阅读说明：本技术 一种刺五加总皂苷、提取方法及应用 (Acanthopanax senticosus total saponin, extraction method and application ) 是由 马佰偏 孙冬云 于 2021-07-30 设计创作，主要内容包括：本发明公开一种刺五加总皂苷、提取方法及应用,涉及生物制药技术领域。取刺五加茎、根茎或根,用水作溶剂提取多次,获得刺五加初级提取液；将获得的刺五加初级提取液采用膜浓缩设备进行膜浓缩,然后进行减压浓缩；获得减压浓缩液；冷却至常温后加乙醇溶液,搅拌均匀,醇沉；取醇沉后的上清液,采用多效浓缩器进行减压浓缩,用水溶解,用大孔吸附树脂进行吸附,用乙醇溶液进行洗脱；加氧化镁进行脱色,过滤,浓缩,喷雾干燥,过筛,即得。本发明采用膜浓缩,可以增加浓缩效率,低温浓缩能减少有效成分损失。本发明操作简单方便,产品收率高,可提高0.5-1％。本发明用YKDH-2大孔吸附树脂进行吸附,效果较好。(The invention discloses a acanthopanax senticosus total saponin, an extraction method and application thereof, and relates to the technical field of biological pharmacy. Extracting stems, rhizomes or roots of acanthopanax for multiple times by using water as a solvent to obtain a primary acanthopanax extracting solution; performing membrane concentration on the obtained acanthopanax primary extract by adopting membrane concentration equipment, and then performing reduced pressure concentration; obtaining a reduced pressure concentrated solution; cooling to normal temperature, adding ethanol solution, stirring, and precipitating with ethanol; collecting supernatant after alcohol precipitation, concentrating under reduced pressure with multiple-effect concentrator, dissolving with water, adsorbing with macroporous adsorbent resin, and eluting with ethanol solution; adding magnesium oxide for decolorizing, filtering, concentrating, spray drying, and sieving. The invention adopts membrane concentration, can increase the concentration efficiency, and can reduce the loss of effective components by low-temperature concentration. The invention has simple and convenient operation and high product yield which can be improved by 0.5 to 1 percent. The invention uses YKDH-2 macroporous adsorption resin for adsorption, and has better effect.)

一种刺五加总皂苷、提取方法及应用

技术领域

本发明属于生物制药

技术领域

，尤其涉及一种刺五加总皂苷、提取方法及应用。

背景技术

目前，刺五加是五加科五加属的一种，其药性温和、无毒，具有补益强壮、益气健脾、扶正固本、镇静安神等作用，是一种免疫增强剂，能调节人体新陈代谢，增强人体对各种疾病的抵抗力，主要分布于我国东北以及华北地区，在中国医药学中做为药物广泛应用已有悠久的历史。而现代医学研究证明刺五加具有抗炎、抗肿瘤、抗辐射、抗衰老、免疫调节等功效。因具有广泛的生理活性而受到国内外学者的关注。

随着近年对刺五加的研究不断深入，发现其具有药理作用的主要活性成分为皂苷，且多为齐敦果烷型的三帖皂苷。如20世纪80年代初从刺五加叶中分离出的刺五加叶皂苷I、K、M和刺五加皂苷A、B、C、D、E、F，以及基于此基础由邵春杰等分离出的刺五加苷A1、A2、A3、A4、B、C1、C2、C3、C4、D1、D2、D3和E，均为齐墩果烷型化合物。

传统的工艺是将刺五加饮片，用水提取或者75％乙醇提取的方法，或者在提取后用大孔树脂脱色，不仅提取分离效率低，而且有效部位或成分纯度不高，因此研究更加有效而高纯度的刺五加皂苷的提取分离方法具有重要的意义。

迄今为止刺五加总皂苷的提取的方法虽有很多，但均存在许多缺点，例如根据皂苷特性采用水或按比例混合有机溶剂水溶液作为提取液的浸提法的提取时间较长；以直接破碎细胞实现提取的超声提取法会导致杂质增多；通过微波场提取皂苷的微波提取法对设备的要求高等。

目前分离纯化刺五加总皂苷的主要方法有：大孔树脂吸附法、化学萃取法和超滤膜法。以上方法虽均能达到纯化目的但单一方法均有缺点与不足。

现有技术提供一种从刺五加叶中提取刺五加总皂苷的方法，按照以下步骤进行：

步骤1：将烘干后的刺五加叶片研磨成粉末与乙醇水溶液混合均匀，超声10min-20min后过滤得到第一次提取液，在剩余的残渣中加入与其等体积的乙醇水溶液重复上述步骤1-2次并将得到的提取液与第一次提取液混合；

其中，刺五加叶片粉末与乙醇水溶液的体积比为1:(20-30)；

步骤2：将步骤1得到的混合后的提取液浓缩至原体积的10％-30％后加入活性炭，于30℃-60℃水浴中加热10min-15min，过滤后得到滤液；

步骤3：向步骤2得到的滤液中加入与其同等体积的石油醚脱色数次至石油醚层澄清无色后，保留下层提取液，向下层提取液中加入与其同等体积的饱和正丁醇，萃取2-3次并将萃取得到的上层的正丁醇溶液混合均匀，随后将混合后的正丁醇溶液旋转蒸发除去正丁醇后加入去离子水溶解，再冷冻干燥至粉末状；

步骤4：用15-20wt.％氢氧化钠水溶液浸泡大孔树脂6h-12h后用去离子水冲洗大孔树脂直至排出的清洗液为中性，然后用15-20wt.％盐酸溶液浸泡大孔树脂6h-12h后用去离子水冲洗大孔树脂直至排出的清洗液为中性，再用无水乙醇浸泡大孔树脂6h-12h后将大孔树脂灌注到层析柱中，加入去离子水冲洗至流出液无白色浑浊为止，将步骤3得到的粉末溶于10ml去离子水中后注入层析柱中静态吸附30min-50min；

其中，大孔树脂与粉末的质量比为(10-30)g:1g；

步骤5：用去离子水对步骤4得到的层析柱中的大孔树脂进行冲洗直至洗脱液澄清，然后用70-90wt.％乙醇水溶液洗脱层析柱得到洗脱液，蒸发去除洗脱液中的乙醇后冷冻干燥，得到刺五加总皂苷干粉。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：

(1)现有技术中浓缩效率低，没有采用低温浓缩，易造成有效成分损失。

(2)现有技术制备工艺操作繁琐，产品收率低。

(3)现有技术中制备工艺中，吸附效果差。

发明内容

为克服相关技术中存在的问题，本发明公开实施例提供了一种刺五加总皂苷、提取方法及应用。所述技术方案如下：

根据本发明公开实施例的第一方面，提供一种刺五加总皂苷提取方法，包括：

步骤一，取刺五加茎、根茎或根，用水作溶剂提取多次，获得刺五加初级提取液；

步骤二，将获得的所述刺五加初级提取液采用膜浓缩设备进行膜浓缩，然后再采用多效浓缩器进行减压浓缩；获得减压浓缩液；

步骤三，将步骤二获得的减压浓缩液冷却至常温后加乙醇溶液，搅拌均匀，醇沉；

步骤四，取步骤三醇沉后的上清液，采用多效浓缩器进行减压浓缩，用水溶解，用大孔吸附树脂进行吸附，用乙醇溶液进行洗脱；

步骤五，将步骤四获得的洗脱液加氧化镁(根据实际需求添加)进行脱色，过滤，浓缩，喷雾干燥，过筛，即得刺五加总皂苷。

在本发明一实施例中，所述步骤一中，用水作溶剂提取3次，第一次用8-10倍水煎煮1小时，第二次用6-8倍水煎煮1小时，第三次用5-6倍水煎煮20分钟；

在本发明一实施例中，所述第三次提取水作为下批次第一遍提取水循环使用。

在本发明一实施例中，所述步骤二减压浓缩中，真空度-0.07MPa～-0.09MPa。

在本发明一实施例中，所述步骤三中，冷却至常温后加入5-6倍80％乙醇溶液，搅拌均匀。

在本发明一实施例中，所述步骤三中，醇沉12小时。

在本发明一实施例中，所述步骤四中，采用多效浓缩器进行减压浓缩，真空度真空度-0.07MPa～-0.09MPa；

用水溶解至每升液体相当于每公斤药材；

用60％乙醇溶液进行洗脱，洗脱液用量2BV，流速1.5BV。

在本发明一实施例中，所述步骤五中，浓缩至相对密度1.17-1.25gcm^-1，过80目筛。

根据本发明公开实施例的第二方面，提供一种利用所述提取方法提取的刺五加总皂苷。

根据本发明公开实施例的第三方面，提供一种所述刺五加总皂苷在制备免疫增强剂药物上的应用。

本发明公开的实施例提供的技术方案可以包括以下有益效果：

本发明采用膜浓缩，可以增加浓缩效率，低温浓缩能减少有效成分损失。

本发明操作简单方便，产品收率高，可提高0.5-1％。

本发明用YKDH-2大孔吸附树脂进行吸附，效果较好。

当理解的是，以上的一般描述和后文的细节描述仅是示例性和解释性的，并不能限制本发明公开。

附图说明

此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本公开的实施例，并与说明书一起用于解释本公开的原理。

图1是本发明实施例提供的刺五加总皂苷提取方法流程图。

具体实施方式

这里将详细地对示例性实施例进行说明，其示例表示在附图中。下面的描述涉及附图时，除非另有表示，不同附图中的相同数字表示相同或相似的要素。以下示例性实施例中所描述的实施方式并不代表与本公开相一致的所有实施方式。相反，它们仅是与如所附权利要求书中所详述的、本公开的一些方面相一致的装置和方法的例子。

如图1所示，本发明公开实施例所提供的刺五加总皂苷提取方法包括：

S101，取刺五加茎、根茎或根，用水作溶剂提取3次，第一次用8-10倍水煎煮1小时，第二次用6-8倍水煎煮1小时，第三次用5-6倍水煎煮20分钟，第三次提取水可作为下批次第一遍提取水使用。

S102，药液采用膜浓缩设备进行膜浓缩，然后再采用多效浓缩器进行减压浓缩(真空度-0.06MPa～-0.09MPa)至相对密度1.26-1.28(80℃测定)；

S103，冷却至常温后加入5-6倍80％乙醇溶液，搅拌均匀，醇沉12小时；

S104，取上清液采用多效浓缩器进行减压浓缩(真空度真空度-0.06MPa～-0.09MPa)至相对密度1.30-1.32(80℃测定)，用水溶解至每升液体相当于每公斤药材，用YKDH-2大孔吸附树脂进行吸附，用60％乙醇溶液进行洗脱，洗脱液用量2BV，流速1.5BV；

S105，洗脱液加氧化镁进行脱色，过滤，浓缩至相对密度1.17-1.25(常温测定)，喷雾干燥，过80目筛，即得。

下面结合实验结果对本发明的技术方案作进一步描述。

实验表明：

本发明采用膜浓缩，可以增加浓缩效率，低温浓缩能减少有效成分损失。

本发明操作简单方便，产品收率高，可提高0.5-1％。

本发明用YKDH-2大孔吸附树脂进行吸附，效果较好。

本领域技术人员在考虑说明书及实践这里公开的公开后，将容易想到本公开的其它实施方案。本申请旨在涵盖本公开的任何变型、用途或者适应性变化，这些变型、用途或者适应性变化遵循本公开的一般性原理并包括本公开未公开的本技术领域中的公知常识或惯用技术手段。说明书和实施例仅被视为示例性的，本公开的真正范围和精神由所附的权利要求指出。

应当理解的是，本公开并不局限于上面已经描述并在附图中示出的精确结构，并且可以在不脱离其范围进行各种修改和改变。本公开的范围应由所附的权利要求来限制。