一种全液相合成戈那瑞林的方法

文档序号：1793226 发布日期：2021-11-05 浏览：33次 >En<

阅读说明：本技术 一种全液相合成戈那瑞林的方法 (Method for synthesizing gonadorelin in full liquid phase ) 是由孙鹏程唐勇擘余辅松杜一雄王志锋郭林于 2021-08-30 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种全液相合成戈那瑞林的方法,涉及医药技术领域。S1、液相合成化合物1：Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OH；S2、液相合成化合物2：R-(1)-Gly-Leu-OR-(2)；S3、液相合成化合物3：H-Gly-Leu-OR-(2)；S4、液相合成化合物4：Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OR-(2)；S5、液相合成化合物5：H-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OR-(2)；S6、液相合成化合物6：H-His(R-(3))-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OR-(2)；S7、液相合成化合物7：R-(4)-Pyr-His(R-(3))-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OR-(2)；S8、液相合成化合物8：R-(4)-Pyr-His(R-(3))-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OH；S9、液相合成化合物9：H-Arg(pbf)-Pro-Gly-NH-(2)；S10、液相合成化合物10：R-(4)-Pyr-His(R-(3))-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Arg(pbf)-Pro-Gly-NH-(2)；S11、戈那瑞林粗品的制备。本发明提供的全液相法所制备的戈那瑞林纯度在95％以上。(The invention provides a method for synthesizing gonadorelin in a full liquid phase, and relates to the technical field of medicines. S1, liquid-phase synthesis of compound 1: Fmoc-Trp (Boc) -Ser (tBu) -Tyr (tBu) -OH; s2, liquid-phase synthesis of compound 2: r 1 ‑Gly‑Leu‑OR 2 (ii) a S3, liquid phase synthesis of compound 3: H-Gly-Leu-OR 2 (ii) a S4, liquid phase synthesis of compound 4: Fmoc-Trp (Boc) -Ser (tBu) -Tyr (tBu) -Gly-Leu-OR 2 (ii) a S5, liquid phase synthesis of compound 5: H-Trp (Boc) -Ser (tBu) -Tyr (tBu) -Gly-Leu-OR 2 (ii) a S6, liquid phase synthesis of compound 6: H-His (R) 3 )‑Trp(Boc)‑Ser(tBu)‑Tyr(tBu)‑Gly‑Leu‑OR 2 (ii) a S7, liquid phase synthesis of compound 7: r 4 ‑Pyr‑His(R 3 )‑Trp(Boc)‑Ser(tBu)‑Tyr(tBu)‑Gly‑Leu‑OR 2 (ii) a S8, liquid phase synthesis of compound 8: r 4 ‑Pyr‑His(R 3 ) -trp (boc) -ser (tbu) -tyr (tbu) -Gly-Leu-OH; s9, liquid phase synthesis of compound 9: H-Arg (pbf) -Pro-Gly-NH 2 (ii) a S10, liquid phase synthesis of compound 10: r 4 ‑Pyr‑His(R 3 )‑Trp(Boc)‑Ser(tBu)‑Tyr(tBu)‑Gly‑Leu‑Arg(pbf)‑Pro‑Gly‑NH 2 (ii) a S11, and preparing a gonadorelin crude product. The purity of the gonadorelin prepared by the full liquid phase method provided by the invention is more than 95%.)

一种全液相合成戈那瑞林的方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种全液相合成戈那瑞林的方法。

背景技术

戈那瑞林，其化学名称为5’-氧代脯氨酰-L-组氨酰-L-色氨酰-L-丝氨酰-L-酪氨酰-甘氨酰-L-亮氨酰-L-精氨酰-L-脯氨酰-甘氨酰胺，分子式为C₅₅H₇₅N₁₇O₁₃；分子量为1182.33；是人工合成的促性腺激素释放激素(GnRH)的九肽类似物，临床上主要用于鉴别诊断男性或女性由于下丘脑或垂体功能低下所引起的生育障碍，性腺萎缩性的性腺功能不足、乳溢性闭经、原发和继发性闭经、绝经和早熟绝经、垂体肿瘤，垂体的器官损伤和事实上的下丘脑功能障碍等。

现有技术对于戈那瑞林的合成主要是固相法，如中国发明专利申请201710439767.8报道了一种固相合成法合成戈那瑞林的方法，该专利采用RinkAmideAM树脂为固相载体，缩合剂调件为HBTU/HOBt/DIPEA，Fmoc氨基酸为单体，哌啶为脱保护试剂，然后从C端到N端逐一进行偶联，直至合成保护戈那瑞林树脂肽链，最后，裂解得到戈那瑞林。此方法采用了易制毒试剂哌啶，所用的Rink树脂价格较贵，且不能回收再次使用，最后一个氨基酸5-氧脯氨酸不易溶于常用于多肽合成的非质子溶剂。捷克专利CZ2014976A3采用了类似的氨基酸单体和Rink树脂为载体的合成方法。美国专利US4024248提及了戈那瑞林类似物可以采用片段缩合的方法：分片段采用叠氮法进行缩合，缩合片段未经保护，副反应较多，成本较高。中国发明CN202011087410.6一种多肽固液组合合成戈那瑞林的方法，该法在固相法的基础上进行了改进，但还是存在杂质难以纯化的问题。目前还未有关于全液相法合成戈那瑞林的报道。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于克服了目前主流的固相反应成本高，使用溶剂多，使用易制毒试剂、环保压力大，产品粗品纯度低的缺点，从而提供一种全液相合成戈那瑞林的方法。产品粗品纯度可以达到95％以上，十分利于的大规模生产。

本发明提供一种全液相合成戈那瑞林的方法，包括如下步骤：

S1、液相合成化合物1：Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OH；

S2、液相合成化合物2：R₁-Gly-Leu-OR₂；

S3、液相合成化合物3：H-Gly-Leu-OR₂；

S4、液相合成化合物4：Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OR₂；

S5、液相合成化合物5：H-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OR₂；

S6、液相合成化合物6：H-His(R₃)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OR₂；

S7、液相合成化合物7：R₄-Pyr-His(R₃)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OR₂；

S8、液相合成化合物8：R₄-Pyr-His(R₃)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OH；

S9、液相合成化合物9：H-Arg(pbf)-Pro-Gly-NH₂；

S10、液相合成化合物10：

R₄-Pyr-His(R₃)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Arg(pbf)-Pro-Gly-NH₂；

S11、戈那瑞林粗品的制备；

其中，R₁为氨基保护基团，包括Fmoc、Z、Boc中的任意一种；R₂为羧基保护基团，包括甲酯Me，乙酯Et，苄酯Bzl，三苯甲酯Tr中的任意一种；R₃包括Boc或Trt中的任意一种；R₄为氨基保护基团，包括Fmoc、Z、Boc中的任意一种。

优选地，步骤S1具体包括以下步骤：

以Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-OSu和H-Tyr(tBu)-OH为反应单元进行缩合反应，在溶剂中反应得到化合物1；所述Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-OSu和所述H-Tyr(tBu)-OH的摩尔比为1∶1.05-2，所述H-Tyr(tBu)-OH与所述有机碱的摩尔比为1∶1，所述溶剂包括DMF、THF、甲醇、乙醇、NMP中的任意一种。

更为优选地，所述的有机碱为TEA，所述Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-OSu和所述H-Tyr(tBu)-OH的摩尔比为1∶1.1，所述H-Tyr(tBu)-OH与所述有机碱的摩尔比为1∶1，所述溶剂包括DMF、THF、甲醇、乙醇、NMP中的任意一种，优选的，所述溶剂为DMF。

优选地，步骤S2具体包括以下步骤：

以R₁-Gly-OH、H-Leu-OR₂为反应单元进行缩合反应，R₁-Gly-OH与H-Leu-OR₂的摩尔比为1∶1.05-2，加入活化剂、有机碱、缩合剂，H-Leu-OR2与活化剂、缩合剂、有机碱的比为1∶1∶1∶1，反应完全后，过滤、析出、洗涤、干燥，收集固体得化合物2；

所述活化剂为多肽合成常用的活化剂，包括HOSu、HOBt、HOAt、HOOBt中的任意一种，更为优选地，所述活化剂为HOSu；所述缩合剂为多肽合成常用的缩合剂，包括DCC、DIC、EDC、BOP、pyBOP、AOP、TBTU、HBTU、HATU中的任意一种，更为优选地，所述缩合剂为DCC；所述有机碱包括DIEA、TEA、NMM中的任意一种，更为优选地，所述有机碱为TEA；所述溶剂包括THF、DCM、DMF、NMP、二氧六环中的任意一种，更为优选地，所述溶剂为DMF。

优选地，步骤S3具体包括以下步骤：

以步骤S2制得的化合物2为底物，加入脱保护试剂和溶剂，浓缩至少量，析出，过滤，真空干燥得化合物3；

所述脱保护试剂包括三氟乙酸、氯化氢溶液、二乙胺、哌嗪、哌啶中的任意一种；所述溶剂为DMF、甲醇、乙醇、DCM、THF中的任意一种。

进一步地，R₁为氨基保护剂，优选为Fmoc或Boc。

进一步地，R₂为羧基保护剂，优选为Me或Et；更优选为Me。

当R₁为Fmoc时，步骤S3中脱保护试剂优选为二乙胺；当R₁为Boc时，脱保护试剂优选为TFA。

优选地，步骤S4具体包括以下步骤：

以步骤S1合成的化合物1和步骤S3合成的化合物3为反应单元进行缩合反应，其中化合物1和化合物3的摩尔比为1∶1.05-2，加入有机碱、缩合剂，其中化合物3与有机碱、缩合剂的摩尔比为1∶1∶1，在溶剂中反应完全后，浓缩、过滤、洗涤、干燥，得化合物4；

所述缩合剂为多肽合成常用的缩合剂，包括DCC、DIC、EDC、BOP、pyBOP、AOP、TBTU、HBTU、HATU中的任意一种；所述有机碱包括DIEA、TEA、NMM中的任意一种；所述溶剂包括THF、DCM、DMF、NMP、二氧六环中的任意一种。更为优选地，所述溶剂为DMF。

优选地，步骤S5中具体包括以下步骤：

取化合物4，加入脱保护试剂反应脱去Fmoc基团，浓缩至少量，析出固体，过滤，真空干燥得化合物5；所述脱保护试剂包括二乙胺、哌嗪、哌啶溶液的任意一种。

优选地，步骤S6具体包括以下步骤：

以Fmoc-His(R₃)-OH、步骤S5中合成的化合物5为反应单元进行缩合反应，其中化合物5与Fmoc-His(R₃)-OH的摩尔比为1∶1.05-2，加入活化剂、有机碱、缩合剂，其中Fmoc-His(R₃)-OH与活化剂、缩合剂、有机碱的比为1∶1∶1∶1，在溶剂中反应完全，浓缩、过滤、洗涤、干燥，脱保护得化合物6；

所述活化剂为多肽合成常用的活化剂，包括HOSu、HOBt、HOAt、HOOBt中的任意一种；所述缩合剂为多肽合成常用的缩合剂，包括DCC、DIC、EDC、BOP、pyBOP、AOP、TBTU、HBTU、HATU中的任意一种；所述有机碱包括DIEA、TEA、NMM中的任意一种；所述溶剂包括THF、DCM、DMF、NMP、二氧六环中的任意一种。更为优选地，所述溶剂为DMF。

优选地，步骤S7具体包括以下步骤：

以R₄-Pyr-OH和步骤S6合成的化合物6进行缩合反应，其中化合物6与R₄-Pyr-OH的摩尔比为1∶1.05-2；加入有机碱、缩合剂，其中R₄-Pyr-OH与缩合剂、有机碱的摩尔比为1∶1∶1，反应完全后，过滤、洗涤、干燥，得化合物7；

优选地，步骤S8具体包括以下步骤：

取甲醇和化合物7反应，缓慢加入2M NaOH，反应2-4h，过滤、洗涤、干燥得化合物8；

其中，NaOH和化合物7的摩尔比为1.5∶1-20∶1；

步骤S9具体包括以下步骤：

以R₁-Arg(pbf)-OH、H-Pro-Gly-NH₂为反应单元进行缩合反应，其中R₁-Arg(pbf)-OH和H-Pro-Gly-NH₂的摩尔比为1∶1.05-2，加入有机碱、缩合剂，其中R₁-Arg(pbf)-OH与有机碱、缩合剂的摩尔比为1∶1∶1，在溶剂中反应完全后，析出固体，过滤，干燥，脱保护，浓缩，析出固体，过滤，真空干燥得化合物9；

需要说明的是，当R₁-Arg(pbf)-OH中R₁为Boc基团时，所采用的脱保护试剂为50％TFA/DCM，化合物9和化合物10中pbf基团不存在。

优选地，步骤S10具体包括以下步骤：

以化合物8和化合物9为反应单元进行缩合反应，其中化合物8和化合物9的摩尔比为1∶1.05-2，加入缩合剂、有机碱，其中化合物9和缩合剂、有机碱的摩尔比为1∶1∶1，反应完全后，过滤、洗涤、干燥得化合物10；

所述缩合剂为多肽合成常用的缩合剂，包括DCC、DIC、EDC、BOP、pyBOP、AOP、TBTU、HBTU、HATU中的任意一种；所述有机碱包括DIEA、TEA、NMM中的任意一种；所述溶剂包括THF、DCM、DMF、NMP、二氧六环中的任意一种；更为优选地，所述溶剂为DMF。

步骤S11具体包括以下步骤：

取化合物10于反应器中，加入裂解液反应完成后，用冷冻乙醚沉淀，过滤，收集固体，得到戈那瑞林粗品；所述裂解液的组分，按体积比计，包括：TFA∶TIS∶H₂O＝95∶2.5∶2.5。

需要说明的是，上述技术方案中所用试剂均为普通市售药剂；在上述技术方案中，析出或者析出固体操作通常采用醚类试剂，包括石油醚、异丙醚、乙醚中的任意一种或任意组合，优选地，为石油醚。

本发明技术方案，具有如下优点：

本发明通过全液相合成法，创造性地发明绿色、温和的生产工艺，没有使用任何剧毒、易制毒试剂，生产的产品收率在82％以上，戈那瑞林粗品纯度可达95％以上，成本极大降低，非常适合大规模生产。

附图说明

为了更清楚地说明本发明

具体实施方式

或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明实施例1制备的化合物1的HPLC谱图；

图2是本发明实施例1制备的化合物2的HPLC谱图；

图3是本发明实施例1制备的化合物3的HPLC谱图；

图4是本发明实施例1制备的化合物4的HPLC谱图；

图5是本发明实施例1制备的化合物5的HPLC谱图；

图6是本发明实施例1制备的化合物6的HPLC谱图；

图7是本发明实施例1制备的化合物7的HPLC谱图；

图8是本发明实施例1制备的化合物8的HPLC谱图；

图9是本发明实施例1制备的化合物9的HPLC谱图；

图10是本发明实施例1制备的化合物10的HPLC谱图；

图11是本发明实施例1制备的丙氨瑞林粗品的HPLC谱图。

具体实施方式

本发明权利要求书和说明书中出现物质的英文缩写对应的中文名称见表1.

表1

实施例1

1、液相合成化合物1：Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OH

1.1投料：

按照表2的物料用量进行投料。

表2

物料	用量
		Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-OSU	100mmol
H-Tyr(tBu)-OH	110mmol
		TEA	110mmol
DMF	400ml
		0.5M盐酸溶液	1L

1.2操作过程

将合成Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-OSu用DMF完全溶解后，加入H-Tyr(tBu)-OH，再加TEA开始反应，HPLC检测反应完全。

将反应液分两次倒入三角瓶中，再加入0.5M盐酸快速搅拌析出，过滤的固体，然后用纯化水洗至中性，30℃干燥。收集固体装至容器中，称重。化合物1的HPLC检测条件为：

流动相A：0.1％TFA/水，流动相B：0.1％TFA/乙腈；

检测波长：210nm；流速：1ml/min；固定相：C18色谱柱，5μ，

梯度：0-30min，70％B-90％B。

其结果参照图1，收率：95.8％，纯度：87.6％。

2、液相合成化合物2：Fmoc-Gly-Leu-OMe.HCl

2.1投料

按照表3的物料进行投料。

表3

物料	用量
		Fmoc-Gly-OH	150mmol
HOSU	165mmol
		TEA	165mmol
DCC	165mmol
		H-Leu-OMe.HCl	165mmol
DMF	500ml
		0.5M盐酸溶液	1L

2.2操作过程：

准确称取Fmoc-Gly-OH、HOSU于反应瓶中，用DMF完全溶解后，再称取H-Leu-OMe.HCl于三角瓶中，用DMF完全溶解后冷浴10min，加入TEA，快速摇匀，加入上述反应瓶中，继续冷浴5min后加入DCC开始反应，HPLC检测反应完全。待完全反应后过滤反应液，用0.5M盐酸水溶液析出，过滤的固体，然后用纯化水洗至中性，30℃干燥，收集固体装至三角瓶中，称重。

化合物2的HPLC检测条件为：

流动相A：0.1％TFA/水，流动相B：0.1％TFA/乙腈；

检测波长：210nm；流速：1ml/min；固定相：C18色谱柱，5μ，

梯度：0-30min，50％B-90％B。

其结果参照图2，收率：107.2％，纯度：95.7％。

3、液相合成化合物3：H-Gly-Leu-OMe

3.1投料：

按照表4的物料进行投料。

表4

物料	用量
		Fmoc-Gly-Leu-OMe.HCl	150mmol
二乙胺	400ml
		石油醚	1L

3.2操作过程

准确称取Fmoc-Gly-Leu-OMe.HCl于反应瓶中，加入二乙胺反应，HPLC检测反应完全。浓缩至少量，加入石油醚析出固体，过滤，真空干燥。化合物3的HPLC检测条件为：

流动相A：0.1％TFA/水，流动相B：0.1％TFA/乙腈；

检测波长：210nm；流速：1ml/min；固定相：C18色谱柱，5μ，

梯度：0-30min，3％B-90％B。

其结果参照图3，收率：91.8％，纯度：94.6％。

4、液相合成化合物4：Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OMe

4.1投料：

按照表5的物料进行投料。

表5

物料	用量
		Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OH	95.8mmol
BOP	105.4mmol
		TEA	105.4mmol
H-Gly-Leu-OMe	105.4mmol
		DMF	200ml
DCM	200ml
		0.5M盐酸溶液	1L

4.2操作过程

准确称取Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OH、BOP于反应瓶中，用DMF完全溶解后冷浴10min后加入DIEA，再将H-Gly-Leu-OMe用DCM溶解后加入反应中开始反应，HPLC检测反应完全，浓缩，用0.5M盐酸沉淀，过滤收集固体，然后用纯化水洗至中性(pH试纸检测)，称重。化合物4的HPLC检测条件为：

流动相A：0.1％TFA/水，流动相B：0.1％TFA/乙腈；

检测波长：210nm；流速：1ml/min；固定相：C18色谱柱，5μ，

梯度：0-30min，80％B-90％B。

其结果参照图4，收率：92.3％，纯度：90％

5、液相合成化合物5：H-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OMe

5.1投料

按照表6的物料投料。

表6

物料	用量
		Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OMe	88.4mmol
二乙胺	500ml
		石油醚	1L

5.2操作过程

准确称取Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OMe于反应瓶中，加入二乙胺反应，HPLC检测反应完全，浓缩至少量，加入石油醚析出固体，过滤，真空干燥。

化合物5的HPLC检测条件为：

流动相A：0.1％TFA/水，流动相B：0.1％TFA/乙腈；

检测波长：210nm；流速：1ml/min；固定相：C18色谱柱，5μ，

梯度：0-30min，50％B-90％B。

其结果参照图5，收率：96.2％，纯度：88.6％。

6、液相合成化合物6：H-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OMe

6.1投料

按照表7的物料进行投料。

表7

物料	用量
		Fmoc-His(Trt)-OH	93.6mmol
HOBt	93.6mmol
		DCC	93.6mmol
H-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OMe	85.1mmol
		二乙胺	500ml
DMF	400ml
		0.5M盐酸溶液	1L

6.2操作过程

准确称取Fmoc-His(Trt)-OH、HOBt、H-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OMe于反应瓶中，用DMF完全溶解后冷浴10min后加入DCC开始反应，过滤反应液，倒入反应瓶中，再加入二乙胺反应20min，浓缩至少量，加入0.5M盐酸溶液析出固体，过滤，烘干。取Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)--Leu-OMe于反应瓶中，加入二乙胺反应20min，HPLC检测反应完全，浓缩至少量，加入石油醚析出固体，过滤，烘干。

化合物6的HPLC检测条件为：

流动相A：0.1％TFA/水，流动相B：0.1％TFA/乙腈；

检测波长：210nm；流速：1ml/min；固定相：C18色谱柱，5μ，

梯度：0-30min，70％B-90％B。

其结果参照图6，收率：82.1％，纯度：92.8％。

7、液相合成化合物7：Boc-Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OMe

7.1投料

按照表8的物料进行投料。

表8

物料	用量
		Boc-Pyr-OH	76.9mmol
BOP	76.9mmol
		TEA	76.9mmol
H-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OMe	69.9mmol
		DMF	350ml
0.5M盐酸溶液	1L

7.2操作过程

准确称取Boc-Pyr-OH、BOP于反应瓶中，用DMF完全溶解后冷浴10min后加入DIEA，再将H-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OMe用DMF溶解后加入反应中开始反应，HPLC检测反应完全；过滤反应液，滤渣用DMF洗涤两次，用0.5M盐酸沉淀，过滤后收集固体，然后用纯化水洗至中性(pH试纸检测)，干燥，称重。

化合物7的HPLC检测条件为：

流动相A：0.1％TFA/水，流动相B：0.1％TFA/乙腈；

检测波长：210nm；流速：1ml/min；固定相：C18色谱柱，5μ，

梯度：0-30min，70％B-90％B。

其结果参照图7，收率：85％，纯度：80.1％。

8、液相合成化合物8：Boc-Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OH

8.1投料

Boc-Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OMe：59.4mmol

甲醇：1110ml

2M NaOH：110ml

0.1M盐酸溶液：2L

8.2操作过程

称取Boc-Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OMe，置于甲醇中搅拌5min完全溶解后，缓慢加入2M NaOH反应，开始反应，HPLC检测反应完全，加入盐酸溶液，沉淀，过滤后收集固体，然后用纯化水洗至中性(pH试纸检测)，干燥，称重。化合物8的HPLC检测条件为：

流动相A：0.1％TFA/水，流动相B：0.1％TFA/乙腈；

检测波长：210nm；流速：1ml/min；固定相：C18色谱柱，5μ，

梯度：0-30min，70％B-90％B。

其结果参照图8，收率：83.9％，纯度：94.07％。

9、液相合成化合物9：H-Arg(pbf)-Pro-Gly-NH₂

9.1投料

按照表9的物料进行投料。

表9

物料	用量
		H-Pro-Gly-NH2	150mmol
BOP	157.5mmol
		DIEA	157.5mmol
Fmoc-Arg(pbf)-OH	157.5mmol
		TEA	157.5mmol
DMF	400ml
		0.5M盐酸溶液	1L
二乙胺	500ml

9.2操作过程

准确称取Fmoc-Arg(pbf)-OH、BOP于反应瓶中，用DMF完全溶解后冷浴10min，加入DIEA，撤掉冷浴，反应20min。

称取H-Pro-Gly-NH₂于三角瓶中，用DMF完全溶解后加入TEA，快速混匀后加入上反应中开始反应。HPLC检测反应完全，用0.5M盐酸沉淀，过滤后收集固体，然后用纯化水洗至中性(pH试纸检测)，干燥，加入二乙胺反应，HPLC检测反应完全，浓缩至少量，加入石油醚析出固体，过滤，真空干燥。HPLC检测条件为：

流动相A：0.1％TFA/水，流动相B：0.1％TFA/乙腈；

检测波长：210nm；流速：1ml/min；固定相：C18色谱柱，5μ，

梯度：0-30min，5％B-30％B。

其结果参照图9，收率93％，纯度：95.5％。

10、液相合成化合物10：

Boc-Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Arg(pbf)-Pro-Gly-NH₂

10.1投料

按照表10的物料进行投料。

表10

物料	用量
		Boc-Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OH	49.8mmol
BOP	54.8mmol
		TEA	54.8mmol
H-Arg(pbf)-Pro-Gly-NH<sub>2</sub>	54.8mmol
		DMF	200ml
0.5M盐酸溶液	500ml

10.2操作过程

准确称取Boc-Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OH、BOP于反应瓶中，用DMF完全溶解后冷浴10min后加入DIEA，再将H-Arg(pbf)-Pro-Gly-NH₂用DMF溶解后加入反应中开始反应。HPLC检测反应完全，加入0.5M盐酸析出固体，过滤收集固体，然后用纯化水洗至中性(pH试纸检测)，干燥，称重。HPLC检测条件为：

流动相A：0.1％TFA/水，流动相B：0.1％TFA/乙腈；

检测波长：210nm；流速：1ml/min；固定相：C18色谱柱，5μ，

梯度：0-30min，70％B-90％B。

其结果参照图10，收率98.1％，纯度：94.8％

11、合成戈那瑞林粗品

11.1投料

化合物10：48.6mmol

裂解液(TFA∶TIS∶H₂O＝95∶2.5∶2.5)：300ml

11.2操作过程

将化合物10加入反应瓶中，加入裂解液反应30min后用冷冻乙醚沉淀，过滤，收集固体，得到产物粗品，产物用水溶解后HPLC检测分析。HPLC检测条件为：

流动相A：0.1％TFA/水，流动相B：0.1％TFA/乙腈；

检测波长：210nm；流速：1ml/min；固定相：C18色谱柱，5μ，

梯度：0-30min，25％B-25％B。

其结果参照图11，收率：82.4％，纯度95.2％。

实施例2

1、液相合成化合物1：Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OH

其过程同实施例1。

2、液相合成化合物2：Boc-Gly-Leu-OEt·HCl

2.1投料

按照表11的物料进行投料。

表11

物料	用量
		Boc-Gly-OH	150mmol
HOSU	300mmol
		TEA	300mmol
DCC	300mmol
		H-Leu-OEt·HCl	300mmol
DMF	500ml
		0.5M盐酸溶液	1L

操作过程同实施例1。收率：106.2％，纯度：95.2％。

3、液相合成化合物3：H-Gly-Leu-OEt

3.1投料：

按照表12的物料进行投料。

表12

物料	用量
		Boc-Gly-Leu-OEt.HCl	150mmol
50％TFA/DCM	400ml
		石油醚	1L

操作过程同实施例1。收率：91.2％，纯度：90.5％。

4、液相合成化合物4：Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OEt

4.1投料：

按照表13的物料进行投料。

表13

物料	用量
		Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OH	95.8mmol
BOP	191.6mmol
		TEA	191.6mmol
H-Gly-Leu-OEt	191.6mmol
		DMF	200ml
DCM	200ml
		0.5M盐酸溶液	1L

操作过程同实施例1。收率：91.8％，纯度：80％

5、液相合成化合物5：H-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OEt

5.1投料

按照表14的物料投料。

表14

物料	用量
		Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OEt	88.4mmol
二乙胺	500ml
		石油醚	1L

操作过程同实施例1。收率：95.8％，纯度：84.8％。

6、液相合成化合物6：H-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OEt6.1投料

按照表15的物料进行投料。

表15

物料	用量
		Fmoc-His(Boc)-OH	170.2mmol
HOBt	170.2mmol
		DCC	170.2mmol
H-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OEt	170.2mmol
		二乙胺	500ml
DMF	400ml
		0.5M盐酸溶液	1L

操作过程同实施例1。收率：82.0％，纯度：81.5％。

7、液相合成化合物7：Fmoc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OEt

7.1投料

按照表16的物料进行投料。

表16

物料	用量
		Fmoc-Pyr-OH	139.8mmol
BOP	139.8mmol
		二乙胺	139.8mmol
H-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OEt	69.9mmol
		DMF	350ml
0.5M盐酸溶液	1L

操作过程同实施例1。收率：85％，纯度：85.3％。

8、液相合成化合物8：Fmoc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OH

8.1投料

Fmoc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OEt：59.4mmol

甲醇：1110ml

2M NaOH：1110ml

0.1M盐酸溶液：2L

操作过程同实施例1。收率：83.5％，纯度：88.6％。

9、液相合成化合物9：H-Arg-Pro-Gly-NH₂

9.1投料

按照表17的物料进行投料。

表17

物料	用量
		H-Pro-Gly-NH<sub>2</sub>	150mmol
BOP	300mmol
		DIEA	300mmol
Fmoc-Arg(pbf)-OH	300mmol
		TEA	300mmol
DMF	400ml
		0.5M盐酸溶液	1L
50％TFA/DCM	500ml

操作过程同实施例1。收率93％，纯度：82％。

10、液相合成化合物10：

Fmoc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂

10.1投料

按照表18的物料进行投料。

表18

物料	用量
		Fmoc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-OH	49.8mmol
BOP	99.6mmol
		TEA	99.6mmol
H-Arg-Pro-Gly-NH<sub>2</sub>	99.6mmol
		DMF	200ml
0.5M盐酸溶液	500ml

操作过程同实施例1。收率97.8％，纯度：81.1％

11、合成戈那瑞林粗品

11.1投料

化合物10：48.7mmol

裂解液(TFA∶TIS∶H₂O＝95∶2.5∶2.5)：300ml

其操作过程同实施例1。收率：82.1％，纯度95.1％。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

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