具有减肥作用的益生菌组合物及其制备方法
阅读说明：本技术 具有减肥作用的益生菌组合物及其制备方法 (Probiotic composition with weight-losing effect and preparation method thereof ) 是由 王冠 于 2021-08-25 设计创作，主要内容包括：本发明提供了具有减肥作用的益生菌组合物,由以下重量份的原料制成：嗜酸乳杆菌6-7份,干酪乳杆菌4-5份,植物乳杆菌3-4份,乳双歧杆菌1-2份,鼠李糖乳杆菌5-6份,凝结芽孢杆菌2-3份,水苏糖10-15份,甘露糖醇20-25份,低聚异麦芽糖15-20份,抗坏血酸5-8份,抗性糊精40-50份,诺丽果提取物4-6份,水50-60份。本发明还提供了所述具有减肥作用的益生菌组合物的制备方法。本发明提供的益生菌组合物具有较好的耐酸耐胆盐能力和减肥功效。(The invention provides a probiotic composition with a weight-losing effect, which is prepared from the following raw materials in parts by weight: 6-7 parts of lactobacillus acidophilus, 4-5 parts of lactobacillus casei, 3-4 parts of lactobacillus plantarum, 1-2 parts of bifidobacterium lactis, 5-6 parts of lactobacillus rhamnosus, 2-3 parts of bacillus coagulans, 10-15 parts of stachyose, 20-25 parts of mannitol, 15-20 parts of isomaltose hypgather, 5-8 parts of ascorbic acid, 40-50 parts of resistant dextrin, 4-6 parts of noni fruit extract and 50-60 parts of water. The invention also provides a preparation method of the probiotic composition with the weight-losing effect. The probiotic composition provided by the invention has better acid resistance and cholate resistance and weight-losing efficacy.)
技术领域
本发明涉及益生菌组合物，特别是涉及具有减肥作用的益生菌组合物及其制备方法。
背景技术
益生菌是通过定殖在人体内，改变宿主某一部位菌群组成的一类对宿主有益的活性微生物。益生菌通过调节宿主黏膜与系统免疫功能或通过调节肠道内菌群平衡，促进营养吸收保持肠道健康的作用，从而产生有利于健康作用的单微生物或组成明确的混合微生物。益生菌主要有酵母菌、益生芽孢菌、丁酸梭菌、乳杆菌、双歧杆菌、放线菌等几种。益生菌可以通过影响人们的食欲以及新陈代谢从而控制体重达到减肥的目的，对身体的负担较小，不过益生菌的耐酸耐胆盐能力较弱，影响了实际吸收和减肥效果。
中国专利申请CN201811018245.1公开了“一种用于减肥的复合益生菌制剂及其应用方法”，所述复合益生菌制剂按重量比为30-50份复合益生菌，5-15份膳食纤维，1-3份蛋白质粉，5-10份植物提取物；其中复合益生菌由鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌组成，植物提取物由冬瓜皮(30-35份)、葛根(9-12份)、茯苓(30-35份)、黄芪(25-30份)组成。该专利存在的问题是其耐酸耐胆盐能力一般，实际减肥效果不佳。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供具有减肥作用的益生菌组合物，其具有较好的耐酸耐胆盐能力和减肥功效。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
具有减肥作用的益生菌组合物，由以下重量份的原料制成：嗜酸乳杆菌6-7份，干酪乳杆菌4-5份，植物乳杆菌3-4份，乳双歧杆菌1-2份，鼠李糖乳杆菌5-6份，凝结芽孢杆菌2-3份，水苏糖10-15份，甘露糖醇20-25份，低聚异麦芽糖15-20份，抗坏血酸5-8份，抗性糊精40-50份，诺丽果提取物4-6份，水50-60份。
进一步地，本发明所述水为蒸馏水。
进一步地，本发明所述诺丽果提取物由以下步骤制成：
将诺丽果果实洗净后烘干，粉碎、研磨后过80目筛得到诺丽果粉，将诺丽果粉加入提取溶剂中，加热至45℃后超声提取45-60分钟得到提取液，将提取液离心分离5-15分钟后得到上清液，将上清液旋转蒸干后加入甲醇，搅拌10-20分钟后得到混合液，将混合液过滤后得到滤液，将滤液真空烘干得到诺丽果提取物。
进一步地，本发明所述诺丽果提取物的制备步骤中，提取溶剂由(50-60)mL:50mL:3g的蒸馏水、乙醇、β-环糊精组成，诺丽果粉、提取溶剂、甲醇的比例为1:(8-12)g/mL:10mL，离心分离的速度为5000转/分。
本发明要解决的另一技术问题是提供上述具有减肥作用的益生菌组合物的制备方法。
为解决上述技术问题，技术方案是：
具有减肥作用的益生菌组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、凝结芽孢杆菌分别30-37℃下活化培养36-48小时，然后32-38℃下扩大培养60-72小时得到各菌种的发酵液；
(2)将步骤(1)所得各菌种的发酵液、水苏糖、甘露糖醇、低聚异麦芽糖、抗坏血酸、抗性糊精、诺丽果提取物、水混合均匀得到混合液，将混合液加入微射流设备处理2次，然后冷冻干燥得到具有减肥作用的益生菌组合物。
进一步地，本发明所述步骤(1)中，活化培养时使用的活化培养基为：蛋白胨1-1.5％，酵母膏0.3-0.5％，牛肉膏0.4-0.6％，氯化钠0.4-0.8％，葡萄糖0.5-1％，磷酸氢二钾0.15-0.2％，硫酸镁0.02-0.04％，pH值为7.3-7.5。
进一步地，本发明所述步骤(1)中，扩大培养时使用的扩大培养基的接种量为4-6％，扩大培养基为：蛋白胨1-1.5％，酵母膏0.3-0.6％，牛肉膏0.4-0.7％，氯化钠0.4-0.8％，葡萄糖1-2％，磷酸氢二钾0.15-0.2％，硫酸镁0.02-0.04％，柠檬酸铵0.1-0.3％。
进一步地，本发明所述步骤(2)中，微射流设备的处理压力为100～200MPa。
进一步地，本发明所述步骤(2)中，冷冻干燥时的温度为-40℃至-35℃，时间为1-2小时。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1)虽然有些益生菌在单独使用时有一定的减肥效果，但是在组合使用时会相互影响生长代谢，导致减肥效果欠佳，发明人经过详细研究发现嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、凝结芽孢杆菌这几种益生菌能相互促进生长代谢，进而产生较好的减肥功效。
2)诺丽果(Morinda citrifolia Linn)是巴戟天属植物，本发明将诺丽果的果实以蒸馏水、乙醇、β-环糊精为提取溶剂通过提取得到诺丽果提取物，其含有黄酮、多酚等活性成分，对益生菌能起到很好的保护作用，能有效提高益生菌组合物的耐酸耐胆碱能力以及减肥功效。
3)本发明在制备方法的步骤(2)中对混合液通过微射流设备进行处理，能改善益生菌组合物中各组分的分散性和结合性，从而进一步提高益生菌组合物的减肥功效。
具体实施方式
下面将结合具体实施例来详细说明本发明，在此本发明的示意性实施例及其说明用来解释本发明，但并不作为对本发明的限定。
实施例1
具有减肥作用的益生菌组合物，由以下重量份的原料制成：嗜酸乳杆菌6-7份，干酪乳杆菌4.5份，植物乳杆菌3.5份，乳双歧杆菌1.5份，鼠李糖乳杆菌5.5份，凝结芽孢杆菌2.5份，水苏糖12份，甘露糖醇24份，低聚异麦芽糖18份，抗坏血酸7份，抗性糊精46份，诺丽果提取物5份，蒸馏水56份。
诺丽果提取物由以下步骤制成：
将诺丽果果实洗净后烘干，粉碎、研磨后过80目筛得到诺丽果粉，将诺丽果粉加入由55mL:50mL:3g的蒸馏水、乙醇、β-环糊精组成的提取溶剂中，加热至45℃后超声提取50分钟得到提取液，将提取液5000转/分速度下离心分离10分钟后得到上清液，将上清液旋转蒸干后加入甲醇，搅拌15分钟后得到混合液，将混合液过滤后得到滤液，将滤液真空烘干得到诺丽果提取物，诺丽果粉、提取溶剂、甲醇的比例为1:10g/mL:10mL。
本实施例的制备方法包括以下步骤：
(1)将嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、凝结芽孢杆菌分别34℃下活化培养42小时，然后36℃下扩大培养66小时得到各菌种的发酵液，活化培养时使用的活化培养基为：蛋白胨1.2％，酵母膏0.4％，牛肉膏0.5％，氯化钠0.7％，葡萄糖0.8％，磷酸氢二钾0.16％，硫酸镁0.03％，pH值为7.4，扩大培养时使用的扩大培养基的接种量为5％，扩大培养基为：蛋白胨1.3％，酵母膏0.4％，牛肉膏0.6％，氯化钠0.6％，葡萄糖1.6％，磷酸氢二钾0.17％，硫酸镁0.03％，柠檬酸铵0.2％；
(2)将步骤(1)所得各菌种的发酵液、水苏糖、甘露糖醇、低聚异麦芽糖、抗坏血酸、抗性糊精、诺丽果提取物、蒸馏水混合均匀得到混合液，将混合液加入微射流设备150Mpa压力下处理2次，然后冷冻干燥得到具有减肥作用的益生菌组合物，冷冻干燥时的温度为-37℃，时间为1.5小时。
实施例2
具有减肥作用的益生菌组合物，由以下重量份的原料制成：嗜酸乳杆菌6份，干酪乳杆菌5份，植物乳杆菌3.2份，乳双歧杆菌1.8份，鼠李糖乳杆菌5份，凝结芽孢杆菌3份，水苏糖15份，甘露糖醇20份，低聚异麦芽糖16份，抗坏血酸5份，抗性糊精42份，诺丽果提取物4.5份，蒸馏水54份。
诺丽果提取物由以下步骤制成：
将诺丽果果实洗净后烘干，粉碎、研磨后过80目筛得到诺丽果粉，将诺丽果粉加入由50mL:50mL:3g的蒸馏水、乙醇、β-环糊精组成的提取溶剂中，加热至45℃后超声提取45分钟得到提取液，将提取液5000转/分速度下离心分离5分钟后得到上清液，将上清液旋转蒸干后加入甲醇，搅拌10分钟后得到混合液，将混合液过滤后得到滤液，将滤液真空烘干得到诺丽果提取物，诺丽果粉、提取溶剂、甲醇的比例为1:12g/mL:10mL。
本实施例的制备方法包括以下步骤：
(1)将嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、凝结芽孢杆菌分别30℃下活化培养48小时，然后32℃下扩大培养72小时得到各菌种的发酵液，活化培养时使用的活化培养基为：蛋白胨1％，酵母膏0.5％，牛肉膏0.5％，氯化钠0.5％，葡萄糖1％，磷酸氢二钾0.15％，硫酸镁0.04％，pH值为7.5，扩大培养时使用的扩大培养基的接种量为4.5％，扩大培养基为：蛋白胨1.2％，酵母膏0.6％，牛肉膏0.4％，氯化钠0.5％，葡萄糖1.5％，磷酸氢二钾0.2％，硫酸镁0.04％，柠檬酸铵0.1％；
(2)将步骤(1)所得各菌种的发酵液、水苏糖、甘露糖醇、低聚异麦芽糖、抗坏血酸、抗性糊精、诺丽果提取物、蒸馏水混合均匀得到混合液，将混合液加入微射流设备100Mpa压力下处理2次，然后冷冻干燥得到具有减肥作用的益生菌组合物，冷冻干燥时的温度为-40℃，时间为1小时。
实施例3
具有减肥作用的益生菌组合物，由以下重量份的原料制成：嗜酸乳杆菌7份，干酪乳杆菌4份，植物乳杆菌3份，乳双歧杆菌2份，鼠李糖乳杆菌5.1份，凝结芽孢杆菌2份，水苏糖10份，甘露糖醇25份，低聚异麦芽糖20份，抗坏血酸6份，抗性糊精50份，诺丽果提取物4份，蒸馏水50份。
诺丽果提取物由以下步骤制成：
将诺丽果果实洗净后烘干，粉碎、研磨后过80目筛得到诺丽果粉，将诺丽果粉加入由60mL:50mL:3g的蒸馏水、乙醇、β-环糊精组成的提取溶剂中，加热至45℃后超声提取60分钟得到提取液，将提取液5000转/分速度下离心分离15分钟后得到上清液，将上清液旋转蒸干后加入甲醇，搅拌20分钟后得到混合液，将混合液过滤后得到滤液，将滤液真空烘干得到诺丽果提取物，诺丽果粉、提取溶剂、甲醇的比例为1:8g/mL:10mL。
本实施例的制备方法包括以下步骤：
(1)将嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、凝结芽孢杆菌分别33℃下活化培养45小时，然后35℃下扩大培养69小时得到各菌种的发酵液，活化培养时使用的活化培养基为：蛋白胨1.1％，酵母膏0.4％，牛肉膏0.6％，氯化钠0.4％，葡萄糖0.6％，磷酸氢二钾0.17％，硫酸镁0.02％，pH值为7.3，扩大培养时使用的扩大培养基的接种量为4％，扩大培养基为：蛋白胨1.5％，酵母膏0.3％，牛肉膏0.7％，氯化钠0.8％，葡萄糖1％，磷酸氢二钾0.15％，硫酸镁0.02％，柠檬酸铵0.3％；
(2)将步骤(1)所得各菌种的发酵液、水苏糖、甘露糖醇、低聚异麦芽糖、抗坏血酸、抗性糊精、诺丽果提取物、蒸馏水混合均匀得到混合液，将混合液加入微射流设备200Mpa压力下处理2次，然后冷冻干燥得到具有减肥作用的益生菌组合物，冷冻干燥时的温度为-36℃，时间为1.8小时。
实施例4
具有减肥作用的益生菌组合物，由以下重量份的原料制成：嗜酸乳杆菌6.6份，干酪乳杆菌4.8份，植物乳杆菌4份，乳双歧杆菌1份，鼠李糖乳杆菌6份，凝结芽孢杆菌2.1份，水苏糖14份，甘露糖醇21份，低聚异麦芽糖15份，抗坏血酸8份，抗性糊精40份，诺丽果提取物6份，蒸馏水60份。
诺丽果提取物由以下步骤制成：
将诺丽果果实洗净后烘干，粉碎、研磨后过80目筛得到诺丽果粉，将诺丽果粉加入由57mL:50mL:3g的蒸馏水、乙醇、β-环糊精组成的提取溶剂中，加热至45℃后超声提取55分钟得到提取液，将提取液5000转/分速度下离心分离12分钟后得到上清液，将上清液旋转蒸干后加入甲醇，搅拌16分钟后得到混合液，将混合液过滤后得到滤液，将滤液真空烘干得到诺丽果提取物，诺丽果粉、提取溶剂、甲醇的比例为1:9g/mL:10mL。
本实施例的制备方法包括以下步骤：
(1)将嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、乳双歧杆菌、鼠李糖乳杆菌、凝结芽孢杆菌分别37℃下活化培养36小时，然后38℃下扩大培养60小时得到各菌种的发酵液，活化培养时使用的活化培养基为：蛋白胨1.5％，酵母膏0.3％，牛肉膏0.4％，氯化钠0.8％，葡萄糖0.5％，磷酸氢二钾0.2％，硫酸镁0.03％，pH值为7.4，扩大培养时使用的扩大培养基的接种量为6％，扩大培养基为：蛋白胨1％，酵母膏0.5％，牛肉膏0.5％，氯化钠0.4％，葡萄糖2％，磷酸氢二钾0.16％，硫酸镁0.03％，柠檬酸铵0.2％；
(2)将步骤(1)所得各菌种的发酵液、水苏糖、甘露糖醇、低聚异麦芽糖、抗坏血酸、抗性糊精、诺丽果提取物、蒸馏水混合均匀得到混合液，将混合液加入微射流设备180Mpa压力下处理2次，然后冷冻干燥得到具有减肥作用的益生菌组合物，冷冻干燥时的温度为-35℃，时间为2小时。
参比实施例1
与实施例1不同的地方在于：原料中不包括诺丽果提取物，省去其制备步骤。
参比实施例2
与实施例1不同的地方在于：组合物的制备步骤(2)改为：将步骤(1)所得各菌种的发酵液、水苏糖、甘露糖醇、低聚异麦芽糖、抗坏血酸、抗性糊精、诺丽果提取物、水混合均匀得到混合液，将混合液冷冻干燥得到具有减肥作用的益生菌组合物，冷冻干燥时的温度为-37℃，时间为1.5小时。即步骤(2)未对混合液通过微射流设备处理而直接将混合液冷冻干燥。
对比例：申请号为CN201811018245.1的中国专利的实施例1。
实验例一：减肥功效测试
选取280名年龄为24-52岁、BMI为24-30、体脂率(男性23-30％，女性29-35％)的志愿者作为测试对象，测试对象排除妊娠期女性，有严重的心肝肾并发症或严重胃肠道疾病者，近三个月有糖尿病酮症者。将测试对象随机平均分为7组，每组40名，测试期间测试对象保持生活饮食习惯，不服用降糖、降脂药物。
分别给7组测试对象服用本发明实施例1-4、参比实施例1-2以及对比例，服用方法：2g/次，每天1次，用热水冲服，连续服用1个月后评价疗效。疗效评价指标：记录测试前后测试对象的体脂率变化，计算出体脂变化率，体脂变化率＝(测试前体脂率-测试后体脂率)/测试前体脂率×100％。疗效评价标准：显效，体脂变化率≥5％；有效，1％≤体脂变化率＜5％；无效，体脂变化率＜1％；以显效+有效统计总有效率。
测试结果如表1所示：
表1
由表1可看出，本发明实施例1-4的总有效率均明显高于对比例，表明本发明制得的益生菌组合物具有较好的减肥功效。参比实施例1、2的部分原料或制备步骤与实施例1不同，与实施例1相比，参比实施例1、2的总有效率均有所降低，说明本发明使用的诺丽果提取物以及在制备步骤(2)中对混合液通过微射流设备处理的操作均能有效提高益生菌组合物的减肥功效。
实验例二：耐酸耐胆碱能力测试
分别称取20g实施例1-4、参比实施例1、对比例，分别加入180mL质量浓度为0.1％的蛋白胨水溶液中，40℃下混合20分钟后振荡均匀，取1mL溶液通过平板计数法测定活菌数记为A1。以3g/L的比例将胃蛋白酶加入无菌生理盐水中，调节pH值至3.0后混合均匀得到模拟胃液，然后分别称取4g实施例1-4、参比实施例1、对比例分别加入300mL模拟胃液中，37℃下培养8小时后取1mL溶液按照前述方法测定活菌数记为A2，然后计算出活菌存活率：
活菌存活率＝A2/A1×100％
活菌存活率越高表明益生菌组合物的耐酸耐胆碱能力越好，测试结果如表2所示：
表2
活菌存活率(％)
实施例1
83.27
实施例2
82.48
实施例3
82.76
实施例4
83.05
参比实施例1
75.84
对比例
74.59
由表2可看出，本发明实施例1-4的活菌存活率均明显高于对比例，表明本发明制得的益生菌组合物具有较好的耐酸耐胆碱能力。参比实施例1的部分原料与实施例1不同，与实施例1相比，参比实施例1的活菌存活率降低不少，说明本发明使用的诺丽果提取物能有效提高益生菌组合物的耐酸耐胆碱能力。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。