吡啶二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相及其制备方法和应用
阅读说明：本技术 吡啶二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相及其制备方法和应用 (Pyridine dicarboxamide bridged bis-beta-cyclodextrin stationary phase and preparation method and application thereof ) 是由 李来生 钟慧 曾庆丽 张天赐 双亚洲 李良 于 2021-10-11 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种吡啶二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相及其制备方法和应用,该材料以吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精、3-异氰酸基丙基三乙氧基硅烷和SBA-15为原料制备得到,制备方法过程简单,条件温和、成本较低；制得的吡啶二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相是一类多模式固定相,具有广泛的分离对象,在液相色谱中能高效快速地拆分一系列酸性、碱性、中性及两性的手性药物或农药。(The invention discloses a pyridine dicarboxamide bridged bis-beta-cyclodextrin stationary phase and a preparation method and application thereof, the material is prepared by taking pyridine-2, 3-dicarboxamide bridged bis-beta-cyclodextrin, 3-isocyanatopropyltriethoxysilane and SBA-15 as raw materials, the preparation method has simple process, mild conditions and lower cost; the prepared pyridine dicarboxamide bridged bis beta-cyclodextrin stationary phase is a multi-mode stationary phase, has wide separation objects, and can efficiently and quickly separate a series of acidic, alkaline, neutral and amphoteric chiral drugs or pesticides in liquid chromatography.)
技术领域
本发明属于手性分离材料领域，具体涉及一种吡啶二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相及其制备方法和应用。
背景技术
随着立体化学研究的深入，手性化合物对映体功能的差异性日益引起国际社会的广泛关注。由于手性药物空间结构能更好地匹配手性生命物质(如蛋白质、核酸、生物酶和活性多糖等)，具有作用靶点明确，药效高，疗效好等优点而被广泛地应用于临床治疗。但手性药物左旋体和右旋体通常只有一种有高活性，另一种不仅活性低，还可能产生毒副作用。例如，L-多巴可用于治疗帕金森类疾病，而D-多巴却没有这种功能，甚至造成粒状白细胞减少症，手性药物和农药的安全性已经成为化学工业、制药工业、临床医学和社会发展急需解决的科学问题。因此，开发新型的手性分离材料，并建立药物对映体含量的分析方法，对保障人们的用药安全和食品安全都具有重要意义。目前，由于高效液相色谱(HPLC)具有众多的优点，已发展成为手性物质的拆分和制备的最常用的手段之一，其中手性分离材料在HPLC拆分中起着重要作用。
环糊精拥有“内疏水，外亲水”的特殊分子结构，容易与空腔尺寸相匹配的客体分子形成包合物。由于左旋体和右旋体空间结构不同，与环糊精形成包合物的稳定性存在差异，从而被环糊精类固定相拆分。环糊精类固定相结构稳定耐用，可以在多种模式实现手性分离，加之无毒和便宜，存在较高的实际应用价值。特别是通过环糊精端口的衍生化可引入多种作用位点，从而提高固定相的手性选择性，主要包括烷基化、羟丙基化、苯甲酰化、苯基氨基甲酰化、萘乙基氨基甲酰化及三氮唑化等，部分衍生化环糊精类固定相已被商品化，已在手性分离中发挥着重要作用。但只通过衍生化很难进一步挖掘环糊精类固定相的潜力，一方面衍生化反应较费时费力，另一方面端口的衍生化会减少羟基的氢键作用，还会造成端口的拥挤现象，加之单个环糊精腔口较小，不利于发挥环糊精包结作用优势。
发明内容
由于衍生化β-环糊精中单个β-环糊精腔体较小，衍生化β-环糊精只能至多包结体积为一个萘环大小的底物，对体积较大手性物质的分离较差。本发明旨在解决上述衍生化环糊精固定相性能的不足，提供一种吡啶二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相及其制备方法，该方法操作简单，产率较高，且所制备的PyCDP能在反相色谱和极性有机等不同模式下对三唑类、黄烷酮类等多种手性物质具有较好的分离，有望一定程度上解决上述单环糊精衍生化固定相较难拆分大体积对映体的不足。具体采用以下的技术方案：
步骤一、将吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精、DMF、3-异氰酸基丙基三乙氧基硅烷混匀，在氮气氛围和60-70℃的条件下反应1.5-2.5h；
步骤二、然后加入SBA-15硅胶，升温至115-125℃，搅拌反应16-24h，冷却至室温后过滤，依次采用DMF、甲醇、丙酮对滤渣进行洗涤至洗液清亮为止，干燥后得到吡啶二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相；吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精、DMF、3-异氰酸基丙基三乙氧基硅烷和SBA-15硅胶的比例为(0.8-1.6)g：40mL：(0.2-0.4)mL：4g；
吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精由以下过程制得：
将单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT和DMF(N,N-二甲基甲酰胺)按照(6.5-7.5)g：(0.2-0.3)g：0.86g：0.54g：30mL的比例混匀，搅拌反应32-40h，过滤，按照DCC：丙酮＝0.86g：500mL的比例将滤液加入至丙酮，析出沉淀后过滤，将滤渣用水溶解后通过葡聚糖凝胶快速柱提纯，然后加入丙酮析出沉淀，抽滤，干燥后得到吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精。
基于Armstrong等π-酸、π-碱相作用原理，本发明引入π-碱性的吡啶芳基作桥基，以吡啶-2,3-二羧酸和氨基-β-环糊精为原料，在常见的脱水剂DCC(二环已基碳二亚胺)和HOBT(羟基苯并三唑)的存在下，常温缩合反应较便利地合成了一种吡啶二甲酰胺基桥联双β-环糊精，通过偶联剂键合到硅胶表面，制备一种新型的桥联环糊精固定相(简称PyCDP)。本发明得到的PyCDP中，两个环糊精腔体与吡啶桥基形成了一个“夹型”结构，能协同包结环糊精腔体所不能包结的较大体积的底物。桥基上的酰胺键既是氢键给体，又是氢键受体，能更大程度的发挥固定相的氢键作用。同时，引入的吡啶基能提供π-π层叠作用，这些相互作用力共同作用于底物分子，提高了PyCDP的手性分离能力。
通过红外、质谱、元素分析等对固定相和配体进行表征，证明了吡啶二甲酰胺基桥联双β-环糊精配体被成功合成，且成功被键合在硅胶基质上。经过实验验证，本发明得到的新固定相具有较强的手性分离能力，在HPLC反相模式下对三唑类农药、丹磺酰化氨基酸、黄烷酮类物质等表现出良好的分离性能；同时在极性有机模式下也能有效拆分多种β-受体阻滞剂类手性化合物，且分离能力明显优于常见的单环糊精类固定相。
本发明所用到的硅胶基质为SBA-15，粒径分布为2.5～4.5μm，孔径约为20nm，平均比表面积为400m2/g，其较大的比表面积有利于键合量的提高，有序的孔结构也可加快溶质传质。
在一些优选的实施情况中，单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT和DM F的比例为7.0g：0.25g：0.86g：0.54g：30mL。
在一些优选的实施情况中，吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精、DMF、3-异氰酸基丙基三乙氧基硅烷和SBA-15硅胶的比例为1.2g：40mL：0.3mL：4.0g。
在一些优选的实施情况中，在制备吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精时，搅拌反应的时间为36h。
在一些优选的实施情况中，步骤一中，在氮气氛围和65℃的条件下反应2h。
在一些优选的实施情况中，步骤二中，升温至120℃，搅拌反应20h。
在一些优选的实施情况中，步骤二中，干燥条件为60℃下真空干燥；在制备吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精时，干燥条件为真空55℃下干燥。
根据上述制备方法制得的吡啶二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相可以作为色谱固定相，用于手性对映体的分离，例如手性药物的分离，这些手性药物包括手性三唑类农药、黄烷酮类药物、丹磺酰化氨基酸或β-受体阻滞剂药物。
本发明的有益效果为：
(1)本发明所制备的固定相是一类多模式固定相，同时适用于高效液相色谱的反相和极性有机模式；同时，PyCDP的色谱性能良好，色谱分离重现性较好，具有稳定的色谱性能，在较宽的温度范围内都具有较高的手性分离能力，且可耐强酸和高浓度的有机溶剂，具有较高的实际应用性价值。
(2)本发明的制备方法具有过程简单、操作方便、重现性好及产率较高等优点。
(3)本发明所制备的PyCDP具有广泛的分离对象，在液相色谱中能高效快速地拆分一系列酸性、碱性、中性及两性的手性药物或农药，包括三唑类农药、黄烷酮类药物、丹磺酰化氨基酸及β-受体阻滞剂类药物等，且其对弱酸性的丹磺酰化谷氨酸、丹磺酰化天冬氨酸都表现出良好的分离性能。
附图说明
图1所示为实施例1中吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相的结构示意图；
图2所示为各个标准品的化学结构示意图；
图3所示为拆分各个标准品的手性色谱图。
具体实施方式
以下将结合实施例和附图对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整的描述，以充分地理解本发明的目的、方案和效果。
以下实施例中本发明所用到的硅胶基质为SBA-15，粒径分布为2.5～4.5μm，孔径约为20nm，平均比表面积为400m2/g。
实施例1：
一种吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相的制备方法，包括以下步骤：
(1)将单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT、无水DMF按比例6.5g、0.25g、0.86g、0.54g、30mL加料，搅拌溶解，在室温下磁力搅拌反应36h。过滤未反应固体，将滤液倒入500mL丙酮中(按0.86g DCC的量来计，下同)，析出沉淀后过滤，得到固体粗产品。将固体用少量水溶解，通过葡聚糖凝胶(C-25)快速柱提纯，收集滤液浓缩，然后加入丙酮析出沉淀，抽滤，固体在真空55℃下干燥，得到吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精(PyCD)，用作手性配体；
(2)将PyCD、无水DMF、3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷按比例1.2g、40mL、0.30mL加料，搅拌均匀，氮气保护下，磁力搅拌在65℃下反应2.0h。然后加入4.0g SBA-15硅胶，在120℃下快速搅拌反应20h。温度下降至室温后，过滤，固体依次用DMF、甲醇、丙酮反复洗涤至洗液清亮为止，固体在60℃下真空干燥，最后得到PyCDP。其结构示意图如图1所示。
以元素分析结果中的碳含量计算所制得的PyCDP的键合量，实测数据如表1所示。
表1
实施例2：
一种吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相的制备方法，包括以下步骤：
(1)将单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT、无水DMF按比例7.0g、0.25g、0.86g、0.54g、30mL加料，搅拌溶解，在室温下磁力搅拌反应36h。过滤未反应固体，将滤液倒入500mL丙酮中(按0.86g DCC的量来计，下同)，析出沉淀后过滤，得到固体粗产品。将固体用少量水溶解，通过葡聚糖凝胶(C-25)快速柱提纯，收集滤液浓缩，然后加入丙酮析出沉淀，抽滤，固体在真空55℃下干燥，得到PyCD，用作手性配体；
(2)将PyCD、无水DMF、3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷按比例1.2g、40mL、0.30mL加料，搅拌均匀，氮气保护下，磁力搅拌在65℃下反应2.0h。然后加入4.0g SBA-15硅胶，在120℃下快速搅拌反应20h。温度下降至室温后，过滤，固体依次用DMF、甲醇、丙酮反复洗涤至洗液清亮为止，固体在60℃下真空干燥，最后得到PyCDP。
以元素分析结果中的碳含量计算所制得的PyCDP的键合量，实测数据如表2所示。
表2
实施例3：
一种吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相的制备方法，包括以下步骤：
(1)将单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT、无水DMF按比例7.5g、0.25g、0.86g、0.54g、30mL加料，搅拌溶解，在室温下磁力搅拌反应36h。过滤未反应固体，将滤液倒入500mL丙酮中(按0.86g DCC的量来计，下同)，析出沉淀后过滤，得到固体粗产品。将固体用少量水溶解，通过葡聚糖凝胶(C-25)快速柱提纯，收集滤液浓缩，然后加入丙酮析出沉淀，抽滤，固体在真空55℃下干燥，得到PyCD，用作手性配体；
(2)将PyCD、无水DMF、3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷按比例1.2g、40mL、0.30mL加料，搅拌均匀，氮气保护下，磁力搅拌在65℃下反应2.0h。然后加入4.0g SBA-15硅胶，在120℃下快速搅拌反应20h。温度下降至室温后，过滤，固体依次用DMF、甲醇、丙酮反复洗涤至洗液清亮为止，固体在60℃下真空干燥，最后得到PyCDP。
以元素分析结果中的碳含量计算所制得的PyCDP的键合量，实测数据如表3所示。
表3
实施例4：
一种吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相的制备方法，包括以下步骤：
(1)将单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT、无水DMF按比例7.0g、0.20g、0.86g、0.54g、30mL加料，搅拌溶解，在室温下磁力搅拌反应36h。过滤未反应固体，将滤液倒入500mL丙酮中(按0.86g DCC的量来计，下同)，析出沉淀后过滤，得到固体粗产品。将固体用少量水溶解，通过葡聚糖凝胶(C-25)快速柱提纯，收集滤液浓缩，然后加入丙酮析出沉淀，抽滤，固体在真空55℃下干燥，得到PyCD，用作手性配体；
(2)将PyCD、无水DMF、3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷按比例1.2g、40mL、0.30mL加料，搅拌均匀，氮气保护下，磁力搅拌在65℃下反应2.0h。然后加入4.0g SBA-15硅胶，在120℃下快速搅拌反应20h。温度下降至室温后，过滤，固体依次用DMF、甲醇、丙酮反复洗涤至洗液清亮为止，固体在60℃下真空干燥，最后得到PyCDP。
以元素分析结果中的碳含量计算所制得的PyCDP的键合量，实测数据如表4所示。
表4
实施例5：
一种吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相的制备方法，包括以下步骤：
(1)将单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT、无水DMF按比例7.0g、0.30g、0.86g、0.54g、30mL加料，搅拌溶解，在室温下磁力搅拌反应36h。过滤未反应固体，将滤液倒入500mL丙酮中(按0.86g DCC的量来计，下同)，析出沉淀后过滤，得到固体粗产品。将固体用少量水溶解，通过葡聚糖凝胶(C-25)快速柱提纯，收集滤液浓缩，然后加入丙酮析出沉淀，抽滤，固体在真空55℃下干燥，得到PyCD，用作手性配体；
(2)将PyCD、无水DMF、3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷按比例1.2g、40mL、0.30mL加料，搅拌均匀，氮气保护下，磁力搅拌在65℃下反应2.0h。然后加入4.0g SBA-15硅胶，在120℃下快速搅拌反应20h。温度下降至室温后，过滤，固体依次用DMF、甲醇、丙酮反复洗涤至洗液清亮为止，固体在60℃下真空干燥，最后得到PyCDP。
以元素分析结果中的碳含量计算所制得的PyCDP的键合量，实测数据如表5所示。
表5
实施例6：
一种吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相的制备方法，包括以下步骤：
(1)将单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT、无水DMF按比例7.0g、0.25g、0.86g、0.54g、30mL加料，搅拌溶解，在室温下磁力搅拌反应32h。过滤未反应固体，将滤液倒入500mL丙酮中(按0.86g DCC的量来计，下同)，析出沉淀后过滤，得到固体粗产品。将固体用少量水溶解，通过葡聚糖凝胶(C-25)快速柱提纯，收集滤液浓缩，然后加入丙酮析出沉淀，抽滤，固体在真空55℃下干燥，得到PyCD，用作手性配体；
(2)将PyCD、无水DMF、3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷按比例1.2g、40mL、0.30mL加料，搅拌均匀，氮气保护下，磁力搅拌在65℃下反应2.0h。然后加入4.0g SBA-15硅胶，在120℃下快速搅拌反应20h。温度下降至室温后，过滤，固体依次用DMF、甲醇、丙酮反复洗涤至洗液清亮为止，固体在60℃下真空干燥，最后得到PyCDP。
以元素分析结果中的碳含量计算所制得的PyCDP的键合量，实测数据如表6所示。
表6
实施例7：
一种吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相的制备方法，包括以下步骤：
(1)将单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT、无水DMF按比例7.0g、0.25g、0.86g、0.54g、30mL加料，搅拌溶解，在室温下磁力搅拌反应36h。过滤未反应固体，将滤液倒入500mL丙酮中(按0.86g DCC的量来计，下同)，析出沉淀后过滤，得到固体粗产品。将固体用少量水溶解，通过葡聚糖凝胶(C-25)快速柱提纯，收集滤液浓缩，然后加入丙酮析出沉淀，抽滤，固体在真空55℃下干燥，得到PyCD，用作手性配体；
(2)将PyCD、无水DMF、3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷按比例1.2g、40mL、0.30mL加料，搅拌均匀，氮气保护下，磁力搅拌在65℃下反应2.0h。然后加入4.0g SBA-15硅胶，在120℃下快速搅拌反应20h。温度下降至室温后，过滤，固体依次用DMF、甲醇、丙酮反复洗涤至洗液清亮为止，固体在60℃下真空干燥，最后得到PyCDP。
以元素分析结果中的碳含量计算所制得的PyCDP的键合量，实测数据如表7所示。
表7
实施例8：
一种吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相的制备方法，包括以下步骤：
(1)将单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT、无水DMF按比例7.0g、0.25g、0.86g、0.54g、30mL加料，搅拌溶解，在室温下磁力搅拌反应32h。过滤未反应固体，将滤液倒入500mL丙酮中(按0.86g DCC的量来计，下同)，析出沉淀后过滤，得到固体粗产品。将固体用少量水溶解，通过葡聚糖凝胶(C-25)快速柱提纯，收集滤液浓缩，然后加入丙酮析出沉淀，抽滤，固体在真空55℃下干燥，得到PyCD，用作手性配体；
(2)将PyCD、无水DMF、3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷按比例0.8g、40mL、0.30mL加料，搅拌均匀，氮气保护下，磁力搅拌在65℃下反应2.0h。然后加入4.0g SBA-15硅胶，在120℃下快速搅拌反应20h。温度下降至室温后，过滤，固体依次用DMF、甲醇、丙酮反复洗涤至洗液清亮为止，固体在60℃下真空干燥，最后得到PyCDP。
以元素分析结果中的碳含量计算所制得的PyCDP的键合量，实测数据如表8所示。
表8
实施例9：
一种吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相的制备方法，包括以下步骤：
(1)将单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT、无水DMF按比例7.0g、0.25g、0.86g、0.54g、30mL加料，搅拌溶解，在室温下磁力搅拌反应32h。过滤未反应固体，将滤液倒入500mL丙酮中(按0.86g DCC的量来计，下同)，析出沉淀后过滤，得到固体粗产品。将固体用少量水溶解，通过葡聚糖凝胶(C-25)快速柱提纯，收集滤液浓缩，然后加入丙酮析出沉淀，抽滤，固体在真空55℃下干燥，得到PyCD，用作手性配体；
(2)将PyCD、无水DMF、3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷按比例1.6g、40mL、0.30mL加料，搅拌均匀，氮气保护下，磁力搅拌在65℃下反应2.0h。然后加入4.0g SBA-15硅胶，在120℃下快速搅拌反应20h。温度下降至室温后，过滤，固体依次用DMF、甲醇、丙酮反复洗涤至洗液清亮为止，固体在60℃下真空干燥，最后得到一种PyCDP。
以元素分析结果中的碳含量计算所制得的PyCDP的键合量，实测数据如表9所示。
表9
实施例10：
一种吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相的制备方法，包括以下步骤：
(1)将单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT、无水DMF按比例7.0g、0.25g、0.86g、0.54g、30mL加料，搅拌溶解，在室温下磁力搅拌反应32h。过滤未反应固体，将滤液倒入500mL丙酮中(按0.86g DCC的量来计，下同)，析出沉淀后过滤，得到固体粗产品。将固体用少量水溶解，通过葡聚糖凝胶(C-25)快速柱提纯，收集滤液浓缩，然后加入丙酮析出沉淀，抽滤，固体在真空55℃下干燥，得到PyCD，用作手性配体；
(2)将PyCD、无水DMF、3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷按比例1.2g、40mL、0.20mL加料，搅拌均匀，氮气保护下，磁力搅拌在65℃下反应2.0h。然后加入4.0g SBA-15硅胶，在120℃下快速搅拌反应20h。温度下降至室温后，过滤，固体依次用DMF、甲醇、丙酮反复洗涤至洗液清亮为止，固体在60℃下真空干燥，最后得到一种PyCDP。
以元素分析结果中的碳含量计算所制得的PyCDP的键合量，实测数据如表10所示。
表10
实施例11：
一种吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相的制备方法，包括以下步骤：
(1)将单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT、无水DMF按比例7.0g、0.25g、0.86g、0.54g、30mL加料，搅拌溶解，在室温下磁力搅拌反应32h。过滤未反应固体，将滤液倒入500mL丙酮中(按0.86g DCC的量来计，下同)，析出沉淀后过滤，得到固体粗产品。将固体用少量水溶解，通过葡聚糖凝胶(C-25)快速柱提纯，收集滤液浓缩，然后加入丙酮析出沉淀，抽滤，固体在真空55℃下干燥，得到PyCD，用作手性配体；
(2)将PyCD、无水DMF、3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷按比例1.2g、40mL、0.40mL加料，搅拌均匀，氮气保护下，磁力搅拌在65℃下反应2.0h。然后加入4.0g SBA-15硅胶，在120℃下快速搅拌反应20h。温度下降至室温后，过滤，固体依次用DMF、甲醇、丙酮反复洗涤至洗液清亮为止，固体在60℃下真空干燥，最后得到PyCDP。
以元素分析结果中的碳含量计算所制得的PyCDP的键合量，实测数据如表11所示。
表11
实施例12：
一种吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相的制备方法，包括以下步骤：
(1)将单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT、无水DMF按比例7.0g、0.25g、0.86g、0.54g、30mL加料，搅拌溶解，在室温下磁力搅拌反应32h。过滤未反应固体，将滤液倒入500mL丙酮中(按0.86g DCC的量来计，下同)，析出沉淀后过滤，得到固体粗产品。将固体用少量水溶解，通过葡聚糖凝胶(C-25)快速柱提纯，收集滤液浓缩，然后加入丙酮析出沉淀，抽滤，固体在真空55℃下干燥，得到PyCD，用作手性配体；
(2)将PyCD、无水DMF、3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷按比例1.2g、40mL、0.40mL加料，搅拌均匀，氮气保护下，磁力搅拌在60℃下反应2.0h。然后加入4.0g SBA-15硅胶，在120℃下快速搅拌反应20h。温度下降至室温后，过滤，固体依次用DMF、甲醇、丙酮反复洗涤至洗液清亮为止，固体在60℃下真空干燥，最后得到PyCDP。
以元素分析结果中的碳含量计算所制得的PyCDP的键合量，实测数据如表12所示。
表12
实施例13：
一种吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相的制备方法，包括以下步骤：
(1)将单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT、无水DMF按比例7.0g、0.25g、0.86g、0.54g、30mL加料，搅拌溶解，在室温下磁力搅拌反应32h。过滤未反应固体，将滤液倒入500mL丙酮中(按0.86g DCC的量来计，下同)，析出沉淀后过滤，得到固体粗产品。将固体用少量水溶解，通过葡聚糖凝胶(C-25)快速柱提纯，收集滤液浓缩，然后加入丙酮析出沉淀，抽滤，固体在真空55℃下干燥，得到PyCD，用作手性配体；
(2)将PyCD、无水DMF、3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷按比例1.2g、40mL、0.40mL加料，搅拌均匀，氮气保护下，磁力搅拌在70℃下反应2.0h。然后加入4.0g SBA-15硅胶，在120℃下快速搅拌反应20h。温度下降至室温后，过滤，固体依次用DMF、甲醇、丙酮反复洗涤至洗液清亮为止，固体在60℃下真空干燥，最后得到PyCDP。
以元素分析结果中的碳含量计算所制得的PyCDP的键合量，实测数据如表13所示。
表13
实施例14：
一种吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相的制备方法，包括以下步骤：
(1)将单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT、无水DMF按比例7.0g、0.25g、0.86g、0.54g、30mL加料，搅拌溶解，在室温下磁力搅拌反应32h。过滤未反应固体，将滤液倒入500mL丙酮中(按0.86g DCC的量来计，下同)，析出沉淀后过滤，得到固体粗产品。将固体用少量水溶解，通过葡聚糖凝胶(C-25)快速柱提纯，收集滤液浓缩，然后加入丙酮析出沉淀，抽滤，固体在真空55℃下干燥，得到PyCD，用作手性配体；
(2)将PyCD、无水DMF、3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷按比例1.2g、40mL、0.40mL加料，搅拌均匀，氮气保护下，磁力搅拌在65℃下反应1.5h。然后加入4.0g SBA-15硅胶，在120℃下快速搅拌反应20h。温度下降至室温后，过滤，固体依次用DMF、甲醇、丙酮反复洗涤至洗液清亮为止，固体在60℃下真空干燥，最后得到PyCDP。
以元素分析结果中的碳含量计算所制得的PyCDP的键合量，实测数据如表14所示。
表14
实施例15：
一种吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相的制备方法，包括以下步骤：
(1)将单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT、无水DMF按比例7.0g、0.25g、0.86g、0.54g、30mL加料，搅拌溶解，在室温下磁力搅拌反应32h。过滤未反应固体，将滤液倒入500mL丙酮中(按0.86g DCC的量来计，下同)，析出沉淀后过滤，得到固体粗产品。将固体用少量水溶解，通过葡聚糖凝胶(C-25)快速柱提纯，收集滤液浓缩，然后加入丙酮析出沉淀，抽滤，固体在真空55℃下干燥，得到PyCD，用作手性配体；
(2)将PyCD、无水DMF、3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷按比例1.2g、40mL、0.40mL加料，搅拌均匀，氮气保护下，磁力搅拌在65℃下反应2.5h。然后加入4.0g SBA-15硅胶，在120℃下快速搅拌反应20h。温度下降至室温后，过滤，固体依次用DMF、甲醇、丙酮反复洗涤至洗液清亮为止，固体在60℃下真空干燥，最后得到一种PyCDP。
以元素分析结果中的碳含量计算所制得的PyCDP的键合量，实测数据如表15所示。
表15
实施例16：
一种吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相的制备方法，包括以下步骤：
(1)将单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT、无水DMF按比例7.0g、0.25g、0.86g、0.54g、30mL加料，搅拌溶解，在室温下磁力搅拌反应32h。过滤未反应固体，将滤液倒入500mL丙酮中(按0.86g DCC的量来计，下同)，析出沉淀后过滤，得到固体粗产品。将固体用少量水溶解，通过葡聚糖凝胶(C-25)快速柱提纯，收集滤液浓缩，然后加入丙酮析出沉淀，抽滤，固体在真空55℃下干燥，得到PyCD，用作手性配体；
(2)将PyCD、无水DMF、3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷按比例1.2g、40mL、0.40mL加料，搅拌均匀，氮气保护下，磁力搅拌在65℃下反应2.0h。然后加入4.0g SBA-15硅胶，在115℃下快速搅拌反应20h。温度下降至室温后，过滤，固体依次用DMF、甲醇、丙酮反复洗涤至洗液清亮为止，固体在60℃下真空干燥，最后得到PyCDP。
以元素分析结果中的碳含量计算所制得的PyCDP的键合量，实测数据如表16所示。
表16
实施例17：
一种吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相的制备方法，包括以下步骤：
(1)将单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT、无水DMF按比例7.0g、0.25g、0.86g、0.54g、30mL加料，搅拌溶解，在室温下磁力搅拌反应32h。过滤未反应固体，将滤液倒入500mL丙酮中(按0.86g DCC的量来计，下同)，析出沉淀后过滤，得到固体粗产品。将固体用少量水溶解，通过葡聚糖凝胶(C-25)快速柱提纯，收集滤液浓缩，然后加入丙酮析出沉淀，抽滤，固体在真空55℃下干燥，得到PyCD，用作手性配体；
(2)将PyCD、无水DMF、3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷按比例1.2g、40mL、0.40mL加料，搅拌均匀，氮气保护下，磁力搅拌在65℃下反应2.0h。然后加入4.0g SBA-15硅胶，在125℃下快速搅拌反应20h。温度下降至室温后，过滤，固体依次用DMF、甲醇、丙酮反复洗涤至洗液清亮为止，固体在60℃下真空干燥，最后得到PyCDP。
以元素分析结果中的碳含量计算所制得的PyCDP的键合量，实测数据如表17所示。
表17
实施例18：
一种吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相的制备方法，包括以下步骤：
(1)将单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT、无水DMF按比例7.0g、0.25g、0.86g、0.54g、30mL加料，搅拌溶解，在室温下磁力搅拌反应32h。过滤未反应固体，将滤液倒入500mL丙酮中(按0.86g DCC的量来计，下同)，析出沉淀后过滤，得到固体粗产品。将固体用少量水溶解，通过葡聚糖凝胶(C-25)快速柱提纯，收集滤液浓缩，然后加入丙酮析出沉淀，抽滤，固体在真空55℃下干燥，得到PyCD，用作手性配体；
(2)将PyCD、无水DMF、3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷按比例1.2g、40mL、0.40mL加料，搅拌均匀，氮气保护下，磁力搅拌在65℃下反应2.0h。然后加入4.0g SBA-15硅胶，在120℃下快速搅拌反应16h。温度下降至室温后，过滤，固体依次用DMF、甲醇、丙酮反复洗涤至洗液清亮为止，固体在60℃下真空干燥，最后得到PyCDP。
以元素分析结果中的碳含量计算所制得的PyCDP的键合量，实测数据如表18所示。
表18
实施例19：
一种吡啶-2,3-二甲酰胺基桥联双β-环糊精固定相的制备方法，包括以下步骤：
(1)将单-6-氨基-β-环糊精、吡啶-2,3-二羧酸、DCC、HOBT、无水DMF按比例7.0g、0.25g、0.86g、0.54g、30mL加料，搅拌溶解，在室温下磁力搅拌反应32h。过滤未反应固体，将滤液倒入500mL丙酮中(按0.86g DCC的量来计，下同)，析出沉淀后过滤，得到固体粗产品。将固体用少量水溶解，通过葡聚糖凝胶(C-25)快速柱提纯，收集滤液浓缩，然后加入丙酮析出沉淀，抽滤，固体在真空55℃下干燥，得到PyCD，用作手性配体；
(2)将PyCD、无水DMF、3-异氰酸丙基三乙氧基硅烷按比例1.2g、40mL、0.40mL加料，搅拌均匀，氮气保护下，磁力搅拌在65℃下反应2.0h。然后加入4.0g SBA-15硅胶，在120℃下快速搅拌反应24h。温度下降至室温后，过滤，固体依次用DMF、甲醇、丙酮反复洗涤至洗液清亮为止，固体在60℃下真空干燥，最后得到PyCDP。
以元素分析结果中的碳含量计算所制得的PyCDP的键合量，实测数据如表19所示。
表19
高效液相色谱拆分实验：
将实施例2所制备的PyCDP用作高效液相色谱柱的固定相，对一些手性化合物进行对映体拆分；评估PyCDP的手性色谱性能。使用典型的匀浆填充技术将制备的PyCDP装入不锈钢柱(250mm×4.6mm)中，以甲醇为填充溶剂(填充压力：34.5MPa)，填充时间约为40min。使用前，将新柱安装在色谱仪上，反复用甲醇和水交替冲洗，最后用流动相冲洗，直至基线稳定，再进行进样分析。进样体积设为5～10μL；流速设为0.8mL/min；反相模式下手性物质的分离在室温下进行，极性有机模式温度为15℃左右；溶剂出峰作为死时间。
流动相组成为简单的水-甲醇(乙腈)或1％醋酸三乙铵或1％甲酸(1％醋酸三乙铵是指通过将体积比为1％的三乙胺加入超纯水中并使用醋酸将pH值调节至特定值；1％甲酸是指将体积比为1％的甲酸加入超纯水中)。流动相使用前均使用G4砂芯漏斗过滤并超声10min。外消旋体标准品的配制方法：将分析物溶解在甲醇和水体积比为1:1的溶液中以制备100～200mg/L的储备溶液，使用前均使用0.22μm微孔膜过滤并超声10min。
拆分的标准品(结构见图2)分别为：弱酸性的2’-羟基黄烷酮(反相模式，流动相水和乙腈的体积比为80：20)、丹磺酰化谷氨酸(反相模式，pH值为6.5的1％醋酸三乙铵和甲醇的体积比为95：5)；弱碱性的烯唑醇(反相模式，流动相水和乙腈的体积比为80：20)；中性的丹磺酰化苏氨酸(反相模式，pH值为6.5的1％醋酸三乙铵和甲醇的体积比为95：5)；体积较大的柚皮甙(反相模式，流动相水和乙腈的体积比为92：8)；阿罗洛尔(极性有机模式，流动相乙腈：甲醇：三乙胺：醋酸的体积比为93：7：1.2：0.8)。
实验结果见图3，可以看出，上述标准品均被基线分离。显然，本发明PyCDP能被用于高效液相色谱法拆分部分手性丹磺酰化氨基酸、黄烷酮类药物、β-受体阻滞剂类药物和某些三唑类手性农药的对映体，且有较好的分离效果。
以上所述，只是本发明的较佳实施例而已，本发明并不局限于上述实施方式，只要其以相同的手段达到本发明的技术效果，都应属于本发明的保护范围。在本发明的保护范围内其技术方案和/或实施方式可以有各种不同的修改和变化。
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