阅读说明：本技术 供注射用聚山梨酯80及其制备方法 (Polysorbate 80 for injection and preparation method thereof ) 是由 张阳洋 李盛 曹金 黄虎 冉文华 肖舒文 朱智刚 李文文 刘淦 田佳 于 2019-09-27 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种供注射用聚山梨酯80及其制备方法。本发明聚山梨酯80的制备方法包括以下步骤：在催化剂存在下,将油酸山梨坦和聚乙二醇进行醚化反应,得到聚山梨酯80；所述的聚乙二醇为聚乙二醇300、聚乙二醇400和聚乙二醇600中的一种或多种；所述的聚乙二醇300与所述的油酸山梨坦的质量比为a,所述的聚乙二醇400与所述的油酸山梨坦的质量比为b,所述的聚乙二醇600与所述的油酸山梨坦的质量比为c,且0≤a≤2.93,0≤b≤2.20,0≤c≤1.47,a、b和c不同时为0。本发明的产品具有较低的过敏和溶血风险,安全性更高。<Image he="199" wi="700" file="DDA0002217751260000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>(The invention discloses polysorbate 80 for injection and a preparation method thereof. The preparation method of polysorbate 80 comprises the following steps: in the presence of a catalyst, carrying out etherification reaction on sorbitan oleate and polyethylene glycol to obtain polysorbate 80; the polyethylene glycol is one or more of polyethylene glycol 300, polyethylene glycol 400 and polyethylene glycol 600; the mass ratio of the polyethylene glycol 300 to the sorbitan oleate is a, the mass ratio of the polyethylene glycol 400 to the sorbitan oleate is b, the mass ratio of the polyethylene glycol 600 to the sorbitan oleate is c, a is more than or equal to 0 and less than or equal to 2.93, b is more than or equal to 0 and less than or equal to 2.20, c is more than or equal to 0 and less than or equal to 1.47, and a, b and c are not 0 at the same time. The product of the invention has lower risk of allergy and hemolysis and higher safety.)

供注射用聚山梨酯80及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种供注射用聚山酯80及其制备方法。

背景技术

聚山梨酯80，又称为吐温80，在医药工业，聚山梨酯80用作水溶性低药物的分散剂和增溶剂，其中高纯度聚山梨酯80可用作注射制剂的增溶剂。在中药注射剂聚山梨酯80作为增溶剂使用，在近些年发展比较迅速的生物制剂中，聚山梨酯80是一种优良的蛋白保护剂。作为在注射剂中使用频率比较高的辅料，聚山梨酯80的安全性十分重要。因此，《中国药典》2015版收载了注射级别聚山梨酯80这个产品，从油酸的含量，杂质，颜色，皂化值，过氧化值等多个方面提高了该产品的质量标准。

聚山梨酯80通常有两种合成方法：一种是山梨醇失水后与油酸酯化，再与环氧乙烷聚合得到(先酯后醚)；另一种是山梨醇失水后与环氧乙烷聚合，再与脂油酸酯化制得(先醚后酯)。但是以上两种合成方法均使用了环氧乙烷，环氧乙烷是一种有毒的致癌物质，是一种易燃易爆的气体；而且得到的最终产品含有乙二醇、二甘醇、三甘醇、二氧六环、以及大分子量物质。公开文献CN102585198B、CN1012351139A、CN101983977B、US8334397等都公开了采用环氧乙烷作为反应原料合成聚山梨酯80的方法，但是最终产品中都含有上述杂质，若不经过精制处理，很难达到中国药典中注射级别的标准。目前，中药注射液在临床使用中发生的不良反应(例如过敏反应、溶血反应)，大多与聚山梨酯80相关。可见，提供更安全和更有效的注射用聚山梨酯80的合成方法已经成为十分紧迫的科研课题。

因此，本领域需要开发出一种更安全的供注射用聚山梨酯80。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中供注射用聚山梨酯80在临床使用中的不良反应(例如过敏反应、溶血反应)的缺陷，而提供了一种供注射用聚山梨酯80及其制备方法。本发明的产品中不含有乙二醇、二甘醇、三甘醇、二氧六环以及大分子量物质等杂质，具有较低的过敏和溶血风险，具有更高的安全性，且满足2015版中国药典的质量要求。

本发明是通过以下技术方案来解决上述技术问题的。

本发明提供了一种聚山梨酯80的制备方法，其包括以下步骤：在催化剂存在下，将油酸山梨坦和聚乙二醇进行醚化反应，得到聚山梨酯80；

其中，所述的聚乙二醇为聚乙二醇300、聚乙二醇400和聚乙二醇600中的一种或多种；

所述的聚乙二醇300与所述的油酸山梨坦的质量比为a，所述的聚乙二醇400与所述的油酸山梨坦的质量比为b，所述的聚乙二醇600与所述的油酸山梨坦的质量比为c，且0≤a≤2.93，0≤b≤2.20，0≤c≤1.47，a、b和c不同时为0；

所述的醚化反应中，所述的聚乙二醇可以为聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600“聚乙二醇300和聚乙二醇400”、“聚乙二醇300和聚乙二醇600”、“聚乙二醇400和聚乙二醇600”、或、“聚乙二醇300、聚乙二醇400和聚乙二醇600”。

其中，当所述的聚乙二醇为“聚乙二醇300和聚乙二醇400”时，所述的a为1.00，所述的b为1.45。

其中，当所述的聚乙二醇为“聚乙二醇300和聚乙二醇600”时，所述的a为0.93，所述的c为1.00。

其中，当所述的聚乙二醇为“聚乙二醇400和聚乙二醇600”时，所述的b为1.00，所述的c为0.80。

其中，当所述的聚乙二醇为“聚乙二醇300、聚乙二醇400和聚乙二醇600”时，“所述的a可以为0.10～2.30，所述的b可以为0.10～1.60，所述的c可以为0.30～1.00”；进一步可以为“所述的a为1.00，所述的b为1.00，所述的c为0.30”、“所述的a为0.20，所述的b为1.60，所述的c为0.30”、“所述的a为0.10，所述的b为0.50，所述的c为1.08”、“所述的a为0.50，所述的b为0.32，所述的c为1.00”、或、“所述的a为2.33，所述的b为0.30，所述的c为1.00”。

所述的醚化反应中，所述的催化剂可为硫酸、磷酸、氢氟酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、三氟乙酸、氯化锌、三氯化铁、氯化铝、三氟化硼和三氟化硼二***中的一种或多种。

所述的醚化反应中，所述的催化剂与所述的山梨醇的质量比可以为0.001:1～0.05：1，例如0.042：1、0.03：1、0.002：1、0.02：1、0.004：1、0.035：1、0.008：1、0.025：1、0.014：1。

所述的醚化反应中，所述的a、b和c满足如下关系：3a+4b+6c＝8.8。

所述的醚化反应还可以在高压反应釜中进行。所述的高压反应釜的真空度≥0.099Mpa。

所述的醚化反应的温度可以为70～135℃，例如115℃、125℃、80℃、90℃、70℃、120℃、115℃、95℃、105℃、100℃。

所述的醚化反应的时间可以为2～10h，例如3.5h、6.5h、8.0h、5.0h、2.0h、6.0h、4.0h、7.0h、9.0h。

所述的醚化反应结束后，其还可以包括过滤。所述的过滤可以为板框过滤。所述的过滤的介质为滤膜，例如0.22um的滤膜。

所述的聚山梨酯80的制备方法，其还可进一步包括以下步骤：在催化剂存在下，将山梨醇和油酸进行酯化反应，得到油酸山梨坦；

所述的酯化反应的操作和条件可以为本领域常规的操作和条件，本发明优选以下操作和条件：

所述的酯化反应中，所述的催化剂可为碱A和酸A，所述的碱A可以为碱金属碱(例如氢氧化钾、氢氧化钠)、碱金属碳酸盐(例如碳酸钠)和碱金属碳酸氢盐(例如碳酸氢钠)中的一种或多种，所述的酸A可以为磷酸和/或亚磷酸。

其中，当所述的碱A优选以水溶液的形式加入。当所述的碱A以水溶液的形式加入时，所述的碱A的浓度可以为10～40％，所述的浓度为所述的碱A的质量与所述的溶液的总质量的质量百分比，例如20％、30％。

其中，当所述的酸A优选以水溶液的形式加入。当所述的酸A以水溶液的形式加入时，所述的酸A的浓度可以为10～40％，所述的浓度为所述的酸A的质量与所述的溶液的总质量的质量百分比，例如20％、30％。

所述的酯化反应中，所述的碱A与所述的山梨醇的质量比可以为0.002:1～0.01：1，例如0.005:1、0.007:1。

所述的酯化反应中，所述的酸A与所述的山梨醇的质量比可以为0.002:1～0.01:1，例如0.003:1、0.005:1。

所述的酯化反应中，所述的山梨醇可以为山梨醇粉末和/或浓度70％的山梨醇水溶液。所述的山梨醇中的还原糖的含量可以＜0.05％，总糖含量可以＞0.3％。

所述的酯化反应中，所述的油酸可以为含量高于98％的高纯油酸。

所述的酯化反应中，所述的油酸与山梨醇的质量比可以为1.0～2.5，例如1.5、2.0。

所述的酯化反应可以在真空度＞0.09MPa下进行反应。

所述的酯化反应的温度是指阶段升温过程和保温反应过程中的温度，所述的阶段升温过程可以为80～180℃，所述的保温过程可以为195～205℃。

所述的酯化反应的时间是指阶段升温过程和保温反应过程中的时间，所述的阶段升温过程的时间可以≥2h，所述的保温过程的时间可以≥6h。

本发明还提供了一种聚山梨酯80的制备方法，所述的聚山梨酯80由上述的聚山梨酯80的制备方法制得。

所述的聚山梨酯80，优选其具有以下特征：①颜色：无色；②酸值：0.1～0.2；③皂化值：40～51；④过氧化值：0.1；⑤环氧乙烷未检出；⑥二氧六环未检出；⑦乙二醇未检出；⑧二甘醇未检出；⑨三甘醇未检出；⑩油酸含量：98.4～99.6％，所述的油酸含量为所述的油酸的质量占所有脂肪酸总质量的质量百分比。

所述的聚山梨酯80进一步优选为具有如下特征的任一聚山梨酯80：“①颜色：无色；②酸值：0.1；③皂化值：46；④过氧化值：0.1；⑤环氧乙烷未检出；⑥二氧六环未检出；⑦乙二醇未检出；⑧二甘醇未检出；⑨三甘醇未检出；⑩油酸含量：98.5％，所述的油酸含量为所述的油酸的质量占所有脂肪酸总质量的质量百分比”、

“①颜色：无色；②酸值：0.2；③皂化值：50；④过氧化值：0.1；⑤环氧乙烷未检出；⑥二氧六环未检出；⑦乙二醇未检出；⑧二甘醇未检出；⑨三甘醇未检出；⑩油酸含量：98.7％，所述的油酸含量为所述的油酸的质量占所有脂肪酸总质量的质量百分比”、

“①颜色：无色；②酸值：0.2；③皂化值：47；④过氧化值：0.1；⑤环氧乙烷未检出；⑥二氧六环未检出；⑦乙二醇未检出；⑧二甘醇未检出；⑨三甘醇未检出；⑩油酸含量：99.4％，所述的油酸含量为所述的油酸的质量占所有脂肪酸总质量的质量百分比”、

“①颜色：无色；②酸值：0.1；③皂化值：44；④过氧化值：0.1；⑤环氧乙烷未检出；⑥二氧六环未检出；⑦乙二醇未检出；⑧二甘醇未检出；⑨三甘醇未检出；⑩油酸含量：99.2％，所述的油酸含量为所述的油酸的质量占所有脂肪酸总质量的质量百分比”、

“①颜色：无色；②酸值：0.2；③皂化值：48；④过氧化值：0.1；⑤环氧乙烷未检出；⑥二氧六环未检出；⑦乙二醇未检出；⑧二甘醇未检出；⑨三甘醇未检出；⑩油酸含量：99.1％，所述的油酸含量为所述的油酸的质量占所有脂肪酸总质量的质量百分比”、

“①颜色：无色；②酸值：0.1；③皂化值：51；④过氧化值：0.1；⑤环氧乙烷未检出；⑥二氧六环未检出；⑦乙二醇未检出；⑧二甘醇未检出；⑨三甘醇未检出；⑩油酸含量：99.0％，所述的油酸含量为所述的油酸的质量占所有脂肪酸总质量的质量百分比”、

“①颜色：无色；②酸值：0.1；③皂化值：49；④过氧化值：0.1；⑤环氧乙烷未检出；⑥二氧六环未检出；⑦乙二醇未检出；⑧二甘醇未检出；⑨三甘醇未检出；⑩油酸含量：98.4％，所述的油酸含量为所述的油酸的质量占所有脂肪酸总质量的质量百分比”、

“①颜色：无色；②酸值：0.2；③皂化值：45；④过氧化值：0.1；⑤环氧乙烷未检出；⑥二氧六环未检出；⑦乙二醇未检出；⑧二甘醇未检出；⑨三甘醇未检出；⑩油酸含量：98.6％，所述的油酸含量为所述的油酸的质量占所有脂肪酸总质量的质量百分比”、

“①颜色：无色；②酸值：0.2；③皂化值：48；④过氧化值：0.1；⑤环氧乙烷未检出；⑥二氧六环未检出；⑦乙二醇未检出；⑧二甘醇未检出；⑨三甘醇未检出；⑩油酸含量：99.6％，所述的油酸含量为所述的油酸的质量占所有脂肪酸总质量的质量百分比”、

“①颜色：无色；②酸值：0.2；③皂化值：45；④过氧化值：0.1；⑤环氧乙烷未检出；⑥二氧六环未检出；⑦乙二醇未检出；⑧二甘醇未检出；⑨三甘醇未检出；⑩油酸含量：98.7％，所述的油酸含量为所述的油酸的质量占所有脂肪酸总质量的质量百分比”、

“①颜色：无色；②酸值：0.1；③皂化值：51；④过氧化值：0.1；⑤环氧乙烷未检出；⑥二氧六环未检出；⑦乙二醇未检出；⑧二甘醇未检出；⑨三甘醇未检出；⑩油酸含量：99.2％，所述的油酸含量为所述的油酸的质量占所有脂肪酸总质量的质量百分比”。

所述的聚山梨酯80中，所述的色度的检测方法可以采用色度仪测定，选用铂-钴色度标准溶液进行标定，其参照中国药典2015版通则(0901)测定。

所述的聚山梨酯80中，所述的酸值、所述的皂化值和所述的过氧化值均可以参照中国药典2015版通则(0713)测定。

所述的聚山梨酯80中，所述的环氧乙烷和所述的二氧六环可以采用气相色谱法检测，其参照中国药典2015版第四部聚山梨酯80(供注射用)品种下“环氧乙烷和二氧六环”的方法。该气相色谱法检测的检测下限为0.1ppm。

所述的聚山梨酯80中，所述的乙二醇、所述的二甘醇和所述的三甘醇，可以采用气相色谱法检测，其参照中国药典2015版第四部聚山梨酯80(供注射用)品种下“乙二醇、二甘醇和三甘醇”的方法。该气相色谱法检测的检测下限为0.1ppm。

所述的聚山梨酯80中，所述的油酸含量可以采用气相色谱法检测，其参照中国药典2015版第四部聚山梨酯80(供注射用)品种下“脂肪酸组成”的方法。

所述的聚山梨酯80中，所述的分子量2000以上的杂质可以采用电喷雾质谱(ESI-MS)进行测定。所述的测定的仪器可以为AB SCIEX 4500质谱仪。所述的测定的条件可以为：气帘气设置为40psi；离子源电压在负离子模式下设置为-4500V；涡轮加热器设置为500℃；雾化气设置为55psi；加热器设置为40psi；配置的样品的浓度为1mg/L的聚山梨酯80甲醇溶液。

在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：本发明的聚山梨酯80中乙二醇、二甘醇、三甘醇和二氧六环杂质均没有检出，无分子量超过2000的大分子杂质，过敏和溶血风险较低，安全性更高。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

实施例1～11聚山梨酯80的合成

实施例1

将100g油酸山梨坦(实施例12)，100g聚乙二醇300与145g聚乙二醇400投入到反应釜中，加入0.1g硫酸。在115℃真空反应3.5h，控制真空度大于0.099Mpa。反应结束后将反应液用0.22um滤膜和板框过滤器进行过滤，灭菌后制得供注射用的聚山梨酯80。

经质谱检测，得到的注射用的聚山梨酯80中不含有分子量大于2000的杂质。

经核磁检测，注射用的聚山梨酯80油酸的甲基H与聚氧乙烯醚链段的亚甲基H比例为1：23.54。理论上聚山梨酯80油酸的甲基H与聚氧乙烯醚链段的亚甲基H比例为3:40；由于聚山梨酯80是一个聚合物，两者的比例不会与理论值相同，满足1:20～1:30即可。

实施例2

将400g油酸山梨坦(实施例13)，400g聚乙二醇300、400g聚乙二醇400与120g聚乙二醇600投入到反应釜中，加入16.8g磷酸。在125℃真空反应6.5h，控制真空度大于0.099Mpa。反应结束后将反应液用0.22um滤膜和板框过滤器进行过滤，灭菌后制得供注射用的聚山梨酯80，其质谱和核磁基本同实施例1。

实施例3

将1000g油酸山梨坦(实施例14)，200g聚乙二醇300、1600g聚乙二醇400与300g聚乙二醇600投入到反应釜中，加入50g氢氟酸。在80℃真空反应8h，控制真空度大于0.099Mpa。反应结束后将反应液用0.22um滤膜和板框过滤器进行过滤，灭菌后制得供注射用的聚山梨酯80，其质谱和核磁基本同实施例1。

实施例4

将2kg油酸山梨坦(实施例15)，2.94kg聚乙二醇600投入到反应釜中，加入60g对甲苯磺酸。在90℃真空反应10h，控制真空度大于0.099Mpa。反应结束后将反应液用0.22um滤膜和板框过滤器进行过滤，灭菌后制得供注射用的聚山梨酯80，其质谱和核磁基本同实施例1。

实施例5

将5kg油酸山梨坦(实施例12)，0.5kg聚乙二醇300、2.5kg聚乙二醇400与5.4kg聚乙二醇600投入到反应釜中，加入10g甲磺酸。在70℃真空反应5h，控制真空度大于0.099Mpa。反应结束后将反应液用0.22um滤膜和板框过滤器进行过滤，灭菌后制得供注射用的聚山梨酯80，其质谱和核磁基本同实施例1。

实施例6

将10kg油酸山梨坦(实施例13)，29.4kg聚乙二醇300，加入0.2kg三氟乙酸。在120℃真空反应2h，控制真空度大于0.099Mpa。反应结束后将反应液用0.22um滤膜和板框过滤器进行过滤，灭菌后制得供注射用的聚山梨酯80，其质谱和核磁基本同实施例1。

实施例7

将10kg油酸山梨坦(实施例14)，22kg聚乙二醇400投入到反应釜中，加入40g甲磺酸。在135℃真空反应3h，控制真空度大于0.099Mpa。反应结束后将反应液用0.22um滤膜和板框过滤器进行过滤，灭菌后制得供注射用的聚山梨酯80，其质谱和核磁基本同实施例1。

实施例8

将50kg油酸山梨坦(实施例15)，46.5kg聚乙二醇300与50kg聚乙二醇600投入到反应釜中，加入1.75kg三氯化铁。在110℃真空反应6h，控制真空度大于0.099Mpa。反应结束后将反应液用0.22um滤膜和板框过滤器进行过滤，灭菌后制得供注射用的聚山梨酯80，其质谱和核磁基本同实施例1。

实施例9

将100kg油酸山梨坦(实施例12)，50kg聚乙二醇300、32.5kg聚乙二醇400与100kg聚乙二醇600投入到反应釜中，加入0.8kg三氯化铝。在70℃真空反应5h，控制真空度大于0.099Mpa。反应结束后将反应液用0.22um滤膜和板框过滤器进行过滤，灭菌后制得供注射用的聚山梨酯80，其质谱和核磁基本同实施例1。

实施例10

将500kg油酸山梨坦(实施例13)，1165kg聚乙二醇300、150kg聚乙二醇400与50kg聚乙二醇600投入到反应釜中，加入12.5kg三氟化硼。在105℃真空反应7h，控制真空度大于0.099Mpa。反应结束后将反应液用0.22um滤膜和板框过滤器进行过滤，灭菌后制得供注射用的聚山梨酯80，其质谱和核磁基本同实施例1。

实施例11

将1000kg油酸山梨坦(实施例14)，1000kg聚乙二醇400与800kg聚乙二醇600投入到反应釜中，加入14kg甲磺酸。在100℃真空反应9h，控制真空度大于0.099Mpa。反应结束后将反应液用0.22um滤膜和板框过滤器进行过滤，灭菌后制得供注射用的聚山梨酯80，其质谱和核磁基本同实施例1。

实施例12～15油酸山梨坦的合成

实施例12

将500g氢氧化钠配成30％质量分数水溶液，将300g磷酸配成40％质量分数的水溶液，以待备用。将100kg山梨醇固体和200kg高纯油酸加入反应釜中，然后加入配好的氢氧化钠水溶液和磷酸水溶液。反应釜抽真空，使真空度大于0.09MPa。开启加热，升温至80℃后在3h内缓慢升温至180℃，然后升温，在195℃至205℃保温反应7h。

实施例13

将200g碳酸氢钠配成10％质量分数水溶液，将1000g亚磷酸配成20％质量分数的水溶液，以待备用。将100kg山梨醇水溶液和100kg高纯油酸加入反应釜中，然后加入配好的碳酸氢钠水溶液和亚磷酸水溶液。反应釜抽真空，使真空度大于0.09MPa。开启加热，升温至80℃后在2.5h内缓慢升温至180℃，然后升温，在195℃至205℃保温反应7.5h。

实施例14

将700g碳酸钠配成40％质量分数水溶液，将200g磷酸配成30％质量分数的水溶液，以待备用。将100kg山梨醇固体和250kg高纯油酸加入反应釜中，然后加入配好的碳酸钠水溶液和磷酸水溶液。反应釜抽真空，使真空度大于0.09MPa。开启加热，升温至80℃后在2.5h内缓慢升温至180℃，然后升温，在195℃至205℃保温反应6h。

实施例15

将1000g氢氧化钾配成20％质量分数水溶液，将500g磷酸配成10％质量分数的水溶液，以待备用。将100kg山梨醇水溶液和150kg高纯级油酸加入反应釜中，然后加入配好的氢氧化钾水溶液和磷酸水溶液。反应釜抽真空，使真空度大于0.09MPa。开启加热，升温至80℃后在2h内缓慢升温至180℃，然后升温，在195℃至205℃保温反应6.5h。

对比实施例1

按照现有文献技术US8334397，用油酸山梨坦与环氧乙烷进行合成反应。

将1000g油酸山梨坦，2000g环氧乙烷和5g氢氧化钠加入反应釜中。在100℃真空反应2h，控制真空度大于0.099Mpa。反应结束反应液用0.22um滤膜和板框过滤器进行过滤，灭菌后制得聚山梨酯80。

对比实施例2

按照现有文献技术CN 101983977B，用失水山梨醇与环氧乙烷聚合，再与油酸进行合成反应。该实施例是注射剂聚山梨酯80的另外一种制备方法，也是目前市售的产品。该对比实施例是为了证明本发明安全性会更好。

效果实施例

检测方法和仪器

酸值、皂化值、过氧化值参照中国药典2015版通则(0713)测定。

色度采用色度仪测定，采用铂-钴色度标准溶液进行标定，“＜2.0”指比标准黄色2号液颜色浅。参照中国药典2015版通则(0901)测定。

环氧乙烷、二氧六环采用采用气相色谱法检测，方法参照中国药典2015版第四部聚山梨酯80(供注射用)品种下“环氧乙烷和二氧六环”的方法。该气相色谱法检测的检测下限为0.1ppm。

乙二醇、二甘醇、三甘醇，采用气相色谱法检测，方法参照中国药典2015版第四部聚山梨酯80(供注射用)品种下“乙二醇、二甘醇和三甘醇”的方法。该气相色谱法检测的检测下限为0.1ppm。

油酸含量采用气相色谱法检测，方法参照中国药典2015版第四部聚山梨酯80(供注射用)品种下“脂肪酸组成”的方法。

分子量2000以上的杂质，根据电喷雾质谱(ESI-MS)进行判定。测试仪器：AB SCIEX4500质谱仪(福斯特城，加利福利亚州，美国)；优化的离子源参数如下：气帘气设置为40psi；离子源电压在负离子模式下设置为-4500V；涡轮加热器(TEM)设置为500℃；雾化气(Gas 1)设置为55psi；加热器(Gas 2)设置为40psi。配置1mg/L的聚山梨酯80甲醇溶液作为供试品。

过敏性测试：配置0.25％、0.5％、1.0％、1.5％、2.0％与3.0％质量分数的聚山梨酯80的水溶液。试验方法参照中国药典2015版通则(1147)测定。

溶血率测试：

(1)2％红细胞混悬液的配制：兔心脏取血4mL，用玻璃珠去纤维蛋白原使成脱纤血，加氯化钠注射液摇匀离心15min(1000r/min)，弃上清液，沉淀的的红细胞用氯化钠注射液同上法洗涤3次，至上清液不呈红色，取沉淀红细胞1mL，加氯化钠注射液稀释至50mL，混匀。

(2)配置0.25％、0.5％、1.0％、1.5％、2.0％与3.0％质量分数的聚山梨酯80的生理盐水水溶液。

(3)每批次样品每浓度分别取洁净试管6支，1、2号管为样品管，3、4号管为阴性对照管，5、6号管为阳性对照管，按下表所示，依次加入2％红细胞混悬液、氯化钠注射液或蒸馏水和相应浓度供试液，混匀，于37℃温育，3h后取出，离心5min(1000mg/mL，采用分光光度法545nm测定各管吸收度。

试管编号	1	2	3	4	5	6
							2％红细胞混悬液/mL	2.5	2.5	2.5	2.5	2.5	2.5
氯化钠注射液/mL	2.2	2.2	2.5	2.5	/	/
							蒸馏水/mL	/	/	/	/	2.5	2.5
供试品溶液/mL	0.3	0.3	/	/	/	/

(4)以两平行管吸收度平均值带入公式:溶血率(％)＝(样品管吸光度－阴性管吸光度)/(阳性管吸光度－阴性管吸光度)×100％，计算溶血率。

将上述实施例中的产品按照上述方法进行检测，其结果如下：

表1为聚山梨酯80的检验结果；表2为油酸山梨坦的理化值检验结果；表3为过敏性试验的结果；表4为溶血率的测试结果。

表1

备注：表1中“未检出”的检测下限为0.1ppm。

表2

	酸值	皂化值	油酸含量
				15版药典标准	＜10	＞140	≥98.0％
实施例12	2	150	99.1％
				实施例13	4	146	99.5％
实施例14	3	162	98.7％
				实施例15	2	144	99.2％

表3

表4

从表3与表4的试验数据可以看出，按照本发明制备的注射级聚山梨酯80比使用环氧乙烷为原料制备的聚山梨酯80(对比实施例1与对比实施例2)在致敏性和溶血性上都有较大的优势。本发明实施例试样浓度在3.0％时，不会出现过敏反应；而对比实施例在3.0％时，已出现严重过敏反应。本发明的产品在相同浓度下，溶血率均比对比实施例更低，在试样浓度为1.5％时，对比实施例的溶血率都高达90％以上，而本发明实施例的溶血率不超过30％。