对各激发波长的光测定穿过了所述试样配置部的所述透射光测定波长范围内的光的强度；以及

d)执行如下的实际测定：使所述光源部按顺序发出所述多个激发波长的光，针对各激发波长的光测定穿过了所述试样配置部的所述透射光测定波长范围内的光的强度和从所述试样配置部发出的所述发光波长测定范围内的光的强度。

并且，为了解决上述问题而完成的本发明的第三方式是一种具有光源部、试样配置部以及检测部的荧光分光光度计用的控制软件，使与该荧光分光光度计以能够通信的方式连接的计算机作为以下各部进行动作：

a)激发波长输入部，其用于受理由使用者进行的多个激发波长的输入；

b)测定波长范围决定部，其与所述多个激发波长对应地，按照预先决定的规则来决定与各激发波长对应的透射光测定波长范围和发光测定波长范围；

c)空白测定执行部，其接收由使用者进行的空白测定的执行指示，来对所述光源部和所述检测部进行控制以执行如下的空白测定：使所述光源部按顺序发出所述多个激发波长的光，针对各激发波长的光测定穿过了所述试样配置部的所述透射光测定波长范围内的光的强度；以及

d)实际测定执行部，其接收由使用者进行的实际测定的执行指示，来对所述光源部和所述检测部进行控制以执行如下的实际测定：使所述光源部按顺序发出所述多个激发波长的光，针对各激发波长的光测定穿过了所述试样配置部的所述透射光测定波长范围内的光的强度和从所述试样配置部发出的所述发光测定波长范围内的光的强度。

发明的效果

通过使用本发明所涉及的荧光分光光度计、分光测定方法或荧光分光光度计控制软件，能够针对多个波长的激发光简单地进行空白测定和实际测定。

附图说明

图1是本发明所涉及的荧光分光光度计的一个实施例的概要结构图。

图2是对本实施例的荧光分光光度计中的测定系统的配置进行说明的图。

图3是本发明所涉及的分光测定方法的一个实施例的流程图。

图4是通过本实施例的荧光分光光度计和分光测定方法获得的光谱的一例。

图5是多个激发波长下的空白测定和实际测定中的光子数的表述的一览。

图6是用于求出关于多个激发波长的外量子效率和内量子效率的计算式的一览。

图7是本实施例的荧光分光光度计和分光测定方法中的光谱的一个显示例。

图8是本实施例的荧光分光光度计和分光测定方法中的测定结果的一个显示例。

图9是本实施例的荧光分光光度计和分光测定方法中的多个试样的测定结果的一个显示例。

具体实施方式

下面，参照附图对本发明所涉及的荧光分光光度计、分光测定方法以及荧光分光光度计控制软件的一个实施例进行说明。

在图1中示出本实施例的荧光分光光度计1的主要部分结构。该荧光分光光度计大致包括测定部10和控制部20。测定部10包括光源部11、试样配置部12以及检测部13。光源部11具备光源111和分光器112，该光源111发出包括后述的多个激发波长的光的连续光。在试样配置部12载置试样(空白试样和实际试样)。检测部13具备分光器131和检测器132。本实施例的分光器112、131均为衍射光栅，检测器132为光电二极管阵列检测器。从光源111发出的连续光被分光器112进行单色化后照射至试样121。另外，穿过了试样121的光以及从试样121发出的光中的由分光器131选择的波长范围的光入射至检测器132来测定其强度。来自检测器132的输出信号被依次发送并保存到存储部21。

如图2所示，试样配置部12设置于积分球100内的中央。在积分球100中，在图中的X-Y平面内的隔着试样配置部12(积分球100的中心)地相向的位置形成有光入射窗101和第一光出射窗102，光入射窗101用于入射来自光源部11的光，第一光出射窗102用于射出穿过了被载置于试样配置部12的试样121的光。另外，在积分球的极点(试样配置部的正上方。积分球100与Z轴的交点中的一方)处形成有第二出射窗103。从试样121发出的荧光或磷光在积分球内部被反复反射并从第二出射窗103射出。从第一光出射窗102射出的透射光和从第二出射窗103射出的荧光或磷光被未图示的光学系统引导至检测部13。

控制部20除了具备存储部21以外，还具备通过执行分光光度计用控制软件22而被具体化的功能块、即波长范围决定部221、空白测定执行部222、实际测定执行部223、光谱制作部224、量子效率计算部225以及分析结果显示部226。控制部20的实体为个人计算机，连接有由键盘和鼠标构成的输入部30以及液晶显示器等显示部40。在存储部21中，针对多个实际试样分别保存有将试样名称与关于测定条件的信息(多个激发波长λ_A、λ_B···、第一波长λ₁、第二波长λ₂以及第三波长λ₃)对应起来的化合物数据库211。另外，在存储部21中保存有用于根据检测器132中的光的检测强度求出光子数的光子数计算信息(数式和/或对应表)。

化合物数据库211中所保存的第一波长λ₁是用于决定对穿过了空白试样和实际试样的光(透射光)进行测定时的测定波长范围(透射光测定波长范围)的值，由此将透射光测定波长范围决定为激发波长±λ₁。另外，第二波长λ₂和第三波长λ₃是用于决定对从实际试样发出的荧光或磷光进行测定时的测定波长范围(发光测定波长范围)的值，由此将发光测定波长范围的下限波长决定为激发波长+λ₂且将上限波长决定为λ₃。

下面，对利用本实施例的荧光分光光度计1进行的分光测定进行说明。图3是对本实施例的分光测定方法的过程进行说明的流程图。在此，以以下情况为例进行说明：使作为类似的化合物的六种试样溶解于同一溶剂来制作试样溶液，针对各个试样求出三种激发波长λ_A～λ_C下的外量子效率和内量子效率。

当使用者通过启动分光光度计用控制软件22等规定的动作来指示开始分光测定时，在显示部40显示用于输入测定试样(实际试样)的信息(试样名称、种类、或测定类型等)及数量的画面，来催促使用者进行输入。

当使用者输入了实际试样的信息及数量时(步骤S1)，波长范围决定部221检索在保存于存储部21的化合物数据库211中是否存在与使用者所输入的实际试样的信息对应的信息。在化合物数据库中不存在与使用者所输入的实际试样的信息对应的信息的情况下，在显示部40显示用于分别输入激发波长λ_A～λ_C、第一波长λ₁、第二波长λ₂以及第三波长λ₃的栏，来让使用者进行输入(步骤S2)。当使用者结束输入时，针对多个激发波长λ_A～λ_C中的各个激发波长设定透射光测定波长范围λ_A-λ₁～λ_A+λ₁等以及发光测定波长范围λ_A+λ₂～λ₃等(步骤S3)。另一方面，在化合物数据库211中存在与使用者所输入的实际试样的信息对应的信息的情况下，读出与该实际试样的信息相对应的多个激发波长λ_A～λ_C、第一波长λ₁、第二波长λ₂以及第三波长λ₃，针对多个激发波长中的各个激发波长分别求出透射光测定波长范围λ_A-λ₁～λ_A+λ₁等以及发光测定波长范围λ_A+λ₂～λ₃等，并显示于显示部40。使用者对所显示的各波长和测定波长范围进行确认，在需要时适当地变更这些信息。

接着，使用者将空白试样(仅为溶剂)封入比色池并放置于试样配置部12(步骤S4)，指示执行空白测定。空白测定执行部222接收到该指示，来使光源部11的光源111产生连续光，通过分光器112取出最初的激发波长λ_A的光并照射至空白试样。另外，使检测部13的分光器131旋转，来以透射光测定波长范围λ_A-λ₁～λ_A+λ₁对来自空白试样的透射光进行波长分离，并测定各波长的光的强度。进一步使分光器131旋转，来以发光测定波长范围λ_A+λ₂～λ₃对从空白试样发出的荧光进行波长分离，并测定各波长的光的强度(步骤S5)。在本实施例中，使分光器131依次旋转来对透射光测定波长范围的光和发光测定波长范围的光进行了测定，但是在能够使以这些波长范围进行波长分离所得到的光同时入射至检测器132的情况下，也可以一次性地对这些光进行测定。

当针对最初的激发波长λ_A的光完成了空白测定时，空白测定执行部222确认是否针对所有的激发波长λ_A～λ_C完成了空白测定(步骤S6)。在仍有未测定的激发波长的情况下(步骤S6：“否”)，使光源部11的分光器112进行动作来取出下一个激发波长λ_B的光并照射至空白试样。另外，使检测部13的分光器131旋转，来以透射光测定波长范围λ_B-λ₁～λ_B+λ₁进行波长分离并测定来自空白试样的透射光的强度，以发光测定波长范围λ_B+λ₂～λ₃进行波长分离并测定来自实际试样的荧光的强度(步骤S5)。像这样，空白测定执行部222对光源部11和检测部13进行控制来将多个激发波长λ_A～λ_C的光依次照射至空白试样，针对各激发波长的光，对穿过了空白试样的光进行波长分离，并测定各波长的光的强度。当针对所有激发波长完成了空白测定时(步骤S6：“是”)，在显示部40显示已结束空白测定的意思，催促使用者将实际试样放置于试样配置部12。

接着，使用者清洗曾封入空白试样的比色池，将最初的实际试样(试样溶液)封入比色池并放置于试样配置部12(步骤S7)。然后，指示执行实际测定。实际测定执行部223接收到该指示，来使光源部11的光源111产生连续光，通过分光器112取出最初的激发波长λ_A的光并照射至实际试样。另外，使检测部13的分光器131旋转，以使来自实际试样的透射光中的透射光测定波长范围λ_A-λ₁～λ_A+λ₁的光入射至检测器132，并测定各波长的光的强度。进一步使分光器131旋转，来以发光测定波长范围λ_A+λ₂～λ₃对从实际试样发出的荧光进行波长分离，并测定各波长的光的强度(步骤S8)。

当针对最初的激发波长λ₁的光完成了实际测定时，实际测定执行部223确认是否针对所有的激发波长完成了实际测定(步骤S9)。在仍有未测定的激发波长的情况下(步骤S9：“否”)，使光源部11的分光器112进行动作来取出下一个激发波长λ_B的光并照射至实际试样。另外，使检测部13的分光器131旋转，来以透射光测定波长范围λ_A-λ₁～λ_A+λ₁对来自实际试样的透射光进行波长分离并测定各波长的光的强度。另外，以发光测定波长范围λ_B+λ₂～λ₃对来自实际试样的荧光进行波长分离并测定各波长的光的强度(步骤S8)。像这样，实际测定执行部223对光源部11和检测部13进行控制来将多个激发波长λ_A～λ_C的光依次照射至实际试样，针对各激发波长的光，对穿过了实际试样的透射光和从实际试样发出的荧光进行波长分离并进行测定。

当针对所有的激发波长完成了实际测定时(步骤S9：“是”)，实际测定执行部223确认是否完成了所有实际试样的实际测定(步骤S10)。在仍有未测定的实际试样的情况下，在显示部40显示用于催促使用者放置下一个实际试样的消息。当已放置下一个实际试样时，实际测定执行部223通过上述同样的过程来按顺序照射所有激发波长的光，并测定来自实际试样的透射光和荧光的强度。当针对所有试样完成了实际测定时(步骤S10：“是”)，实际测定执行部223在显示部40显示已完成所有测定的意思的消息。

当结束了所有的测定时，光谱制作部224读出保存于存储部21的测定数据，针对每个实际试样制作光谱数据，并将光谱显示于显示部40(步骤S11)。图4是针对一个试样通过使用三个激发波长进行空白测定和实际测定所得到的光谱的一例。图4的(a)是关于激发波长λ_A的光谱，具体地说，空白测定中的透射光强度(照射至实际试样的激发光的强度)的光谱和从实际测定中的荧光强度(来自试样和溶剂的荧光的强度)中减去空白测定中的荧光强度(来自溶剂的荧光的强度)所得到的强度的光谱。图4的(b)是关于激发波长λ_B的同样的光谱，图4的(c)是关于激发波长λ_C的同样的光谱。另外，图5是将关于三个激发波长λ_A、λ_B、λ_C的光谱叠加显示后的图。能够根据来自使用者的指示适当地切换图4的(a)～(c)与图5的光谱的显示。另外，图4和图5是与外量子效率对应的光谱，但是也能够显示表示试样所吸收的激发光的强度(从空白测定时的透射光的强度中减去实际测定时的透射光的强度所得到的强度)的与内量子效率对应的光谱，来取代照射至试样的激发光的强度的光谱。这些光谱数据是针对所有的试样制作出的，被保存到存储部21。

当制作出所有试样的光谱数据时，量子效率计算部225针对各试样求出各激发波长下的外量子效率、内量子效率(步骤S12)。具体地说，根据保存于存储部21的空白测定中的透射光强度和荧光强度、实际测定中的透射光强度和荧光强度，基于保存于存储部21的光子数计算信息来求出使用各激发波长λ_A、λ_B、λ_C进行的空白测定中的透射光的光子数F_EXA、F_EXB、F_EXC及荧光的光子数F_EMA、F_EMB、F_EMC、实际测定中的透射光的光子数F_EXA’、F_EXB’、F_EXC’及荧光的光子数F_EMA’、F_EMB’、F_EMC’(参照图6)。然后，例如针对激发波长λ_A，根据(F_EMA’-F_EMA)/F_EXA求出外量子效率，根据(F_EMA’-F_EMA)/(F_EXA-F_EXA’)求出内量子效率(参照图7)。能够针对所有的试样、所有的激发波长求出外量子效率和内量子效率。

当由量子效率计算部225进行的处理完成时，分析结果显示部226使用多个激发波长λ_A、λ_B、λ_C下的外量子效率和内量子效率的值，通过利用近似曲线等方法求出外量子效率和内量子效率的激发波长依赖性，并显示于显示部40(步骤S13)。图8是该激发波长依赖性的显示例。另外，分析结果显示部226对各试样的量子效率进行一览显示(步骤S13)。该一览显示能够设为：例如图9所示，以横轴为波长且将试样沿纵轴方向排列所得到的二维区域被划分为多个分区，用颜色的浓淡来表现该分区中的量子效率(在图9中通过影线来进行显示)。由此，使用者能够容易地确认多个试样的量子效率。当然，该显示形式能够适当地进行变更，除了颜色的浓淡以外，还能够通过着色、影线等以能够视觉识别的方式进行显示。

如以上所说明的那样，在本实施例的荧光分光光度计和分光测定方法中，针对多个激发波长依次进行空白测定，接着针对多个激发波长依次进行实际测定，因此只是在与所有的激发波长相关的空白试样的测定结束后将空白试样更换为实际试样即可，能够简单地进行测定。另外，由于分析者只是在测定开始前输入多个激发波长λ_A～λ_C以及第一波长λ₁～第三波长λ₃(或者输入试样的信息)即可，因此与利用以往的装置进行的测定相比能够减轻分析者的劳力和时间。

上述实施例为一例，能够按照本发明的宗旨适当地进行变更。

在上述实施例中，对将第一波长λ₁和第二波长λ₂作为相对于激发波长的相对波长进行输入并将第三波长λ₃作为绝对波长进行输入的情况进行了说明，但是也能够构成为将第二波长λ₂作为绝对波长进行输入。其中，在该情况下，需要避免第二波长λ₂进入透射光测定波长范围λ_A-λ₁～λ_A+λ₁等中。因而，优选构成为在使用者所输入的第二波长λ₂存在于测定波长范围λ_A-λ₁～λ_A+λ₁等中的情况下催促使用者重新输入。另外，在只对同一种类的试样重复进行测定的情况下，也能够构成为预先在荧光分光光度计中设置第一波长λ₁～第三波长λ₃来作为初始值，只在需要时由使用者对值进行变更。

另外，在上述实施例中，将试样溶液(空白试样和实际试样)封入比色池来进行了测定，但是也可以收容在其它的容器来进行测定。另外，也能够将气体试样或固体试样收容到试样容器中来与上述同样地进行测定。并且，在固体试样的情况下，还能够将空白试样(例如基板)和实际试样(例如在所述基板上涂布有功能性物质)直接放置于试样配置部来进行测定。

并且，不限于液体试样，还能够将气体试样封入试样容器来进行测定。并且，也能够对固体试样直接(或者收容在试样容器中)进行测定。

在上述实施例中，在空白测定中对来自空白试样(溶剂)的荧光或磷光的强度进行了测定，但是在已知空白试样在多个激发波长λ_A～λ_C下均不发出荧光或磷光的情况下，也能够是在空白测定时只测定来自空白试样的透射光的强度，并将来自空白试样的荧光或磷光的强度值及光子数设为0。

附图标记说明

1：荧光分光光度计；10：测定部；11：光源部；111：光源；112：分光器；12：试样配置部；121：试样；13：检测部；131：分光器；132：检测器；20：控制部；21：存储部；211：化合物数据库；22：分光光度计用控制软件；221：波长范围决定部；222：空白测定执行部；223：实际测定执行部；224：光谱制作部；225：量子效率计算部；226：分析结果显示部；30：输入部；40：显示部。