具体实施方式

本发明提供了一种纳米脂质体，包括如下质量份数的组分：分子量为150万道尔顿的透明质酸钠0.15～0.3份，优选为0.2～0.25份，进一步优选为0.225份；

分子量为40万道尔顿的透明质酸钠0.25～0.6份，优选为0.35～0.5份，进一步优选为0.4份；

分子量为0.5万道尔顿的透明质酸钠0.02～0.05份，优选为0.03～0.04份，进一步优选为0.035份；

甘油1～25份，优选为9～17份，进一步优选为13份；

1,2-戊二醇2～5份，优选为3～4份，进一步优选为3.5份；

季铵盐-73 0.001～0.005份，优选为0.002～0.004份，进一步优选为0.003份；

D泛醇0.4～2份，优选为0.8～1.6份，进一步优选为1.2份；

β-葡聚糖0.001～0.2份，优选为0.091～0.11份，进一步优选为0.1005份；

烟酰胺1～2.5份，优选为1.5～2份，进一步优选为1.75份；

氢化卵磷脂1～5份，优选为2～4份，进一步优选为3份；

水59.345～94.178份，优选为69.345～84.178份，进一步优选为76.7615份。

本发明还提供了所述的纳米脂质体的制备方法，包括如下步骤：

(1)将分子量为150万道尔顿的透明质酸钠、分子量为40万道尔顿的透明质酸钠、分子量为0.5万道尔顿的透明质酸钠、甘油与水混合，得到A相；

(2)将1,2-戊二醇、季铵盐-73、D-泛醇、β-葡聚糖、烟酰胺、氢化卵磷脂与A相混合，均质，得到纳米脂质体。

在本发明中，步骤(1)所述混合的方式为均质；

所述均质的温度为80～85℃，优选为81～84℃，进一步优选为82.5℃；

所述均质的时间为2～4min，优选为3min；

所述均质的转速为2000-3000r/min，优选为2500r/min；

所述均质时的真空度为-0.03～-0.07MPa，优选为-0.04～-0.06MPa，进一步优选为-0.05MPa。

在本发明中，所述1,2-戊二醇、季铵盐-73、D-泛醇、β-葡聚糖、烟酰胺、氢化卵磷脂与A相混合时，A相的温度为60～70℃，优选为62～68℃，进一步优选为65℃。

在本发明中，步骤(2)所述均质包括依次进行的第一均质和第二均质。

所述第一均质的转速为6000～30000r/min，优选为12000～24000r/min，进一步优选为18000r/min；

所述第一均质的时间为5～30min，优选为15～20min，进一步优选为17.5min；

所述第一均质的真空度为-0.03～-0.07MPa，优选为-0.04～-0.06MPa，进一步优选为-0.05MPa；

所述第二均质的压力为60～150MPa，优选为80～130MPa，进一步优选为105MPa；

所述第二均质的次数为1～6次，优选为2～5次，进一步优选为3.5次；

每次第二均质的时间为30～45s，优选为25～40s。

在本发明中经过第一次均质后得到的液体为粗乳分散。

在本发明中经过第二次均质得到的液体为澄清透明体。

本发明还提供了所述的纳米脂质体在制备具有抗炎修复功效的化妆品方面的应用。

所述化妆品为抗炎修复霜、抗炎修复乳或抗炎修复喷雾。

本发明还提供了一种抗炎修复霜，包括如下质量比的组分：

水相：油相：卡波姆：黄原胶：精氨酸：去离子水：纳米脂质体为79～81:12～13:0.25～0.35:0.1～0.2:0.25～0.35:4.5～5.5:1.5～2.5；优选为水相：油相：卡波姆：黄原胶：精氨酸：去离子水：纳米脂质体为80:12.5:0.3:0.15:0.3:5:2；

所述水相中包括如下质量份数的组分：去离子水69～71份，优选为70份；

甘油3.5～4.5份，优选为4份；

1,3-丁二醇4～5份，优选为4.5份；

EDTA-2Na 0.04～0.06份，优选为0.05份；

1,2-己二醇0.4～0.6份，优选为0.5份；

对羟基苯乙酮0.4～0.6份，优选为0.5份。

所述油相中包括如下质量份数的组分：辛酸/癸酸甘油三酯2～4份，优选为3份；

角鲨烷2～3份，优选为2.5份；

鲸蜡硬脂醇1～2份，优选为1.5份；

乳木果油0.5～1.5份，优选为1份；

白池花籽油1～3份，优选为2份；

甘油硬脂酸酯柠檬酸酯2～3份，优选为2.5份。

在本发明中所述抗炎修复霜的制备方法包括如下步骤：

(1.1)将精氨酸溶于去离子水中，得到精氨酸水溶液；

(1.2)在水相中缓慢加入卡波姆和黄原胶，分散均匀，得到中间液1；

(1.3)在中间液1中加入油相，均质得到中间液2；

(1.4)将精氨酸水溶液加入到中间液2中，继续搅拌5min，得到中间液3；

(1.5)在中间液3中加入纳米脂质体，得到抗炎修复霜。

步骤(1.3)所述中间液1中加入油相的时机为中间液1的温度为85℃时；

步骤(1.3)所述油相的制备方法包括如下步骤：将辛酸/癸酸甘油三酯、角鲨烷、鲸蜡硬脂醇、乳木果油、白池花籽油、甘油硬脂酸酯柠檬酸酯混合均匀后加热至85℃得到油相。

步骤(1.4)所述精氨酸水溶液加入到中间液2的时机为中间液2的温度为60℃时。

步骤(1.5)所述中间液3中加入纳米脂质体的时机为中间液3的温度为50℃时。

本发明还提供了一种抗炎修复乳，包括如下质量比的组分：

水相：油相：卡波姆：黄原胶：精氨酸：去离子水：纳米脂质体为82～84:8～10:0.1～0.2:0.1～0.14:0.1～0.2:4～6:1.5～2.5，优选为水相：油相：卡波姆：黄原胶：精氨酸：去离子水：纳米脂质体为83:9:0.15:0.12:0.15:5:2；

所述水相中包括如下质量份数的组分：去离子水74～76份，优选为75份；

甘油3～5份，优选为2.5份；

1,3-丁二醇2～4份，优选为3份；

1,2-己二醇0.4～0.6份，优选为0.5份；

对羟基苯乙酮0.4～0.6份，优选为0.5份。

所述油相中包括如下质量份数的组分：辛酸/癸酸甘油三酯2～4份，优选为3份；

角鲨烷0.5～1.5份，优选为1份；

鲸蜡硬脂醇0.4～0.6份，优选为0.5份；

乳木果油0.5～1.5份，优选为1份；

白池花籽油1～2份，优选为1.5份；

甘油硬脂酸酯柠檬酸酯1.5～2.5份，优选为2份。

在本发明中所述抗炎修复乳的制备方法包括如下步骤：

(2.1)将精氨酸溶于去离子水中，得到精氨酸水溶液；

(2.2)在水相中缓慢加入卡波姆和黄原胶，分散均匀，得到中间液1；

(2.3)在中间液1中加入油相，均质得到中间液2；

(2.4)将精氨酸水溶液加入到中间液2中，继续搅拌5min，得到中间液3；

(2.5)在中间液3中加入纳米脂质体，得到抗炎修复乳。

步骤(2.3)所述中间液1中加入油相时的时机为中间液1的温度为85℃；

步骤(2.3)所述油相的制备方法包括如下步骤：将辛酸/癸酸甘油三酯、角鲨烷、鲸蜡硬脂醇、乳木果油、白池花籽油、甘油硬脂酸酯柠檬酸酯混合均匀后加热至85℃得到油相。

步骤(2.4)所述精氨酸水溶液加入到中间液2的时机为中间液2的温度为60℃时。

步骤(2.5)所述中间液3中加入纳米脂质体的时机为中间液3的温度为50℃时。

一种抗炎修复喷雾，包括如下质量比的组分：

水相：卡波姆：黄原胶：精氨酸：去离子水：纳米脂质体为92～93:0.05～0.15:0.05～0.15:0.05～0.15:4～6:1.5～2.5，优选为水相：卡波姆：黄原胶：精氨酸：去离子水：纳米脂质体为92.5:0.1:0.1:0.1:5:2；

所述水相中包括如下质量份数的组分：去离子水85～86份，优选为85.5份；甘油3～5份，优选为3.5份；

1,3-丁二醇2～4份，优选为3份；

1,2-己二醇0.4～0.6份，优选为0.5份；

对羟基苯乙酮0.4～0.6份，优选为0.5份。

在本发明中所述抗炎修复喷雾的制备方法包括如下步骤：

(3.1)将精氨酸溶于去离子水中，得到精氨酸水溶液；

(3.2)在水相中缓慢加入卡波姆和黄原胶，分散均匀，得到中间液1；

(3.3)在中间液1中精氨酸水溶液，得到中间液2；

(3.4)在中间液2中加入纳米脂质体得到抗炎修复喷雾。

下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

本实验例中用到的小鼠巨噬细胞系RAW264.7来源于中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心。

本实验例中用到的人角质细胞来源于北京北纳创联生物技术研究院。

实施例1

纳米脂质体的制备

在乳化锅中加入59.345g去离子水，边搅拌边加入0.15g 150万道尔顿的透明质酸钠、0.5g 40万道尔顿的透明质酸钠、0.05g 0.5万道尔顿的透明质酸钠、1g甘油，将温度加热至80℃后，在转速为2000r/min，真空度为-0.03mpa的条件下均质3min得到A相。

待A相温度降至70℃时加入2g 1,2-戊二醇、0.001g季铵盐-73、2g D-泛醇、0.1gβ-葡聚糖、2.5g烟酰胺、1g氢化卵磷脂，先在6000rpm/min，真空度为-0.03mpa的条件下进行第一次均质，均质时间为30min。再在60MPa的条件下进行第二次均质，均质30s，重复第二次均质6次，得到纳米脂质体，备用。

抗炎修复霜的制备

25℃条件下，在水相中缓慢加入0.3g卡波姆、0.15g黄原胶，分散均匀，得到中间液1。将中间液1加热至85℃，将处理好的油相加入到中间液1中，均质5min得到中间液2。待中间液2的温度降至60℃时，将精氨酸水溶液加入到中间液2中，继续搅拌5min，得到中间液3。中间液3的温度降至50℃时加入2g纳米脂质体，继续搅拌至25℃，得到抗炎修复霜。

水相中包括：去离子水70.2g、甘油4g、1,3-丁二醇4.5g、EDTA-2Na 0.05g，1,2-己二醇0.5g、对羟基苯乙酮0.5g。

油相的处理方法为：将3g辛酸/癸酸甘油三酯、2.5g角鲨烷、1.5g鲸蜡硬脂醇、1g乳木果油、2g白池花籽油、2.5g甘油硬脂酸酯柠檬酸酯混合均匀后加热至85℃得到处理好的油相。

精氨酸水溶液的配置方法为：0.3g精氨酸溶于5g去离子水中得到。

选取15名受试者，选取受试者前臂曲侧2×2cm为测试区域。清洁皮肤后，将黄豆粒大小抗炎修复霜涂于测试区域，使用Corneometer(皮肤水分测试仪)分别测定使用前以及使用后0h、4h和8h测试区域角质层中水分的含量。同一个位点测定5次排除最大值和最小值后取3次的平均值记录，测量结果如表1所示。

实施例2

纳米脂质体的制备

在乳化锅中加入73g去离子水，边搅拌边加入0.3g 150万道尔顿的透明质酸钠、0.25g 40万道尔顿的透明质酸钠、0.02g 0.5万道尔顿的透明质酸钠、15g甘油，将温度加热至85℃后，在转速为3000r/min，真空度为-0.07mpa的条件下均质2min得到A相。

待A相温度降至65℃时加入5g 1,2-戊二醇、0.003g季铵盐-73、0.4g D-泛醇、0.001gβ-葡聚糖、2g烟酰胺、5g氢化卵磷脂，先在10000rpm/min，真空度为-0.07mpa的条件下进行第一次均质，均质时间为20min。再在100MPa的条件下进行第二次均质，均质45s，重复第二次均质3次，得到纳米脂质体，备用。

抗炎修复乳的制备

25℃条件下，在水相中缓慢加入0.15g卡波姆、0.12g黄原胶，分散均匀，得到中间液1。将中间液1加热至85℃，将处理好的油相加入到中间液1中，均质5min得到中间液2。待中间液2的温度降至60℃时，将精氨酸水溶液加入到中间液2中，继续搅拌5min，得到中间液3。中间液3的温度降至50℃时加入2g纳米脂质体，继续搅拌至25℃，得到抗炎修复乳。

水相中包括：去离子水75.58g、甘油4g、1,3-丁二醇3g、1,2-己二醇0.5g、对羟基苯乙酮0.5g。

油相的处理方法为：将3g辛酸/癸酸甘油三酯、1g角鲨烷、0.5g鲸蜡硬脂醇、1g乳木果油、1.5g白池花籽油、2g甘油硬脂酸酯柠檬酸酯混合均匀后加热至85℃得到处理好的油相。

精氨酸水溶液的配置方法为：0.15g精氨酸溶于5g去离子水中得到。

采用人角质细胞，进行体外细胞试验，考察抗炎修复乳对炎症介质白细胞介素-1α(1L-1α)、白细胞介素-8(1L-8)释放的影响。具体步骤如下：将抗炎修复乳与人角质细胞按照2.5:1混合后，经UV300mJ/cm²照射6min，检测1L-1α、1L-8的释放量，以不加入抗炎修复乳的角质细胞经UV300mJ/cm²照射6min的1L-1α、1L-8的释放量为空白对照。结果见表2。

实施例3

纳米脂质体的制备

在乳化锅中加入94.178g去离子水，边搅拌边加入0.2g 150万道尔顿的透明质酸钠、0.6g 40万道尔顿的透明质酸钠、0.03g 0.5万道尔顿的透明质酸钠、25g甘油，将温度加热至82℃后，在转速为2500r/min，真空度为-0.05mpa的条件下均质4min得到A相。

待A相温度降至60℃时加入3g 1,2-戊二醇、0.005g季铵盐-73、1g D-泛醇、0.2gβ-葡聚糖、1g烟酰胺、3g氢化卵磷脂，先在30000rpm/min，真空度为-0.05mpa的条件下进行第一次均质，均质时间为5min。再在150MPa的条件下进行第二次均质，均质40s，得到纳米脂质体，备用。

抗炎修复喷雾的制备

25℃条件下，在水相中缓慢加入0.1g卡波姆、0.1g黄原胶，分散均匀，得到中间液1。在中间液1中加入精氨酸水溶液混合均匀后，再加入纳米脂质体混合均匀得到抗炎修复喷雾。

水相中包括：去离子水85.7g、甘油3g、1,3-丁二醇3g、1,2-己二醇0.5g、对羟基苯乙酮0.5g。

精氨酸水溶液的制备方法为：0.1g精氨酸溶解于5g去离子水中得到。

取小鼠腹膜肥大细胞培养物，利用10mL的抗炎修复喷雾培养细胞培养物25min，检测抗炎修复喷雾对组胺释放量的影响。以不加任何培养基的细胞培养物释放的组胺的量为空白对照。结果见表3。

对比例1

本对比例1的方法按照实施例1的方法进行设置，但是在设置本对比例1的抗炎修复霜时不加入纳米脂质体。按照实施例1的方法检测本对比例1的抗炎修复霜对角质层水分含量的影响。结果如表1所示。

表1实施例1和对比例1的抗炎修复霜对角质层水分含量的影响

表1显示，实施例1加入纳米脂质体组成抗炎修复霜后，较未加入纳米脂质体组成的抗炎修复霜的补水效果更好。说明本发明的纳米脂质体具有很好的补水效果。

对比例2

本对比例2的方法按照实施例2的方法进行设置，但是在设置本对比例2的抗炎修复乳时不加入纳米脂质体。按照实施例2的方法检测本对比例2的抗炎修复乳对炎症介质白细胞介素-1α(1L-1α)、白细胞介素-8(1L-8)释放的影响。结果见表2。

表2实施例2与对比例2的抗炎修复乳对炎症介质白细胞介素释放的影响

表2显示，加入纳米脂质体的实施例2的抗炎修复乳较未加入纳米脂质体的对比例2的抗炎修复乳在抑制炎症介质1L-1α和1L-8时，抑制率明显提高。实施例2加入纳米脂质体后得到的抗炎修复乳对炎症介质1L-1α的抑制率能达到76.9％，对1L-8的抑制率能达到68.9％。说明本发明的纳米脂质体可以有效的抑制炎症因子。

对比例3

本对比例3的方法按照实施例3的方法进行设置，但是在设置本对比例3的抗炎修复喷雾时不加入纳米脂质体。按照实施例3的方法检测本对比例3的抗炎修复喷雾对组胺释放量的影响。结果见表3。

表3实施例3和对比例3抗炎修复喷雾对组胺释放量的影响

表3显示，加入纳米脂质体制备得到的实施例3的抗炎修复喷雾对组胺的抑制率能达到76.6％，而未加入纳米脂质体制备得到的对比例3的抗炎修复喷雾对组胺的抑制率仅为20.9％。说明本发明的纳米脂质体能更好的抑制组胺的释放。

实验例1

调整RAW264.7细胞密度至5×10⁴/mL，接种于96孔细胞培养板中，每孔1000μL，置于37℃、5％CO₂细胞培养箱中培养24h。培养结束后吸出细胞板中的培养基，处理组中分别加入含有实施例1的纳米脂质体、实施例1的抗炎修复霜、实施例2的抗炎修复乳和实施例3的抗炎修复喷雾500μg/mL的无血清培养基200μL。空白对照组加入等体积无血清的培养基，继续培养24h，每组3个复孔。24h后，每组加入20μL的MTT溶液继续培育4h后，取出96孔板，吸出孔内液体，加入150μL的二甲基亚砜，震荡5min后于490nm处测定吸光度(A)值，计算细胞的存活率。存活率＝药物组平均A值/空白对照组平均A值。结果如表4所示。

表4各处理组对细胞存活率的影响

表4显示，本发明得到的纳米脂质体、抗炎修复霜、抗炎修复乳、抗炎修复喷雾安全、温和，没有任何细胞毒性。

实验例2

调整RAW264.7细胞密度至5×10⁴/mL，接种于96孔细胞培养板中，每孔1000μL，置于37℃、5％CO₂细胞培养箱中培养24h。培养结束后吸出细胞板中的培养基，处理组1加入含有100μg/mL实施例1的纳米脂质体及1μg/mL LPS的无血清培养基200μL，处理组2加入含有100μg/mL实施例1的抗炎修复霜及1μg/mL LPS的无血清培养基200μL，处理组3加入含有100μg/mL实施例2的抗炎修复乳及1μg/mL LPS的无血清培养基200μL，处理组4加入含有100μg/mL实施例3的抗炎修复喷雾及1μg/mL LPS的无血清培养基200μL，以等体积无血清的培养基为空白对照。继续培养18h后收集细胞上清液，采用ELISA试剂盒检测PGE2的含量，并计算抑制率，结果如表5所示。

表5各处理组对LPS刺激细胞释放PGE2的影响

表5显示，本发明的纳米脂质体以及利用纳米脂质体制备得到的抗炎修复霜、抗炎修复乳、抗炎修复喷雾具有很好的抑制LPS刺激细胞释放PGE2的能力。说明本发明的纳米脂质体具有很好的抑制PGE2炎症因子的作用。

实验例3

按实验例2的方法检测实施例1的纳米脂质体、实施例1的抗炎修复霜、实施例2的抗炎修复乳和实施例3的抗炎修复喷剂对LPS刺激RAW264.7细胞释放TNF-a的影响。结果如表6所示。

表6各处理组对LPS刺激细胞释放TNF-a的影响

表6显示，本发明的纳米脂质体以及利用纳米脂质体制备得到的抗炎修复霜、抗炎修复乳、抗炎修复喷剂具有很好的抑制LPS刺激细胞释放TNF-a的能力。说明本发明的纳米脂质体具有很好的抑制TNF-a炎症因子的作用。

由以上实施例可知，本发明提供了一种纳米脂质体及其制备方法与应用以及一种抗炎修复霜、抗炎修复乳和抗炎修复喷雾，本发明的纳米脂质体具有如下优点：

(1)本发明优选出三种不同分子量大小的透明质酸钠且进行有机组合，发挥了不同分子量的透明质酸对炎症反应的抑制及促进修复的协同作用。又因烟酰胺、D-泛醇的透皮性很好，将部分阳离子活性物季铵盐-73及D-泛醇和烟酰胺共同作用于表皮层及真皮层，达到更好的杀菌、抑菌效果。烟酰胺在皮肤细胞中转化成NDA⁺及NDAP⁺辅酵素，从而提升DNA修复机制，激发表皮层的结构蛋白质、脂质以及真皮层的胶原蛋白，帮助细胞结构逐渐恢复完整。

(2)采用本发明的制备方法包裹得到的纳米脂质体，可以提高透皮吸收水平和缓释能力，能更好的发挥功效。

(3)本发明的纳米脂质体对炎症因子的抑制作用显著，并具有长效抗炎功效，能从根本上修复皮肤屏障。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。