阅读说明：本技术 黑果枸杞花色苷在具有美白功效的化妆品中的应用 (Application of lycium ruthenicum anthocyanin in cosmetics with whitening effect ) 是由 管福琴 陈雨 刘兰英 冯煦 印敏 黄佳楠 李晓莺 禄璐 米佳 王奇志 刘飞 于 2019-09-04 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种黑果枸杞花色苷的制备方法,用该方法制备得到的黑果枸杞花色苷具有美白功效。本发明也公开了黑果枸杞花色苷在具有美白功效的化妆品中的应用,以及含有黑果枸杞花色苷的化妆品组合物。(The invention discloses a preparation method of lycium ruthenicum anthocyanin, and the lycium ruthenicum anthocyanin prepared by the method has a whitening effect. The invention also discloses application of the lycium ruthenicum anthocyanin in cosmetics with whitening effects and a cosmetic composition containing the lycium ruthenicum anthocyanin.)

黑果枸杞花色苷在具有美白功效的化妆品中的应用

技术领域

本发明涉及化妆品领域，具体涉及黑果枸杞花色苷在具有美白功效的化妆品中的应用，以及含有黑果枸杞花色苷的化妆品组合物。

背景技术

皮肤生理上的表面状态、血流、水分、色素等各种各样的成分经过错综复杂的结合，决定了人体的肤色。而皮肤的颜色主要取决于黑色素，虽然黑色素起着保护身体不受紫外线损害的作用，可是黑色素过剩和不均匀的聚集是形成皮肤黑变和老年斑的主要原因。黑色素是由表皮基底层的色素细胞内的小器官黑素体生成的，之后移动到表皮细胞，在表皮细胞内分解同时进入角化层，最终与角化细胞的脱落碎片一起从皮肤消失。

在皮肤黑色素生物合成过程中，酪氨酸酶是关键限速酶，它作用于多巴，生成多巴醌，后者自发进行一系列反应最后形成黑色素。由于酪氨酸酶在黑色素合成过程中起关键作用，因此一大类美白剂都是通过抑制酪氨酸酶活性来减少黑色素生成而达到美白皮肤的效果。

近年来皮肤美白类化妆品的开发日趋活跃，美白化妆品中有关皮肤黑色素成因、美白机理、美白效果的评价、美白剂的选择等方面的研究不断深入。强调天然活性美白剂在化妆品中的使用，人们希望出现一系列对人体无害，又具有美容保健作用的天然原料制备的护肤化妆品。

黑果枸杞（Lycium ruthenicum Murr.）是茄科（Solanceae）枸杞属（Lycium L.）多年生灌木，是我国西北地区特有的野生植物品种。据藏医典籍《晶珠本草》和《维吾尔药志》记载，黑果枸杞果实具有强肾、润肝、明目、健胃、补脑、抗衰老及通经作用，用于治疗心热病、心脏病、***、停经等且药效显著。近年来发现黑果枸杞还具有美白功效（1、白波等，专利申请号：201310557610.7；2、曹有龙等，专利申请号：201710351479.7），但是功效物质基础不明，目前尚未有黑果枸杞花色苷单体的美白功效报道。

本发明首次提出黑果枸杞花色苷具有美肤功效，适用于具有美白功效的化妆品中。

目前枸杞大多应用于食品领域。文献中均未涉及黑果枸杞花色苷具有美白的作用，也未提及将其作为功能添加剂加入化妆品中。也就是说，本发明首次提出黑果枸杞花色苷具有美肤作用，可以作为功能添加剂加入化妆品中，用于实现美白功效。

下面结合具体的实施例进一步阐述本发明。但是，应该明白，这些实施例仅用于说明本发明而不构成对本发明范围的限制。

以下实施例1-4 中所述黑果枸杞产自宁夏。

实施例1

将黑果枸杞干果按固液比1:8加入去离子水室温浸提4h，再按固液比1:6加入75%食用乙醇，45^oC提取两次，每次2小时。合并提取液，过滤，减压浓缩，喷雾干燥，得到黑果枸杞提取物。称取黑果枸杞提取物约30g，加1%甲酸-水100ml使之溶解，得到黑果枸杞提取物溶液，用大孔树脂柱分离，以乙醇-水（加1%的甲酸）为洗脱剂，依次用30%乙醇洗脱，以去除杂质，用50%乙醇得到花色苷粗提物，最后用95%乙醇洗柱。得到的花色苷粗提物用 Waters制备液相，C18柱，以20%乙腈（加1%甲酸）为洗脱剂，等度洗脱，得到富含花色苷的组分。最后岛津制备液相，C18柱分离纯化，以20%乙腈（加1%甲酸）为洗脱剂，等度洗脱得到较纯的花色苷组分，继续制备得到更纯的花色苷，再制备得到矮牵牛素-3-O-( 6-O-对香豆酰) 芸香糖苷-5-O-葡萄糖苷，如图1。

附图说明

图1矮牵牛素-3-O-( 6-O-对香豆酰) 芸香糖苷-5-O-葡萄糖苷的结构式。

实施例2 ：体外生化酪氨酸酶活性抑制实验

一、实验原理

在皮肤黑色素生物合成过程中，酪氨酸酶是关键限速酶，它作用于多巴，生成多巴醌，后者自发进行一系列反应最后形成黑色素。由于酪氨酸酶在黑色素合成过程中起关键作用，因此一大类美白剂都是通过抑制酪氨酸酶活性来减少黑色素生成而达到美白皮肤的效果。通过体外生化酪氨酸酶活性抑制实验可以快速筛选出具有抑制酪氨酸酶的活性物。其实验原理是酪氨酸酶在pH6.8 的磷酸缓冲液中，可催化多巴生成多巴醌（呈肾上腺素红色），多巴醌在475nm 处具有吸收峰，通过分光光度计可以间接反映多巴醌的生成量。具有抑制酪氨酸酶活性作用的物质可以减少多巴转化成多巴醌，从而降低吸光值，根据吸光值的变化，评估待测物质对酪氨酸酶的抑制作用。

二、实验方法

在样品管和样品对照管各加入50μL对应浓度的枸杞花色苷样品溶液（PBS配制，pH6.8），阴性对照管和空白对照管则分别加入50μL PBS。在样品管和阴性对照管中各加入50μL（100U/ml）酪氨酸酶溶液，样品对照管与空白对照管以50μL PBS代替。振摇混匀，30℃水槽孵育十分钟。在各管中加入100μL的5×10^-4g/ml的L-酪氨酸或多巴L-DOPA，继续孵育5分钟，即刻测定在475nm处的吸光值（Abs）。

计算对酪氨酸酶活性的抑制率：

抑制率（%）= ) ×100%

式中：T-样品管Abs；T0-样品对照管Abs；C-阴性对照管Abs；C0-空白对照管Abs。

三、实验结果

实验浓度（μg/ml）

6.25

12.5

25

50

100

200

单酚酶抑制率（%）

18.39±4.77

34.03±1.34

45.84±0.25

64.76±3.71

85.89±2.27

97.07±8.07

二酚酶抑制率（%）

-2.28±2.75

3.14±1.10

10.63±1.42

22.67±2.19

39.12±3.42

56.51±3.58

结论：黑果枸杞花色苷矮牵牛素-3-O-( 6-O-对香豆酰) 芸香糖苷-5-O-葡萄糖苷具有抑制酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性的作用，且这种抑制作用呈浓度依赖关系，其半数抑制浓度( IC₅₀ ) 分别为 25.44 μg/ml 和 153.1 μg/ml。矮牵牛素-3-O-( 6-O-对香豆酰) 芸香糖苷-5-O-葡萄糖苷具有一定的美白功效。

实施例3 ：面霜的制备

实施例4：眼霜的制备

以上3-4实施例中所述的黑果枸杞花色苷均经过①皮肤安全性测试，证实对皮肤无刺激，不会引发红斑、脱屑、刺痛及灼热等不良反应，可安心使用；②使用感觉测试，请20 位中国女性志愿者在面部连续使用实施例3所述的面霜8 周，评估结果表明，使用含黑果枸杞花色苷的面霜后，明显发现肌肤变得白皙、通透度提升，感觉肌肤水嫩饱满度提高，显得更为年轻。