附图说明

图1：在感染后第+1、+3和+6天测量被BLI白色念珠菌感染并用不同化合物处理的小鼠口腔的总光子通量发射的量化。结果给出了3个不同实验中每组5只小鼠的平均值±SEM。≠,p<0.05(用FLU、GI或IY处理的感染小鼠对比用盐水溶液处理的感染小鼠)。

图2：在感染后第+6天对被BLI白色念珠菌感染并用不同化合物处理的小鼠进行体内成像。

图3：在感染后第+3天和第+6天进行的被白色念珠菌感染并用不同化合物处理的小鼠舌上的CFU计数。结果给出了3个不同实验中每组3只小鼠的平均值±SEM。≠,p<0.05(用FLU、GI或IY处理的感染小鼠对比用盐水溶液处理的感染小鼠)。

图4：在第+8天对(A)用不同化合物处理的未感染小鼠上进行的和(B)被BLI白色念珠菌感染并用不同化合物处理的小鼠上进行的组织学检查。

图5：在感染后第+6天进行的被BLI白色念珠菌感染并用不同化合物处理的小鼠的(A)食道中、(B)胃中和(C)十二指肠中的CFU计数。结果给出了3个不同实验中每组3只小鼠的平均值±SEM。≠,p<0.05(用FLU、GI或IY处理的感染小鼠对比用盐水溶液处理的感染小鼠)。

图6：在感染后第+6天进行(A)和在第+8天进行(B)的被BLI白色念珠菌感染并用不同化合物处理的小鼠食道和胃的离体成像。结果给出了3个不同实验中每组5只小鼠的平均值±SEM。≠,p<0.05(用FLU、GI或IY处理的感染小鼠对比用盐水溶液处理的感染小鼠)。

图7：舌上CFU计数。在舌感染后第+1、+3和+6天通过CFU测定评估感染后第+1、+2和+3天用10μl盐水溶液或氟康唑(FLZ–4mg/ml)或IY、GI或WG(均为100mg/ml)处理的感染小鼠舌的真菌载量。结果给出了2个不同实验中4-6只小鼠的平均值±SEM。≠,p<0.05(用FLZ、IY、GI或WG处理的感染小鼠对比用盐水溶液处理的感染小鼠)。

图8：IY、GI和WG对口咽念珠菌病期间SAP2、SAP6、ALS3和HWP1表达的影响。在感染后第+1、+2和+3天在用10μl盐水溶液或氟康唑(FLZ–4mg/ml)或IY、GI或WG(均为100mg/ml)处理的感染小鼠舌匀浆的细胞级分中分析基因(A)SAP2、(B)SAP6、(C)ALS3和(D)HWP1的表达。在感染后第3+天和第+6天，将舌匀浆离心，然后裂解细胞级分，提取总RNA并反转录为cDNA。通过实时PCR检测白色念珠菌的基因SAP2、SAP6、ALS3和HWP1，并在2^-ΔΔCT中报告了相对于白色念珠菌接种物的转录物的cDNA量。结果给出了2个不同实验中4-6只小鼠的平均值±SEM。≠,p<0.05(用FLZ、IY、GI或WG处理的感染小鼠对比用盐水溶液处理的感染小鼠)。

图9：腹膜中性粒细胞的破坏活性。在感染后第3+天和第+6天评估感染后第+1、+2和+3天用10μl盐水溶液或氟康唑(FLZ–4mg/ml)或IY、GI或WG(均为100mg/ml)处理的未感染小鼠或感染小鼠的腹膜中性粒细胞的破坏活性。在白色念珠菌(CA-6)(1x10⁵/ml)存在下将腹膜中性粒细胞(1x10⁶/ml)孵育2小时。结果给出了2个不同实验中每组4-6只小鼠的平均值±SEM。≠,p<0.05(用FLZ、IY、GI或WG处理的感染小鼠对比用盐水溶液处理的感染小鼠)。

图10：IL-1β、TNF-α和IL-6的产生。在感染后第+1、+3和+6天通过ELISA针对(A)IL-1β、(B)TNF-α和(C)IL-6的存在测试在感染后第+1、+2和+3天用10μl盐水溶液或氟康唑(FLZ–4mg/ml)或IY、GI或WG(均为100mg/ml)处理的未感染小鼠或感染小鼠的舌匀浆上清液。结果给出了2个不同实验中每组4-6只小鼠的平均值±SEM。*，p<0.05(用盐水溶液处理的感染小鼠对比未感染小鼠)。≠,p<0.05(用FLZ、IY、GI或WG处理的感染小鼠对比用盐水溶液处理的感染小鼠)。

图11：IL-17A/F、IL-22和IL-23的产生。在感染后第+1、+3和+6天通过ELISA针对(A)IL-17A/F、(B)IL-22和(C)IL-23的存在测试在感染后第+1、+2和+3天用10μl盐水溶液或氟康唑(FLZ–4mg/ml)或IY、GI或WG(均为100mg/ml)处理的未感染小鼠或感染小鼠的舌匀浆上清液。结果给出了2个不同实验中每组4-6只小鼠的平均值±SEM。*，p<0.05(用盐水溶液处理的感染小鼠对比未感染小鼠)。≠,p<0.05(用FLZ、IY、GI或WG处理的感染小鼠对比用盐水溶液处理的感染小鼠)。

图12：IFN-α的产生。在感染后第+1、+3和+6天通过ELISA针对IFN-α的存在测试在感染后第+1、+2和+3天用10μl盐水溶液或氟康唑(FLZ–4mg/ml)或IY、GI或WG(均为100mg/ml)处理的未感染小鼠或感染小鼠的舌匀浆上清液。结果给出了2个不同实验中每组4-6只小鼠的平均值±SEM。*，p<0.05(用盐水溶液处理的感染小鼠对比未感染小鼠)。≠,p<0.05(用FLZ、IY、GI或WG处理的感染小鼠对比用盐水溶液处理的感染小鼠)。

实施例1：评估不同酵母产品在口咽念珠菌病动物模型中的活性

A.材料和方法

口咽念珠菌病动物模型。由于白色念珠菌不是实验室小鼠的共生物种，因此将由Solis和Filler(Nature Protoc.,2012,7(4):637-642)开发的用于获得模拟人假膜性口咽念珠菌病的可重复感染的程序用于野生型C57BL/6小鼠上。该程序包括注射醋酸可的松，这使小鼠容易受到念珠菌的口腔感染和白色念珠菌的感染。

更具体地，将6-8周龄的雌性C57BL/6小鼠(Charles River,Calco,Italy)保持在Perugia University(Italy)的动物屋中。从感染前一天开始，每隔一天用225mg/kg醋酸可的松(Sigma-Aldrich)处理小鼠，然后在皮下注射乙胺噻吩环己酮/唑拉西泮-甲苯噻嗪(50mg/kg/5mg/kg)混合物麻醉下(Mosci et al.,Virulence,2013,4:250-254)如前所述用1x10⁶/ml BLI白色念珠菌悬液感染小鼠(Solis and Filler,Nature Protoc.,20125,7:637-642)。在感染前立即测试口腔，以确认之前不存在念珠菌物种(通过取口腔样品，将其涂在含有氯霉素(50μg/ml)(均来自Sigma-Aldrich)的YPD琼脂上)。

在没有特定病原体的条件(用敏感性测试被检测为不良感染的条件)下使用小鼠。根据欧洲实验动物科学协会联合会的标准，没有检测到感染。涉及动物及其护理的程序根据国家和国际法律和标准进行。所有动物实验均符合欧洲指令2010/63、用于实验目的或其他科学目的和国家法律116/92的脊椎动物公约的欧洲保护。该协议经Perugia大学伦理委员会批准用于动物护理和使用。所有动物均保持在Perugia大学的动物屋。小鼠在开始实验前适应环境1周。每笼最多包含5只小鼠，它们随意接受食物和水。

测试的产品。在本实施例中测试了活形式(GI)和灭活形式(IY)的酿酒酵母菌株I-3856。在感染后第+1、+2、+3和+6天小鼠接受经口注射(10μl)盐水溶液(0.9％NaCl，阴性对照)、氟康唑(FLZ–用作阳性对照的参考抗真菌剂)(4mg/ml)或GI和IY酵母产品(均为100mg/ml)。

念珠菌。使用带有融合产物ACT1p-gLUC59(gLUC59)的白色念珠菌CA1398菌株。白色念珠菌培养物通过在YPD琼脂(Y：酵母提取物，P：蛋白胨和D：无水葡萄糖-均来自Sigma-Aldrich)上的连续传代保持。通过将白色念珠菌的单菌落悬浮于盐水溶液中来收集真菌细胞，洗涤两次，使用血细胞计数器计数，并调节至所需浓度。

口腔中白色念珠菌感染的评估。

a.CFU测定。在感染白色念珠菌后第+3天和第+6天，通过在CHROMAgar^TM平板(对念珠菌具有特异性和选择性的生长培养基)上涂抹稀释的舌匀浆来评估粘附在口腔上的白色念珠菌菌落数。然后，在30℃培养两天后计数白色念珠菌的活菌落。结果以Log CFU/g组织(或法语Log UFC/g)表示。

b.口腔中BLI念珠菌的成像。在感染后第+1、+3和+6天，小鼠接受10μl(0.5mg/ml，在1/10甲醇/H₂O混合物中)的腔肠素(Synchem，OHM)，然后用2.5％异氟醚麻醉下使用IVIS-200TM系统(Xenogen Inc.)成像。在图像上，使用Living ImageR软件量化每只小鼠口腔(目标区域，ROI)的总光子通量发射。对于接受10μl腔肠素的未感染小鼠，未观察到发光(数据未显示)。

c.组织学检查。小鼠舌的组织学检查是感染后第+8天根据由Mosci et al.,Virulence,2013,4(3):250-254描述的方案进行。

感染扩散到食道、胃和肠道。

a.CFU测定。在感染白色念珠菌后第+6天，通过在CHROMAgar^TM平板板上涂抹组织/器官匀浆稀释液来评估在感染扩散后在食道、胃和十二指肠中形成的白色念珠菌菌落数。结果以Log CFU/g组织(或法语Log UFC/g)表示。

b.BLI念珠菌的成像。在感染后第+6天和第+8天，切除胃管，并通过咽部将10μl(0.5mg/ml，在1/10甲醇/H₂O混合物中)的腔肠素(Synchem，OHM)注射到食道腔内。然后，使用IVIS-200TM系统(Xenogen Inc.)对小鼠的食道和胃进行离体成像。在图像上，使用Living ImageR软件对每只小鼠的每个食道/胃系统(目标区域，ROI)的总光子通量发射进行量化。

统计分析。用Mann-Whitney U检验评估用FLU、GI或IY处理的感染小鼠与用盐水溶液处理的感染小鼠之间的差异。p<0.05的值被认为是显著的。

B.结果

口腔中白色念珠菌感染的评估。图1和图2显示了用各种化合物处理的感染小鼠的体内成像结果。这些结果表明，以其活形式(GI)和死形式(IY)的酿酒酵母菌株CNCM I-3856均能够显著减少真菌载量。有益效果类似于使用氟康唑(FLU–阳性对照)获得的效果。

在感染白色念珠菌后第+3天和第+6天评估的粘附在小鼠舌上的白色念珠菌菌落数证实了以其活形式(GI)和死形式(IY)的酿酒酵母菌株CNCM I-3856均能够显著减少真菌载量。有益效果类似于使用氟康唑(FLU–阳性对照)获得的效果(图3)。

对用两种酵母产品处理的未感染小鼠进行的组织学检查(图4(A))表明，用GI和IY处理的未感染小鼠的舌没有任何病变，并且没有观察到中性粒细胞的募集。对用各种化合物处理的感染小鼠进行的组织学检查(图4(B))表明，以其活形式(GI)和死形式(IY)的酿酒酵母菌株CNCM I-3856处理的感染小鼠的舌不具有任何由白色念珠菌引起的病变。有益效果类似于使用氟康唑(FLU–阳性对照)获得的效果。

感染扩散到食道、胃和十二指肠。在感染扩散后，在感染白色念珠菌后第+6天评估食道(图5(A))、胃(图5(B))和十二指肠(图5(C))中形成的白色念珠菌菌落数量。获得的结果表明，以其活形式(GI)的酿酒酵母菌株CNCM I-3856能够显著抑制真菌载量，而其死形式(IY)显示出减少食道和胃中真菌载量的趋势。GI的有益效果类似于使用氟康唑(FLU–阳性对照)获得的效果。感染后第+6天(图6(A))和第+8天(图6(B))食道和胃的离体成像证实以其活形式(GI)和死形式(IY)(较小程度)的酿酒酵母菌株CNCM I-3856防止感染在消化道中扩散。

C.结论

综合考虑，实施例1中获得的结果表明，无论是以其活形式(GI)和死形式(IY)的酿酒酵母菌株CNCM I-3856都能够显著降低真菌载量，从而防止其扩散到食道和胃。有益效果类似于使用氟康唑(阳性对照)获得的效果。

实施例2：酿酒酵母I-3856菌株对对白色念珠菌引起的口咽感染的免疫反应的影响

唾液是对抗念珠菌口腔感染的先天防御机制之一。唾液在牙齿和口腔上皮上形成薄膜。这种薄膜的主要成分是粘蛋白和免疫球蛋白A(IgA)，其可能聚集白色念珠菌，通过吞咽作用去除。此外，唾液含有生物活性剂，如具有杀真菌特性的组蛋白5、溶菌酶、乳铁蛋白和钙卫蛋白。尽管这些药剂以低浓度存在于唾液中，但它们的组合作用是加成或协同的。此外，唾液防御剂和唾液流动的动态效应的结合限制了白色念珠菌对口腔上皮的定植、增殖和侵袭，从而导致对白色念珠菌的固有口腔抵抗(Feller et al.,J.Oral.Pathol.Med.,2014,43:563-569)。

中性粒细胞和T细胞在抗念珠菌黏膜免疫中起重要作用。中性粒细胞通过氧化机制吞噬并杀死念珠菌细胞(Moyes et al.,Clin.Dev.Immunol.,2011,346307)。主要参与对念珠菌的口腔反应的T细胞是辅助T淋巴细胞(辅助T细胞，Th)Th1和Th17。Th1细胞产生IFN-γ，它是中性粒细胞的有效激活剂(Gattoni et al.,Clin.Ter.,2006,157:457-468)。在存在IL-6、IL-1β和TGF-β的情况下，T细胞分化为Th17，并在IL-23的刺激下成熟。Th17细胞产生IL-17A、IL-17F和IL-22。IL-17A和IL-17F刺激上皮细胞以产生抗菌肽并促进中性粒细胞的募集和激活，因此允许消除真菌。IL-22对上皮细胞具有与IL-17相似的作用并限制真菌生长(Hebecker et al.,Expert.Rev.Anti Infect.Ther.,2014,12:867-879；Moyes etal.,Clin.Dev.Immunol.,2011,346307)。

在实施例1中证明，酿酒酵母菌株保藏号I-3856，无论是活形式(GI)还是灭活形式(IY)，都能够减少口腔真菌载量，防止念珠菌感染扩散到食道和胃。在本实施例中，首先评估了WG(酿酒酵母菌株CNCM I-3856的细胞壁)减少口腔真菌载量的能力，然后测定口服IY、GI和WG是否能够影响口咽念珠菌病的真菌毒力因子和炎症反应。

A.材料和方法

白色念珠菌菌株和培养条件。使用了高毒力的白色念珠菌菌株(CA-6)(Bistoniet al.,Infect.Immun.,1986,51:6668-674)。白色念珠菌培养物通过在YPD琼脂(Y：酵母提取物，P：蛋白胨和D：无水葡萄糖-均来自Sigma-Aldrich)上的连续传代保持。通过将白色念珠菌的单菌落悬浮于盐水溶液中来收集真菌细胞，洗涤两次，使用血细胞计数器计数，并调节至所需浓度。

口咽念珠菌病动物模型。将6-8周龄的雌性C57BL/6小鼠(Charles River,Calco,Italy)保持在Perugia University(Italy)的动物屋中。从感染前一天开始，每隔一天用225mg/kg醋酸可的松(Sigma-Aldrich)处理小鼠，然后在皮下注射乙胺噻吩环己酮/唑拉西泮-甲苯噻嗪(50mg/kg/5mg/kg)混合物麻醉下(Mosci et al.,Virulence,2013,4:250-254)如前所述用1x10⁶/ml白色念珠菌(CA-6)悬液感染小鼠(Solis and Filler,NatureProtoc.,20125,7:637-642)。在感染前立即测试口腔，以确认之前不存在念珠菌物种(通过取口腔样品，将其涂在含有氯霉素(50μg/ml)(均来自Sigma-Aldrich)的YPD琼脂上)。参见实施例1的伦理声明。

测试的产品。在该实施例中，测试了活形式(GI)和灭活形式(IY)以及细胞壁形式(WG)的酿酒酵母菌株I-3856。在感染后第+1、+2和+3天小鼠接受经口注射(10μl)盐水溶液(0.9％NaCl，阴性对照)、氟康唑(FLZ，4mg/ml，阳性对照)和IY、GI或WG(均为100mg/ml)。

CFU测定。有关操作条件，参见实施例1。在感染后第+1、+3和+6天测定真菌载量。

SAP2、SAP6、ALS3和HWP1基因表达的定量分析。在感染后第+1、+3和+6天获得来自患有白色念珠菌口腔感染并如上所述用盐水溶液、或氟康唑或用IY、GI或WG处理的小鼠的舌匀浆。将小鼠舌匀浆以3000转/分钟离心5分钟，然后用Trizol(Life Technology)裂解细胞级分。

根据制造商的说明，使用莫洛尼鼠白血病病毒(M-MLV RT)的逆转录酶反应提取和逆转录总RNA。用分光光度计测定互补DNA(cDNA)的浓度。使用已知引物检测白色念珠菌的SAP2、SAP6、ALS3和HWP1基因(Naglik et al.,J.Med.Microbiol.,2006,55:1323-1327；Naglik et al.,Microbiology,2008,154:3266-3280；Roudbarmohammadi et al.,Adv.Biomed.Res.,2016,5:105)。实时PCR反应在带有SYBR green(BioRad)的96孔PCR板中进行。对于实时PCR反应，使用200ng cDNA。所有样品一式三份测量。在2^-ΔΔCT中报告感染后不同时间念珠菌基因相对于白色念珠菌接种物的转录物的相对表达水平，(Pericolini etal.,Virulence,2017,8:74-90))。SAP2、SAP6、ALS3和HWP1使用的扩增条件相同：95℃ 3分钟、40个循环的95℃ 10秒和引物特异性杂交温度30秒。实验使用Eppendorf Mastercycler进行。

杀白念珠菌能力测试。在感染后第+3天和第+6天，在腹膜内注射0.5ml不含内毒素的10％巯基乙酸盐(Difco)溶液18小时后，收集未感染小鼠和如上所述的感染并处理的小鼠的腹膜中性粒细胞。

中性粒细胞破坏活性通过CFU抑制试验测定。简言之，在5％CO₂存在下，在37℃下将每孔0.1ml悬液中的中性粒细胞(10⁵个细胞)在平底96孔组织培养板中与在0.1ml含有5％FBS的RPMI中的10⁴个白色念珠菌(CA-6)细胞一起孵育2小时。孵育后，剧烈摇动平板，加入Triton X-100(蒸馏水中0.1％，每孔中终浓度为0.01％)裂解细胞。用蒸馏水从每个孔中制备系列稀释液。将样品一式三份铺板在含有氯霉素(50mg/ml)的Sabouraud葡萄糖琼脂上，并在37℃下孵育24小时后评估CFU值。所谓的对照培养物由与含有5％FCS且不含效应细胞的RPMI-1640一起孵育的白色念珠菌(CA-6)组成。

细胞因子的生产。在感染后+1、+3和+6天获得来自未感染小鼠或来自如上所述经口感染和处理的小鼠的舌匀浆。将舌匀浆以3000转/分钟离心5分钟，收集上清液并通过ELISA测定法(eBioscience)测量IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-17A/F、IL-22、IL-23和IFN-γ的水平。

统计分析。结果是两个不同实验中每组4-6只小鼠的一式两份或一式三份样品的平均值±SEM。用Mann-Whitney U检验评估用盐水溶液处理的感染小鼠与用FLU、GI、IY或WG处理的未感染小鼠或感染小鼠与用盐水溶液处理的感染小鼠之间的差异。p<0.05的值被认为是显著的。

B.结果和讨论

首先评估WG(酿酒酵母菌株CNCM I-3856的细胞壁)针对口腔中白色念珠菌载量的影响的能力。为此目的，在用白色念珠菌(10⁶/ml)感染后第+1、+2和+3天用IY、GI或WG(均为100mg/ml)处理小鼠。在感染后第+1、+3和+6天评估如此处理的小鼠舌的CFU值。获得的结果显示于图7中，表明所有测试的化合物，包括WG，都能够显著抑制白色念珠菌载量，并且有益效果类似于使用氟康唑(FLZ)获得的效果。

接下来，本发明人确定真菌载量的抑制是否与白色念珠菌的某些毒力因子的抑制有关。因此，他们测定了与念珠菌入侵组织有关的天冬氨酸蛋白酶(Sap)的表达。SAP2和SAP6基因的测定在感染后+1、+3和+6天进行。结果显示于图8(A)和(B)中，表明在用GI处理后SAP2和SAP6的表达存在显著抑制，但用IY或WG处理则没有–这种效果在感染后6天观察到。

白色念珠菌表达侵袭素Als3，它与上皮细胞结合，通过上皮细胞的侵袭和主动渗透导致真菌的内吞作用，产生细胞损伤和促炎细胞因子的释放(Naglik et al.,MicrobesInfect.,2011,13:963-976)。白色念珠菌的HWP1(菌丝壁蛋白1)基因编码菌丝生长和真菌粘附到上皮细胞所必需的真菌细胞壁蛋白(Orsi et al.,Microb.Pathog.,2014,69-70:20-27)。发现两种基因ASL3和HWP1的表达在用GI处理后显著降低，但用IY或WG处理后则没有(参见图8(C)和(D))。这些结果表明GI对CFU的抑制可能是由于抑制了念珠菌对上皮细胞的粘附以及抑制了酵母菌丝转化，从而减少了随后的细胞损伤。由于IY和WG不影响念珠菌中的基因表达，因此使用这两种化合物观察到的CFU降低还存在其他作用机制。

中性粒细胞是真菌破坏的主要效应免疫细胞(Gazendam et al.,Immunol.Rev.,2016,273:299-311)。因此，检查了中性粒细胞的破坏活性。获得的结果显示于图9中。它们表明，与未感染的小鼠相比，在感染白色念珠菌期间减弱的嗜中性粒细胞的破坏活性通过用测试的酵母产品处理而恢复。特别地，在感染后6天，与未处理的感染小鼠相比，在用GI、IY和WG处理的感染小鼠中观察到中性粒细胞的破坏活性大幅增加。

在口腔念珠菌病病程中，通过释放促炎细胞因子，上皮细胞诱导中性粒细胞的募集，从而通过加速消除念珠菌来限制对上皮细胞的损伤程度(Trautwein-Weidner et al.,Mucosal.Immunol.,2015,8:221-231)。在本文使用的实验系统中测试了促炎细胞因子IL-1β、TNF-α和IL-6的产生。获得的结果如图10所示。这些结果表明，与未感染的小鼠相比，在感染后一天，在感染小鼠中观察到促炎细胞因子(如IL-1β、TNF-α和IL-6)的产生没有变化，无论是否用各种化合物处理。但是，感染后3天，感染小鼠的IL-1β和TNF-α产生显著增加，并且用酵母产品或FLZ处理导致这些细胞因子的明显抑制。此时，除FLZ外，与未处理小鼠相比，IL-6的产生保持不变。在感染后6天进行促炎细胞因子分析时，与未感染小鼠的舌的上清液相比，感染小鼠的舌的上清液中观察到大量增加，并且用GI、WG和FLZ处理导致所有细胞因子的产生显著减少，而IY只能显著抑制TNF-α的产生(图10)。

已知IL-17、IL-22和IL-23在口腔念珠菌病过程中起到消除真菌的作用(Hebeckeret al.,Expert.Rev.Anti Infect.Ther.,2014,12:867-879；Moyes et al.,Clin.Dev.Immunol.,2011,346307)。因此，在本系统中还确定了T细胞的细胞因子IL-17、IL-22和IL-23的存在。获得的结果(图11)表明，感染后6天，所有这些细胞因子在感染小鼠舌的上清液中的含量高于未感染小鼠舌的上清液中的含量。用GI和WG处理导致对所有测试的细胞因子的显著抑制，而IY仅在产生IL-23的情况下诱导显著减少。

在感染后3天和6天，在感染小鼠的舌的上清液中也观察到IFN-γ(一种T细胞典型的细胞因子)增加，并且用测试化合物处理导致IFN-γ的产生大幅减少(参见图12)。

综合考虑，这些结果表明在用测试化合物处理后观察到的促炎细胞因子的抑制可归因于真菌载量的减少。可以预期，通过抑制若干种毒力因子(如天冬氨酸蛋白酶和念珠菌的粘附素)，GI成功抑制了念珠菌载量和炎症反应。在本文呈现的实验中，IY和WG显然对念珠菌的毒力因子没有影响，但它们导致真菌载量大幅减少。先前已经表明，IY能够与念珠菌产生强聚集(Pericolini et al.,Virulence,2017,8:74-90)。可以预期，WG通过类似的机制发挥作用。此外，用所有测试的化合物处理后观察到的中性粒细胞破坏活性的增加也可以解释真菌载量的大幅减少。

C.结论

获得的结果表明，所有测试的酵母产品(GI、IY和WG)都能够抑制口腔中念珠菌的真菌生长。GI的有益作用至少部分是由于通过抑制念珠菌的粘附素和抑制菌丝转变来抑制念珠菌与上皮细胞的粘附。结果表明，WG和IY的作用特别是由于通过产生念珠菌的强聚集产生的机械效应，这阻止了念珠菌粘附到上皮细胞。所有这些作用都会导致念珠菌消除的明显加速，从而导致炎症反应低甚至不存在。有趣的是，在进行的所有测定中，用测试的酵母产品(GI、IY和WG)处理后获得的真菌载量与使用氟康唑(用于治疗口咽念珠菌病的标准抗真菌剂)获得的相当。