阅读说明：本技术 一种牛大力的培养方法 (A kind of cultural method of beautiful millettia root ) 是由 周国权 郑彬江 郑彬旭 罗志超 于 2019-06-21 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种牛大力的培养方法,通过对牛大力幼苗的前期浸泡处理,以及在培养基中加入邻羟基苯甲酸甲酯、牛大力幼苗根部提取液,可防止培养期间培养物褐变死亡,从而提高增殖效率,并且能够有效地诱导培养物的细胞分裂,可以促进愈伤组织的形成,提高愈伤组织生长效率。(The present invention relates to a kind of cultural methods of beautiful millettia root, pass through immersion treatment early period to beautiful millettia root seedling, and Methyl Salicylate, beautiful millettia root seedling root extracting solution are added in the medium, it can prevent culture Necrosis during culture, to improve proliferation efficiency, and it is capable of the cell division of effectively Induced cultures, calli induction can be promoted, improve callus growth efficiency.)

一种牛大力的培养方法

技术领域

本申请属于植物培养技术领域，具体涉及一种牛大力的培养方法。

背景技术

牛大力，别名猪脚笠、金钟根、山莲藕、倒吊金钟、大力薯。是一种药材。为豆科豆科崖豆藤属植物。牛大力在我国尚未产业化，可谓方兴未艾，所以很多种植户经常犯了认识上的错误，误以为一旦种植牛大力就成功的丰收。殊不知，牛大力有很多不同的种质品源，不同牛大力种源，其形态特性和产量存在一定的差异性，选对质优高产的品种方可成功丰收；反之，则可能失败。牛大力幼苗期管理不科学，将严重影响后期的收获，这是致命性的.科学合理的树冠会制造更多的光合产物向根部输送，促进根茎的快速膨大。

采用现有技术中的培养方法培育牛大力的过过程中会出现比较严重的褐化现象，甚至在4-6周内就会发生褐变，严重影响了牛大力的生长效率，因此，如何提供一种有效的抑制牛大力在生长过程中出现褐化现象的接种方法是目前亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种有效抑制褐化现象的牛大力接种方法。

具体地，本发明的牛大力培养方法依次包括如下步骤：

取萌发14天的牛大力幼苗茎部，剥除表皮后用蒸馏水洗涤30分钟，随后将其浸入浓度为8％的苯扎氯铵溶液中2至6秒，接着在浓度为60％的酒精溶液中浸泡1至3秒，再在浓度为10％的次氯酸钠溶液中浸泡30至40分钟，将经过浸泡处理后的幼苗茎部用切刀划开创口，然后将创口朝下放入第一培养基中进行愈伤组织培养，所述第一培养基含有MS盐、0.5-1mg/L邻羟基苯甲酸甲酯、0.3 mg/L BAP、1 mg/L NAA、20-30g/L蔗糖和5-10g/L琼脂，第一培养基的pH为5.8，在第一培养基中培养70天后，将其接种到第二培养基上，第二培养基含有MS盐、维生素、0.3 mg/L BAP、1 mg/L NAA、20-30g/L蔗糖和3-6g/L琼脂，第二培养基的pH为5.8，在第二培养基中培养30-60天后，再将愈伤组织转移到HSM培养基中再生，萌芽后，转移到无激素MS培养基，然后在7-10天后移栽入土壤。

优选地，所述第一培养基中还含有牛大力幼苗根部的提取液，所述提取液的提取方法为：将牛大力幼苗的根部切碎，并放入到甲醇溶液中过夜提取，然后减压浓缩以除去甲醇，再加入醋酸丁酯并搅拌分离成水层和第一醋酸丁酯层，取上述醋酸丁酯层加入到5％碳酸氢钠溶液中，继续搅拌分离为水层和第二醋酸丁酯层，取该第二醋酸丁酯层即得到提取液。

优选地，所述提取液的添加量为0.5-2ml/L。

本发明的有益效果是：1）通过对牛大力幼苗的前期浸泡处理，提高了后期愈伤组织的增殖率；2）通过在培养基中加入邻羟基苯甲酸甲酯，有效抑制了培养过程中的褐化现象；3）通过在培养基中加入牛大力幼苗根部提取液，有效降低了培养基的氧化程度。通过以上技术手段，本发明可防止培养期间培养物褐变死亡，从而提高增殖效率，并且能够有效地诱导培养物的细胞***，可以促进愈伤组织的形成，提高愈伤组织生长效率。

具体实施方式

实施例1

作为一较佳实施例，通过以下步骤进行牛大力的培养：

（1）取萌发14天的牛大力幼苗茎部，剥除表皮后用蒸馏水洗涤30分钟，随后将其浸入浓度为8％的苯扎氯铵溶液中2至6秒，接着在浓度为60％的酒精溶液中浸泡1至3秒，再在浓度为10％的次氯酸钠溶液中浸泡30至40分钟；

（2）将经过浸泡处理后的幼苗茎部用切刀划开创口，然后将创口朝下放入第一培养基中进行愈伤组织培养，所述第一培养基含有MS盐、0.5-1 mg/L邻羟基苯甲酸甲酯、0.3 mg/LBAP、1 mg/L NAA、20-30g/L蔗糖和5-10g/L琼脂，第一培养基的pH为5.8；

（3）在第一培养基中培养70天后，将其接种到第二培养基上，第二培养基含有MS盐、维生素、0.3 mg/L BAP、1 mg/L NAA、20-30g/L蔗糖和3-6g/L琼脂，第二培养基的pH为5.8；

（4）在第二培养基中培养30-60天后，再将愈伤组织转移到HSM培养基中再生，萌芽后，转移到无激素MS培养基，然后在7-10天后移栽入土壤。

在该实施例的培养过程中，5-6个月后仍未见褐化现象，且愈伤组织的增殖率为2.5-3倍。

实施例2

作为另一较佳实施例，通过以下步骤进行牛大力的培养：

（1）取萌发14天的牛大力幼苗茎部，剥除表皮后用蒸馏水洗涤30分钟，随后将其浸入浓度为8％的苯扎氯铵溶液中2至6秒，接着在浓度为60％的酒精溶液中浸泡1至3秒，再在浓度为10％的次氯酸钠溶液中浸泡30至40分钟；

（2）将经过浸泡处理后的幼苗茎部用切刀划开创口，然后将创口朝下放入第一培养基中进行愈伤组织培养，所述第一培养基含有MS盐、0.5-2ml/L牛大力幼苗根部的提取液、0.5-1 mg/L邻羟基苯甲酸甲酯、0.3 mg/L BAP、1 mg/L NAA、20-30g/L蔗糖和5-10g/L琼脂，第一培养基的pH为5.8；

（3）在第一培养基中培养70天后，将其接种到第二培养基上，第二培养基含有MS盐、维生素、0.3 mg/L BAP、1 mg/L NAA、20-30g/L蔗糖和3-6g/L琼脂，第二培养基的pH为5.8；

（4）在第二培养基中培养30-60天后，再将愈伤组织转移到HSM培养基中再生，萌芽后，转移到无激素MS培养基，然后在7-10天后移栽入土壤。

在该实施例的培养过程中，8-9个月后仍未见褐化现象，且愈伤组织的增殖率为3.5-4倍。

对比例1

作为一对比实施例，通过以下步骤进行牛大力的培养：

（1）取萌发14天的牛大力幼苗茎部，剥除表皮后用蒸馏水洗涤30分钟；

（2）将经过浸泡处理后的幼苗茎部用切刀划开创口，然后将创口朝下放入第一培养基中进行愈伤组织培养，所述第一培养基含有MS盐、0.3 mg/L BAP、1 mg/L NAA、20-30g/L蔗糖和5-10g/L琼脂，第一培养基的pH为5.8；

（3）在第一培养基中培养70天后，将其接种到第二培养基上，第二培养基含有MS盐、维生素、0.3 mg/L BAP、1 mg/L NAA、20-30g/L蔗糖和3-6g/L琼脂，第二培养基的pH为5.8；

（4）在第二培养基中培养30-60天后，再将愈伤组织转移到HSM培养基中再生，萌芽后，转移到无激素MS培养基，然后在7-10天后移栽入土壤。

在该实施例的培养过程中，1-2个月出现褐化现象，且愈伤组织的增殖率为1.2倍。

对比例2

作为另一对比实施例，通过以下步骤进行牛大力的培养：

（1）取萌发14天的牛大力幼苗茎部，剥除表皮后用蒸馏水洗涤30分钟，随后将其浸入浓度为8％的苯扎氯铵溶液中2至6秒，接着在浓度为60％的酒精溶液中浸泡1至3秒，再在浓度为10％的次氯酸钠溶液中浸泡30至40分钟；

（2）将经过浸泡处理后的幼苗茎部用切刀划开创口，然后将创口朝下放入第一培养基中进行愈伤组织培养，所述第一培养基含有MS盐、0.3 mg/L BAP、1 mg/L NAA、20-30g/L蔗糖和5-10g/L琼脂，第一培养基的pH为5.8；

（3）在第一培养基中培养70天后，将其接种到第二培养基上，第二培养基含有MS盐、维生素、0.3 mg/L BAP、1 mg/L NAA、20-30g/L蔗糖和3-6g/L琼脂，第二培养基的pH为5.8；

（4）在第二培养基中培养30-60天后，再将愈伤组织转移到HSM培养基中再生，萌芽后，转移到无激素MS培养基，然后在7-10天后移栽入土壤。

在该实施例的培养过程中，3-4个月出现褐化现象，且愈伤组织的增殖率为1.8倍。

对比例3

作为另一对比实施例，通过以下步骤进行牛大力的培养：

（1）取萌发14天的牛大力幼苗茎部，剥除表皮后用蒸馏水洗涤30分钟，随后将其浸入浓度为8％的苯扎氯铵溶液中2至6秒，接着在浓度为60％的酒精溶液中浸泡1至3秒，再在浓度为10％的次氯酸钠溶液中浸泡30至40分钟；

（2）将经过浸泡处理后的幼苗茎部用切刀划开创口，然后将创口朝下放入第一培养基中进行愈伤组织培养，所述第一培养基含有MS盐、0.5-2ml/L牛大力幼苗根部的提取液、0.3mg/L BAP、1 mg/L NAA、20-30g/L蔗糖和5-10g/L琼脂，第一培养基的pH为5.8；

（3）在第一培养基中培养70天后，将其接种到第二培养基上，第二培养基含有MS盐、维生素、0.3 mg/L BAP、1 mg/L NAA、20-30g/L蔗糖和3-6g/L琼脂，第二培养基的pH为5.8；

（4）在第二培养基中培养30-60天后，再将愈伤组织转移到HSM培养基中再生，萌芽后，转移到无激素MS培养基，然后在7-10天后移栽入土壤。

在该实施例的培养过程中，4-5个月后仍未见褐化现象，且愈伤组织的增殖率为2-2.5倍。

通过以上实施例可以看出，在初代培养基中加入邻羟基苯甲酸甲酯和牛大力幼苗根部提取液，协同抑制了褐化现象的发生，且有效提高了愈伤组织的增值率。