具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。

除非另有说明，本文中所用的专业与科学术语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法或材料也可应用于本发明中。

一种完全抗原的制备方法，在表面活性剂存在的条件下，将疏水性半抗原与载体进行偶联反应，得到完全抗原。

本发明是在常规的完全抗原偶联制备过程中增加促溶环节，疏水性半抗原会与表面活性剂的疏水端相互作用而形成特定可溶性胶束，该胶束为动态平衡的胶束，在遇到载体时可以释放出疏水性半抗原，从而使得偶联反应能够顺利进行，同时由于相互作用依然存在，偶联后的完全抗原周围依然还有表面活性剂，避免完全抗原因缀合度过大而发生沉淀。也就是说，表面活性剂一方面增加了疏水性半抗原的水溶性，从而降低其活化酯因不易溶而产生的排斥性水解，间接增加了活化效率；另一方面增加了生成的完全抗原的溶解性，使其在原有偶联物上不断偶联多个疏水性半抗原，且微观角度相对均一，可提高产品在宏观使用上的效价同时降低产品的批间差。本发明提供的该方法可以显著改善沉淀现象，偶联效率也得到大幅度提升，完全抗原活性高倍增加，极大地简化了制备工艺并且降低了成本。

需要说明的是，“半抗原”：具有抗原性，没有免疫原性的小分子物质，本发明中指分子量小于1万道尔顿的小分子，例如维生素D等等。“疏水性”是指一个分子或分子中某些部分与水互相排斥的物理性质，疏水性分子或分子的疏水部分一般包含有烷烃基、脂肪烃基等不含N或O等易形成氢键的元素的碳链或碳环。载体是指赋予半抗原免疫原性的大分子物质，可以为蛋白质等等。

本发明的技术方案中，可以使用现有技术中常规的针对疏水性半抗原的活化方法、偶联的载体及其偶联方法等，本发明对此都不做限定。

在优选地实施方式中，疏水性半抗原包括维生素D及其衍生物、醛固酮或雌二醇。

在优选地实施方式中，疏水性半抗原为维生素D及其衍生物，进一步优选为25-羟基维生素D3及其衍生物或1,25-二羟维生素D3及其衍生物。

在优选地实施方式中，表面活性剂的亲油端含有10-18个碳原子的直链烷基，优选为亲油端含有12-16个碳原子的直链烷基。

在优选地实施方式中，当疏水性半抗原为维生素D时，表面活性剂的亲油端含有10-18个碳原子的直链烷基，优选为亲油端含有12-16个碳原子的直链烷基。发明人通过试验研究发现，亲油端含有10-18个碳原子直链烷基的表面活性剂可以起到良好的促溶效果，该类亲油结构与维生素D的结构可能会形成某种动态均衡的胶束，如图1为表面活性剂CTAC与疏水性半抗原维生素D衍生物的相互作用机理图，阐述了疏水性半抗原维生素D衍生物与载体偶联时添加表面活性剂CTAC能增加促溶性和提高免疫活性的原理；图2为直链型表面活性剂与疏水性半抗原相互作用的引申性模型示意图，该模型能很好的反应不同分子间的亲水端之间的相互作用，与不同分子间的疏水端之间的相互作用，能在水体系中形成相对较稳定的胶束形式，且该胶束整体呈现亲水端外露，疏水端内藏的状态，故可以增加水溶性的同时还能保持半抗原的疏水端的免疫原性，即提高最终缀合物的活性。表面活性剂中优先含直链疏水端的结构可能与直链结构与维生素D小分子中的疏水结构形成中等疏水性结合的作用力，从而兼顾了既能形成胶束状态而解决沉淀问题，又能避免因过高的疏水性结合作用力而影响免疫过程中免疫位点结合。

在优选地实施方式中，表面活性剂包括亲油端含有10-18个碳原子的直链烷基的离子型表面活性剂，优选为亲油端含有12-16个碳原子的直链烷基的离子型表面活性剂。

在优选地实施方式中，表面活性剂包括十六烷基三甲基氯化铵(CTAC)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、十二烷基磺酸钠(SLS)或十二烷基苯磺酸钠(LAS)。其中，CTAC的最终使用量优选为5mg/ml-50mg/ml，CTAB的最终使用量优选为5mg/ml-50mg/ml，SLS的最终使用量优选为2mg/ml-20mg/ml，LAS的最终使用量优选为2mg/ml-20mg/ml。需要说明的是，CTAC的最终使用量是指每1ml的反应体系中加入5-50mg的CTAC；同理，CTAB的最终使用量是指每1ml的反应体系中加入5-50mg的CTAB；SLS的最终使用量是指每1ml的反应体系中加入2-20mg SLS；同理，LAS的最终使用量是指每1ml的反应体系中加入2-20mg LAS。

在优选地实施方式中，载体包括BSA(牛血清白蛋白)、KHL(钥孔血蓝蛋白)、OVA(卵清蛋白)、HSA(人血清白蛋白)、GST(谷胱甘肽S转移酶)、Poly-Lys(多聚赖氨酸)或Poly-PEG(多聚乙二醇)。可以理解的是，本发明中载体可以采用本领域常规方法，在此并不作限定，优选为BSA。

在优选地实施方式中，疏水性半抗原与载体的偶联的方法包括混合酸酐法、碳二亚胺类缩合剂法、鎓盐类缩合剂法，有机磷类缩合剂法、戊二醛法、重氮化法、多元酸酐法、羰基二咪唑法、二硫键法或过碘酸氧化法。本发明中偶联方法可以采用本领域常规方法，在此并不作限定。

混合酸酐法主要应用半抗原中的游离羧基与氯甲酸异丁酯或氯甲酸乙酯反应生成混合酸酐，再与载体中游离氨基的反应。

碳二亚胺类缩合剂法利用碳二亚胺类缩合剂，如EDC(1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺)、EDCI(1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺)、DCC(二环己基碳二亚胺)、DIC(二异丙基碳二亚胺)，实现氨基和羧基化合物的偶联，该法可以加入酰化催化剂或活化剂，以减少副产物生成。该法可以引入N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)或N-羟基硫代琥珀酰亚胺，以提高偶联效率。

鎓盐类缩合剂法利用碳鎓盐缩合剂或磷鎓盐缩合剂对羧基和氨基进行酰胺缩合，如常用的O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-二(二甲胺基)碳鎓六氟磷酸盐(HATU)、O-(苯并三氮唑-1-基)-二(二甲胺基)碳鎓六氟磷酸盐(HBTU)、O-(5-氯苯并三氮唑-1-基)-二(二甲胺基)碳鎓六氟磷酸盐(HCTU)、O-(苯并三氮唑-1-基)-二(二甲胺基)碳鎓四氟硼酸盐(TBTU)、O-(N-丁二酰亚胺基)-二(二甲胺基)碳鎓四氟硼酸盐(TSTU)、O-(N-endo-5-降莰烯-2,3-二碳二酰亚胺)-二(二甲胺基)碳鎓四氟硼酸盐(TNTU)等。

有机磷类缩合剂法利用磷酸酯或磷酰胺类缩合剂对分子的羧基和氨基进行酰胺缩合，常用的有DECP、BOP-Cl等。

多元酸酐法主要用于半抗原的羟基与琥珀酸酐在无水吡啶中反应得到一个琥珀酸半酯(带有羧基的中间体)，再经碳二亚胺法或混合酸酐法与蛋白质氨基结合，在半抗原与蛋白质载体间插入一个琥珀酰基，因此也称琥珀酸酐法。

重氮化法主要用于活性基团是芳香胺基的半抗原，先将氨基重氮化后再与载体蛋白质的酪氨酸残基偶联。

戊二醛作为同型双功能试剂分别与半抗原和载体上的氨基联合，中间引物5个碳链的联结桥。

过碘酸氧化法是将糖环氧化成醛基，再与载体蛋白上的氨基偶联。

羰基二咪唑法：N，N’-羰基二咪唑是引入羰基的高活性试剂，含羟基的分子同羰基二咪唑反应，形成中间体咪唑基甲酸酯，它能和N-亲核试剂反应，得到N-烷基化的甲酸酯键，通常蛋白质通过N-端(α-氨基)和赖氨酸侧链的(ε-氨基)和分子形成不带电的类似尿烷的衍生物，具有极好的化学稳定性。

二硫键法：将载体蛋白与半抗原在pH4.0的醋酸缓冲液中，通过过氧化氢的作用形成二硫键，也可以将半抗原连接到蛋白质分子上。

在优选地实施方式中，偶联反应包括对疏水性半抗原活化，活化疏水性半抗原后，添加表面活性剂混匀，再与载体进行偶联；或是，偶联反应包括对疏水性半抗原活化，活化疏水性半抗原后，添加含有表面活性剂的载体进行偶联。本发明的技术方案中，可以将先将表面活性剂与活化疏水性半抗原或载体混合，再与载体或活化疏水性半抗原进行偶联反应，实现在偶联反应过程中，表面活性剂一直存在，最大程度的避免凝集的发生，提高偶联效率。

在优选地实施方式中，表面活性剂提高完全抗原的溶解性和/或完全抗原的竞争活性。在完全抗原的制备过程中，表面活性剂可以在两个方面分别或同时起到改善作用，即提高完全抗原的溶解性和/或完全抗原的竞争活性。本发明中，提高完全抗原的溶解性是指在其他操作条件相同的情况下，有表面活性剂的制备方法得到的完全抗原，相较于不添加表面活性的制备方法得到的完全抗原的溶解性得到改善；提高完全抗原的竞争活性是指在其他操作条件相同的情况下，有表面活性剂的制备方法得到的完全抗原，相较于不添加表面活性的制备方法得到的完全抗原的竞争活性得到改善。

在优选地实施方式中，表面活性剂使得完全抗原无沉淀。由于表面活性的添加，使得完全抗原的溶解性得到有效改善，较优为全部溶解，不会产生沉淀，稳定性得到显著改善。

在优选地实施方式中，表面活性剂提高完全抗原的竞争活性至少10％，优选为至少50％，进一步优选为至少100％，更进一步优选为至少120％。由于表面活性的添加，得到的完全抗原的竞争活性得到提高，可以为提高10％以上，也可以但不限于为20％、30％、50％、70％、100％、150％、200％、250％、300％、350％、400％、500％、600％、700％、800％或900％等等，可以理解的是，完全抗原的竞争活性改善的越多，该完全抗原的性能越好。

在优选地实施方式中，一种维生素D完全抗原的制备方法，可以为：

1mgVD衍生物溶解于50-200μl N’N-二甲基甲酰胺，加入1.1-1.5当量的EDC与1.1-3.0当量的NHS，室温反应1-3小时，然后将该活化液缓慢加入3-6ml含有表面活性的缓冲液中，摇匀后再将该混合液加入到3-6ml含有BSA的浓度为1mg/ml-10mg/ml的缓冲液中，然后过夜反应，次日取出透析除去未反应的小分子杂质，最后离心取上清液评价完全抗原活性。

在优选地实施方式中，维生素D完全抗原的制备方法，可以为：

1mgVD衍生物溶解于50-200μl N’N-二甲基甲酰胺，加入1.1-1.5当量的EDC与1.1-3.0当量的NHS，室温反应1-3小时，得到活化液；将3-6ml含有表面活性剂的缓冲液与3-6ml含有BSA的浓度为1mg/ml-10mg/ml的缓冲液混合，得到含有表面活性剂的载体溶液。将反应液缓慢加入含有表面活性剂的载体溶液中，然后过夜反应，次日取出透析除去未反应的小分子杂质，最后离心取上清液评价完全抗原活性。

需要说明的是，上述“当量”是指特定化学反应中相对基准原料的物质的量的倍数，这里指相对于VD衍生物的摩尔用量多少倍。例如，VD衍生物的摩尔质量是344.24g/mol，1mg的VD衍生物为2.9×10^-3mmol，1.1当量就是EDC加入量为2.9×1.1×10^-3mmol。

本发明同时提供上述制备方法制备得到的完全抗原。该完全抗原稳定性好，不会出现浑浊或沉淀，有效期得到延长，并且抗原活性好，且在低包被浓度下的活性也较高，极大地降低了成本。该完全抗原适合制备成试剂盒用于制备抗体或免疫学检测，效果好。

本发明又提供上述完全抗原在制备抗体或免疫学检测中的应用。

本发明最后提供一种含有上述完全抗原的试剂盒。

下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。

实施例1CTAC十六烷基三甲基氯化铵

1mgVD衍生物溶解于50μl N’N-二甲基甲酰胺，加入1.1当量的EDC与3.0当量的NHS，室温反应3小时，然后将该活化液缓慢加入6.4ml含有表面活性CTAC的缓冲液中，摇匀后再将该混合液加入到6.4ml含有BSA的浓度为6mg/ml的10mM PH7.4的PB缓冲液中，然后过夜反应，次日取出透析除去未反应的小分子杂质，最后离心取上清液评价完全抗原活性。

对不同实验组所得的完全抗原VD-BSA进行包被板的板式发光评价，所用包被板为VD-BSA，对应抗体30ng/ml，偶联物：羊抗鼠IgG-HRP(稀释3000倍)，质控品：未经偶联新购制的25OH-VD分子，免疫程序为：50μl sample+50μl antibody/100μl conjugate/100μlluminol，30min/30min/60s。(sample-完全抗原，antibody-单克隆抗体，conjugate-标记HRP的羊二抗，Luminol-HRP的底物鲁米诺，反应时间：完全抗原与单克隆抗体反应30min，单克隆抗体与羊二抗的反应时间是30min，鲁米诺与HRP酶反应的时间为60秒)。

不同包被浓度结果如表1和表2所示。需要说明的是，表1和表2中的不同CTAC浓度为反应体系中CTAC的最终使用浓度。

表面活性剂为CTAC时，制备的维生素D完全抗原的沉淀情况及抗原活性检测结果如下表1/2所示，其中，“+++”代表沉淀最明显，“++”代表有沉淀，“+”代表稍微有沉淀，“--”代表无沉淀，表中上半部数据为完全抗原与质控品竞争结合抗体的竞争活性，下半部分为加了CTAC的实验组相对没有加的实验组的竞争活性增加百分比。

表1包被浓度为0.5μg/ml结果。

表1

表2包被浓度为0.1μg/ml结果。

表2

从表格数据可以看出反应体系中的CTAC能改善沉淀产生和增加完全抗原的竞争活性，实施例中抗原竞争活性平均增加率高达180％以上，在优选的浓度范围内，CTAC能完全消除沉淀。

实施例2SLS十二烷基磺酸钠

1mgVD衍生物溶解于200μl N’N-二甲基甲酰胺，加入1.5当量的EDC与1.1当量的NHS，室温反应1小时，然后将该活化液缓慢加入6ml含有表面活性SLS的缓冲液中，摇匀后再将该混合液加入到6ml含有BSA的浓度为10mg/ml的10mM PH7.4的PB缓冲液中，然后过夜反应，次日取出透析除去未反应的小分子杂质，最后离心取上清液评价完全抗原活性。

对不同实验组所得的完全抗原VD-BSA进行包被板的板式发光评价，所用包被板为VD-BSA，对应抗体30ng/ml，偶联物：羊抗鼠IgG-HRP(稀释3000倍)，质控品：未经偶联新购制的25OH-VD分子，免疫程序为：50μl sample+50μl antibody/100μl conjugate/100μlluminol，30min/30min/60s。(sample-完全抗原，antibody-单克隆抗体，conjugate-标记HRP的羊二抗，Luminol-HRP的底物鲁米诺，反应时间：完全抗原与单克隆抗体反应30min，单克隆抗体与羊二抗的反应时间是30min，鲁米诺与HRP酶反应的时间为60秒)。

不同包被浓度结果如表3和表4所示。需要说明的是，表1和表2中的不同SLS浓度为反应体系中SLS的最终使用浓度。

表面活性剂为SLS时，制备的维生素D完全抗原的沉淀情况及抗原活性检测结果如下表3/4所示，其中，“+++”代表沉淀最明显，“++”代表有沉淀，“+”代表稍微有沉淀，“--”代表无沉淀，表中上半部数据为完全抗原与质控品竞争结合抗体的竞争活性，下半部分为加了SLS的实验组相对没有加的实验组的竞争活性增加百分比。

表3包被浓度为0.5μg/ml结果。

表3

表4包被浓度为0.1μg/ml结果。

表4

从表格数据可以看出反应体系中的SLS能改善沉淀产生和增加完全抗原的竞争活性，实施例中抗原竞争活性平均增加率高达200％以上，在优选的浓度范围内，SLS能完全消除沉淀。

实施例3LAS十二烷基苯磺酸钠

1mgVD衍生物溶解于100μl N’N-二甲基甲酰胺，加入1.3当量的EDC与1.3当量的NHS，室温反应2小时，然后将该活化液缓慢加入6ml含有表面活性LAS的缓冲液中，摇匀后再将该混合液加入到6ml含有BSA的浓度为8mg/ml的缓冲液中，然后过夜反应，次日取出透析除去未反应的小分子杂质，最后离心取上清液评价完全抗原活性。

对不同实验组所得的完全抗原VD-BSA进行包被板的板式发光评价，所用包被板为VD-BSA，对应抗体30ng/ml，偶联物：羊抗鼠IgG-HRP(稀释3000倍)，质控品：未经偶联新购制的25OH-VD分子，免疫程序为：50μl sample+50μl antibody/100μl conjugate/100μlluminol，30min/30min/60s。(sample-完全抗原，antibody-单克隆抗体，conjugate-标记HRP的羊二抗，Luminol-HRP的底物鲁米诺，反应时间：完全抗原与单克隆抗体反应30min，单克隆抗体与羊二抗的反应时间是30min，鲁米诺与HRP酶反应的时间为60秒)。

不同包被浓度结果如表5和表6所示。需要说明的是，表1和表2中的不同LAS浓度为反应体系中LAS的最终使用浓度。

表面活性剂为LAS时，制备的维生素D完全抗原的沉淀情况及抗原活性检测结果如下表5/6所示，其中，“+++”代表沉淀最明显，“++”代表有沉淀，“+”代表稍微有沉淀，“--”代表无沉淀，表中上半部数据为完全抗原与质控品竞争结合抗体的竞争活性，下半部分为加了LAS的实验组相对没有加的实验组的竞争活性增加百分比。

表5包被浓度为0.5μg/ml结果。

表5

表6包被浓度为0.1μg/ml结果。

表6

从表格数据可以看出反应体系中的LAS能改善沉淀产生和增加完全抗原的竞争活性，实施例中抗原竞争活性平均增加率高达120％以上，在优选的浓度范围内，LAS能完全消除沉淀。

实施例4CHAPS

1mgVD衍生物溶解于50μl N’N-二甲基甲酰胺，加入1.1当量的EDC与3.0当量的NHS，室温反应3小时，然后将该活化液缓慢加入6.4ml含有表面活性CHAPS的缓冲液中，摇匀后再将该混合液加入到6.4ml含有BSA的浓度为6mg/ml的10mM PH7.4的PB缓冲液中，然后过夜反应，次日取出透析除去未反应的小分子杂质，最后离心取上清液评价完全抗原活性。

对不同实验组所得的完全抗原VD-BSA进行包被板的板式发光评价，所用包被板为VD-BSA，对应抗体30ng/ml，偶联物：羊抗鼠IgG-HRP(稀释3000倍)，质控品：未经偶联新购制的25OH-VD分子，免疫程序为：50μl sample+50μl antibody/100μl conjugate/100μlluminol，30min/30min/60s。(sample-完全抗原，antibody-单克隆抗体，conjugate-标记HRP的羊二抗，Luminol-HRP的底物鲁米诺，反应时间：完全抗原与单克隆抗体反应30min，单克隆抗体与羊二抗的反应时间是30min，鲁米诺与HRP酶反应的时间为60秒)。

不同包被浓度结果如表7和表8所示。需要说明的是，表1和表2中的不同CHAPS浓度为反应体系中CHAPS的最终使用浓度。

表面活性剂为CHAPS时，制备的维生素D完全抗原的沉淀情况及抗原活性检测结果如下表7/8所示，其中，“+++”代表沉淀最明显，“++”代表有沉淀，“+”代表稍微有沉淀，“--”代表无沉淀，表中上半部数据为完全抗原与质控品竞争结合抗体的竞争活性，下半部分为加了CHAPS的实验组相对没有加的实验组的竞争活性增加百分比。

表7包被浓度为0.5μg/ml结果。

表7

表8包被浓度为0.1μg/ml结果。

表8

从表7、8的结果可以看出，反应体系中的CHAPS能改善沉淀产生，在优选的浓度范围内，CHAPS能完全消除沉淀，但对完全抗原活性有不同程度的衰减。

实施例5司班80

1mgVD衍生物溶解于200μl N’N-二甲基甲酰胺，加入1.5当量的EDC与1.1当量的NHS，室温反应1小时，然后将该活化液缓慢加入6ml含有表面活性司班80的缓冲液中，摇匀后再将该混合液加入到6ml含有BSA的浓度为10mg/ml的10mM PH7.4的PB缓冲液中，然后过夜反应，次日取出透析除去未反应的小分子杂质，最后离心取上清液评价完全抗原活性。

对不同实验组所得的完全抗原VD-BSA进行包被板的板式发光评价，所用包被板为VD-BSA，对应抗体30ng/ml，偶联物：羊抗鼠IgG-HRP(稀释3000倍)，质控品：未经偶联新购制的25OH-VD分子，免疫程序为：50μl sample+50μl antibody/100μl conjugate/100μlluminol，30min/30min/60s。(sample-完全抗原，antibody-单克隆抗体，conjugate-标记HRP的羊二抗，Luminol-HRP的底物鲁米诺，反应时间：完全抗原与单克隆抗体反应30min，单克隆抗体与羊二抗的反应时间是30min，鲁米诺与HRP酶反应的时间为60秒)。

不同包被浓度结果如表9和表10所示。需要说明的是，表1和表2中的不同司班80浓度为反应体系中司班80的最终使用浓度。

表面活性剂为司班80时，制备的维生素D完全抗原的沉淀情况及抗原活性检测结果如下表9/10所示，其中，“+++”代表沉淀最明显，“++”代表有沉淀，“+”代表稍微有沉淀，“--”代表无沉淀，表中上半部数据为完全抗原与质控品竞争结合抗体的竞争活性，下半部分为加了司班80的实验组相对没有加的实验组的竞争活性增加百分比。

表9包被浓度为0.5μg/ml结果。

表9

表10包被浓度为0.1μg/ml结果。

表10

从表9、10的结果可以看出，反应体系中的司班80能改善沉淀产生，在优选的浓度范围内，司班80能完全消除沉淀，但对完全抗原活性有不同程度的衰减。

实施例6Triton X-100

1mgVD衍生物溶解于100μl N’N-二甲基甲酰胺，加入1.3当量的EDC与1.3当量的NHS，室温反应2小时，然后将该活化液缓慢加入6ml含有表面活性Triton X-100的缓冲液中，摇匀后再将该混合液加入到6ml含有BSA的浓度为8mg/ml的缓冲液中，然后过夜反应，次日取出透析除去未反应的小分子杂质，最后离心取上清液评价完全抗原活性。

对不同实验组所得的完全抗原VD-BSA进行包被板的板式发光评价，所用包被板为VD-BSA，对应抗体30ng/ml，偶联物：羊抗鼠IgG-HRP(稀释3000倍)，质控品：未经偶联新购制的25OH-VD分子，免疫程序为：50μl sample+50μl antibody/100μl conjugate/100μlluminol，30min/30min/60s。(sample-完全抗原，antibody-单克隆抗体，conjugate-标记HRP的羊二抗，Luminol-HRP的底物鲁米诺，反应时间：完全抗原与单克隆抗体反应30min，单克隆抗体与羊二抗的反应时间是30min，鲁米诺与HRP酶反应的时间为60秒)。

不同包被浓度结果如表11和表12所示。需要说明的是，表1和表2中的不同TritonX-100浓度为反应体系中Triton X-100的最终使用浓度。

表面活性剂为Triton X-100时，制备的维生素D完全抗原的沉淀情况及抗原活性检测结果如下表11/12所示，其中，“+++”代表沉淀最明显，“++”代表有沉淀，“+”代表稍微有沉淀，“--”代表无沉淀，表中上半部数据为完全抗原与质控品竞争结合抗体的竞争活性，下半部分为加了Triton X-100的实验组相对没有加的实验组的竞争活性增加百分比。

表11包被浓度为0.5μg/ml结果。

表11

表12包被浓度为0.1μg/ml结果(结论同上)。

表12

从表9、10的结果可以看出，反应体系中的Triton X-100能改善沉淀产生，在优选的浓度范围内，Triton X-100能完全消除沉淀，但对完全抗原活性有不同程度的衰减。

尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。