具体实施方式

植物化学物质

本发明中，“植物化学物质”是指：存在于植物中的天然化学物质及其修饰体以及包含这些物质的组合物，虽不是维持正常身体机能所需要的，但作为对维持/改善健康产生积极影响的物质而被摄取、或将来会被摄取的化合物或组合物。因此，本发明中，植物化学物质除了包括植物来源的纯的或具有一定纯度的化合物之外，还包括包含这种化合物作为主要成分的植物来源的组合物的形态的物质、例如级分。

根据本发明的优选方式，植物化学物质例如是指多元酚、有机硫化合物、及萜类化合物等。

本发明中，作为多元酚的优选例子，可列举出类黄酮类、双酮(diketone)类、四萜等，进而作为它们的具体例，作为类黄酮类，可列举出黄酮(例如，芹菜素、木犀草素等)、异黄酮(例如，金雀异黄素、大豆黄酮等)、黄酮醇(例如，檞皮素、杨梅黄酮、山奈酚等)、黄烷酮(例如，橙皮素、柚皮素等)、黄烷-3-醇(例如，儿茶素、表儿茶酸等)、花青素(例如，矢车菊色素、飞燕草色素等)。另外，作为双酮类，可列举出姜黄素。

另外，作为有机硫化合物的优选的例子，可列举出异硫氰酸酯类(例如，莱菔硫烷等)、半胱氨酸亚砜类(例如，甲基半胱氨酸亚砜等)、锍化物(sulfines)(例如，大蒜素等)。

另外，作为萜类化合物，可列举出四萜，作为其具体例，可列举出类胡萝卜素(例如，β-胡罗卜素、α-胡罗卜素、β-隐黄质、番茄红素、叶黄素、辣椒红、虾青素等)。

进而，本发明中，上述植物化学物质中也包括它们的类似物，作为其优选的例子，对于金雀异黄素，可列举出糖苷(染料木苷)和缀合物(葡萄糖醛酸缀合物、硫酸缀合物)，对于檞皮素，可列举出甲基化物(异鼠李素)、糖苷(芦丁、檞皮素葡萄糖苷)、缀合物(葡萄糖醛酸缀合物、硫酸缀合物)，对于山奈酚，可列举出糖苷(橙皮苷)和缀合物(葡萄糖醛酸缀合物、硫酸缀合物)。进而，对于表儿茶酸、儿茶素，可列举出异构体(儿茶素)、聚合物(原花青素B1、原花青素B2、原花青素B5、原花青素C1等)、缀合物(葡萄糖醛酸缀合物、硫酸缀合物)和没食子酯(表儿茶酸没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯)。对于橙皮素，可列举出糖苷(橙皮苷)和缀合物(葡萄糖醛酸缀合物、硫酸缀合物)，对于柚皮素，可列举出糖苷(山奈酚、黄芪甙)和缀合物(葡萄糖醛酸缀合物、硫酸缀合物)。对于β-胡罗卜素，可列举出异构体(α-胡罗卜素、γ-胡罗卜素)和代谢物(视黄醇棕榈酸酯、阿朴-10-胡萝卜醛、视黄醇)，对于番茄红素，可列举出代谢物(阿朴-10-番茄红素醛)。

进而，本发明中，植物化学物质中也包括植物来源的提取物、浓缩物。作为其优选的例子，对于金雀异黄素，可列举出大豆、小豆、豌豆、蚕豆来源的提取物、浓缩物，对于檞皮素，可列举出洋葱、苹果来源的提取物、浓缩物，对于山奈酚，可列举出茶、西兰花来源的提取物、浓缩物，对于表儿茶酸、儿茶素，可列举出可可豆、茶来源的提取物、浓缩物，对于橙皮素，可列举出温州橙子来源的提取物、浓缩物，对于柚皮素，可列举出葡萄柚、橙子来源的提取物、浓缩物，对于木犀草素，可列举出白苏、紫苏、茼蒿、青椒来源的提取物、浓缩物，对于表儿茶酸，可列举出可可豆来源的提取物、浓缩物，对于β-胡罗卜素，可列举出胡萝卜、菠菜的提取物、浓缩物，对于α-胡罗卜素，可列举出胡萝卜的提取物、浓缩物，对于番茄红素，可列举出番茄来源的提取物、浓缩物，对于叶黄素，可列举出黄色胡萝卜、菠菜、万寿菊的提取物、浓缩物，对于辣椒红，可列举出红辣椒、青椒的提取物、浓缩物。

本发明中，植物化学物质为难溶于水的物质。根据本发明的优选方式，难水溶性的植物化学物质是指：在水中的溶解率为88％以下，进一步优选为50％以下、更优选为20％以下、最优选为1％以下的植物化学物质。此处，本发明中的“溶解率”是表示化合物容易溶解于水中的指标，是如下参数：将使化合物振荡溶解于纯水中后进行离心分离而得的上清液的浓度(w/v)除以振荡溶解前的浓度(w/v)并以百分率(％)来表示的值。浓度的测定可以使用分光光度计来进行。本发明中优选将使植物化学物质化合物33.3mg加入纯水10mL中而制得的溶液用于“溶解率”的测定。更难溶于水的植物化学物质的情况，可以使用将3.3mg加入纯水10mL中而制得的溶液来测定“溶解率”。需要说明的是，“溶解率”测定的温度条件为21±2℃。另外，植物化学物质的难水溶性可以以每次测定上述“溶解率”时得到的“将化合物振荡溶解于纯水中后进行离心分离而得的上清液的浓度(w/v)”作为指标来表示，在此情况下，在水中的溶解率为88％以下对应于293mg/100g以下。需要说明的是，可认为本发明中成为吸收促进对象的植物化学物质并非一定是溶解于水中的状态。即，认为：对于以固体状态或悬浮于水中的状态进行摄取的植物化学物质，也可以获得本发明的吸收促进的效果。

吸收促进用组合物

本发明中，植物化学物质的吸收促进是指：与在无含有多糖的乳酸菌产生物的情况下进行摄取的对照组相比，显著提高植物化学物质向体内的摄入、特别是向血液中的转移速度和/或转移量。具体而言，给予后，与对照组相比产生高的血药浓度、或与对照组相比产生大的血药浓度-时间曲线下面积(AUC)中的任一者或两者。由此，可以以更少的量或更短的时间得到植物化学物质摄取的效果，同时能够减少原料成本。另外，通过将本发明的植物化学物质吸收促进用组合物添加至饮食品、饮食品组合物中，从而能够提高饮食品等的附加价值、提高商品价值。

含有多糖的乳酸菌产生物

本发明中，含有多糖的“乳酸菌产生物”广义上除了包括乳酸菌发酵物之外，还包括乳酸菌培养物、乳酸菌代谢物等通过乳酸菌发酵而包含多糖的组合物。

本说明书中“多糖”是由半乳糖、葡萄糖、鼠李糖、甘露糖、N-乙酰基葡糖胺等糖类构成的糖链高分子。该多糖中，除了中性多糖之外，还可以包含结合有磷酸基的酸性多糖。另外，其分子量通常在5000至50万的范围内。

此外，本发明中，作为“乳酸菌产生物”，使用德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus·delbrueckii·subsp.·bulgaricus)OLL1251(以下有时简记为“保加利亚乳杆菌OLL1251”或“OLL1251”)所产生者。该OLL1251所产生的“乳酸菌产生物”与类似的菌株相比，具有更优异的植物化学物质吸收促进作用。

另外，根据本发明的一个优选方式，优选使用将OLL1251与嗜热链球菌OLS3290(以下有时简记为“OLS3290”)组合而产生的“乳酸菌产生物”。通过使OLL1251与OLS3290组合，从而可以获得如下优点：能够高效地产生“乳酸菌产生物”，能够以特别短的发酵时间获得具有优异的植物化学物质吸收促进作用的“乳酸菌产生物”。

上述德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1251于2018年4月25日(保藏日)在国家技术评估学会，专利微生物保藏中心(NPMD)(日本千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室)以保藏编号NITE BP-02703进行了基于布达佩斯条约的国际保藏。

进而嗜热链球菌OLS3290于2004年1月19日(保藏日)以保藏编号FERM BP-19638在国家技术评估学会，专利微生物保藏中心(NPMD)进行了基于布达佩斯条约的国际保藏。

本说明书中，“乳酸菌发酵物”是指：通过乳酸菌德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1251、或作为优选方式的德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1251与嗜热链球菌OLS3290的组合利用发酵而得到的培养物和包含其的组合物、及对其处理后的组合物。因此，该乳酸菌发酵物中，包括将德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1251、或组合了德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1251与嗜热链球菌OLS3290的发酵物及其处理物，例如，包括：利用过滤/离心分离或膜分离等将培养物(乳酸菌发酵物)除菌而得到的培养滤液、培养上清液；利用旋转蒸发器等将培养滤液/培养上清液、乳酸菌发酵物等浓缩而得到的浓缩物、糊剂化物、稀释物、或干燥物(例如，通过冷冻、加热、减压等所得者)。另外，处理可以将过滤、离心分离、膜分离等除菌处理、沉淀、浓缩、糊剂化、稀释、干燥等上述处理工序中的1种或多种组合而实施。另外，作为培养用的培养基，例如可列举出添加了酵母提取物的脱脂奶粉培养基、MRS培养基等。

根据本发明的优选方式，乳酸菌产生物特别优选为乳酸菌德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1251、或组合了德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1251与嗜热链球菌OLS3290的乳发酵物、乳培养物、乳代谢物。作为乳发酵物、乳培养物、及乳代谢物，例如可列举出发酵乳(酸奶)。本发明中，发酵乳(酸奶)可以优选设为其上清液。该发酵乳中，除了脱脂奶粉、乳清分解物等培养液之外，还可以添加果胶、瓜尔胶、黄原胶、卡拉胶、加工淀粉等增稠剂、凝胶化剂。

本发明中，作为乳，例如可列举出牛乳等动物奶、其加工品(例如，脱脂乳、全脂奶粉、脱脂奶粉、炼乳、酪蛋白、乳清、鲜奶油、复合奶油、黄油、酪乳粉(butter milk powder)、干酪等)、大豆来源的豆浆等植物奶等。需要说明的是，乳可以进行杀菌处理、也可以未经杀菌处理。

根据本发明的一个方式，作为发酵乳(酸奶)的原料，可以使用称为发酵乳原料混合物者。发酵乳原料混合物是包含原料乳和其它成分的混合物。该发酵乳原料混合物例如可以通过将原料乳、水、其它任意成分(例如，砂糖、糖类、甜味料、酸味料、矿物质、维生素、香料等)等制造发酵乳时常用的原料加热使其溶解，进行混合从而得到。原料乳中，也可以包含水、生乳、杀菌乳、脱脂乳、全脂奶粉、脱脂奶粉、全脂浓缩乳、脱脂浓缩乳、酪乳、黄油、奶油、干酪等。另外，原料乳中，也可以包含乳清蛋白浓缩物(WPC)、乳清蛋白分离物(WPI)、α-乳清蛋白(α-La)、β-乳球蛋白(β-Lg)等。

本发明中，发酵乳(酸奶)可以利用本领域中作为常规方法的方法而制备。即，发酵乳(酸奶)可以经过原料混合物的调和工序、原料混合物的(加热)杀菌工序、原料混合物的冷却工序、发酵剂的添加工序、发酵工序、发酵乳的冷却工序等工序而制造。另外，这些工序中，可以适宜采用在制造发酵乳(酸奶)时使用的通常的条件。另外，优选按照原料混合物的(加热)杀菌工序、原料混合物的冷却工序、发酵剂的添加工序、发酵工序和发酵乳的冷却工序的顺序来实施。

本发明中，作为用于培养乳酸菌德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1251、或德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1251与嗜热链球菌OLS3290的组合的培养基，可以使用为了培养乳酸菌而在本领域中通常使用的培养基。即，只要是除了主碳源之外含有适量的氮源、无机物等营养素的培养基即可，可以使用任意的培养基。作为碳源，根据使用菌的同化性，可以使用乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、澱粉水解物、廃糖蜜等。作为氮源，可以使用酪蛋白的水解物、乳清蛋白水解物、α-乳清蛋白、β-乳球蛋白、糖巨肽、大豆蛋白水解物等含有机氮的物质。此外，作为增殖促进剂，可以使用肉提取物、鱼肉提取物、酵母提取物等。

本发明中，乳酸菌德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1251、或德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1251与嗜热链球菌OLS3290的组合可以在厌氧状态下培养，另外也可以在液体静置培养等中使用的微好氧状态下培养。厌氧状态下的培养方法例如可以采用在二氧化碳气相下培养的方法等公知的方法，但也可以采用其它方法。培养温度通常优选为30℃以上且47℃以下的范围内，更优选为35℃以上且46℃以下的范围内，进一步优选为37℃以上且45℃以下的范围内。优选将乳酸菌培养中的培养基的pH维持在6以上且7以下的范围内，但只要是菌生长的pH就也可以是其它pH范围。作为乳酸菌等的培养时间，通常优选为1小时以上且48小时以下的范围内，更优选为1.5小时以上且36小时以下的范围内，进一步优选为2小时以上且24小时以下的范围内。

根据本发明的一个方式，发酵乳(酸奶)典型地非脂乳固体成分为8重量％以上，乳酸菌数或酵母数为10⁶个/ml以上且10¹¹个/ml以下的范围内。

植物化学物质吸收促进用组合物的组成、形态、及任意成分

本发明中，“吸收促进用组合物”可以作为“乳酸菌产生物”以乳酸菌德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1251、或德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1251与嗜热链球菌OLS3290的组合的发酵物、培养物、代谢物等的形态使用，但优选进行制剂化而使用。因此，本发明中，“吸收促进用组合物”例如除了以药物的形态提供之外，包括以直接摄取、优选经口摄取的制剂的形态、即所谓的营养补充剂的形态提供者，另外，也包括作为食品添加剂添加于其它食品、饮食物中而用于对该食品、饮食物赋予植物化学物质吸收促进作用者。

另外，根据本发明，包含本发明的植物化学物质吸收促进用组合物的饮食品、及经加工的饮食品、饮食品组合物也包括在本发明中。

本发明中，制剂是指：为了制剂化而组合使用可以接受的添加剂并依据常规方法制成优选经口制剂者。该制剂可以采用片剂、散剂、细粒剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、缓释剂等固体制剂、溶液、悬浮液、乳浊液等液体制剂的形态。作为为了制剂化而可以接受的添加剂，例如可列举出赋形剂、稳定剂、防腐剂、润湿剂、乳化剂、润滑剂、甜味料、着色料、香料、缓冲剂、抗氧化剂、pH调节剂等。需要说明的是，作为食品添加剂，具体而言可列举出加工调味料、风味调味料、烹饪混合物等调味料等。

另外，本发明中，饮食品和饮食品组合物是为了人、动物的饮食而经加工而成者，只要是溶液、悬浮液、乳浊液、粉末、固体成型物等能经口摄取的形态即可，没有特别限定。作为饮食品和饮食品组合物的例子，具体而言可列举出乳饮料(包括加工乳)、酸奶类、乳酸菌饮料、发酵乳、冰激凌类、奶油类、干酪类等乳产品；清凉饮料、果汁饮料、蔬菜饮料、豆乳饮料、咖啡饮料、茶饮料、胶冻饮料、营养饮料、美容用的饮料、可可、奶昔等粉末饮料、运动粉末饮料、营养增强的粉末饮料、美容用的粉末食品、粉末汤、蛋糕的原料、浓缩饮料、酒精饮料等饮料类；面包、通心面、面、蛋糕混合物、油炸面粉、面包粉等小麦粉产品；巧克力、口香糖、糖果、饼干、果汁橡皮糖、零食、日式点心、果冻、布丁等甜点等点心类；咖喱、意大利面、日式罐装食品、日式炖菜、和风食品的蒸煮食品；加工油脂、黄油、人造奶油、黄油、蛋黄酱等油脂类；冷冻干燥食品等速食食品类；罐装农产品、果酱/果子酱类、咸菜、煮豆、谷物、稀饭等农产加工品；水产加工品；畜产加工品；披萨、焗饭(Doria)、焗烤食品、配菜、油炸食物等冷冻食品；流食、半流食、进而动物的饲料、压片、口腔内使用的化妆品等。

本发明中，饮食品和饮食品组合物中也可以包含功能性食品、健康营养食品、健康食品、特定保健用食品、功能性标示食品、营养功能食品、患者用食品、乳幼儿用配方奶粉、孕产妇或哺乳期妇女用奶粉、或附有疾病风险减少标示的饮食品那样的分类食品。此处，疾病风险减少的标示是具有能减少疾病风险的可能性的饮食品的标示，是基于FAO/WHO合同食品标准委员会(法典委员会)制定的标准或参考其标准所制定的标示或被认可的标示。

本发明中，饮食品和饮食品组合物中可以根据需要加入任意的成分。作为这样的任意成分，没有特别限制，可列举出作为通常配混于饮食品中的成分的甜味料、酸味料、蔬菜/水果/果实的汁及其提取物、维生素、矿物质、氨基酸等营养素、乳酸菌(本发明的实施方式的必须乳酸菌除外。)、双歧杆菌、丙酸菌等有用的微生物及其发酵物、寡聚糖等具有功能性的糖类、蜂王浆、葡糖胺、虾青素、胶原蛋白、多元酚等现有的功能性材料、香料、pH调节剂、赋形剂、酸味料、着色料、乳化剂、保存料等。

另外，由以上所明确的那样，根据本发明的一个方式，提供含有多糖的乳酸菌产生物在制造上述的本发明的难水溶性植物化学物质吸收促进用组合物中的应用。

植物化学物质吸收促进用组合物的摄取方法

本发明中，植物化学物质吸收促进用组合物的摄取量可以适宜确定，根据本发明的一个方式，设为多糖的摄取量为200μg以上/天左右的量，优选为200μg/天以上且60000μg/天以下的范围内，更优选为300μg/天以上且45000μg/天以下的范围内，进一步优选为400μg/天以上且30000μg/天以下的范围内，特别优选为500μg/天以上且15000μg/天以下的范围内(需要说明的是，“质量/天以上”的表述与“质量以上/天”的表述含义相同，“质量/天以下”的表述与“质量以下/天”的表述含义相同。)。摄取期也没有特别限定，例如优选经口摄取至少1次以上。

根据本发明的另一方式，也可以使用基于食品安全委员会资料的下式将所需量由动物实验(例如小鼠实验)中的必要给予用量换算为对人体的必要给予用量。

(给予至人体的必要用量(换算值))＝(动物的必要给予用量)×(女性体重下限值：40kg)÷(安全系数：100)

如以上所明确的那样，根据本发明的一个方式，提供促进难水溶性植物化学物质在人或动物体内的摄入的方法，其包括向该人或动物给予或使其摄取含有多糖的乳酸菌产生物。另外，根据本发明的另一方式，提供含有多糖的乳酸菌产生物在促进难水溶性植物化学物质向人或动物体内的摄入中的应用。

实施例

以下的实施例中，为了进行比较而使用了下述菌株。

德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1247

该菌株于2014年3月6日(保藏日)在国家技术评估学会，专利微生物保藏中心(NPMD)(日本千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室)以保藏编号NITE BP-01814进行了基于布达佩斯条约的国际保藏。

德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1224

该菌株于2009年7月2日(保藏日)以保藏编号NITE BP-778在国家技术评估学会，专利微生物保藏中心(NPMD)进行了基于布达佩斯条约的国际保藏。

嗜热链球菌OLS3078

该菌株于2013年8月23日(保藏日)在国家技术评估学会，专利微生物保藏中心(NPMD)以保藏编号NITE BP-01697进行了基于布达佩斯条约的国际保藏。

以下的实施例中，均使用了下述的测定方法。

酸奶中的多糖含量的测定

酸奶中的多糖的含量依据苯酚硫酸法(Hodge等人，“Methods in carbohydratechemistry”，第1卷，第338页(1962年))进行测定。具体而言如下所述。

首先，在10g的酸奶中加入1g的三氯乙酸并进行充分搅拌。接着，将该添加有三氯乙酸的酸奶在10000rpm、10分钟、4℃的条件下进行离心分离处理，然后将其上清液移至其它试管中。接着，在该上清液中加入2倍体积的99.5％乙醇，之后将该添加有乙醇的上清液在冷冻室中放置一夜，在试管中产生了沉淀物。将该沉淀物在10000rpm、10分钟、4℃的条件下进行离心分离处理，然后在得到的沉淀物中加入超纯水3mL作为多糖提取液。此外，在500μL的多糖提取液中加入500μL的苯酚试剂(5％(w/v))，并对该混合液进行搅拌，然后进而在该混合液中加入2.5mL的浓硫酸并立即将该混合液搅拌10秒。然后，将该混合液在室温下放置20分钟以上，之后用分光光度计测定该混合液的490nm的吸光度。对照液如下进行制备并与上述同样地测定其490nm的吸光度。在500μL的标准葡萄糖溶液中加入500μL的苯酚试剂(5％(w/v))并搅拌该混合液，然后进而在该混合液中加入2.5mL的浓硫酸并立即将该混合液搅拌10秒。然后，将该混合液在室温下放置20分钟以上。

檞皮素代谢物的测定

如下测定了作为檞皮素代谢物的檞皮素缀合物和异鼠李素缀合物。在血清50μL中加入溶解于0.1M乙酸钠缓冲液(pH5.0)中的葡糖醛酸糖苷酶溶液45μL(10000U/mL、Sigma-Aldrich公司制)、溶解于0.1M乙酸钠缓冲液(pH5.0)中的0.1M抗坏血酸溶液5μL，在37℃下加热2小时。加入甲醇300μL使酶反应停止，进行离心分离(12000rpm、10分钟、4℃)。将上清液移至其它试管中，通过离心浓缩去除了溶剂。溶解于300μL的含有0.1％甲酸的50％乙腈溶液中，制备了HPLC用的样品。

HPLC使用Nexera XR(岛津制作所制)，MS/MS检测器使用4500QTRAP(SCIEX公司制)。柱使用ACQUITY UPLC HSS T31.8μm(2.1×50mm)(Waters公司制)，柱温度设定为40℃。对于流动相，制备了含有0.1％的甲酸溶液作为A液，制备了含有0.1％甲酸的乙腈溶液作为B液。用B液30％保持1分钟，然后以4.5分钟递减至B液45％，洗脱了目标物质。然后，用B液99％将柱清洗2分钟，用B液30％保持3分钟。需要说明的是，流速设定为0.3mL/分钟。MS/MS分析用ESI负离子模式进行分析。MS/MS的分析条件设为：气帘气流量30psi、碰撞气流量9psi、离子喷雾电压-4500V、涡轮燃气温度600℃、离子源气体70psi。

β-胡罗卜素的测定

在血清50μL中加入生理盐水90μL，加入二氯甲烷甲醇溶液(二氯甲烷：甲醇＝1：2)300μL。进而，加入己烷150μL提取β-胡罗卜素。将上层移至其它试管中，通过氮气回流而去除了溶剂。溶解于150μL的含有0.1％乙酸铵的30％乙酸乙酯70％甲醇溶液中，制备了HPLC用的样品。

HPLC使用1200系列(Agilent Technologies,Inc.制)。柱使用TSKgel ODS-80TsQA(5.0×250mm)(东曹株式会社制)，柱温度设定为40℃。对于流动相，制备了含有0.1％乙酸铵的30％乙酸乙酯70％甲醇溶液。需要说明的是，流速设定为0.3mL/分钟，测定了450nm的吸光波长。

植物化学物质的溶解性的评价

(1)实验方法

使用：表儿茶酸(Sigma-Aldrich公司制)、儿茶素(东京化成工业株式会社制)、檞皮素(和光纯药工业株式会社制)、金雀异黄素(东京化成工业株式会社制)、芦丁(和光纯药工业株式会社制)、α葡糖基芦丁(和光纯药工业株式会社制)、橙皮苷(和光纯药工业株式会社制)、柚皮苷(Sigma-Aldrich公司制)、柚皮素(Sigma-Aldrich公司制)、山奈酚(ExtraSynthase社制)、β-胡罗卜素(和光纯药工业株式会社制)、β-隐黄质(和光纯药工业株式会社制)、辣椒红(东京化成工业株式会社制)、番茄红素(和光纯药工业株式会社制)、木犀草素(东京化成工业株式会社制)。依据实验例中使用的给予用量，在表儿茶酸，儿茶素、檞皮素、金雀异黄素、柚皮素、山奈酚、木犀草素各33.3mg中分别加入10mL的超纯水。关于作为糖苷的植物化学物质，按照以糖苷配基(将糖苷水解而得到的糖质以外的部分)量计等于33.3mg的方式，在芦丁67.3mg(以檞皮素计为33.3mg)、α葡糖基芦丁89.6mg(以檞皮素计为33.3mg)、橙皮苷67.3mg(以橙皮素计为33.3mg)、柚皮苷71.0mg(以柚皮素计为33.3mg)中加入10mL的超纯水。依据实验例中使用的给予用量，作为萜类化合物，在β-胡罗卜素、番茄红素各3.3mg中分别加入10mL的超纯水。将制得的溶液振荡3小时后，进行2000×g、10分钟离心分离。使用0.45μL的过滤器将离心上清液过滤。使用分光光度计测定了离心上清液的吸光度(表儿茶酸、儿茶素、橙皮苷、柚皮苷、柚皮素、木犀草素为280nm，金雀异黄素为260nm，檞皮素、芦丁、α葡糖基芦丁、山奈酚为360nm，β-胡罗卜素、α-胡罗卜素、β-隐黄质为450nm，番茄红素、辣椒红为470nm)。使用80％甲醇或甲醇将各自的化合物溶解，制作标准曲线，求出离心上清液的浓度。需要说明的是，以上的一系列操作在21±2℃的温度条件下进行。此外，依据下式计算出溶解率。

溶解率(％)＝((振荡溶解后的离心上清液的浓度(w/v)÷(振荡溶解前的溶液的浓度(w/v))×100

(2)结果

将结果示于表1。儿茶素、α葡糖基芦丁的溶解率为89％以上，是水溶性的植物化学物质。另一方面，表儿茶酸、金雀异黄素、檞皮素、芦丁、山奈酚、橙皮苷、柚皮苷、柚皮素、β-胡罗卜素、α-胡罗卜素、番茄红素、木犀草素、β-隐黄质、辣椒红的溶解率为88％以下，难溶于水。这些结果意味着：对于溶解率为88％以下的难水溶性的植物化学物质而言，摄取含有多糖的乳酸菌产生物时会促进植物化学物质的吸收。另外，将在测定溶解率时得到的“(振荡溶解后的离心上清液的浓度(w/v))”称为“饱和溶解度”，一并记载于表1中。需要说明的是，作为糖苷的植物化学物质以糖苷配基换算值来记入。

[表1]

表1植物化学物质的溶解率

实验例1：β-胡罗卜素的吸收促进(OLL1251与其它菌株的对比)

(1)酸奶的制备

在包含10质量％的脱脂奶粉和0.5mM甲酸钠的培养基分别接种保加利亚乳杆菌OLL1251、保加利亚乳杆菌OLL1224、保加利亚乳杆菌OLL1247，然后将该培养基在43℃下发酵至pH4.6并进行加热。在由此得到的酸奶中，分别包含136μg/g、88μg/g、68μg/g的多糖。

(2)实验方法

将32只大鼠(SD、雄、8周龄、Japan SLC,Inc.)驯化7天后，将这些大鼠每8只分一组。进行16小时禁食后，对各组的大鼠分别给予β-胡罗卜素、β-胡罗卜素和酸奶(保加利亚乳杆菌OLL1251)、β-胡罗卜素和酸奶(保加利亚乳杆菌OLL1224)、β-胡罗卜素和酸奶(保加利亚乳杆菌OLL1247)。此处，以5mg/kg体重给予β-胡罗卜素、以11.3g/kg体重给予酸奶。在给予前、给予后60分钟、120分钟、240分钟、480分钟从尾静脉进行采血，得到了血清。依据上述的方法测定了β-胡罗卜素的血清中浓度。

以下，将给予了β-胡罗卜素的大鼠组(对照)称为“β-胡罗卜素组”，将给予了β-胡罗卜素和酸奶(保加利亚乳杆菌OLL1251)的大鼠组(实施例)称为“β-胡罗卜素+OLL1251组”，将给予了β-胡罗卜素和酸奶(保加利亚乳杆菌OLL1224)的大鼠组(比较例)称为“β-胡罗卜素+OLL1224组”，将给予了β-胡罗卜素和酸奶(保加利亚乳杆菌OLL1247)的大鼠组(比较例)称为“β-胡罗卜素+OLL1247组”。

(3)结果

将结果示于表2。对于血药浓度-时间曲线下面积(AUC)，与β-胡罗卜素组相比，β-胡罗卜素+OLL1251组、β-胡罗卜素+OLL1224组、β-胡罗卜素+OLL1247组中显著增加。该结果说明酸奶的摄取促进β-胡罗卜素的吸收。

[表2]

表2β胡罗卜素的血药浓度-时间曲线下面积(AUC)

平均值±标准偏差

*P＜0.05相对于β胡罗卜素组具有显著差异

实验例2：β-胡罗卜素的吸收促进(嗜热链球菌OLS3290单独)

(1)酸奶的制备

在包含10质量％的脱脂奶粉和0.1重量％的酪蛋白肽(DOMO制)的培养基中接种嗜热链球菌OLS3290、嗜热链球菌OLS3078后，将该培养基在43℃下发酵至pH4.6并进行加热。在由此得到的酸奶中，分别包含76.3μg/g、45.8μg/g的多糖。

(2)实验方法

将24只大鼠(SD、雄、8周龄、Japan SLC,Inc.)驯化7天后，将这些大鼠每8只分一组。进行16小时禁食后，对各组的大鼠分别给予β-胡罗卜素、β-胡罗卜素和酸奶(嗜热链球菌OLS3290)、β-胡罗卜素和酸奶(嗜热链球菌OLS3078)。此处，以5mg/kg体重给予β-胡罗卜素、以11.3g/kg体重给予酸奶。在给予前、给予后60分钟、120分钟、240分钟、480分钟从尾静脉进行采血，得到了血清。依据上述的方法测定了β-胡罗卜素的血清中浓度。

以下，将给予了β-胡罗卜素的大鼠组(对照)称为“β-胡罗卜素组”，将给予了β-胡罗卜素和酸奶(嗜热链球菌OLS3290)的大鼠组(参考例)称为“β-胡罗卜素+OLS3290组”，将给予了β-胡罗卜素和酸奶(嗜热链球菌OLS3078)的大鼠组(参考例)称为“β-胡罗卜素+OLS3078组”。

(3)结果

将结果示于表17。对于血药浓度-时间曲线下面积(AUC)，与β-胡罗卜素组相比，β-胡罗卜素+OLS3290组中显著增加。该结果说明酸奶的摄取促进β-胡罗卜素的吸收。

[表3]

表3β胡罗卜素的血药浓度-时间曲线下面积(AUC)

平均值±标准偏差

*P＜0.05相对于β胡罗卜素组具有显著差异

实验例3：β-胡罗卜素的吸收促进(保加利亚乳杆菌OLL1251与嗜热链球菌OLS3290 的组合)

(1)酸奶的制备

在包含10质量％的脱脂奶粉的培养基中接种市售的发酵剂(里海酸奶、FujiccoCo.,Ltd.制)、保加利亚乳杆菌OLL1247和嗜热链球菌OLS3078、保加利亚乳杆菌OLL1251和嗜热链球菌OLS3290，然后将该培养基在43℃下发酵至达到pH4.6为止并进行加热。在由此得到的酸奶中包含15μg/g、54μg/g、67μg/g的多糖。

(2)实验方法

将32只大鼠(SD、雄、8周龄、Japan SLC,Inc.)驯化7天后，将这些大鼠每8只分一组。进行16小时禁食后，对各组的大鼠分别给予β-胡罗卜素、β-胡罗卜素和酸奶(里海酸奶)、β-胡罗卜素和酸奶(保加利亚乳杆菌OLL1247和嗜热链球菌OLS3078)、β-胡罗卜素和酸奶(保加利亚乳杆菌OLL1251和嗜热链球菌OLS3290)。此处，以5mg/kg体重给予β-胡罗卜素、以11.3g/kg体重给予酸奶。在给予前、给予后60分钟、120分钟、240分钟、480分钟从尾静脉进行采血，得到了血清。依据上述的方法测定了β-胡罗卜素的血清中浓度。

以下，将给予了β-胡罗卜素的大鼠组(对照)称为“β-胡罗卜素组”，将给予了β-胡罗卜素和酸奶(里海酸奶)的大鼠组(比较例)称为“β-胡罗卜素+里海YG组”，将给予了β-胡罗卜素和酸奶保加利亚乳杆菌OLL1247和嗜热链球菌OLS3078)的大鼠组(比较例)称为“β-胡罗卜素+OLL1247×OLS3078组”，将给予了β-胡罗卜素和酸奶(保加利亚乳杆菌OLL1251和嗜热链球菌OLS3290)的大鼠组(实施例)称为“β-胡罗卜素+OLL1251×OLS3290组”。

(5)结果

将结果示于表4。对于血药浓度-时间曲线下面积(AUC)，与β-胡罗卜素组相比，β-胡罗卜素+OLL1247×OLS3078组、β-胡罗卜素+OLL1251×OLS3290组中显著增加。该结果说明酸奶的摄取促进β-胡罗卜素的吸收。

[表4]

表4β胡罗卜素的血药浓度-时间曲线下面积(AUC)

平均值±标准偏差

*P＜0.05相对于β胡罗卜素组具有显著差异

实验例4：檞皮素的吸收促进(保加利亚乳杆菌OLL1251与嗜热链球菌OLS3290的组 合)

(1)使用的酸奶

使用实验例3中制备的酸奶。

(2)实验方法

将24只大鼠(SD、雄、8周龄、Japan SLC,Inc.)驯化7天后，将这些大鼠每8只分一组。进行16小时禁食后，对各组的大鼠分别给予檞皮素、檞皮素和酸奶。此处，以50mg/kg体重给予檞皮素、以11.3g/kg体重给予酸奶。在给予前、给予后60分钟、120分钟、240分钟、480分钟从尾静脉进行采血，得到了血清。依据上述的方法测定了作为檞皮素代谢物的檞皮素缀合物、及异鼠李素缀合物的血清中浓度。

以下，将给予了檞皮素的大鼠组(对照)称为“檞皮素组”，将给予了檞皮素和酸奶(保加利亚乳杆菌OLL1247和嗜热链球菌OLS3078)的大鼠组(比较例)称为“檞皮素+OLL1247×OLL3078组”，将给予了檞皮素和酸奶(保加利亚乳杆菌OLL1251和嗜热链球菌OLS3290)的大鼠组(实施例)称为“檞皮素+OLL1251×OLL3290组”。

(3)结果

将结果示于表5。对于檞皮素缀合物的血药浓度-时间曲线下面积(AUC)，与檞皮素组相比，檞皮素+OLL1247×OLS3078组、檞皮素+OLL1251×OLS3290组中显著增加。该结果意味着基于乳酸菌的发酵促进檞皮素的吸收。

[表5]

表5檞皮素缀合物、异鼠李素缀合物的血药浓度-时间曲线下面积(AuC)

平均值±标准偏差

*P＜0.05相对于檞皮素组具有显著差异

实验例5：β-胡罗卜素的吸收促进(与其它吸收促进剂的比较)

(1)酸奶来源的多糖浓缩物的制备

取出实施例4的酸奶(保加利亚乳杆菌OLL1251和嗜热链球菌OLS3290)的一部分，在其上清液中添加3倍量的乙醇并进行冷冻保管。然后，对该上清液进行离心分离处理，结果得到沉淀物。然后，将该沉淀物冷冻干燥而得到多糖浓缩物。需要说明的是，在11.3g的酸奶中包含70mg的多糖浓缩物。以下，将得到的多糖浓缩物称为“乳酸菌来源多糖浓缩物”。

(2)实验方法

将48只大鼠(SD、雄、8周龄、Japan SLC,Inc.)驯化7天后，将这些大鼠每8只分一组。进行16小时禁食后，对各组的大鼠分别给予β-胡罗卜素、β-胡罗卜素和乳酸菌来源多糖浓缩物、β-胡罗卜素和环糊精(CycloChem Co.,Ltd.制)、β-胡罗卜素和淀粉(米来源)(SIGMA公司制)、β-胡罗卜素和果胶(苹果来源)(和光纯药工业制)、β-胡罗卜素和难消化性糊精(松谷化学制)。需要说明的是，以5mg/kg体重给予β-胡罗卜素、以70mg/kg体重给予多糖。在给予前、给予后60分钟、120分钟、240分钟、480分钟从尾静脉进行采血，得到了血清。

以下，为了便于说明，将给予了β-胡罗卜素的大鼠组(对照)称为“β-胡罗卜素组”，将给予了β-胡罗卜素和乳酸菌来源多糖浓缩物的大鼠组(实施例)称为“β-胡罗卜素+乳酸菌来源多糖浓缩物组”，将给予了β-胡罗卜素和环糊精的大鼠组(比较例)称为“β-胡罗卜素+乳酸菌来源多糖浓缩物组”，将给予了β-胡罗卜素和淀粉(米来源)的大鼠组(比较例)称为“β-胡罗卜素+淀粉(米来源)组”，将给予了β-胡罗卜素和果胶(苹果来源)的大鼠组(比较例)称为“β-胡罗卜素+果胶(苹果来源)组”，将给予了β-胡罗卜素和难消化性糊精的大鼠组(比较例)称为“β-胡罗卜素+难消化性糊精组”。

(5)结果

将结果示于表6。对于血清中浓度-时间曲线下面积(AUC)，与β-胡罗卜素组相比，β-胡罗卜素+乳酸菌来源多糖浓缩物组中显著增加。另一方面，与β-胡罗卜素组相比，β-胡罗卜素+环糊精组中显著降低。该结果意味着与其它多糖相比，乳酸菌来源的多糖的摄取促进β-胡罗卜素的吸收。

[表6]

表6β胡罗卜素的血药浓度-时间曲线下面积(AUC)

平均值±标准偏差

*P＜0.05相对于β胡罗卜素组具有显著差异

#P＜0.05相对于环糊精组、淀粉(米来源)组、难消化性糊精组具有显著差异

实验例6：人体中的β-胡罗卜素的吸收促进(添加至胡萝卜汁中)

(1)酸奶的制备

在包含10质量％的脱脂奶粉的培养基中接种保加利亚乳杆菌OLL1251和嗜热链球菌OLS3290后，将该培养基在43℃下发酵至达到pH4.6为止。

(2)实验方法

让5名被检者禁食12小时，然后摄取市售的胡萝卜汁180g(含有β-胡罗卜素11mg)，采集了摄取4小时后的血清。经过1周的清除后，摄取混合了前述胡萝卜汁180g和酸奶100g而成者，采集了摄取4小时后的血清。对得到的血清用生理盐水覆盖，立即通过超离心(155000×g、30分钟)进行离心分离，分级出乳糜微粒。

(3)结果

将结果示于表7。对于胡萝卜汁摄取前后的乳糜微粒级分的血浆β-胡罗卜素浓度的变化量，与胡萝卜汁组相比，胡萝卜汁+酸奶组中显著增加。该结果意味着在人体中基于乳酸菌的发酵促进胡萝卜汁中包含的β-胡罗卜素的吸收。

[表7]

表7胡萝卜汁摄取前后的乳糜微粒级分血浆β胡罗卜素浓度的变化量

平均值±标准偏差

*P＜0.05相对于胡萝卜汁组具有显著差异

实验例7：人体中的类胡萝卜素的吸收促进(添加至蔬菜汁)

(1)酸奶的制备

在包含10质量％的脱脂奶粉的培养基中接种保加利亚乳杆菌OLL1251和嗜热链球菌OLS3290，然后将该培养基在40℃下发酵至达到pH4.2为止。在由此得到的酸奶中包含90μg/g的多糖。

(2)实验方法

以20岁以上且小于35岁、BMI为18.5kg/m²以上且低于25.0kg/m²的10名男性被检者为对象实施了试验。进行16小时禁食后，使其单次摄取包含蔬菜汁100g(市售的菠菜泥、市售的番茄泥、市售的胡萝卜汁，包含α-胡罗卜素5mg、β-胡罗卜素10mg、叶黄素3mg、番茄红素10mg)和水100g的饮料、或包含前述蔬菜汁100g和酸奶100g的饮料中的任一种饮料。经过2周的清除后，使其单次摄取在第1次摄取试验中未摄取的饮料。在试验食品摄取前、摄取2小时后、4小时后、6小时后、8小时后进行采血，得到了血浆。

以下，为了便于说明，将摄取了蔬菜汁时(对照)称为“蔬菜汁组”，将摄取了蔬菜汁和酸奶时(实施例)称为“蔬菜汁+酸奶组”。

(3)结果

将结果示于表8。对于α-胡罗卜素、β-胡罗卜素、叶黄素、番茄红素的血清中浓度-时间曲线下面积(AUC)，与蔬菜汁组相比，蔬菜汁+酸奶组中显著增加。该结果意味着在人体中酸奶促进蔬菜汁中包含的类胡萝卜素的吸收。

[表8]

表8蔬菜汁来源类胡萝卜素的血药浓度-时间曲线下面积(AUC)

平均值±标准偏差

*P＜0.05相对于蔬菜汁组具有显著差异

实验例8：人体中的类胡萝卜素的吸收促进(添加至包含β-胡罗卜素和番茄红素的 制剂中)

(1)使用的酸奶

使用实验例7中制备的酸奶。

(2)实验方法

以20岁以上且小于35岁、BMI为18.5kg/m²以上且低于25.0kg/m²的9名男性被检者为对象实施了试验。进行16小时禁食后，使其单次摄取包含类胡萝卜素制剂25g(β-胡罗卜素10mg(San-Ei Gen F.F.I.，Inc.制、New Carotin Base 250)、番茄红素10mg(Lycored公司制、TOMATO-O-Red 2％SG))和水100g的饮料、或包含类胡萝卜素制剂25g和酸奶100g的饮料中的任一种饮料。经过2周的清除后，使其单次摄取在第1次摄取试验中未摄取的饮料。在试验食品摄取前、摄取2小时后、4小时后、6小时后及8小时后进行采血，得到了血浆。

以下，为了便于说明，将摄取了蔬菜汁时(对照)称为“类胡萝卜素制剂组”，将摄取了类胡萝卜素制剂和酸奶时(实施例)称为“类胡萝卜素制剂+酸奶组”。

(3)结果

将结果示于表9。对于β-胡罗卜素、番茄红素的血清中浓度-时间曲线下面积(AUC)，与类胡萝卜素制剂组相比，类胡萝卜素制剂+酸奶组中显著增加。该结果意味着在人体中酸奶促进类胡萝卜素制剂中包含的类胡萝卜素的吸收。

[表9]

表9类胡萝卜素制剂来源类胡萝卜素的血药浓度-时间曲线下面积(AUC)

平均值±标准偏差

*P＜0.05相对于类胡萝卜素制剂组具有显著差异

实验例9：β-隐黄质的吸收促进

(1)使用的酸奶

在包含10质量％的脱脂奶粉的培养基中接种保加利亚乳杆菌OLL1251和嗜热链球菌OLS3290，然后将该培养基在43℃下发酵至达到pH4.2为止并进行加热。在由此得到的酸奶中包含105.8μg/g的多糖。

(2)实验方法

将16只大鼠(SD、雄、8周龄、Japan SLC,Inc.)驯化7天后，将这些大鼠每8只分一组。进行16小时禁食后，对各组的大鼠分别给予β-隐黄质、β-隐黄质和酸奶。需要说明的是，以3mg/kg体重给予β-隐黄质、以11.3g/kg体重给予酸奶。在给予前、给予后60分钟、120分钟、240分钟、480分钟从尾静脉进行采血，得到了血清。以下，为了便于说明，将给予了β-隐黄质的大鼠组(对照)称为“β-隐黄质组”，将给予了β-隐黄质和酸奶的大鼠组(实施例)称为“β-隐黄质+酸奶组”。

(3)β-隐黄质的测定

在血清50μL中加入生理盐水90μL，加入二氯甲烷甲醇溶液(二氯甲烷：甲醇＝1：2)300μL。进而，加入己烷150μL提取β-胡罗卜素。将上层移至其它试管中，通过氮气回流而去除了溶剂。溶解于150μL的含有0.1％乙酸铵的30％乙酸乙酯70％甲醇溶液中，制备了HPLC用的样品。

(4)HPLC的分析条件

HPLC使用1200系列(Agilent Technologies公司制)。柱使用TSKgel ODS-80TsQA(5.0×250mm)(东曹公司制)，柱温度设定为40℃。对于流动相，制备了含有0.1％乙酸铵的30％乙酸乙酯70％甲醇溶液。需要说明的是，流速设定为0.3mL/分钟，测定了450nm的吸光波长。

(5)结果

将结果示于表10和图1。对于给予60分钟、120分钟、240分钟后的β-隐黄质的血药浓度，与β-隐黄质组相比，β-隐黄质+酸奶组中显著上升。另外，对于血液中曲线下面积(AUC)，与β-隐黄质组相比，β-隐黄质+酸奶组中显著增加。该结果说明酸奶的摄取促进β-隐黄质的吸收。需要说明的是，图中，“*”的符号表示在P＜0.05下相对于β-隐黄质组具有显著差异。

[表10]

平均值±标准偏差

*P＜0.05相对于β-隐黄质组具有显著差异

实验例10：辣椒红的吸收促进

(1)使用的酸奶

使用实验例9中使用的酸奶。

(2)实验方法

将16只大鼠(SD、雄、8周龄、Japan SLC,Inc.)驯化7天后，将这些大鼠每8只分一组。进行16小时禁食后，对各组的大鼠分别给予辣椒红、辣椒红和酸奶。需要说明的是，以5mg/kg体重给予辣椒红、以11.3g/kg体重给予酸奶。在给予前、给予后60分钟、120分钟、240分钟、480分钟从尾静脉进行采血，得到了血清。以下，为了便于说明，将给予了辣椒红的大鼠组(对照)称为“辣椒红组”，将给予了辣椒红和酸奶的大鼠组(实施例)称为“辣椒红+酸奶组”。

(3)辣椒红的测定

在血清50μL中加入生理盐水90μL，加入二氯甲烷甲醇溶液(二氯甲烷：甲醇＝1：2)300μL。进而，加入己烷150μL提取β-胡罗卜素。将上层移至其它试管中，通过氮气回流而去除了溶剂。溶解于150μL的含有0.1％乙酸铵的30％乙酸乙酯70％甲醇溶液中，制备了HPLC用的样品。

(4)HPLC的分析条件

HPLC使用1200系列(Agilent Technologies公司制)。柱使用TSKgel ODS-80TsQA(5.0×250mm)(东曹公司制)，柱温度设定为40℃。对于流动相，制备了含有0.1％乙酸铵的30％乙酸乙酯70％甲醇溶液。需要说明的是，流速设定为0.3mL/分钟，对470nm的吸光波长进行测定。

(5)结果

将结果示于表11和图2。对于给予后60分钟、120分钟、240、480分钟的辣椒红的血药浓度，与辣椒红组相比，辣椒红+酸奶组中显著上升。另外，对于血液中曲线下面积(AUC)，与辣椒红组相比，辣椒红+酸奶组中显著增加。该结果说明酸奶的摄取促进辣椒红的吸收。需要说明的是，图中，“*”的符号表示在P＜0.05下相对于辣椒红组具有显著差异。

[表11]

平均值±标准偏差

*P＜0.05相对于辣椒红组具有显著差异

实验例11：橙皮苷的吸收促进

(1)使用的酸奶

使用实验例9中使用的酸奶。

(2)实验方法

将16只大鼠(SD、雄、8周龄、Japan SLC,Inc.)驯化7天后，将这些大鼠每8只分一组。进行16小时禁食后，对各组的大鼠分别给予橙皮苷、橙皮苷和酸奶。需要说明的是，以162mg/kg体重给予橙皮苷、以11.3g/kg体重给予酸奶。在给予前、给予后60分钟、120分钟、240分钟从尾静脉进行采血，得到了血清。以下，为了便于说明，将给予了橙皮苷的大鼠组(对照)称为“橙皮苷组”，将给予了橙皮苷和酸奶的大鼠组(实施例)称为“橙皮苷+酸奶组”。

(3)橙皮素代谢物的测定

如下测定了作为橙皮苷代谢物的橙皮素缀合物。在血清50μL中加入溶解于0.1M乙酸钠缓冲液(pH5.0)的葡糖醛酸糖苷酶溶液45μL(10000U/mL、Sigma-Aldrich公司制)、溶解于0.1M乙酸钠缓冲液(pH5.0)中的0.1M抗坏血酸溶液5μL，在37℃下加热2小时。加入甲醇300μL使酶反应停止，进行离心分离(12000rpm、10分钟、4℃)。将上清液移至其它试管中，通过离心浓缩去除了溶剂。溶解于300μL的含有0.1％甲酸的50％乙腈溶液中，制备了HPLC用的样品。

(4)HPLC的分析条件

HPLC使用Nexera XR(岛津制作所制)、MS/MS检测器使用4500QTRAP(SCIEX公司制)。柱使用ACQUITY UPLC HSS T31.8μm(2.1×50mm)(Waters公司制)，柱温度设定为40℃。对于流动相，制备了含有0.1％的甲酸溶液作为A液，制备了含有0.1％甲酸的乙腈溶液作为B液。用B液30％保持1分钟，然后以4.5分钟递减至B液45％，洗脱了目标物质。然后，用B液99％将柱清洗2分钟，用B液30％保持3分钟。需要说明的是，流速设定为0.3mL/分钟。MS/MS分析以ESI负离子模式进行分析。MS/MS的分析条件为：气帘气流量30psi、碰撞气流量9psi、离子喷雾电压-4500V、涡轮燃气温度600℃、离子源气体70psi。

(5)结果

将结果示于表12和图3。对于给予后60分钟的橙皮素缀合物的血药浓度，与橙皮苷组相比，橙皮苷+酸奶组中显著上升。另外，对于血液中曲线下面积(AUC)，与橙皮苷组相比，橙皮苷+酸奶组中显著增加。该结果说明酸奶的摄取促进橙皮素缀合物的吸收。需要说明的是，图中，“*”的符号表示在P＜0.05下相对于橙皮苷组具有显著差异。

[表12]

平均值±标准偏差

*P＜0.05相对于橙皮苷组具有显著差异

实验例12：乳酸菌发酵中的pH的推移

(1)实验方法

在包含10质量％的脱脂奶粉的培养基中仅接种保加利亚乳杆菌OLL1251，接种保加利亚乳杆菌OLL1251和嗜热链球菌OLS3290，然后将该培养基在43℃下使其发酵，确认了pH的变化。

(2)结果

将结果示于表13。与用保加利亚乳杆菌OLL1251单独发酵相比，通过使保加利亚乳杆菌OLL1251与嗜热链球菌OLS3290组合并使其发酵，从而使pH的降低快速进行。该结果意味着乳酸菌的活性是活跃的，进而也意味着多糖的产生很多。由该结果确认了：通过菌的组合而可缩短用于产生多糖的发酵时间。

[表13]

实验例13：人体中的类胡萝卜素的吸收促进(添加至胡萝卜汁中)

(1)酸奶的制备

在包含10质量％的脱脂奶粉的培养基中接种保加利亚乳杆菌OLL1251和嗜热链球菌OLS3290，然后将该培养基在40℃下发酵至达到pH4.2为止。在由此得到的酸奶中包含90μg/g的多糖。

(2)实验方法

以20岁以上且小于35岁、BMI为18.5kg/m²以上且低于25.0kg/m²的男性被检者16名为对象实施了试验。进行16小时禁食后，使其单次摄取包含胡萝卜汁100g(市售的胡萝卜汁，包含α-胡罗卜素6mg、β-胡罗卜素10mg)和水100g的饮料、或包含前述胡萝卜汁100g和酸奶100g的饮料中的任一种饮料。经过2周的清除后，使其单次摄取在第1次摄取试验中未摄取的饮料。在试验食品摄取前、摄取2小时后、4小时后、6小时后、8小时后进行采血，得到了血浆。

以下，为了便于说明，将摄取了胡萝卜汁时(对照)称为“胡萝卜汁组”，将摄取了胡萝卜汁和酸奶时(实施例)称为“胡萝卜汁+酸奶组”。

(3)结果

将结果示于表14。对于α-胡罗卜素、β-胡罗卜素的血浆中浓度-时间曲线下面积(AUC)，与胡萝卜汁组相比，胡萝卜汁+酸奶组中显著增加。该结果意味着在人体中酸奶促进胡萝卜汁中包含的类胡萝卜素的吸收。

[表14]

平均值±标准偏差

*P＜0.05相对于胡罗卜汁组具有显著差异

实验例14：人体中的类胡萝卜素的吸收促进(添加至番茄汁中)

(1)酸奶的制备

在包含10质量％的脱脂奶粉的培养基中接种保加利亚乳杆菌OLL1251和嗜热链球菌OLS3290，然后将该培养基在40℃下发酵至达到pH4.2为止。在由此得到的酸奶中包含90μg/g的多糖。

(2)实验方法

以20岁以上且小于35岁、BMI为18.5kg/m²以上且低于25.0kg/m²的男性被检者15名为对象实施了试验。进行16小时禁食后，使其单次摄取包含番茄汁100g(市售的番茄汁(包含番茄红素10mg)和水100g的饮料、或包含前述番茄汁100g和酸奶100g的饮料中的任一种饮料。经过2周的清除后，使其单次摄取在第1次摄取试验中未摄取的饮料。在试验食品摄取前、摄取2小时后、4小时后、6小时后、8小时后进行采血，得到了血浆。

以下，为了便于说明，将摄取了番茄汁时(对照)称为“番茄汁组”，将摄取了番茄汁和酸奶时(实施例)称为“番茄汁+酸奶组”。

(3)结果

将结果示于表15。对于番茄红素的血浆中浓度-时间曲线下面积(AUC)，与蔬菜汁组相比，番茄汁+酸奶组中显著增加。该结果意味着在人体中酸奶促进番茄汁中包含的类胡萝卜素的吸收。

[表15]

平均值±标准偏差

*P＜0.05相对于番茄汁组具有显著差异

实验例15：人体中的类胡萝卜素的吸收促进(添加至菠菜汁中)

(1)酸奶的制备

在包含10质量％的脱脂奶粉的培养基中接种保加利亚乳杆菌OLL1251和嗜热链球菌OLS3290，然后将该培养基在40℃下发酵至达到pH4.2为止。在由此得到的酸奶中包含90μg/g的多糖。

(2)实验方法

以20岁以上且小于35岁、BMI为18.5kg/m²以上且低于25.0kg/m²的男性被检者16名为对象实施了试验。进行16小时禁食后，使其单次摄取包含菠菜汁100g(市售的菠菜汁，包含叶黄素4.0mg、β-胡罗卜素2.4mg)和水100g的饮料、或包含前述菠菜汁100g和酸奶100g的饮料中的任一种饮料。经过2周的清除后，使其单次摄取在第1次摄取试验中未摄取的饮料。在试验食品摄取前、摄取2小时后、4小时后、6小时后、8小时后进行采血，得到了血浆。

以下，为了便于说明，将摄取了菠菜汁时(对照)称为“菠菜汁组”，将摄取了菠菜汁和酸奶时(实施例)称为“菠菜汁+酸奶组”。

(3)结果

将结果示于表16。对于叶黄素、β-胡罗卜素的血浆中浓度-时间曲线下面积(AUC)，与菠菜汁组相比，菠菜汁+酸奶组中显著增加。该结果意味着在人体中酸奶促进菠菜汁中包含的类胡萝卜素的吸收。

[表16]

平均值±标准偏差

*P＜0.05相对于菠菜汁组具有显著差异

实验例16：人体中的类胡萝卜素的吸收促进(添加至温州橙子汁中)

(1)酸奶的制备

在包含10质量％的脱脂奶粉的培养基中接种保加利亚乳杆菌OLL1251和嗜热链球菌OLS3290，然后将该培养基在40℃下发酵至达到pH4.2为止。在由此得到的酸奶中包含90μg/g的多糖。

让5名被检者禁食12小时后，使其摄取市售的橙子汁100g(含有β-隐黄质3mg)，采集了摄取4小时后的血清。经过1周的清除后，使其摄取混合前述橙子汁100g和酸奶100g而成者，采集了摄取4小时后的血清。

(3)结果

将结果示于表17。对于橙子汁摄取前后的血浆β-隐黄质浓度的变化量，与橙子汁组相比，橙子汁+酸奶组中显著增加。该结果意味着在人体中基于乳酸菌的发酵促进橙子汁中包含的类胡萝卜素的吸收。

[表17]

平均值±标准偏差

*P＜0.05相对于橙汁组具有显著差异。