阅读说明：本技术 一种甘蔗实生苗移栽前梢腐病接种胁迫的方法 (A kind of method that cane seedlings transplant preceding top rot inoculation stress ) 是由 黄海荣 杨荣仲 徐林 李翔 邓宇驰 经艳 王伦旺 唐仕云 周会 高轶静 谭芳 于 2019-09-30 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种甘蔗实生苗移栽前梢腐病接种胁迫的方法。该方法是在将甘蔗实生苗假植育苗穴盘中,待生长至6~8片叶时,将配制好的梢腐病孢子悬浊液喷淋甘蔗实生苗上部,覆盖塑料薄膜保温保湿,进行梢腐病接种,用于筛选出抗梢腐病单株或组合。该方法可以大规模接种实生苗,评价组合,提早淘汰感病单株,从而提高育种效率,减少误选几率,节省后期的劳力物力地力。本发明中的接种装置,可自动均匀进行甘蔗实生苗梢腐病接种,有效控制接种环境温度和湿度,提高了接种效果,减少了抗梢腐病甘蔗苗品种误选几率,可用于准确筛选抗梢腐病甘蔗品系。(A kind of method of top rot inoculation stress before being transplanted the invention discloses cane seedlings.This method is planted in seedling culture hole plate by cane seedlings, it is to be grown to 6 ~ 8 leaves when, prepared top rot spore suspension is sprayed into cane seedlings top, plastic covering film thermal insulating moisturizing, top rot inoculation is carried out, for filtering out anti-top rot single plant or combination.This method can be evaluated combination, be eliminated susceptible single plant ahead of time with large-scale inoculation seedling, to improve breeding efficiency, probability is falsely dropped in reduction, save labour's material resources soil fertility in later period.Classification inoculation apparatus in the present invention, can automatic uniform carry out the inoculation of cane seedlings top rot, effectively control inoculation environment temperature and humidity, improve effect of inoculation, reduce anti-top rot sugarcane seedling kind and falsely drop probability, can be used for accurately screening anti-top rot sugarcane line.)

一种甘蔗实生苗移栽前梢腐病接种胁迫的方法

技术领域

本发明属于甘蔗抗稍腐病品种选育领域，具体涉及一种甘蔗实生苗移栽前梢腐病接种胁迫的方法。

背景技术

甘蔗梢腐病是一种气传真菌病害，该病菌的分生孢子被气流带至甘蔗梢头叶片上，在适宜温度和湿度下萌芽侵染甘蔗。感染梢腐病的甘蔗叶片主要表现出起叶片褪绿黄化、皱缩扭曲，最终导致植株停止生长或在梢部幼嫩组织上形成顶腐状。我国7-9月的高温高湿天气是梢腐病的主要发生时期，干旱后充分灌水、施用氮肥过多或干旱后遇到降雨，都可引发梢腐病的大规模发生，1989年，广东省珠江三角洲蔗区POJ2878梢腐病爆发，造成10％～38％的蔗茎枯死。2012～2014年广西甘蔗品种区域试验以及2013～2014年国家甘蔗品种区域试验调查，品种发病率达到100％。病害发生可导致甘蔗减产5％～20％，甘蔗糖分降低达3％。梢腐病具有发病速度快、传播性强等特点，如不及时控制病害的蔓延，必将严重影响到甘蔗产业的可持续发展。

防治梢腐病最经济有效的方法是对甘蔗苗进行梢腐病接种并进行抗病品种选育，甘蔗稍腐病的接种技术一般针对甘蔗茎芽培育生长的小苗(无性繁殖)进行接种，接种的方法为在幼苗基部叶鞘注射病液称叶窝注射或针刺法，这种接种技术不适用于大规模甘蔗苗的接种。当前甘蔗稍腐病的接种有两种方法：1)针对甘蔗茎芽培育生长的小苗(无性繁殖)进行，此方法只能对少量的甘蔗品种进行评价优选抗病；2)将对茎芽培育生长的小苗种到田间，生长自然感病，从而淘汰感病品种。但此方法可能在某个年份某个地块因为天气或环境的因素并未此感病，定性抗病品种而误选入第二年的繁殖和生长，造成人力地力财力的浪费，育种效率低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种甘蔗实生苗移栽前梢腐病接种胁迫的方法，在甘蔗实生苗-育种早期，使用喷淋稍腐病孢子悬浊液接种，并进行抗性鉴定，可以大规模接种实生苗，评价组合，提早淘汰感病单株，从而提高育种效率，减少误选几率，节省后期的劳力物力地力。

为实现上述目的，本发明提供了一种甘蔗实生苗移栽前梢腐病接种胁迫的方法，包括如下步骤：

(1)甘蔗实生苗培育：将甘蔗杂交种子播种于甘蔗苗盘内，在温室大棚下，控制温度28～35℃，相对湿度85～90％，种子萌芽、生长；

(2)甘蔗假植苗：待甘蔗实生苗萌发生长至2～3片真叶后，假植育苗穴盘中；

(3)梢腐病孢子悬浊液制备：采集甘蔗梢腐病叶，收集梢腐病病原菌孢子，放入PDA培养基培养，然后采用无菌水和吐温20配置孢子浓度为10⁵～10⁶个孢子/ml的梢腐病孢子悬浊液，所述无菌水和吐温中吐温的质量百分数为0.05％～1.5％；

(4)接种：待假植的甘蔗实生苗生长至6～8片叶时，将配制好的梢腐病孢子悬浊液喷淋甘蔗实生苗上部，使甘蔗叶片基本充分湿润并蕴含病液，使病液留存在新叶嫩芽部位；覆盖塑料薄膜保温保湿24小时，创造有利环境为孢子萌发并侵染叶片。

优选的，上述技术方案中，所述无菌水和吐温20中吐温20的质量百分数为0.1％，吐温使菌液黏连叶片基部的能力更强，提高接种效果。

优选的，上述技术方案中，所述步骤(4)在甘蔗实生苗梢腐病接种装置进行，所述甘蔗实生苗梢腐病接种装置，所述甘蔗实生苗梢腐病接种装置，包括底座、顶盖、网状板与支撑杆，所述网状板是水平设置，所述支撑杆自下而上连接底座、多层网状板和顶盖构成接种架，所述顶盖四周设有卷轴，所述卷轴***卷绕有遮光帘，所述接种架一侧面设有接种液存放箱，所述接种液存放箱通过连接管连接出水泵输入端，所述出水泵输出端与出水管的一端连接，所述出水管沿接种架延伸，另一端与雾化喷头连接，多个所述雾化喷头分别设于各所述网状板的上方。

优选的，上述技术方案中，所述甘蔗实生苗梢腐病接种装置的底座内设有加热器和加湿器，所述加热器和加湿器内设有送风系统。

优选的，上述技术方案中，所述步骤(4)在甘蔗实生苗梢腐病接种装置进行接种的具体步骤包括：

(1)将假植甘蔗实生苗的穴盘放置在接种架内的网状板上，放下遮光帘；

(2)将配制好的梢腐病孢子悬浊液放入接种液存放箱中，启动出水泵，将梢腐病孢子悬浊液抽送到每个雾化喷头，均匀地喷洒到甘蔗实生苗上；

(3)启动加热器和加湿器，设定温度为25～35℃和相对湿度70～90％，创造孢子萌发并侵染叶片的有利环境。

优选的，上述技术方案中，所述梢腐病孢子悬浊液喷洒流量为3～5ml/min，喷1～2min，以甘蔗心叶叶窝能结滴为佳。

上述甘蔗实生苗移栽前梢腐病接种胁迫的方法在甘蔗实生苗抗稍腐病品种选育中的应用。

优选的，上述应用中，接种5天后开始观察记录蔗稍部叶片皱缩扭曲的病变情况，30天后累计感病植株数，判定甘蔗实生苗感病情况，进而初步筛选出抗梢腐病的甘蔗品种。

与现有的技术相比，本发明具有如下有益效果：

1.本发明采用喷淋接种可进行大规模实生苗接种稍腐病，接种效率更高，更简洁，可服务于甘蔗育种机构，用于甘蔗实生苗抗稍腐病选育。

2.本发明对甘蔗实生苗进行接种，可提早淘汰感病单株和组合，减少了抗梢腐病甘蔗苗品种误选几率，提高育种效率，减少财力物力的投入。

3.本发明中接种装置可自动均匀进行甘蔗实生苗梢腐病接种，有效控制接种环境温度和湿度，为梢腐病孢子萌发和侵染叶片提供了适宜环境，提高接种效果，可用于准确筛选抗梢腐病甘蔗品系。

附图说明

图1是本发明的甘蔗实生苗梢腐病接种装置结构示意图。

主要附图标记说明：

1-底座，2-顶盖，3-网状板，4-支撑杆，5-卷轴，6-遮光帘，7-接种液存放箱，8-出水泵，9-出水管，10-雾化喷头，11-加热器，12-加湿器。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。

选取亲本对稍腐病敏感Y63(桂糖94-119×粤糖93-159)，Y101(粤糖93-159×粤糖91-976)，Y101抗感(抗病和感病)(粤糖94-128×桂糖00-122)，抗病组合Y216(YC97-40×ROC22)和Y87(粤糖91-976×ROC22)5个组合作为试验对象。

实施例1

一种甘蔗实生苗移栽前梢腐病接种胁迫的方法，包括如下步骤：

(1)将甘蔗杂交种子播种于甘蔗苗盘内，在温室大棚下，控制温度28～35℃，相对湿度85～90％，种子萌芽、生长；

(2)待甘蔗实生苗萌发生长至2～3片真叶后，假植育苗穴盘中；

(3)梢腐病孢子悬浊液制备：采集甘蔗梢腐病叶，收集梢腐病病原菌孢子，放入PDA培养基培养，然后采用无菌水和吐温20配置孢子浓度为10⁶个孢子/ml的梢腐病孢子悬浊液，无菌水和吐温中吐温的质量百分数为0.1％；

(4)待假植的甘蔗实生苗生长至6～8片叶时，在上午8-10点钟(20-28摄氏度)，将配制好的梢腐病孢子悬浊液喷淋甘蔗实生苗上部，使甘蔗叶片基本充分湿润并蕴含病液，使病液留存在新叶嫩芽部位；覆盖塑料薄膜保温保湿24小时。

第五天后开始观察记录，观察记录甘蔗稍部叶片皱缩扭曲等病变情况，30天后累计感病植株数。

试验结果：5个组合，每个组合有25株实生苗，每个组合设置3个重复，即3×25株实生苗进行喷淋病菌接种处理，设置相同实生苗数对照组进行喷淋清水处理。喷淋病菌接种的稍腐病平均感染率为7.11％较喷淋清水对照0％高，其中稍腐病敏感组合Y63的感染率为18.67％，说明对甘蔗实生苗的喷淋接种效果好。

实施例2

本实施例给出一种甘蔗实生苗移栽前梢腐病接种胁迫的方法，该实施例与实施例1的不同在于：采用无菌水和吐温20配置孢子浓度为10⁶个孢子/ml的梢腐病孢子悬浊液，无菌水和吐温中吐温的质量百分数为1.5％。其他步骤和条件参数与实施例1相同。

实施例3

本实施例给出一种甘蔗实生苗移栽前梢腐病接种胁迫的方法，该实施例与实施例1的不同在于：采用无菌水和吐温20配置孢子浓度为10⁵个孢子/ml的梢腐病孢子悬浊液，无菌水和吐温中吐温的质量百分数为0.05％。其他步骤和条件参数与实施例1相同。

实施例4

本实施例提供一种甘蔗实生苗梢腐病接种装置如图1所示，包括底座1，顶盖2，网状板3，支撑杆4，卷轴5，遮光帘6，接种液存放箱7，出水泵8，出水管9，雾化喷头10，加热器11，加湿器12。底座1上表面设有螺孔，顶盖2下表面设有与支撑杆4形状相同的凹槽，网状板水平设置，网状板3四个顶角处设有卡块，卡块上设有螺孔，支撑杆4一端表面设有与底座1上螺纹孔相匹配的螺纹，中部设有多个通孔，支撑杆4自下而上连接底座1、多层网状板3和顶盖2构成接种架，支撑杆4通过底座1上螺孔连接底座1，采用螺钉通过通孔与网状板3卡块上的螺孔进行螺合连接网状板3，顶端卡入顶盖2凹槽连接顶盖2，螺合连接使接种架可拆卸且拆卸方便。顶盖2四周设有卷轴5，卷轴5***卷绕有遮光帘6，使用时遮光帘下拉固定，创造黑暗条件有利于孢子萌发并侵染叶片。接种液存放箱7设在接种架一侧面，接种液存放箱7通过连接管连接出水泵8输入端，出水泵8输出端与出水管9的一端连接，出水管9沿接种架延伸，另一端与雾化喷头10连接，多个雾化喷头分别设于各网状板的上方，接种液存放箱7、出水泵8、出水管9和雾化喷头10构成自动喷洒病菌接种液系统，用于自动均匀喷洒梢腐病孢子悬浊液进行甘蔗实生苗梢腐病接种。

进一步底座1设有加热器11和加湿器12，加热器和加湿器内部设有送风系统，控制接种环境温度和湿度，为梢腐病接种提供适宜的环境。

一种甘蔗实生苗移栽前梢腐病接种胁迫的方法，包括以下步骤：

(1)将甘蔗杂交种子播种于甘蔗苗盘内，在温室大棚下，控制温度28～35℃，相对湿度85～90％，种子萌芽、生长；

(2)待甘蔗实生苗萌发生长至2～3片真叶后，假植育苗穴盘中；

(3)梢腐病孢子悬浊液制备：采集甘蔗梢腐病叶，收集梢腐病病原菌孢子，放入PDA培养基培养，然后采用无菌水和吐温20配置孢子浓度为10⁶个孢子/ml的梢腐病孢子悬浊液，无菌水和吐温中吐温的质量百分数为0.1％；

(4)待假植的甘蔗实生苗生长至6～8片叶时，将假植甘蔗实生苗的穴盘放置在甘蔗实生苗梢腐病接种装置的接种架内的网状平台上，放下遮光帘并固定；将配制好的梢腐病孢子悬浊液放入接种液存放箱中，启动出水泵，将梢腐病孢子悬浊液抽送到每个雾化喷头，均匀地喷洒到甘蔗实生苗上，梢腐病孢子悬浊液喷洒量为4ml/min，喷1.5min；启动加热器和加湿器，设定温度为25～35℃和相对湿度70～90％，创造孢子萌发并侵染叶片的有利环境。

试验结果：5个组合，每个组合有25株实生苗，每个组合设置3个重复，即3×25株实生苗进行喷淋病菌接种处理。喷淋处理的稍腐病平均感染率为8.5％，其中对感病组合Y63的感染率为23％，使用方差分析，两者达到显著水平，专用的接种装置能自动均匀地喷洒喷淋效果好，接种装置能控制温度和湿度，创造了适宜的温暖、潮湿、阴暗的环境更有利病菌生长并侵害植株，使接种效果更好。

对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。