阅读说明：本技术 一种单克隆抗体的制备方法 (Preparation method of monoclonal antibody ) 是由 詹爱军 单君忆 招沐 闫文龙 于 2019-11-21 设计创作，主要内容包括：一种单克隆抗体的制备方法。涉及单克隆抗体,尤其涉及一种单克隆抗体的制备方法。提供了一种方便可靠,降低成本,提高产量的单克隆抗体的制备方法。所述完全培养基为SFM培养基,不完全培养基为DMEM培养基。无血清细胞培养基中还包括维生素B6、维生素E和叶酸。本发明使用杂交瘤细胞培养法生产单克隆抗体,产量高且方法简便。其既不需要使用实验动物,也不需要特设设备,且抗体产生的量也高于常规方法；使用本方法所产生的单克隆抗体比常规的培养方法抗体量高20-25倍。本发明节省了成本,保证了质量。(A method for preparing monoclonal antibody. Relates to a monoclonal antibody, in particular to a preparation method of the monoclonal antibody. Provides a convenient and reliable preparation method of the monoclonal antibody, which reduces the cost and improves the yield. The complete culture medium is an SFM culture medium, and the incomplete culture medium is a DMEM culture medium. The serum-free cell culture medium also comprises vitamin B6, vitamin E and folic acid. The invention uses the hybridoma cell culture method to produce the monoclonal antibody, has high yield and simple and convenient method. It does not require the use of experimental animals nor special equipment, and the amount of antibody production is higher than that of conventional methods; the monoclonal antibody produced by the method is 20-25 times higher than that produced by the conventional culture method. The invention saves cost and ensures quality.)

一种单克隆抗体的制备方法

技术领域

本发明涉及单克隆抗体，尤其涉及一种单克隆抗体的制备方法。

背景技术

单克隆抗体，由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤(hybridoma)抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群，可制备针对一种抗原表位的特异性抗体即单克隆抗体。

现有技术中，如何制备质量好产量高的单克隆抗体是当前研究的重要问题，通常用于生产单克隆抗体的方法有两种：①利用纯系小鼠生产免疫腹水，该法的优点是产量和效价高，但纯化困难，价格昂贵，生产周期长：②杂交瘤细胞常规体外培养法，此法虽然产量不高效价低，但不含正常小鼠免疫球蛋白，较易纯化且成本低，但此法若需大量生产则需特殊设备。

发明内容

本发明针对以上问题，提供了一种方便可靠，降低成本，提高产量的单克隆抗体的制备方法。

本发明的技术方案为：包括以下步骤：

1）制备无血清细胞培养基；

2）将无血清细胞培养基置于容器内，无血清细胞培养基的体积为容器的1/10；

3）将杂交瘤细胞初次接种到容器中，杂交瘤细胞密度控制在2-5 * 105个/ml；

4）待杂交瘤细胞生长到48小时后，进行补充1/4容积量的无血清细胞培养基，随后每48小时后补充一次，每次补充1/4容积量，直到容器内的无血清细胞培养基完全满，进行单克隆抗体的生产。

步骤1）中，无血清细胞培养基包括完全培养基和/或不完全培养基。

步骤1）中，在细胞培养过程中每24小时一次，添加葡萄糖，葡萄糖的浓度为50-100mmol/ml。

步骤1）中，在细胞培养过程中每24小时一次，添加丙酮酸钠，丙酮酸钠的浓度为20-50mmol/ml。

所述完全培养基为SFM培养基，不完全培养基为DMEM培养基。

无血清细胞培养基中还包括维生素B6、维生素E和叶酸。

本发明使用杂交瘤细胞培养法生产单克隆抗体，产量高且方法简便。其既不需要使用实验动物，也不需要特设设备，且抗体产生的量也高于常规方法；使用本方法所产生的单克隆抗体比常规的培养方法抗体量高20-25倍。

本发明节省了成本，保证了质量。

具体实施方式

本发明包括以下步骤：

1）制备无血清细胞培养基；

2）将无血清细胞培养基置于容器内，无血清细胞培养基的体积为容器的1/10；

3）将杂交瘤细胞初次接种到容器中，杂交瘤细胞密度控制在2-5 * 105个/ml；

4）待杂交瘤细胞生长到48小时后，进行补充1/4容积量的无血清细胞培养基，随后每48小时后补充一次，每次补充1/4容积量，直到容器内的无血清细胞培养基完全满，进行单克隆抗体的生产。

步骤1）中，无血清细胞培养基包括完全培养基和/或不完全培养基。

步骤1）中，在细胞培养过程中每24小时一次，添加葡萄糖，葡萄糖的浓度为50-100mmol/ml。

步骤1）中，在细胞培养过程中每24小时一次，添加丙酮酸钠，丙酮酸钠的浓度为20-50mmol/ml。

所述完全培养基为SFM培养基，不完全培养基为DMEM培养基。

无血清细胞培养基中还包括维生素B6、维生素E和叶酸。通过加入维生素等，使得培养基能够使杂交瘤细胞快速生长，满足培养的需求。

本发明使用杂交瘤细胞培养法生产单克隆抗体，产量高且方法简便。提供了一种静止无血清培养杂交瘤细胞株培养法，其具体内容如下：细胞使用无血清培养基；细胞培养过程中24小时一次，添加一定量的葡萄糖（50-100mmol/ml）；细胞培养过程中24小时一次，添加一定量的丙酮酸钠（20-50mmol/ml）；

根据所用细胞容器大小，培养基的量为容器的1/10；杂交瘤细胞初次接种到容器中的比例严格控制在2-5 X 105个/ml；杂交瘤细胞生长到48小时后进行补充1/4容积量的培养基，随后每48小时后补充一次，每次1/4容积量，直到培养基完全满，随后培养之细胞培养基变黄；随后可以按此方法循环。

根据该方法所产生的单克隆抗体比常规的培养方法抗体量高20-25倍。

以上，仅为本案所公开的具体实施方式，但本公开的保护范围并不局限于此，本案所公开的保护范围应以权利要求的保护范围为准。