基于化学键修饰的多孔硅胶的手性药物拆分方法

文档序号:577258 发布日期:2021-05-25 浏览:46次 >En<

阅读说明:本技术 基于化学键修饰的多孔硅胶的手性药物拆分方法 (Chiral drug resolution method of porous silica gel based on chemical bond modification ) 是由 张炳烛 于 2020-12-31 设计创作,主要内容包括:本发明公开了一种基于化学键修饰的多孔硅胶的手性药物拆分方法,利用经过化学键修饰的多孔修饰硅胶进行手性药物的拆分;多孔修饰硅胶的制备方法为:A、取多孔硅胶和硅烷化试剂,备用;B、对多孔硅胶进行化学修饰,得到含末端氨基的修饰硅胶;C、取待拆分手性药物相关蛋白,于22-38℃进行酶解,得到多肽组合库;D、在步骤B所得修饰硅胶的表面,通过化学修饰键合步骤C所得多肽组合库,得到多孔修饰硅胶,用于手性药物的拆分。本发明制备的多孔修饰硅胶表面具有的组合手性识别库可用于多种手性药物的拆分及分析,能够满足广泛手性拆分范围、键合密度较高、表面分布均匀的综合要求。(The invention discloses a chiral drug resolution method of porous silica gel modified based on chemical bonds, which is used for carrying out chiral drug resolution by utilizing the porous modified silica gel modified by the chemical bonds; the preparation method of the porous modified silica gel comprises the following steps: A. taking porous silica gel and a silanization reagent for later use; B. chemically modifying the porous silica gel to obtain modified silica gel containing terminal amino; C. taking chiral drug related protein to be resolved, and carrying out enzymolysis at 22-38 ℃ to obtain a polypeptide combinatorial library; D. and C, chemically modifying the polypeptide combinatorial library obtained in the step C on the surface of the modified silica gel obtained in the step B to obtain the porous modified silica gel for the resolution of chiral drugs. The combined chiral recognition library on the surface of the porous modified silica gel prepared by the invention can be used for the resolution and analysis of various chiral drugs, and can meet the comprehensive requirements of wide chiral resolution range, higher bonding density and uniform surface distribution.)

基于化学键修饰的多孔硅胶的手性药物拆分方法

技术领域

本发明涉及手性药物相关技术领域,尤其是一种基于化学键修饰的多孔硅胶的手性药物拆分方法。

背景技术

高效液相色谱法能广泛适用于各类化合物,制备分离快速方便,定量分析的可靠性较高。用于液相色谱手性分离的手性固定相种类很多,包括Proteins、Polysaccharides、Chiralpolymers、Crownethers、cyclodextrin、含氨基酸残基或其它可以与类似金属铜的离子产生络合的基团、Pirkle型及Molecularlyimprintedpolymers等。在蛋白类手性固定相中,通常采用Bovineserumalbumin,BSA、Humanserumalbumin,HSA、α-Acidglycoprotein,AGP、卵清白蛋白和胰蛋白酶、α-胰凝乳蛋白酶、抗生素蛋白、胃蛋白酶等。然而,现有的手性药物拆分技术通常都难于满足广泛手性拆分范围、键合密度较高、表面分布均匀的综合要求。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种基于化学键修饰的多孔硅胶的手性药物拆分方法。

为解决上述技术问题,本发明所采取的技术方案如下。

基于化学键修饰的多孔硅胶的手性药物拆分方法,该方法利用经过化学键修饰的多孔修饰硅胶进行手性药物的拆分。

作为本发明的一种优选技术方案,所述多孔修饰硅胶的制备方法为:

A、取多孔硅胶和硅烷化试剂,备用;

B、对多孔硅胶进行化学修饰,得到含末端氨基的修饰硅胶;

C、取待拆分手性药物相关蛋白,于22-38℃进行酶解,得到多肽组合库;

D、在步骤B所得修饰硅胶的表面,通过化学修饰键合步骤C所得多肽组合库,得到多孔修饰硅胶,用于手性药物的拆分。

作为本发明的一种优选技术方案,步骤A中,所述多孔硅胶的孔径为5-15nm;所述多孔硅胶的粒径为1mm-50mm;所述硅烷化试剂为含末端氨基的硅烷化试剂。

作为本发明的一种优选技术方案,步骤B中,所述化学修饰的方法为:利用含末端氨基的硅烷化试剂对多孔硅胶进行修饰。

作为本发明的一种优选技术方案,步骤C中,所述待拆分手性药物相关蛋白包括与待拆分手性药物相关的一种蛋白或多种蛋白组合。

作为本发明的一种优选技术方案,步骤C中,所述蛋白包括α-酸性糖蛋白、白蛋白、卵清白蛋白、牛血清白蛋白,任选一种或其任意组合。

作为本发明的一种优选技术方案,步骤C中,所述酶解采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、弹性蛋白酶;任选一种或其任意组合;酶解后通过变性、吸附或透析的方法除去酶杂质。

作为本发明的一种优选技术方案,步骤D中,所述多孔修饰硅胶中,碳含量为6-18%w/w,氮含量为5-15% w/w;所述多肽组合库为具有手性识别能力的多肽组合库。

作为本发明的一种优选技术方案,所述多孔修饰硅胶的制备方法为:取2-10g卵清白蛋白以pH8.5的缓冲溶液溶解之,添加1% v/v弹性蛋白酶溶液至总溶液中,于30℃-35℃下进行酶解2-4min,接着将酶解后得到的多肽组合库以调节温度的方法除去酶蛋白;然后取10g孔径为10nm、粒径10mm的氨基修饰的多孔硅胶,先与羰基米唑在乙腈中反应,反应结束后过滤洗涤,接着调整pH,7.0,然后与上述除酶蛋白的溶液于60-90℃反应2-10h,反应产物过滤并以乙醇洗涤数次后干燥,即得。

作为本发明的一种优选技术方案,所述多孔修饰硅胶的制备方法为:取2-10g牛血清白蛋白,以pH=8.5的缓冲溶液溶解之,添加1% v/v弹性蛋白酶溶液,调节pH=8.5,于28-37℃下进行酶解5-15min,迅速加热,过滤,滤液以盐酸调节pH至7.0;然后取10g孔径为12nm、粒径20mm的氨基修饰的多孔硅胶,先与羰基米唑在乙腈中反应,反应结束后过滤洗涤,接着调整pH=7.0,然后与上述除酶蛋白的溶液于60-90℃反应2-10h,反应产物过滤并以乙醇洗涤数次后干燥,即得。

采用上述技术方案所产生的有益效果在于:本发明制备的多孔修饰硅胶表面具有的组合手性识别库可用于多种手性药物的拆分及分析,能够满足广泛手性拆分范围、键合密度较高、表面分布均匀的综合要求。

具体实施方式

以下实施例详细说明了本发明。本发明所使用的各种原料及各项设备均为常规市售产品,均能够通过市场购买直接获得。

在以下实施例的描述中,为了说明而不是为了限定,提出了诸如特定系统结构、技术之类的具体细节,以便透彻理解本申请实施例。然而,本领域的技术人员应当清楚,在没有这些具体细节的其它实施例中也可以实现本申请。在其它情况中,省略对众所周知的系统、装置、电路以及方法的详细说明,以免不必要的细节妨碍本申请的描述。

应当理解,当在本申请说明书和所附权利要求书中使用时,术语“包括”指示所描述特征、整体、步骤、操作、元素和/或组件的存在,但并不排除一个或多个其它特征、整体、步骤、操作、元素、组件和/或其集合的存在或添加。

还应当理解,在本申请说明书和所附权利要求书中使用的术语“和/或”是指相关联列出的项中的一个或多个的任何组合以及所有可能组合,并且包括这些组合。

如在本申请说明书和所附权利要求书中所使用的那样,术语“如果”可以依据上下文被解释为“当...时”或“一旦”或“响应于确定”或“响应于检测到”。类似地,短语“如果确定”或“如果检测到[所描述条件或事件]”可以依据上下文被解释为意指“一旦确定”或“响应于确定”或“一旦检测到[所描述条件或事件]”或“响应于检测到[所描述条件或事件]”。

另外,在本申请说明书和所附权利要求书的描述中,术语“第一”、“第二”、“第三”等仅用于区分描述,而不能理解为指示或暗示相对重要性。

在本申请说明书中描述的参考“一个实施例”或“一些实施例”等意味着在本申请的一个或多个实施例中包括结合该实施例描述的特定特征、结构或特点。由此,在本说明书中的不同之处出现的语句“在一个实施例中”、“在一些实施例中”、“在其他一些实施例中”、“在另外一些实施例中”等不是必然都参考相同的实施例,而是意味着“一个或多个但不是所有的实施例”,除非是以其他方式另外特别强调。术语“包括”、“包含”、“具有”及它们的变形都意味着“包括但不限于”,除非是以其他方式另外特别强调。

实施例1

基于化学键修饰的多孔硅胶的手性药物拆分方法,该方法利用经过化学键修饰的多孔修饰硅胶进行手性药物的拆分。

实施例2

多孔修饰硅胶的制备方法为:A、取多孔硅胶和硅烷化试剂,备用;多孔硅胶的孔径为5-15nm;多孔硅胶的粒径为1mm-50mm;硅烷化试剂为含末端氨基的硅烷化试剂。

B、对多孔硅胶进行化学修饰,得到含末端氨基的修饰硅胶;化学修饰的方法为:利用含末端氨基的硅烷化试剂对多孔硅胶进行修饰。

C、取待拆分手性药物相关蛋白,于22-38℃进行酶解,得到多肽组合库;待拆分手性药物相关蛋白包括与待拆分手性药物相关的一种蛋白或多种蛋白组合。

D、在步骤B所得修饰硅胶的表面,通过化学修饰键合步骤C所得多肽组合库,得到多孔修饰硅胶,用于手性药物的拆分;多孔修饰硅胶中,碳含量为6-18% w/w,氮含量为5-15% w/w;多肽组合库为具有手性识别能力的多肽组合库。

实施例3

待拆分手性药物相关蛋白,通常包括α-酸性糖蛋白、白蛋白、卵清白蛋白、牛血清白蛋白,任选一种或其任意组合。

实施例4

酶解,通常采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、弹性蛋白酶;任选一种或其任意组合。

实施例5

多孔修饰硅胶的制备方法为:取2-10g卵清白蛋白以pH8.5的缓冲溶液溶解之,添加1% v/v弹性蛋白酶溶液至总溶液中,于30℃-35℃下进行酶解2-4min,接着将酶解后得到的多肽组合库以调节温度的方法除去酶蛋白;然后取10g孔径为10nm、粒径10mm的氨基修饰的多孔硅胶,先与羰基米唑在乙腈中反应,反应结束后过滤洗涤,接着调整pH,7.0,然后与上述除酶蛋白的溶液于60-90℃反应2-10h,反应产物过滤并以乙醇洗涤数次后干燥,即得。

实施例6

多孔修饰硅胶的制备方法为:取2-10g牛血清白蛋白,以pH=8.5的缓冲溶液溶解之,添加1% v/v弹性蛋白酶溶液,调节pH=8.5,于28-37℃下进行酶解5-15min,迅速加热,过滤,滤液以盐酸调节pH至7.0;然后取10g孔径为12nm、粒径20mm的氨基修饰的多孔硅胶,先与羰基米唑在乙腈中反应,反应结束后过滤洗涤,接着调整pH=7.0,然后与上述除酶蛋白的溶液于60-90℃反应2-10h,反应产物过滤并以乙醇洗涤数次后干燥,即得。

实施例7

多孔修饰硅胶的制备方法为:取 2-10g卵清白蛋白以 pH8.1 的缓冲溶液溶解之,添加 5% 胰蛋白酶溶液 pH3.0至总溶液中含相当于 0.5% 的胰蛋白酶, 于 25-36℃下进行酶解 5-30 分钟,酶解后得到的多肽组合库以调节温度的方法除去酶蛋白。然后取10g孔径为8nm、 粒径5mm的氨基修饰的多孔硅胶, 先与CDI在乙腈中反应, 反应结束后过滤洗涤, 接着与上述除酶蛋白的溶液 (调整 pH7.0) 于 60-90℃反应 2-10 小时, 反应产物过滤并以乙醇洗涤数次后, 干燥即得。

在上述实施例中,对各个实施例的描述都各有侧重,某个实施例中没有详述或记载的部分,可以参见其它实施例的相关描述。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围,均应包含在本发明的保护范围之内。

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