二至方在制备防治便秘的药物中的用途
阅读说明：本技术 二至方在制备防治便秘的药物中的用途 (Application of two formulas in preparation of medicine for preventing and treating constipation ) 是由 高秀梅 毛浩萍 刘二伟 吕彬 赵鑫 周巍 陈璐 蔡明琪 于 2021-02-09 设计创作，主要内容包括：本发明属于中医药领域,涉及二至方在制备防治便秘的药物中的用途。具体地,本发明涉及选自如下的(1)-(3)项中的任一项在制备治疗或预防便秘的药物中的用途：(1)中药组合物,包括女贞子和墨旱莲；(2)提取物,其为第(1)项中的中药组合物的水提物和/或乙醇溶液提取物；(3)药物制剂,其包含第(2)项中的提取物,以及一种或多种药学上可接受的辅料；优选地,所述药物制剂为二至丸。二至方或其提取物能够有效地治疗和/或预防便秘的药物；有效地抑制慢传输型便秘或阿片类药物引起的便秘。(The invention belongs to the field of traditional Chinese medicines, and relates to application of two formulas in preparation of a medicine for preventing and treating constipation. Specifically, the present invention relates to the use of any one of the following items (1) to (3) for the preparation of a medicament for treating or preventing constipation: (1) a Chinese medicinal composition comprising fructus Ligustri Lucidi and Ecliptae herba; (2) an extract which is an aqueous extract and/or an ethanol solution extract of the Chinese medicinal composition of item (1); (3) a pharmaceutical formulation comprising the extract of item (2), and one or more pharmaceutically acceptable excipients; preferably, the pharmaceutical formulation is a two to one pill. A drug capable of effectively treating and/or preventing constipation; effectively inhibit slow transit constipation or opioid-induced constipation.)
技术领域
本发明属于中医药领域，涉及二至方在制备防治便秘的药物中的 用途。本发明还涉及一种二至方提取物。
背景技术
便秘的主要表现是排便次数减少和排便困难，许多患者的排便次 数每周少于3次，严重者长达2-4周才排便一次。有的患者可突出地 表现为排便困难，排便时间可长达30分钟以上，或每日排便多次，但 排出困难，且数量很少。此外，还有腹胀、食欲缺乏，以及服用泻药 不当引起排便前腹痛等情形。
慢传输型便秘(slow transit constipation，STC)主要表现为排便 次数减少、排便困难和便意减少或消失，近年来该病呈高发趋势，在 我国患病较多。目前，STC的发病机制尚不清楚，学术界对STC发 生的病理生理学研究也不够深入，因此对便秘的程度量化及治疗仍未 统一标准，临床多采用泻药及促胃肠动力药进行治疗。
根据WHO癌痛三阶梯治疗原则，阿片类止痛药是中重度癌痛治 疗的首选药物。国内报道认为，阿片类镇痛药诱发便秘发生率高达 90％-100％，且持续存在于止痛治疗的全过程。随着服用阿片类药物 的时间延长，病人便秘加重，同时伴随着恶心呕吐、腹胀腹痛等胃肠 道副作用，因此许多患者一旦出现阿片类便秘现象便停止药物治疗。 阿片类药物引起的便秘(opioid-induced constipation，OIC)是一种 慢传输型便秘；阿片类药物引起的便秘等胃肠道副作用已成为癌症治 疗过程中亟需解决的重要问题。
二至方由女贞子和墨旱莲等质量配伍组成，女贞子以果实入药， 冬至时节采收，而墨旱莲以全草入药，夏至季节采收；制成丸剂称为 二至丸。二至丸是国产药品，由天津中新药业集团股份有限公司乐仁 堂制药厂等企业生产。用于补益肝肾，滋阴止血。用于肝肾阴虚，眩 晕耳鸣，咽干鼻燥，腰膝酸痛，月经量多。二至方的药理作用主要包 括免疫调节作用、抗氧化以及抗衰老作用、保肝作用、抗骨质疏松的 作用、抗炎作用、抗肿瘤作用，激素样作用等，未见有便秘方面的应 用。
目前，尚需要开发新的用于防治便秘的药物，尤其适合于慢传输 型便秘或阿片类药物引起的便秘的药物。
发明内容
本发明人经过深入的研究和创造性的劳动，惊奇地发现女贞子和 墨旱莲两者配伍，能够有效地防治便秘特别是慢传输型。由此提供了 下述发明：
本发明的一个方面涉及选自如下的(1)-(3)项中的任一项在制 备治疗或预防便秘的药物中的用途：
(1)中药组合物，包括女贞子和墨旱莲；
(2)提取物，其为第(1)项中的中药组合物的水提物和/或乙醇 溶液提取物；
(3)药物制剂，其包含第(2)项中的提取物，以及一种或多种 药学上可接受的辅料；优选地，所述药物制剂为丸剂(例如二至丸)、 颗粒剂、口服液剂、片剂或胶囊剂。
在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，所述便秘为慢 传输型便秘，例如阿片类药物引起的便秘。
在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，
所述中药组合物包括：女贞子0.5-1.5重量份、墨旱莲0.5-1.5重 量份；
优选地，所述中药组合物包括：女贞子0.8-1.2重量份、墨旱莲 0.8-1.2重量份；
优选地，所述中药组合物包括：女贞子1重量份、墨旱莲1重量 份；
优选地，所述中药组合物由女贞子和墨旱莲组成；
优选地，所述中药组合物为二至方；
优选地，所述女贞子和所述墨旱莲为药材或者药材粉末；优选地， 药材粉末的平均粒径为100-250目。所述药材可以是生药或者饮片。
在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，第(2)项中， 所述提取物通过包括如下步骤的制备方法制得：
1)将第(1)项的中药组合物用50％-95％(v/v)的乙醇溶液进 行回流提取1次或多次，得到中药组合物提取液；或者将第(1)项的 中药组合物中的各味药材分别用50％-95％(v/v)的乙醇溶液进行回 流提取1次或多次，合并各味药材的提取液得到合并提取液；
2)将中药组合物提取液或者合并提取液浓缩，得到浓缩物；
3)将浓缩物冻干，得到冻干产物，即提取物。
在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其特征在于如下的A 项-C项中的任意一项或者任意多项：
A.步骤1)中，乙醇溶液的浓度独立地为50％-85％(v/v)、 55％-80％(v/v)、55％-75％(v/v)、55％-65％(v/v)或60％(v/v)；
B.步骤1)中，乙醇溶液的用量独立地为3-15倍体积、5-12倍 体积或5-10倍体积；
C.步骤1)中，提取时间独立地为0.5-5小时、0.5-3小时或0.5-2 小时。
上述A、B和/C项中，所述“独立地”是指将第(1)项的中药 组合物作为一个整体进行回流提取的情形，或者将第(1)项的中药组 合物中的各味药材分别进行回流提取的情形，这两种情形之间是独立 的。
在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，第(1)项、第 (2)项或第(3)项的单位剂量按照中药组合物的重量来计算，为3-15 g，优选为6-12g，特别优选为8-10g例如9g。
在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，第(1)项、第 (2)项或第(3)项的给药剂量按照中药组合物的重量来计算，为3-15 g/人，优选为6-12g/人，特别优选为8-10g/人例如9g/人；
优选地，第(1)项、第(2)项或第(3)项的给药途径为口服给 药。
在本发明的一些实施方式中，所述的用途，其中，第(3)项中， 所述药物制剂为口服制剂，例如片剂、胶囊剂、丸剂或颗粒剂。
本发明中，如果没有特别说明，术语“二至方”是指女贞子和墨 旱莲(俗称旱莲草)构成的方剂，术语“二至丸”是指通过工业生产 获得的制剂。
通常本发明的药物制剂含有作为主药的0.1重量％－90重量％的 中药组合物或其提取物。药物制剂可根据本领域已知的方法制备。用 于此目的时，如果需要，可将主药与一种或多种固体或液体药物赋形 剂和/或辅剂结合，制成可作为人用的适当的施用形式或剂量形式。
术语“辅料”在本申请中是指用以将主药给药的赋形剂或者媒介 物，其包括但不限于稀释剂、崩解剂、沉淀抑制剂、表面活性剂、助 流剂、粘合剂、润滑剂、包衣材料等。辅料在E.W.Martin的 “Remington's Pharmaceutical Sciences”中被一般性描述。辅料的实例包括但不限于单硬脂酸铝、硬脂酸铝、羧甲基纤维素、羧甲基纤维 素钠、交聚维酮、异硬脂酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、羟基乙基纤维 素、羟基甲基纤维素、羟基硬脂酸羟基二十八酯、羟基丙基纤维素、 羟基丙基甲基纤维素、乳糖、乳糖一水合物、硬脂酸镁、甘露醇、微 晶纤维素等。
二至方或二至方提取物可配制成药物制剂，包括适用于口服给药 的剂型，适用于胃肠外注射(例如静脉注射、皮下注射)的剂型(例 如作为溶液剂)，适用于表面给药的剂型(例如作为软膏剂、贴剂或 者乳膏剂)，以及适用于直肠给药的剂型(例如作为栓剂)等。
术语“有效量”是指可在受试者中实现治疗、预防、减轻和/或缓 解本发明所述疾病或病症的剂量。
术语“连续给药”为一段时间之内实现每天都给药，每天的给药 次数并不特别限定，例如1次、2次、3次或以上。
本发明中，如果没有特别说明，乙醇溶液的浓度为体积百分比浓 度(v/v％)。
本发明中，如果没有特别说明，人或者小鼠的给药的重量均是指 或者折合成女贞子药材和墨旱莲药材的合计重量。对于给药剂量涉及 每人(/人)的情形，是指成年人，优选体重为60-70kg的成年人。
发明的有益效果
二至方或其提取物能够有效地治疗和/或预防便秘的药物；有效地 抑制慢传输型便秘或阿片类药物引起的便秘。
附图说明
图1：二至方对洛哌丁胺盐酸盐导致的小鼠便秘后粪便粒数的影 响。
图2：二至方对洛哌丁胺盐酸盐导致的小鼠便秘后粪便湿重的影 响
图3：二至方对洛哌丁胺盐酸盐导致的小鼠便秘后粪便干重的影 响
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领 域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限 定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造 商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通 过市购获得的常规产品。
实施例1：二至方提取物的制备(1)
女贞子提取物的制备：取女贞子药材1kg(河北安国顺全隆药材 公司提供)，加入10倍量的80％乙醇，加热至沸腾，回流提取2次， 每次2h，合并提取液，浓缩至浓溶液后真空50℃干燥，得女贞子浸膏 254g，经计算其出膏率为25.4％。
墨旱莲提取物的制备：取墨旱莲药材1kg(河北安国顺全隆药材 公司提供)，加入10倍量的饮用水，加热至沸腾，回流提取2次，每 次2h，合并提取液，提取液浓缩干燥得墨旱莲浸膏232g，经计算其出 膏率为23.2％。
将上述女贞子提取物和墨旱莲提取物按照生药质量比1：1混合， 可得二至方提取物。
实施例2：二至方提取物的制备(2)
二至方中使用的女贞子、墨旱莲生药，均购自北京同仁堂天津南 开大药房，经鉴定符合中国药典标准。
女贞子提取物的制备：将500g女贞子浸泡于5L浓度60％(体积 百分比浓度，下同)的乙醇0.5h，后加热回流提取2h，滤出煎液；再 次加入5L浓度60％的乙醇提取2h，滤出并混合两次煎液；使用旋转 蒸发仪浓缩煎液，再通过冷冻干燥12h，制得女贞子浸膏120.0g，经计算其提取率为24％。
墨旱莲提取物的制备：将500g墨旱莲浸泡于5L浓度60％(体积 百分比浓度，下同)的乙醇0.5h，后加热回流提取2h，滤出煎液；再 次加入5L浓度60％的乙醇提取2h，滤出并混合两次煎液；使用旋转 蒸发仪浓缩煎液，再通过冷冻干燥12h，制得墨旱莲浸膏118.5g，经计算其提取率为23.7％。
将上述女贞子提取物和墨旱莲提取物按照生药质量比1：1混合， 可得二至方提取物。
实施例3：二至方提取物促进肠组织收缩作用研究
1.实验样品和实验材料
样品：实施例2制备女贞子提取物和墨旱莲提取物作为二至方提 取物，配制二至方混悬液。具体配置步骤如下：
首先配置28mg/mL剂量组混悬液：取336mg女贞子提取物， 331.8mg墨旱莲提取物加入10ml的纯水中，充分混匀后4℃保存，使 用前摇匀，取1ml药液加入9ml k-H液中，使浴槽内药物浓度为 28mg/ml。随后将其按1:1依次稀释即为其它浓度。
离体肠肌的制备：取健康雄性豚鼠，180-200g，实验前禁食24h， 期间自由饮水，脱颈处死后立即剖开腹腔，取出胃及全肠(胃贲门至 直肠肛门部分)，初步分离肠系膜及相连接的腹部脂肪。自食管向下 取豚鼠小肠8-10cm，肛门向上取豚鼠结肠约8-10cm，分离干净表面 血管及肠系膜，剪成1-2cm肠管备用。使用经95％O2+5％CO2混合 气体通气0.5h的低温K-H液(克-亨氏液，Kreb-Henseleit液)冲洗 肠腔内容物及肠液并保存于K-H液中。
2.实验方法
将用丝线将肠管的两端打结，一端系于固定钩上，另一端系于连 接信号采集系统的张力换能器上。使水浴槽内的温度保持为37± 0.5℃，将肠段浸没于加入10ml K-H液的浴槽中，继续适度通气， 使气泡呈连续线状或鱼眼状。
设置离体肠段初始张力为1g，平衡0.5h，记录5min结肠(或 小肠)正常活动曲线，随后加入实验药品，观察并记录结肠(或小肠) 收缩曲线变化情况。
2.1二至方提取物对离体肠肌(分别为小肠和结肠)活动的影响
当豚鼠离体肠段在组织浴槽中稳定0.5h，产生规律收缩后，先记 录5min正常活动曲线，然后在各浴槽中分别加入不同剂量的二至方 混悬液，使浴槽内的药物终浓度分别为3.5mg/ml、7mg/ml、14mg/ml、 28mg/ml(3.5mg/ml为浴槽内每mL的K-H液中含的提取物按照生 药的质量计算为1.75mg/ml女贞子生药和1.75mg/ml墨旱莲生药，其 它浓度以此类推)，加药后观察5min，记录药物发生作用后的平均 收缩力变化情况。
2.2二至方提取物对阿托品松弛豚鼠离体肠肌(分别为小肠和结 肠)活动的影响
阿托品是M胆碱受体拮抗剂，具有显著地松弛肠肌，抑制收缩的 作用，可用于模拟便秘状况下的肠肌运动状态。故除正常对照组加入 等体积的纯水外，其他各组均在浴槽中加入阿托品，使浴槽内阿托品 终浓度为10-4M，当肠收缩被显著抑制且平稳3-5min后，除阿托品 组加入等体积纯水外，二至方各组均加入不同剂量的二至方混悬液， 使与槽内的药物终浓度为3.5mg/ml、7.0mg/ml、14.0mg/ml、28.0 mg/ml(3.5mg/ml为浴槽内每mL的K-H液中含的提取物按照生药 的质量计算为1.75mg/ml女贞子生药和1.75mg/ml墨旱莲生药，其它 浓度以此类推)，加药后观察5min，记录药物发生作用后的平均收 缩力变化情况。
3.实验结果
3.1.1二至方提取物对豚鼠离体小肠活动的影响
如下面的表1所示。
表1：二至方提取物对豚鼠离体小肠活动的影响(n＝4)
与二至方给药前比，*p＜0.01。
表1显示，二至方提取物对豚鼠离体小肠具有明显的促收缩作用， 并存在一定的剂量相关性。给药后短时间内肠收缩力即上升，但药物 作用时间较短，随着时间的延长，收缩力逐渐下降。与给药前相比， 二至方提取物给药后肠收缩力显著上升，且在给药后1min收缩力最 高(P＜0.01或P＜0.05)，而后随着时间的延长，给药后3min、5min 内收缩力逐渐下降。
3.1.2二至方提取物对豚鼠离体结肠活动的影响
如下面的表2所示。
表2：二至方提取物对豚鼠离体结肠活动的影响(n＝8)
与二至方给药前比，*p＜0.01。
表2显示，二至方提取物对豚鼠离体结肠自发收缩具有明显促进 作用，表现为给药后其收缩力的显著上升，且随着二至方剂量的加大， 收缩力上升幅度越显著。与给药前相比，二至方提取物给药后肠收缩 力显著上升(P＜0.01或P＜0.05)，且在给药后1min时收缩力变化 最显著(P＜0.01或P＜0.05)，而后随着时间的延长，收缩力逐渐下 降。
表1和表2的结果说明二至方具有直接促进小肠及结肠收缩的作 用，提示二至方的抗便秘作用是广谱性质的。
3.2.1二至方提取物对阿托品给药豚鼠离体小肠活动的影响
如下面的表3所示。
表3：二至方提取物对阿托品给药豚鼠离体小肠运动的影响(n＝6)
与二至方给药前比，*p＜0.01；与阿托品给药后相比，#p＜0.01。
表3显示，阿托品(10-4M)可显著抑制豚鼠离体小肠自发活动(P ＜0.01或P＜0.05)，与给予阿托品前比较，阿托品可使肠收缩力下 降约1/2；与阿托品+纯水组比较，不同剂量二至方提取物组均可显著 逆转阿托品对豚鼠离体小肠的松弛。给药后1min、3min、5min均 可观察到肠收缩力明显恢复(P＜0.01或P＜0.05)，并高于给药前初 始收缩力。
3.2.2二至方提取物对阿托品松弛豚鼠离体结肠活动的影响
如下面的表4所示。
表4：二至方提取物对阿托品给药豚鼠离体结肠运动的影响(n＝8)
与二至方给药前比，*p＜0.01；与阿托品给药后相比，#p＜0.01。
表4显示，阿托品(10-4M)给药后可显著抑制豚鼠离体结肠自发 活动(P＜0.01或P＜0.05)，与给药前及对照组比较，阿托品可使肠 张力显著下降，约表现为正常状态的50％；与阿托品模型组比较，不 同剂量二至方提取物组均可明显逆转阿托品对豚鼠离体结肠的松弛， 给药后1min、3min、5min可观察到肠收缩力明显恢复(P＜0.01)。 且二至方提取物对阿托品的拮抗作用存在一定的剂量相关性。
表3和表4的结果说明二至方具有拮抗阿托品导致的肠肌松弛作 用，提示二至方抗便秘与M受体有关。
实施例4：二至丸用于便秘的临床研究
1.实验样品和实验对象
二至丸：天津中新药业集团股份有限公司乐仁堂制药厂(规格为 每10粒1.7g)，成分：女贞子、旱莲草(两种药材的质量比1：1)。 制备工艺如下(标准编号：WS3-B-2457-97)：
处方：女贞子(蒸)500g墨旱莲500g。
制法：以上二味，取女贞子300g，粉碎成细粉；其余女贞子与墨 旱莲加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对 密度1.30的稠膏，加女贞子粉，混匀，干燥，粉碎成细粉，过筛(留 出适量浓缩膏粉作包衣用)，用水泛丸，干燥，用留出的浓缩膏粉末 包衣，打光，干燥，即得)。
枸橼酸莫沙必利分散片：成都康弘药业集团股份有限公司(规格 为5mg)。
受试对象：慢传导性便秘患者。
受试对象按照如下标准筛选：
诊断标准符合罗马Ⅲ标准中慢传导性便秘诊断标准：超过1/4排 便感到费力，超过1/4排便为硬便或块状便，超过1/4时间有排便不 净感，超过1/4排便时肛门直肠堵塞感，超过1/4排便需要人工方法 辅助，每周少于3次排便，符合2项以上；诊断前6月出现症状，最近3月满足诊断标准，诊断肠易激综合征依据不充分。中医诊断标准 参照《中医病证诊断疗效标准》标准：排便周期延长，或周期不长但 粪质干结、排除艰难，或粪质不硬，虽有便意但便而不畅；辨证属气 秘，证：主症为大便干结、欲便不得出、腹中胀满，次症为胸胁满闷、 嗳气呃逆、食欲不振、肠鸣矢气、便后不爽，苔薄白或薄黄或薄腻， 脉弦或弦缓或弦数或弦紧。
排除标准：①年龄＞75岁或＜18岁者；②结肠镜、肛门直肠测压 等检查显示肠道存在器质性病变者；③合并严重肝、肾、心血管疾病 者；④消化道严重合并症者；⑤妊娠期、哺乳期患者；⑥过敏体质者； ⑦精神异常不能配合研究者；⑧非自愿参与本研究及不签署知情同意 书者。
2.实验方法
2.1给药方法
对照组(42人)：给予枸橼酸莫沙必利分散片，餐前半小时口服， 每次10mg，每天3次，连续治疗2周。
治疗组(38人)：给予二至丸治疗。餐后口服，每次20粒g(规 格：每10粒重1.7g，相当于生药4.6g，即女贞子2.3g，旱莲草2.3g； 相当于实施例2中的二至方提取物1g)，每天2次，酌情服用2-4周 嘱清淡易消化饮食，忌辛辣厚味，调畅情志，注意排便习惯，每天定 时排便，清晨多饮清水。
2.2疗效标准：参照《中药新药临床研究指导原则(试行)》评估， 以尼莫地平法计算。痊愈：临床症状、体征消失或基本消失，舌象完 全正常，疗效指数≥95％；显效：临床症状、体征明显改善，舌象接近 正常，疗效指数为70％-95％；有效：临床症状、体征有所好转，舌象 基本正常，疗效指数为30％-70％；无效：临床症状、体征及舌象均未 见好转，甚至加重，疗效指数＜30％。参照痊愈、显效比例计算总有 效率。
3.实验结果
如下面的表5所示。
表5：两组临床疗效比较
组别
n
痊愈
显效
有效
无效
总有效率
治疗组
38
20
14
4
0
89.1％
对照组
42
15
14
8
5
72.3％
结果显示，总有效率治疗组为89.1％，对照组为72.3％。两组比 较，差异有统计学意义(P<0.05)。
实施例5：二至方提取物对慢性便秘小鼠作用的在体研究
1.实验材料
1.1动物
SPF级雄性ICR(CD-1)小鼠，体质量18-20g，购买于北京维通 利华实验动物技术有限公司，许可证号SCXK(京)2016-0006。饲养 于天津中医药大学动物实验中心。
1.2化学试剂
女贞子、墨旱莲：北京同仁堂天津南开大药房，二至方提取物的 制备如实施例2。
洛哌丁胺盐酸盐：美国SIGMA-ALDRICH公司，CAS： 34552-83-5。
阿拉伯树胶粉：北京索莱宝科技有限公司，CAS：9000-01-5。
活性炭粉：福晨(天津)化学试剂有限公司，CAS：No：7440-44-0。
2.实验药液的制备
2.1.1洛哌丁胺混悬液的制备
按给药浓度将洛哌丁胺盐酸盐溶于纯水中，-4℃遮光保存。
2.1.2二至方提取物混悬液的制备
二至方提取物混悬液以女贞子、墨旱莲1:1等量配伍的原则，使 用纯水进行配置，-4℃低温保存。
2.1.3碳胶混悬液的制备
将阿拉伯树胶与纯水按照10g:80ml的比例混合，电磁炉加热煮沸 直到溶液变透明，随后加入5g活性炭粉，再次煮沸3次，待溶液冷却 后定容至100ml，储存于4℃，使用前摇匀(不宜储存过久，尽量随 用随配)。
3.实验方法
3.1慢性便秘小鼠模型的建立
30只ICR(CD-1)小鼠，适应性喂养1周，期间自由进食饮水。 随机分为5组，分别是：
空白组、模型组、二至方提取物的低剂量组、二至方提取物的中 剂量组和二至方提取物的高剂量组。
除空白组之外的其余4组，在上午9点整，给予10mg/kg的剂量 灌胃洛哌丁胺建立小鼠便秘模型。使用纯水配置1mg/ml的洛哌丁胺 混悬液，给药体积为10ml/kg，1次/天，给药8天；空白组予纯水灌 胃，给药体积为10ml/kg，1次/天，给药8天。
3.2二至方提取物给药方案
除空白组、模型组之外的其余3组，在中午12点整，给予不同剂 量的二至方提取物混悬液治疗。在2020年《中华人民共和国药典》中 女贞子、墨旱莲各自的成人建议用量为6-12g，根据体表面积公式计 算小鼠等效剂量，随后制定不同剂量组二至方提取物给药量，低剂量 组：1.56g/kg、中剂量组：3.12g/kg、高剂量组：6.24g/kg，给药体积 为10ml/kg，1次/天，给药8天；空白组和模型组予纯水灌胃，给药 体积为10ml/kg，1次/天，给药8天。
3.3 6h粪便粒数/湿重、粪便干重的测定
最后一次给药后，将小鼠单笼饲养，期间保证自由进食、饮水， 收集6h内粪便，记录其粒数，湿重。恒温干燥箱设置温度为60摄氏 度，烘干4h，取出烘干后的粪便，称重第1次，随后继续烘干10min， 称重第2次，如连续两次粪便重量相同，测得的重量记为粪便干重。
4.实验结果
如图1至图3所示。
结果显示，与对照组相比，模型组小鼠粪便粒数、粪便湿重及干 重均显著下降(p<0.01)。与模型组相比，二至方3.12g/kg剂量组显 著增加小鼠粪便粒数及粪便重量(包括湿重和干重)，表明二至方能 够有效地增加便秘小鼠粪便总量。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人 员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修 改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围 由所附权利要求及其任何等同物给出。