阅读说明：本技术 一种麻竹的组织培养方法 (Tissue culture method of dendrocalamus latiflorus ) 是由 姚强 于 2021-03-11 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种麻竹的组织培养方法,属于牡竹属麻竹组组培快繁技术领域。本发明提供的繁殖方法,包含以下步骤：1)形成愈伤组织；2)愈伤组织分化不定芽；3)不定芽生根培养；4)麻竹组培苗生根培养。本发明提供的繁殖方法选取麻竹幼枝作为外植体可在30d即可获得大量优质的麻竹组培苗,可快速、便捷、大量的为麻竹的研究及应用提供优良原材料。在保护麻竹自然资源、栽培对种苗的需求、以及基因库的建立等方面具有重要意义。(The invention relates to a tissue culture method of dendrocalamus latiflorus, belonging to the technical field of tissue culture and rapid propagation of dendrocalamus latiflorus groups. The propagation method provided by the invention comprises the following steps: 1) forming callus; 2) differentiating adventitious buds from the callus; 3) culturing adventitious buds for rooting; 4) and (5) rooting culture of the dendrocalamus latiflorus tissue culture seedling. According to the propagation method provided by the invention, the young dendrocalamus latiflorus branches are selected as explants, a large number of high-quality dendrocalamus latiflorus tissue culture seedlings can be obtained within 30 days, and good raw materials can be rapidly, conveniently and massively provided for research and application of dendrocalamus latiflorus. Has important significance in protecting natural resource of the dendrocalamus latiflorus, meeting the requirements of seedling cultivation, establishing a gene bank and the like.)

一种麻竹的组织培养方法

技术领域

本发明涉及植物组织培养领域，具体地说，涉及一种麻竹的组织培养方法。

背景技术

麻竹是禾本科的牡竹属植物，本种是我国南方栽培最广的竹种，高20～30m，直径15～30cm，节间长45～60cm，竿分枝习性高，每节分多枝。麻竹是极佳的笋、材两用竹，笋味甜美，营养价值高，每年均有大量笋干和罐头上市且远销海外；其竿粗壮高大可作为建筑材料、造纸材料、同时也可庭园栽植，具有较高观赏价值。

麻竹虽为一种优质的植物原材料，但其自然繁衍难以满足现今产业需求。麻竹在育种方面，竹类无规律开花及开花后迅速死亡的生物学特性，限制其研究与发展。目前大多的文献报道都集中在麻竹的扦插繁殖与应用价值分析上，有关麻竹组织培养的文献报道非常少，国内有覃和业等对麻竹的组织培养(覃和业，2014)、李海营对麻竹花药的组织培养研究(李海营，2011)等关于麻竹组织培养的报道。麻竹的组织培养方法，可以进行大量快速繁殖，并保持母本的优良品质，为麻竹的应用提供大量优良的原材料，为实现对麻竹的栽培、对麻竹种苗的需求，以及基因库的建立奠定了技术基础。

发明内容

为解决麻竹日益增长的商业需求，保护麻竹资源、满足科研需要，选择优良的麻竹品种，应用组织培养技术进行快速大量繁殖，并保持母本的优良品质，为麻竹的应用提供大量优良的原材料，为实现对麻竹野生资源的保护、栽培对种苗的需求，以及基因库的建立奠定技术基础。

本发明提供的一种麻竹的组织培养方法，包括如下步骤：

1)麻竹幼枝形成愈伤组织：截取2～4年生麻竹幼枝经消毒处理后，切成4mm×4mm的小块，接种至愈伤诱导培养基上，得到麻竹愈伤组织。

2)愈伤组织分化不定芽：将步骤1)得到的愈伤组织切成4mm×4mm的小块，移至分化不定芽的诱导培养基上，得到生成不定芽的愈伤组织。

3)不定芽生根培养：将步骤2)得到长至2～4cm不定芽愈伤组织移至生根诱导培养基，得到生根麻竹幼苗。

4)生根培养：将步骤3)得到根须1～3cm生根麻竹幼苗移至生根培养基，得到麻竹组培苗。

其中所述愈伤组织的诱导培养基以MS固体培养基为基准，包含质量浓度为0.48～0.52mg/L吲哚丁酸和8mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸。

其中所述愈伤组织的增殖培养基以3/4MS固体培养基为基准，包含质量浓度为2.8～3.1g/L山梨糖醇、250mg/聚乙烯吡咯烷酮和2mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸。

其中所述生根诱导的培养基以1/2MS固体培养基为基准，包含质量浓度为1mg/L吲哚-3-乙酸。

所述生根培养基以MS固体培养基为基准，包含0.1mg/L TDZ，或以MS固体培养基为基准，包含0.1mg/L TDZ+0.48～0.51mg/L萘乙酸。

其中所述MS培养基中蔗糖浓度为31g/L，植物凝胶浓度为4.1g/L。

所述培养环境均为独立无菌环境，pH值为6.1，培养温度为23±2℃，光照强度为1800～2100Lx，每日光照16h/d。

其中所述幼枝形成愈伤的时间是10d。

其中所述愈伤组织分化出不定芽是14d。

其中所述不定芽生根是6d。.

本发明的方法有益效果在于：

1)本发明的方法在30d内可获得大量优质的麻竹组培苗，可快速、便捷、大量的为麻竹的应用及研究提供优良原材料。

2)本发明的方法在保护麻竹自然资源、栽培对种苗的需求、以及基因库的建立等方面具有重要意义。

附图说明

图1：是本发明实施例中，培育10d后麻竹幼枝形成愈伤组织的情况(麻竹来源自野外采摘，下同)。

图2：是本发明实施例中，麻竹幼枝形成愈伤组织14d后麻竹愈伤组织分化出不定芽的情况。

图3：是本发明实施例中，麻竹愈伤组织分化出不定芽6d后麻竹不定芽培养生根的情况。

图4：是本发明实施例中，麻竹不定芽培养生根7d后麻竹幼苗情况。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中所使用的植物生长调节剂吲哚丁酸、2，4-二氯苯氧乙酸、山梨糖醇、聚乙烯吡咯烷酮、吲哚-3-乙酸、萘乙酸与已报道的关于麻竹组织培养所使用的不同。

实施例1

一种麻竹的组织培养方法，包括如下步骤：

1)幼枝形成的愈伤组织：将野外采摘的麻竹叶片经过消毒处理后，切成约4mm×4mm的小块，接种至愈伤组织诱导培养基上，常规培养至形成愈伤组织；所述幼枝形成愈伤的时间是10d；所述的麻竹愈伤组织的诱导培养基为包含质量浓度为0.48～0.52mg/L吲哚丁酸和8mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸的MS固体培养基；所述MS培养基中蔗糖浓度为31g/L，植物凝胶浓度为4.1g/L；所述培养环境均为独立无菌环境，pH值为6.1，培养温度为23±2℃，光照强度为1800～2100Lx，每日光照16h/d。

2)愈伤组织分化不定芽：将步骤1)得到的愈伤组织切成4mm×4mm的小块，接种至分化不定芽的诱导培养基上，常规培养至愈伤组织上形成不定芽；所述愈伤组织分化出不定芽是14d；所述的分化诱导不定芽培养基为包含2.8～3.1g/L山梨糖醇、250mg/聚乙烯吡咯烷酮和2mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸的3/4MS固体培养基；所述3/4MS培养基中蔗糖浓度为31g/L，植物凝胶浓度为4.1g/L；所述常规培养的培养条件同步骤1)。

3)不定芽生根培养：将步骤2)得到长至2～4cm不定芽愈伤组织移至生根诱导培养基，常规培养至根须初步形成，得到生根麻竹幼苗；所述生根诱导培养基为包含1mg/L吲哚-3-乙酸的1/2MS培养基；所述不定芽生根培养是6d；所述1/2MS培养基中蔗糖浓度为31g/L，植物凝胶浓度为4.1g/L；所述常规培养的培养条件同步骤1)。

4)生根培养：将步骤3)得到根须1～3cm生根麻竹幼苗移至生根培养基，常规培养至根须形成，得到麻竹组培苗；所述麻竹生根培养基为包含0.1mg/L TDZ的MS培养基，或为包含0.1mg/L TDZ+0.48～0.51mg/L萘乙酸的MS培养基；所述MS培养基和所述常规培养的培养条件同步骤1)

结果表明，本发明的方法即可在30d之内获得大量优良的麻竹组培苗，为麻竹的应用提供大量优良的原材料，为实现对麻竹自然资源的保护、栽培对种苗的需求，以及基因库的建立奠定技术基础，市场应用前景广阔。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。