香豆素衍生物和类似物及其制备方法和用途
阅读说明：本技术 香豆素衍生物和类似物及其制备方法和用途 (Coumarin derivatives and analogs, and preparation method and application thereof ) 是由 陈俐娟 于 2020-09-15 设计创作，主要内容包括：本发明涉及香豆素衍生物和类似物及其制备方法和用途,属于化学医药领域。本发明提供了式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的盐。本发明还提供了上述化合物的制备方法和用途。生物学实验表明,这类化合物具有较强的体外抗纤维化效果,在TGF-β诱导的NRK-49F细胞上能明显减少细胞间胶原纤维的沉积,对HUVEC细胞的迁移有抑制性。同时,这类结构的化合物在在四氯化碳诱导的肝纤维化、博来霉素诱导的肺纤维化小鼠模型上都具有一定的疗效,毒性较小,为临床治疗包括肝纤维化、肺纤维化、肾纤维化在内的组织纤维化疾病提供了新的选择。(The invention relates to coumarin derivatives and analogs, and a preparation method and application thereof, and belongs to the field of chemical medicine. The invention provides a compound shown as a formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof. The invention also provides a preparation method and application of the compound. Biological experiments show that the compound has stronger in-vitro anti-fibrosis effect, can obviously reduce the deposition of intercellular collagen fibers on the NRK-49F cells induced by TGF-beta, and has inhibition on the migration of HUVEC cells. Meanwhile, the compounds with the structure have certain curative effect on mouse models of hepatic fibrosis induced by carbon tetrachloride and pulmonary fibrosis induced by bleomycin, have low toxicity, and provide a new choice for clinically treating tissue fibrosis diseases including hepatic fibrosis, pulmonary fibrosis and renal fibrosis.)
技术领域
本发明涉及香豆素衍生物和类似物及其制备方法和用途，属于化学医药领域。
背景技术
纤维化是指组织或者器官受到损伤后，机体对其不断的修复，修复过度从而形成多余的纤维结缔组织。它表现为一种反应性的、良性的或病理性的状态。产生损伤的反应过程，被称为瘢痕化，如果发生的纤维化源于单个细胞系，则称之为纤维瘤。理上，纤维化会发生并且沉积在结缔组织，逐渐影响正常组织和器官的结构和功能。纤维化是一种可以通过用过度沉积的胶原来描述的病理状态。我们通常用过量的细胞外基质(Extracellularmatrix，ECM)沉积来定义它，纤维化最终导致瘢痕形成并使组织增厚，它的本质上是一个过度损伤修复反应，这最终会影响正常的器官功能。
肾纤维化可以被不同肾脏疾病引起，最终进展为终末期肾病。虽然肾纤维化的发病机理尚未完全阐明，但其通常表现为肾固有细胞(肾小球上皮细胞，肾小球系膜细胞和内皮细胞)过度增殖，肾缺损修复，肾间质成纤维细胞异常激活和细胞外基质过度沉积，最终引起肾小球硬化和肾小管间质纤维化。
肝纤维化发生于不同的慢性损伤，包括各种病毒性肝炎，酒精滥用，药物原因，代谢疾病，过载铁或铜，肝细胞或胆管发生自身免疫攻击上皮细胞或先天性异常。通常情况下，损伤存在疤痕之前数月至数年。肝纤维化是可逆的，而肝硬化是纤维化的终末期结果，通常是不可逆的。
肺纤维化是一种长期的、进展的、以不明原因导致的以间质性肺炎为特点的一种纤维化肺部疾病，表现为呼吸困难和气短气紧等症状。其中特发性肺纤维化(Idiopathicpulmonary fibrosis，IPF)是肺纤维化最常见和最严重的形式，它的主要特征是干咳、呼吸困难、肺功能下降等。根据美国2012年的数据显示，其发病率约为每10万人中6.8～8.8人，而总的患病率为每10万人中14～27.9人。通过临床对病患的研究发现，IPF患者有以下几个特点：男性中发病率较高；IPF的发病率随年龄的增长而增加，特别是在50岁后；IPF在吸烟者中更常见，即使是戒烟以后也没有改善；在CT下IPF患者的肺部会呈现蜂窝状的形态。尽管IPF整体的患病率不高，但是它是特发性间质肺炎中最普遍和严重的类型，患者生存质量下降、存活时间和存活率较低、准确诊断难，成为治疗该类疾病的阻碍。
近年来，人们对IPF的发病机理研究有了一个转变，从炎症驱动型到上皮性疾病。以前将其归类为一种慢性炎症性疾病，与单核细胞、成纤维细胞和细胞因子的相互作用有关。IPF是一种不正常的伤口愈合的形式，涉及到肺间的空隙和肺泡空间与肌纤维母细胞过度增殖导致的纤维化。即炎症并不是IPF的主要原因，但它在疾病的发病和发展过程中起着重要的作用。具体的发病机制包括：首先，肺部反复受到微损伤的攻击，如吸烟和在肺泡上皮细胞(AECs)上的病毒感染。这些损伤导致上皮细胞死亡，并促进伤口愈合过程。在正常情况下，上皮细胞的凋亡引发伤口愈合过程，提高了对蛋白质(纤维蛋白原和纤维蛋白)的血管通透性，并形成了伤口凝块。受损的细胞通过炎症的作用被移除，接着是成纤维细胞的生长形成一个新的细胞外基质(ECM)。在重新上皮化后，细胞如分化的肌纤维母细胞，参与伤口愈合过程，会发生凋亡。然而在IPF中，异常的伤口愈合反应导致成纤维细胞增生和急剧的ECM沉积。这最终会影响到纤维调解器和抗纤维化调解器之间的平衡。在IPF的患者中，主动转化生长因子(TGF-β)的水平有所提高。当这个异常的过程持续时，重复的肺重塑最终会导致蜂窝囊肿的形成和肺结构的破坏，最终导致肺纤维化的发展和功能的丧失。
与纤维化相关的细胞介导通路包括：①纤维化相关的细胞外因素，主要是生长因子和细胞因子。这些因子通过特定的信号通路作用于相邻的或者远距细胞。它们与细胞膜上特定的受体结合，促进细胞外信号像胞内传导，最终导致前纤维化细胞应答反应。②细胞内影响因素，主要涉及到多种酪氨酸激酶，它们可以通过磷酸化和去磷酸化调控很多细胞内不同信号通路。
目前被FDA批准用于IPF治疗的药物只有2008年上市的吡菲尼酮和2014年上市的尼达尼布。尼达尼布是一种三激酶抑制剂，包括：血管内皮生长因子(VEGF)；血小板生长因子(PDGF)；纤维母细胞生长因子(FGFR)。PDGFs可以诱导成纤维细胞趋化性，是成纤维细胞增殖的最强刺激。因此，它们在肌纤维母细胞的扩张中起着重要的作用，并起到了胶原蛋白合成的作用。据报道，像伊马替尼这样的PDGF抑制剂可以改变成纤维性反应，从而减少动物研究中的肺纤维化。FGF通道是控制血管生成、形态形成和气道重构的重要信号通路。VEGFR-2对抗剂可以通过调节血管生成和炎症来减弱组织病理纤维化和胶原沉积。因此，PDGF、FGF和VEGF的信号已经成为IPF的潜在治疗目标。Nintedanib通过抑制由IPF患者产生的原发性人肺成纤维细胞的增殖抑制了显著的抗纤维化作用。但是，尼达尼布的选择性不好，对其他的激酶与FLT3等也有一定的抑制性。
TGF-β1-4是与TGF-β受体结合的多功能细胞因子家族，有TGF-βR1和R2组成。TGF-βR2与TGF-β结合后，能磷酸化TGF-βR1激酶，诱导信号联级放大，招募和激活S-mad蛋白。它们与细胞核下游调节蛋白效应器进行转录，导致靶细胞的分化、趋化、增殖与活化。TGF-β1作为一种不活跃的肽，需要包括MMPs在内的蛋白酶的水解才能被激活。TGF-β1的关键作用有：调节炎症过程、ECM的产生、T细胞的凋亡与分化。在纤维化过程中，TGF-β信号能促进沉寂的纤维母细胞分化为肌纤维细胞并分泌ECM，其依赖的S-mad3通路尤为重要。因此，抑制TGF-β1与其受体的结合和相关S-mad3通路信号成为抗纤维化的另一目标。吡菲尼酮抗纤维化的特性归因于它能够减少TGF-β等细胞因子的表达，最终导致纤维化的抑制作用。
发明内容
本发明的目的在于提供香豆素衍生物和类似物或其药学上可接受的盐，其结构如式Ⅰ所示：
X选自O或NH；
R1、R2、R3、R4、R5、R6独立的选自H、硝基、C1～C6烷氧基或
Y选自O、S或NR12；R7、R8、R9、R10、R11独立的选自H、卤素或R12选自H、C1～C6烷基；R13选自NR14R15、取代或未取代的5～6元杂环，杂原子为N或O，杂原子个数为1～2个；R14、R15独立的选自H、C1～C6烷基、取代或未取代的5～6元杂环，杂原子为N或O，杂原子个数为1～2个。
作为本发明优选的技术方案，上述化合物，R13选自NR14R15、未取代的5元杂环、取代的5元杂环、未取代的6元杂环、取代的6元杂环；R14、R15独立的选自H、C1～C6烷基、未取代的5元杂环、取代的5元杂环、未取代的6元杂环、取代的6元杂环；
优选的，R13选自NR14R15、未取代的5元杂环、未取代的6元杂环、C1～C4烷基取代的6元杂环、叔丁氧羰基取代的6元杂环、-COR16取代的6元杂环、-COOR17取代的6元杂环、-NR18R19取代的6元杂环；R14、R15独立的选自H、C1～C6烷基、未取代的6元杂环、叔丁氧羰基取代的6元杂环、-COOR17取代的6元杂环；R16选自C1～C3烷基、C3～C6环烷基；R17、R18、R19独立的选自C1～C4烷基；
进一步优选的，R13选自NR14R15、未取代的5元杂环、未取代的6元杂环、C1～C4烷基取代的6元杂环、叔丁氧羰基取代的6元杂环、-COR16取代的6元杂环、-COOR17取代的6元杂环、-NR18R19取代的6元杂环；R14、R15独立的选自H、C1～C6烷基、未取代的6元杂环、叔丁氧羰基取代的6元杂环、-COOR17取代的6元杂环；R16选自C1～C3烷基、C3～C6环烷基；R17、R18、R19独立的选自C1～C4烷基；所述5元杂环，杂原子为N，杂原子个数为1个；
更优选的，R13选自
最优选的，R7、R8、R10、R11独立的选自H或卤素；R9选自
作为本发明优选的技术方案，上述化合物，当X选自O时，结构式如下式Ⅱ：
其中，Y选自O或NR12；R1、R3、R4、R5、R6独立的选自H、硝基、C1～C6烷氧基；R7、R8、R10、R11独立的选自H或卤素；R12选自H或甲基。
4、根据权利要求3所述的化合物，其特征在于：R1、R3、R4、R5、R6独立的选自H、硝基、C1～C3烷氧基；优选的，R1、R3、R4、R5、R6独立的选自H、硝基或甲氧基；更优选的，R1、R3、R6均选自H，R4、R5独立的选自H、硝基或甲氧基；
和/或，R7、R8、R10、R11独立的选自H或F；优选的，R7、R8、R11均选自H，R10选自H或F；
和/或，R13选自
上述化合物，结构式如下：
作为本发明优选的技术方案，上述化合物，当X选自NH时，Y选自O、S或NR12，R2、R4、R5独立的选自H或并且R2、R4、R5其中一个为R1、R3、R6独立的选自H、硝基、C1～C6烷氧基；R7、R8、R10、R11独立的选自H或卤素；R12选自H或甲基。
优选的，上述化合物，R2选自时，Y选自O、S或NR12；R4或R5选自时，Y选自O；
和/或，R1、R3、R6独立的选自H、硝基、C1～C3烷氧基；优选的，R1、R3、R6均选自H；
和/或，R7、R8、R10、R11独立的选自H或F；优选的，R7选自H或F，R8、R10、R11均选自H；
和/或，R13选自
上述化合物，结构式如下：
本发明还提供了上述化合物的制备方法，主要采用如下几条合成路线：
路线(一)：
反应试剂以及反应条件：(a)四丁基溴化铵(TABA),P2O5,甲苯(TOL),90±5℃；(b)Et3N,EtOH,70±5℃,2～5h；(c)氯乙酰氯,Et3N,DMF,0±5℃；(d)DMF,KI,室温。
路线(二)：
反应试剂以及反应条件：(a)TABA,P2O5,TOL,90±5℃；(b)K2CO3,丙酮(ACE),65±5℃；(c)Fe,HCl,MeOH,H2O,室温；(d)氯乙酰氯,Et3N,DMF,0±5℃；(e)DMF,KI,室温。
路线(三)：
反应试剂以及反应条件：(a)TABA,P2O5,TOL,90±5℃；(b)hydrobromic acid,1,4-dioxane,90±5℃；(c)aniline,Xantphos,Pd2(dba)3,t-BuOK,dioxane,130±5℃；(d)trifluoroacetic acid,rt,过夜搅拌；(e)氯乙酰氯,Et3N,DMF,0-25℃；(f)RNH,Et3N,DMF,rt,过夜搅拌。
路线(四)：
反应试剂以及反应条件：(a)POCl3,100±5℃；(b)hydrochloric acid,1,4-dioxane,90±5℃；(c)4-aminothiopenenol,K2CO3,DMF,130±5℃；(d)氯乙酰氯,Et3N,DMF,0±5℃,4h,0-25℃；(e)RNH2,Et3N,DMF,rt,过夜搅拌。
路线(五)：
反应试剂以及反应条件：(a)K2CO3,DMF,100±5℃；(b)Fe,HCl,MeOH/H2O＝9/1,85±5℃；(c)氯乙酰氯,Et3N,DMF,0±5℃；(d)RNH2,Et3N,DMF,室温搅拌。
路线(六)：
反应试剂以及反应条件：(a)K2CO3,DMF,室温；(b)Fe,HCl,MeOH/H2O＝9/1,85±5℃；(c)氯乙酰氯,Et3N,DMF,0±5℃；(d)RNH2,Et3N,DMF,室温搅拌。
化合物29-1或化合物29-2的合成方法与化合物29相同，只需要将原料化合物10替换为化合物10-1或化合物10-2。
上述所有合成路线中，R13选自NR14R15、取代或未取代的5～6元杂环，杂原子为N或O，杂原子个数为1～2个；R14、R15独立的选自H、C1～C6烷基、取代或未取代的5～6元杂环，杂原子为N或O，杂原子个数为1～2个。
优选的，R13选自NR14R15、未取代的5元杂环、取代的5元杂环、未取代的6元杂环、取代的6元杂环；R14、R15独立的选自H、C1～C6烷基、未取代的5元杂环、取代的5元杂环、未取代的6元杂环、取代的6元杂环。
进一步优选的，R13选自NR14R15、未取代的5元杂环、未取代的6元杂环、C1～C4烷基取代的6元杂环、叔丁氧羰基取代的6元杂环、-COR16取代的6元杂环、-COOR17取代的6元杂环、-NR18R19取代的6元杂环；R14、R15独立的选自H、C1～C6烷基、未取代的6元杂环、叔丁氧羰基取代的6元杂环、-COOR17取代的6元杂环；R16选自C1～C3烷基、C3～C6环烷基；R17、R18、R19独立的选自C1～C4烷基。
更优选的，R13选自NR14R15、未取代的5元杂环、未取代的6元杂环、C1～C4烷基取代的6元杂环、叔丁氧羰基取代的6元杂环、-COR16取代的6元杂环、-COOR17取代的6元杂环、-NR18R19取代的6元杂环；R14、R15独立的选自H、C1～C6烷基、未取代的6元杂环、叔丁氧羰基取代的6元杂环、-COOR17取代的6元杂环；R16选自C1～C3烷基、C3～C6环烷基；R17、R18、R19独立的选自C1～C4烷基；所述5元杂环，杂原子为N，杂原子个数为1个。
最优选的，R13选自
本发明还提供了一种药物组合物，由上述化合物、药学上可接受的盐或药学上可接受的水合物为活性成分，添加药学上可接受的辅助性成分组成。
本发明还提供了上述的化合物或其药学上可接受的盐或上述药物组合物在制备治疗纤维化疾病的药物中的用途。
进一步的，上述用途，所述药物是抑制COL1A1、α-SMA、p-Smad3蛋白表达的药物。
进一步的，上述用途，所述药物是抑制TGF-β/Smad3通路的药物。
进一步的，上述用途，所述纤维化疾病为肺纤维化、肝纤维化或肾纤维化。
术语定义：
本发明提供的化合物和衍生物可以根据IUPAC(国际纯粹与应用化学联合会)或CAS(化学文摘服务社，Columbus，OH)命名系统命名。
术语“烷基”是直链或支链的饱和烃基的基团。C1～C6烷基的实例包括但不限于甲基(C1)、乙基(C2)、正丙基(C3)、异丙基(C3)、正丁基(C4)、叔丁基(C4)、仲丁基(C4)、异丁基(C4)、正戊基(C5)、3-戊基(C5)、戊基(C5)、新戊基(C5)、3-甲基-2-丁基(C5)、叔戊基(C5)和正己基(C6)。
术语“环烷基”是指包含或不包含杂原子的饱和的环状烃基，其可以是单环结构，也可以是两个以上的环，其中，杂原子选自磷、硫、氧和/或氮。
术语“卤素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)、碘(I)。
术语“药学上可接受的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料，和/或所形成的盐通常在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物与无机和/或有机酸和碱形成的酸式和/或碱式盐，也包括两性离子盐(内盐)，还包括季铵盐，例如烷基铵盐。这些盐可以是在化合物的最后分离和纯化中直接得到。也可以是通过将上述化合物与一定数量的酸或碱适当(例如等当量)进行混合而得到。这些盐可能在溶液中形成沉淀而以过滤方法收集，或在溶剂蒸发后回收而得到，或在水介质中反应后冷冻干燥制得。本发明中所述盐可以是化合物的盐酸盐、硫酸盐、枸橼酸盐、苯磺酸盐、氢溴酸盐、氢氟酸盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、草酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。
本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增溶剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。
除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。
本发明所述药学上可接受的辅助性成分，是指除活性成分以外包含在剂型中的物质，所述的辅助性成分如环糊精、精氨酸或葡甲胺。所述的环糊精选自α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、(C1-4烷基)-α-环糊精、(C1-4烷基)-β-环糊精、(C1-4烷基)-γ-环糊精、(羟基-C1-4烷基)-α-环糊精、(羟基-C1-4烷基)-β-环糊精、(羟基-C1-4烷基)-γ-环糊精、(羧基-C1-4烷基)-α-环糊精、(羧基-C1-4烷基)-β-环糊精、(羧基-C1-4烷基)-γ-环糊精、α-环糊精的糖类醚、β-环糊精的糖类醚、γ-环糊精的糖类醚、α-环糊精的磺丁基醚、β-环糊精的磺丁基醚和γ-环糊精的磺丁基醚。所述的辅助性成分还包含医学上可接受的载体、佐剂或媒剂。可用于药学上可接受的药物组合物还离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵凝脂；缓冲物质包括磷酸盐、甘氨酸、精氨酸、山梨酸等。
本发明提供了一类结构新颖的香豆素衍生物。生物学实验表明，这类化合物具有较强的体外抗纤维化效果，在TGF-β诱导的NRK-49F细胞上能明显减少细胞间胶原纤维的沉积，同时对HUVEC细胞的迁移有抑制性。同时，这类结构的化合物在在四氯化碳诱导的肝纤维化、博来霉素诱导的肺纤维化小鼠模型上都具有一定的疗效，毒性较小，为临床治疗包括肝纤维化、肺纤维化在内的纤维化疾病提供了新的选择。
附图说明
图1为化合物21a、25k、29f、29i、29j的划痕实验；
图2为化合物9d对COL1A1,α-SMA,and p-Smad3蛋白表达的抑制性；
图3为化合物29f对COL1A1,α-SMA,and p-Smad3蛋白表达的抑制性；
图4为化合物9d在肺纤维化小鼠的体内效果；
图5为化合物29f在肺纤维化小鼠的体内效果；
图6为化合物9d在急性肝损伤模型小鼠的体内效果。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
现将实施例所用原料或试剂的缩写制成下表。
试剂
缩写
试剂
缩写
四丁基溴化铵
TBAB
二氯甲烷
DCM
乙酸乙酯
EtOAc
三(二亚苄-BASE丙酮)二钯(0)
Pd<sub>2</sub>(dba)<sub>3</sub>
甲醇
MeOH
4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽
Xantphos
乙醇
EtOH
丙酮
ACE
异丙醇
IPA
甲苯
TOL
N,N-二甲基甲酰胺
DMF
还原铁粉
Fe
五氧化二磷
P<sub>2</sub>O<sub>5</sub>
水
H<sub>2</sub>O
盐酸溶液
HCl
碘化钾
KI
氢溴酸水溶液
HBr
叔丁醇钾
tBu-OK
碳酸钾
K<sub>2</sub>CO<sub>3</sub>
钯炭(10％)
Pd/C
氮气
N<sub>2</sub>
氮气
N<sub>2</sub>
石油醚
PE
氢气
H<sub>2</sub>
甲烷酰氯
MsCl
三氯氧磷
POCl<sub>3</sub>
三乙胺
Et<sub>3</sub>N
实施例1
在反应瓶中加入4-羟基香豆素(4.86g，3mol)，加入400ml的甲苯做溶剂，在室温搅拌下加入四丁基溴化铵(TBAB，14.49g,4.5mol)，随后由室温开始缓慢升温至90℃。在90℃时将P2O5(17.04g，12mol)分三批于一小时内加入，保持90℃的温度继续搅拌约6-8小时，点板检测反应完全。待反应液降至室温，旋蒸得黑色粘稠状液体，加入1.2L的冰水和400ml的乙酸乙酯萃取，合并三次有机相旋干。在室温下加入正庚烷，随后升温至90℃待其充分溶解，趁热抽滤得淡黄色液体，冷却至室温出现黄色结晶，抽滤、真空干燥得黄色产品，收率为58％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:6.9(s,1H),7.29(m,1H),7.4(m,2H),7.80(m,1H).MS(ESI),m/z:224.94[M+H]+.
以下化合物2-1参考实施例1合成，只是将实施例1中原料4-羟基香豆素的替换为4-羟基-7-甲氧基香豆素。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.72–7.67(m,1H),7.02(dd,J＝7.5,2.2Hz,2H),6.87(s,1H),3.88(s,3H).MS(ESI),m/z:254.95[M+H]+.
以下化合物2-2参考实施例1合成，只是将实施例1中原料4-羟基香豆素的替换为4-羟基-6-硝基香豆素。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.63(d,J＝2.9Hz,1H),8.35(d,J＝2.9Hz,1H),8.33(d,J＝2.9Hz,1H),7.43(d,J＝9.0Hz,1H).MS(ESI),m/z:269.93[M+H]+.
实施例2
将4-溴香豆素(1g,3.93mmol)和对二苯胺(0.43g,3.93mmol)置于50mL干燥洁净圆底烧瓶中，加入适量的乙醇作为反应溶剂，而后将Et3N(1.1mL,7.88mmol)滴入反应瓶中，将反应瓶提至加热反应器中，65℃下搅拌3h后，将反应提至室温，继续搅拌两个小时，会有大量的固体析出，过滤，乙醇重结晶得到目标产物，收率57％，白色粉末状固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.96(s,1H),8.11(d,J＝9.0Hz,1H),6.96(m,3H),6.90(d,J＝2.5Hz,1H),6.64(m,2H),5.21(s,2H),4.87(s,1H),3.86(s,3H).MS(ESI),m/z:253.09[M+H]+.
以下化合物3-1的合成参考实施例2，只是将实施例2中的原料化合物2替换为化合物2-1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.96(s,1H),8.11(d,J＝9.0Hz,1H),6.96(m,3H),6.90(d,J＝2.5Hz,1H),6.64(m,2H),5.21(s,2H),4.87(s,1H),3.86(s,3H).MS(ESI),m/z:283.10[M+H]+.
以下化合物3-2的合成参考实施例2，只是将实施例2中的原料化合物2替换为化合物2-2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.52(s,1H),9.28(d,J＝2.1Hz,1H),8.45(dd,J＝9.1,2.2Hz,1H),7.57(d,J＝9.1Hz,1H),7.00(d,J＝8.4Hz,2H),6.67(d,J＝8.4Hz,2H),5.27(s,2H),5.12(s,1H).MS(ESI),m/z:298.08[M+H]+.
以下化合物3-3的合成参考实施例2，只是将实施例2中的原料对二苯胺替换为2-氟-1,4-苯二胺。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.11(s,1H),8.19(d,J＝7.8Hz,1H),7.64(t,J＝7.6Hz,1H),7.37(dd,J＝10.9,8.3Hz,2H),7.04(d,J＝12.0Hz,1H),6.87(m,2H),5.28(s,2H),5.07(s,1H).MS(ESI),m/z:271.08[M+H]+.
实施例3
将4-溴香豆素(5g，0.022mol)、对羟基苯酚(4.65g，0.033mol)和碳酸钾(7.7g，0.055mol)置于合适大小的圆底烧瓶，加入300ml的丙酮为溶剂，升温至65℃搅拌，TLC监测反应完全后，旋蒸除去丙酮，而后用EA/H2O体系萃取，合并EA层，EA层用10％NaOH洗三遍，无水Na2SO4干燥，旋蒸得到固体用乙醇重结晶，最终得到目标产物，收率72％，黄色粉末状固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.39(m,2H),7.90(d,J＝8.8Hz,1H),7.65(m,2H),7.11(d,J＝2.4Hz,1H),7.05(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),5.35(s,1H),3.90(s,3H).MS(ESI),m/z:284.05[M+H]+.
以下化合物的合成参考实施例3，只是将实施例3中的原料化合物2替换为化合物2-1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.39(m,2H),7.90(d,J＝8.8Hz,1H),7.65(m,2H),7.11(d,J＝2.4Hz,1H),7.05(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),5.35(s,1H),3.90(s,3H).MS(ESI),m/z:314.06[M+H]+.
实施例4
将中间体6(3g，0.01mol)充分分散在200ml含水10％的甲醇溶液中，随后室温下加入还原铁粉，升温至85℃时滴加浓盐酸(5ml)，保持85℃回流，点板监测反应完全后，趁热抽滤得黄色滤液，旋蒸除去溶剂。随后加入50ml的水打浆10分钟，抽滤得固体，真空干燥得黄色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.01(d,J＝7.0Hz,1H),7.74(dd,J＝11.4,4.2Hz,1H),7.45(dd,J＝12.7,7.9Hz,2H),6.98(d,J＝8.7Hz,2H),6.70(m,2H),5.26(s,2H),5.18(s,1H).MS(ESI),m/z:254.07[M+H]+.
以下化合物的合成参考实施例4，根据化合物的结构替换为相应的原料即可。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.90(d,J＝8.8Hz,1H),7.02(m,2H),7.01(m,2H),6.61(m,2H),5.24(s,2H),5.01(s,1H),3.95(m,3H).MS(ESI),m/z:284.09[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.60(s,1H),7.95(d,J＝7.7Hz,1H),7.60(t,J＝7.4Hz,1H),7.36(q,J＝8.8Hz,5H),7.25(t,J＝7.3Hz,1H),5.33(s,1H).MS(ESI),m/z:253.09[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.59(s,1H),7.97(d,J＝7.3Hz,1H),7.60(s,1H),7.44–7.10(m,3H),6.67(dd,J＝41.1,9.7Hz,2H),5.84(s,2H),5.33(s,1H).MS(ESI),m/z:271.08[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.87(s,1H),7.88(d,J＝9.5Hz,1H),7.45–7.35(m,2H),7.31(d,J＝6.8Hz,2H),7.25–7.12(m,2H),6.52(d,J＝9.4Hz,1H).MS(ESI),m/z:271.08[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.59(s,1H),7.86(d,J＝9.5Hz,1H),7.67(d,J＝8.5Hz,1H),7.33(dd,J＝15.3,8.0Hz,2H),7.14(d,J＝7.4Hz,1H),6.91–6.77(m,2H),6.38(d,J＝9.4Hz,1H).MS(ESI),m/z:271.08[M+H]+.
实施例5
在反应瓶中加入4-羟基-2-喹啉酮(8.05g，5mol)，加入600ml的甲苯做溶剂，在室温搅拌下加入四丁基溴化铵(TBAB，24.15g,7.5mol)，随后由室温开始缓慢升温至90℃。在90℃时将P2O5(28.40g，20mol)分五批于一小时内加入，保持90℃的温度继续搅拌约6-8小时，点板检测反应完全。待反应液降至室温，旋蒸得黑色粘稠状液体，加入适量的石油醚充分溶解，抽滤得淡黄色滤液和褐色固体。再加入适量石油醚充分溶解滤渣，合并三次滤液，旋干、真空干燥得黄色产品，收率为40％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.82(dd,J＝8.1,1.0Hz,1H),7.61(ddd,J＝8.4,7.3,1.3Hz,1H),7.36(d,J＝8.2Hz,1H),7.33–7.28(m,1H),7.03(d,J＝1.5Hz,1H).MS(ESI),m/z:285.91[M+H]+.
实施例6
在反应瓶中加入4-羟基-2-喹啉酮(8.05g，5mol)，于室温搅拌下缓慢滴加200ml的三氯氧磷，滴加中放出大量热和气体。待滴加完毕后呈褐色粘稠状反应液，再缓慢升温至100℃反应约6小时。点板检测反应完全后，待反应液降至室温，将反应液缓慢倒入大量冰水中待其充分冷却，加入乙酸乙酯萃取，合并三次有机相，旋干。加入适量60-80目硅胶拌样，用快速过柱机过柱子纯化得淡黄色产品，收率为53％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.78(dd,J＝8.2,1.1Hz,1H),7.63(ddd,J＝8.3,7.2,1.3Hz,1H),7.33(d,J＝8.2Hz,1H),7.30–7.26(m,1H),7.08(d,J＝1.5Hz,1H).MS(ESI),m/z:197.98[M+H]+.
实施例7
将2,4-二溴喹啉(2.5g,8.77mmol)溶于60ml的1,4-二氧六环溶剂中，升温至90℃，随后滴加10ml含有40％HBr的水溶液，保持90℃反应约6h，点板监测反应完全后，旋蒸出去溶剂。随后加入适量的饱和NaHCO3水溶液，有大量气泡产生，同时白色固体析出，抽滤、烘干得白色固体产物，收率95％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.06(s,1H),7.82(dd,J＝8.1,1.0Hz,1H),7.61(ddd,J＝8.4,7.3,1.3Hz,1H),7.36(d,J＝8.2Hz,1H),7.33–7.28(m,1H),7.03(d,J＝1.5Hz,1H).MS(ESI),m/z:223.96[M+H]+.
以下化合物的合成参考实施例7，将HBr换成浓HCl即可。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.05(s,1H),7.82(dd,J＝8.2,1.1Hz,1H),7.63(ddd,J＝8.3,7.2,1.3Hz,1H),7.40(d,J＝8.2Hz,1H),7.36–7.29(m,1H),7.11(d,J＝1.5Hz,1H).MS(ESI),m/z:180.01[M+H]+.
实施例8
将4-溴-2-喹啉酮(2.2g,9.8mmol)、N-Boc-对苯二胺(2.45g，11.78mmol)、叔丁醇钾(2.75g，24.55mmol)、Pd2(dba)3(0.90g，0.99mmol)、Xantphos(1.41g，2.45mmol)充分分散于100ml的1,4-二氧六环中，氮气保护下由室温加热到100℃，保持该温度再反应约12小时，点板监测反应完全。将反应液先抽滤得褐色滤液，加入硅胶拌样，用快速过柱机纯化得褐色产物，收率60％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.95(s,1H),9.41(s,1H),8.52(s,1H),8.10(d,J＝7.9Hz,1H),7.57–7.45(m,3H),7.29–7.23(m,1H),7.23–7.13(m,3H),5.46(d,J＝0.9Hz,1H),1.49(s,9H).MS(ESI),m/z:423.18[M+H]+.MS(ESI),m/z:352.16[M+H]+.
实施例9
将化合物(1.5g,4.27mmol)置于50ml的圆底烧瓶中，室温下滴加20ml的三氟乙酸(TFA)，随后在室温下搅拌约4小时，点板监测反应完全。随后旋蒸出去三氟乙酸，加入饱和饱和NaHCO3水溶液至不再产生气泡，同时褐色固体分散在水中，抽滤、烘干得褐色固体，收率93％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.82(s,1H),8.32(s,1H),8.09(d,J＝7.8Hz,1H),7.46(dd,J＝11.3,4.1Hz,1H),7.28–7.21(m,1H),7.18–7.08(m,1H),6.94(d,J＝8.6Hz,2H),6.67–6.60(m,2H),5.25(s,1H),5.14(s,2H).MS(ESI),m/z:252.10[M+H]+.
实施例10
4-氨基苯硫醇(7.0g，0.06mol)和K2CO3(12.42g，0.09mol)放入圆底烧瓶中，然后加入DMF(200ml)。将反应混合物加热至130℃后，加入4-氯-2-喹啉酮(5.37g，0.03mol)并再搅拌6小时。通过TLC监测反应结束后，将混合物冷却至室温，加入400ml水，形成悬浮混合物。过滤得固体，通过硅胶柱纯化后，得到棕色固体，产率58％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.53(s,1H),7.82(d,J＝7.6Hz,1H),7.59–7.52(m,1H),7.33(d,J＝8.1Hz,1H),7.23(t,J＝7.7Hz,3H),6.72(d,J＝8.5Hz,2H),5.74(s,2H),5.56(s,1H).MS(ESI),m/z:269.06[M+H]+.
实施例11
将4-羟基-2-喹啉酮(9.66g，0.06mol)和K2CO3(12.42g，0.09mol)放入圆底烧瓶中，然后加入DMF(200ml)加热至100℃。将1-氟-4-硝基苯(4.23g，0.03mol)溶于另外的20mlDMF中，并在半小时内将该溶液滴加到制备的混合物中。保持混合物在100℃下搅拌约6小时，通过TLC监测反应结束后，将混合物冷却至室温，加入400ml水，形成悬浮混合物。然后通过过滤器收集固体。通过真空干燥箱干燥后，得到浅黄色固体，收率72％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.75(s,1H),8.37(d,J＝7.4Hz,2H),7.87(d,J＝6.6Hz,1H),7.62(s,1H),7.55(d,J＝6.8Hz,2H),7.47–7.16(m,2H),5.72(s,1H).MS(ESI),m/z:283.06[M+H]+.
实施例12
将4-羟基-2-喹啉酮(9.66g，0.06mol)和K2CO3(12.42g，0.09mol)放入圆底烧瓶中，分散于DMF(200ml)。将3,4-二氟-硝基苯(4.77g，0.03mol)溶于另外的20ml DMF中，在室温搅拌下将该溶液滴加到之前的混合物中。保持混合物在室温下搅拌约6小时，通过TLC监测反应结束后，加入400ml水，形成悬浮混合物。然后通过过滤器收集固体。通过真空干燥箱干燥后，得到浅黄色固体，收率68％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.76(s,1H),8.45(dd,J＝10.4,2.7Hz,1H),8.22(ddd,J＝9.0,2.6,1.3Hz,1H),7.93(dd,J＝8.0,1.0Hz,1H),7.81–7.72(m,1H),7.68–7.58(m,1H),7.40(d,J＝8.2Hz,1H),7.32–7.23(m,1H),5.68(s,1H).MS(ESI),m/z:301.05[M+H]+.
以下化合物的合成参考实施例12，根据化合物的结构替换为相应的原料即可
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.91(s,1H),8.34(dd,J＝10.8,2.7Hz,1H),8.09–8.02(m,1H),7.88(d,J＝9.6Hz,1H),7.56(d,J＝1.2Hz,1H),7.43(d,J＝2.3Hz,2H),7.13(t,J＝8.7Hz,1H),6.56(d,J＝9.6Hz,1H).MS(ESI),m/z:301.05[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.73(s,1H),8.40(dd,J＝10.7,2.7Hz,1H),8.13(ddd,J＝9.1,2.6,1.3Hz,1H),7.92(d,J＝9.6Hz,1H),7.76(d,J＝8.5Hz,1H),7.39(t,J＝8.6Hz,1H),7.04–6.97(m,2H),6.46(d,J＝9.5Hz,1H).MS(ESI),m/z:301.05[M+H]+.
实施例13
将NaH(1.45g,60.2mmol)和7.5mL碳酸二乙酯置于合适大小的圆底烧瓶中，反应瓶移至低温反应器中，0℃下搅拌，而后将丹皮酚(2g,12.04mmol)溶于10mL碳酸二乙酯中后置于25mL恒压地液漏斗中，将其缓慢滴入反应瓶中，滴毕，保持0℃继续搅拌二十分钟后，将反应瓶移至加热反应器中，100℃下搅拌3h,TLC监测反应，反应结束后，停止加热，将反应瓶放置室温，小心滴加水淬灭反应，而后用大量的乙醚(3×25mL)洗去多余的碳酸二乙酯，弃去醚层，合并水层，水层用2N HCl酸化pH至3左右(注意：因为酸化过程会产生大量的乳泡并析出大量的白色固体，一定要在搅拌的情况下进行酸化处理)，过滤，滤饼用大量的水洗涤，真空干燥，得到目标产物，收率69％，白色粉末状固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.37(s,1H),7.72(d,J＝8.6Hz,1H),6.93(m,2H),5.47(s,1H),3.86(s,3H).MS(ESI),m/z:193.04[M+H]+.
实施例14
将硝酸钠(0.52g,6.17mmol)置于合适大小的圆底烧瓶中，而后向反应瓶中加入20mL浓硫酸，将反应瓶提至低温反应器中，0℃下搅拌十分钟，而后向反应瓶中加入化合物4-羟基香豆素(1g,6.17mmol)，保持温度，继续搅拌1h，TLC监测反应，反应结束后，低温搅拌下缓慢向反应瓶中加入碎冰，直至不在有多余固体析出，过滤，滤饼用水多洗涤几遍，真空干燥，得到目标产物，收率42％，白色粉末状固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.53(d,J＝2.6Hz,1H),8.45(dd,J＝9.1,2.7Hz,1H),7.63(dd,J＝17.8,8.2Hz,1H),5.71(s,1H).MS(ESI),m/z:208.02[M+H]+.
实施例15
将化合物3(2.82g,1.0mol)溶于10mL的无水DMF溶液中置于其中，然后将反应瓶提至低温反应器中，0℃下搅拌，滴入Et3N(1.81ml,1.3mol)，滴毕，保持温度继续搅拌十分钟，而后滴入氯乙酰氯(960ul,1.2mol)，滴毕，保持温度继续搅拌2h后，将反应提至室温，常温搅拌2h后，TLC监测反应，反应结束后，加水淬灭反应，同时有大量固体析出，过滤，用水洗涤滤饼，真空干燥，得到目标产物，收率85％，灰白色粉末状固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.06(s,1H),8.21(d,J＝7.5Hz,1H),7.63(t,J＝7.3Hz,1H),7.35(m,2H),6.99(d,J＝8.5Hz,2H),6.66(d,J＝8.5Hz,2H),5.23(s,2H),5.00(s,1H).MS(ESI),m/z:329.06[M+H]+.
以下化合物的合成参考实施例15，根据化合物的结构替换为相应的原料即可。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.42(s,1H),9.19(s,1H),8.14(d,J＝9.0Hz,1H),7.70(d,J＝8.8Hz,2H),7.33(d,J＝8.8Hz,2H),6.99(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.94(d,J＝2.5Hz,1H),5.11(s,1H),4.27(s,2H),3.87(s,3H).MS(ESI),m/z:329.07[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.17(s,1H),9.33(s,1H),8.21(d,J＝7.6Hz,1H),7.96(t,J＝8.7Hz,1H),7.67(t,J＝7.4Hz,1H),7.39(m,3H),7.24(d,J＝8.8Hz,1H),5.41(s,1H),4.37(s,2H).MS(ESI),m/z:347.05[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.45(s,1H),9.74(s,1H),9.31(d,J＝2.5Hz,1H),8.48(dd,J＝9.1,2.6Hz,1H),7.73(d,J＝8.8Hz,2H),7.61(d,J＝9.1Hz,1H),7.37(d,J＝8.8Hz,2H),5.35(s,1H),4.28(s,2H).MS(ESI),m/z:374.05[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.59(s,1H),8.04(d,J＝7.8Hz,1H),7.76(dd,J＝16.1,8.5Hz,3H),7.47(m,2H),7.35(m,2H),5.22(s,1H),4.31(s,2H).MS(ESI),m/z:330.05[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.49(s,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,1H),7.75(d,J＝8.8Hz,2H),7.33(d,J＝8.8Hz,2H),7.05(m,2H),5.05(s,1H),4.29(s,2H),3.89(s,3H).MS(ESI),m/z:360.06[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.02(s,1H),10.89(s,1H),8.71(s,1H),8.19(d,J＝8.1Hz,1H),7.72(d,J＝8.6Hz,2H),7.50(t,J＝7.6Hz,2H),7.33–7.27(m,3H),7.16(t,J＝7.5Hz,1H),5.58(s,1H),4.35(s,2H).MS(ESI),m/z:328.07[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.65(s,1H),10.76(s,1H),7.84(dd,J＝8.3,3.2Hz,3H),7.67–7.54(m,3H),7.36(d,J＝8.2Hz,1H),7.26(t,J＝7.5Hz,1H),5.58(s,1H),4.34(s,2H).MS(ESI),m/z:345.04[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.55(s,1H),10.47(s,1H),7.97(d,J＝8.1Hz,1H),7.74(d,J＝8.6Hz,2H),7.60(t,J＝7.7Hz,1H),7.35(d,J＝8.2Hz,1H),7.26(dd,J＝14.6,8.0Hz,3H),5.32(s,1H),4.29(s,2H).MS(ESI),m/z:329.06[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.63(s,1H),10.69(s,1H),7.92(dd,J＝56.5,9.6Hz,2H),7.62(s,1H),7.47(s,2H),7.37(d,J＝7.3Hz,1H),7.27(s,1H),5.35(s,1H),4.31(s,2H).MS(ESI),m/z:347.05[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.80(s,1H),11.31(s,1H),7.83(dd,J＝17.0,5.7Hz,2H),7.46(d,J＝8.7Hz,1H),7.37(d,J＝8.9Hz,1H),7.25(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),7.18(dd,J＝15.0,5.7Hz,2H),6.48(d,J＝9.5Hz,1H),4.36(s,2H).MS(ESI),m/z:347.05[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.50(s,1H),11.01(s,1H),7.84(s,2H),7.64(d,J＝8.3Hz,1H),7.45(s,1H),7.33(d,J＝8.3Hz,1H),6.80(dd,J＝40.5,13.0Hz,2H),6.36(d,J＝8.9Hz,1H),4.34(s,2H).MS(ESI),m/z:347.05[M+H]+.
实施例16
取化合物4(100mg，0.3mmol)和KI(126mg，0.75mmol)分散于5ml无水DMF中，室温搅拌下滴加吡咯烷(21mg，0.45mmol)，随后室温搅拌过夜。次日点板检测反应完全，搅拌下加入15ml水，大量白色固体析出，抽滤得固体，50℃烘干得白色粉末固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.44(s,1H),9.28(s,1H),8.24(d,J＝7.7Hz,1H),7.68(m,3H),7.38(m,4H),5.24(s,1H),4.28(s,2H).MS(ESI),m/z:329.06[M+H]+.
以下化合物的合成参考实施例16，根据化合物结构替换相应的原料即可。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.79(s,1H),9.27(s,1H),8.24(d,J＝7.1Hz,1H),7.75(d,J＝8.8Hz,2H),7.65(m,1H),7.39(dd,J＝13.1,7.8Hz,2H),7.32(d,J＝8.7Hz,2H),5.21(s,1H),3.09(s,2H),2.49(s,4H),1.58(d,J＝4.8Hz,4H),1.41(s,2H).MS(ESI),m/z:378.19[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.87(s,1H),9.27(s,1H),8.24(d,J＝7.3Hz,1H),7.75(d,J＝8.8Hz,2H),7.66(m,1H),7.39(dd,J＝13.1,7.8Hz,2H),7.32(d,J＝8.8Hz,2H),5.21(s,1H),3.65(m,4H),3.15(s,2H),2.53(m,4H).MS(ESI),m/z:380.15[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.92(s,1H),9.41(d,J＝6.5Hz,1H),8.32(d,J＝8.0Hz,1H),7.77(dd,J＝14.6,8.7Hz,2H),7.66(t,J＝7.3Hz,1H),7.35(dd,J＝12.7,10.5,5.9Hz,4H),5.21(s,1H),3.15(s,2H),2.55(s,4H),2.42(s,4H),2.20(s,3H).MS(ESI),m/z:393.18[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.78(s,1H),9.27(s,1H),8.24(d,J＝7.2Hz,1H),7.76(d,J＝8.8Hz,2H),7.70–7.63(m,1H),7.39(dd,J＝13.1,7.8Hz,2H),7.32(d,J＝8.8Hz,2H),5.22(s,1H),3.10(s,2H),2.79(t,J＝8.8Hz,2H),2.08(td,J＝10.7,3.7Hz,1H),1.85–1.52(m,6H),0.85(d,J＝6.3Hz,4H).MS(ESI),m/z:392.19[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.84(s,1H),9.24(s,1H),8.18(d,J＝8.9Hz,1H),7.81(d,J＝8.7Hz,2H),7.29(d,J＝8.7Hz,2H),6.99(dd,J＝9.0,2.4Hz,1H),6.93(d,J＝2.4Hz,1H),5.08(s,1H),4.01(d,J＝5.9Hz,2H),3.87(s,3H),2.48(m,4H),1.24(m,4H).MS(ESI,m/z):394.10[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.77(s,1H),9.17(s,1H),8.14(d,J＝9.0Hz,1H),7.74(d,J＝8.8Hz,2H),7.29(d,J＝8.8Hz,2H),6.99(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.94(d,J＝2.5Hz,1H),5.08(s,1H),3.87(s,3H),3.08(s,2H),2.47(d,J＝5.2Hz,4H),1.57(dd,J＝10.9,5.6Hz,4H),1.41(d,J＝4.9Hz,2H).MS(ESI,m/z):408.01[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.85(s,1H),9.18(s,1H),8.14(d,J＝9.0Hz,1H),7.74(d,J＝8.8Hz,2H),7.30(d,J＝8.8Hz,2H),6.99(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.94(d,J＝2.5Hz,1H),5.08(s,1H),3.87(s,3H),3.65(m,4H),3.15(s,2H),2.53(d,J＝4.6Hz,4H).MS(ESI,m/z):410.10[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.80(s,1H),9.17(s,1H),8.14(d,J＝9.0Hz,1H),7.73(d,J＝8.8Hz,2H),7.29(d,J＝8.8Hz,2H),6.99(dd,J＝9.0,2.5Hz,1H),6.94(d,J＝2.5Hz,1H),5.08(s,1H),3.87(s,3H),3.13(s,2H),2.37(d,J＝24.4Hz,8H),2.19(s,3H).MS(ESI,m/z):423.20[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.77(s,1H),9.17(s,1H),8.14(d,J＝9.0Hz,1H),7.74(d,J＝8.8Hz,2H),7.29(d,J＝8.8Hz,2H),6.99(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.94(d,J＝2.5Hz,1H),5.08(s,1H),3.87(s,3H),3.09(s,2H),2.79(s,2H),2.07(d,J＝10.7,3.7Hz,2H),1.69(m,5H),0.85(d,J＝6.3Hz,3H).MS(ESI,m/z):422.20[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.81(s,1H),9.74(s,1H),9.32(d,J＝2.5Hz,1H),8.48(dd,J＝9.1,2.5Hz,1H),7.77(d,J＝8.8Hz,2H),7.62(t,J＝9.9Hz,1H),7.33(d,J＝8.8Hz,2H),5.34(d,J＝7.2Hz,1H),3.10(s,2H),2.79(t,J＝8.7Hz,2H),2.08(td,J＝10.7,3.6Hz,1H),1.67(m,6H),0.86(d,J＝6.3Hz,3H).MS(ESI),m/z:437.17[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.85(s,1H),8.36(s,1H),8.30(d,J＝9.8Hz,1H),7.52(d,J＝8.7Hz,2H),7.37(t,J＝8.2Hz,1H),7.08(d,J＝8.7Hz,2H),6.89(d,J＝8.2Hz,1H),6.77(d,J＝8.1Hz,1H),3.31(s,2H),2.05(m,4H),1.22(m,4H),0.85(d,J＝6.9Hz,2H).MS(ESI),m/z:423.16[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.83(s,1H),9.72(s,1H),9.31(d,J＝2.2Hz,1H),8.47(dd,J＝9.1,2.4Hz,1H),7.76(d,J＝8.7Hz,2H),7.58(t,J＝16.5Hz,1H),7.33(d,J＝8.7Hz,2H),5.33(s,1H),3.12(d,J＝15.0Hz,2H),2.54(s,4H),2.40(s,4H),2.19(s,3H).MS(ESI),m/z:438.17[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.89(s,1H),9.73(s,1H),9.32(d,J＝2.5Hz,1H),8.48(dd,J＝9.1,2.6Hz,1H),7.77(d,J＝8.8Hz,2H),7.61(d,J＝9.1Hz,1H),7.33(d,J＝8.8Hz,2H),5.33(s,1H),3.65(m,4H),3.16(s,2H),2.51(s,4H).MS(ESI),m/z:425.14[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.84(s,1H),9.72(s,1H),9.31(d,J＝2.5Hz,1H),8.48(dd,J＝9.1,2.5Hz,1H),7.78(d,J＝8.8Hz,2H),7.61(d,J＝9.1Hz,1H),7.32(d,J＝8.8Hz,2H),5.32(s,1H),3.27(d,J＝8.6Hz,2H),2.64(d,J＝26.1Hz,4H),1.76(t,J＝3.4Hz,4H).MS(ESI),m/z:409.14[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.68(s,1H),9.32(s,1H),8.21(d,J＝7.2Hz,1H),8.12(t,J＝8.8Hz,1H),7.67(t,J＝7.8Hz,1H),7.38(m,3H),7.23(d,J＝8.7Hz,1H),5.36(s,1H),3.13(s,2H),2.50(s,4H),1.58(m,4H),1.43(d,J＝5.0Hz,2H).MS(ESI),m/z:382.15[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.68(s,1H),9.32(s,1H),8.21(d,J＝7.2Hz,1H),8.12(t,J＝8.8Hz,1H),7.67(t,J＝7.8Hz,1H),7.38(m,3H),7.23(d,J＝8.7Hz,1H),5.36(s,1H),3.13(s,2H),2.50(s,4H),1.58(m,4H),1.43(d,J＝5.0Hz,2H).MS(ESI),m/z:396.16[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.66(s,1H),9.33(s,1H),8.21(d,J＝7.6Hz,1H),8.04(t,J＝8.7Hz,1H),7.67(t,J＝7.5Hz,1H),7.39(m,3H),7.23(d,J＝8.4Hz,1H),5.37(s,1H),3.65(s,4H),3.20(s,2H),2.56(s,4H).MS(ESI),m/z:398.14[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.64(s,1H),9.32(s,1H),8.21(d,J＝7.2Hz,1H),8.11(t,J＝8.8Hz,1H),7.67(t,J＝7.8Hz,1H),7.38(m,3H),7.23(d,J＝8.7Hz,1H),5.36(s,1H),3.17(d,J＝10.5Hz,2H),2.57(s,4H),2.39(s,4H),2.19(s,3H).MS(ESI),m/z:411.18[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.66(s,1H),9.32(s,1H),8.16(m,2H),7.67(t,J＝7.6Hz,1H),7.39(dt,J＝20.4,10.1Hz,3H),7.22(d,J＝8.4Hz,1H),5.36(s,1H),3.13(s,2H),2.80(d,J＝9.0Hz,2H),2.01(m,3H),1.61(d,J＝45.4Hz,4H),0.87(d,J＝6.1Hz,3H).MS(ESI),m/z:410.18[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.11(d,J＝8.3Hz,2H),7.58(m,2H),7.30(m,4H),5.12(s,1H),3.66(t,J＝6.3Hz,4H),3.31(s,2H),1.95(m,4H).MS(ESI),m/z:365.14[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.86(s,1H),8.05(dd,J＝7.9,1.3Hz,1H),7.77(m,3H),7.48(dd,J＝13.7,7.6Hz,2H),7.38(d,J＝8.8Hz,2H),5.20(s,1H),4.13(s,2H),3.45(s,2H),3.07(s,3H),1.77(s,5H).13CNMR(101MHz,DMSO):δ168.26,166.50,162.78,154.20,151.61,133.90,126.92,123.02,121.20,117.08,115.21,98.09,63.46,51.10,25.12,24.54.MS(ESI),m/z:379.16[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.94(s,1H),8.04(dd,J＝7.9,1.3Hz,1H),7.82(d,J＝9.0Hz,2H),7.76(m,1H),7.47(dd,J＝14.0,7.5Hz,2H),7.32(d,J＝9.0Hz,2H),5.20(s,1H),3.65(m,4H),3.16(s,2H),2.53(d,J＝4.6Hz,4H).MS(ESI),m/z:381.14[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.89(s,1H),8.04(m,1H),7.77(m,3H),7.47(dd,J＝14.2,7.6Hz,2H),7.31(d,J＝8.9Hz,2H),5.21(s,1H),3.14(s,2H),2.60(d,J＝58.5Hz,4H),2.39(s,4H),2.18(s,3H).MS(ESI),m/z:394.17[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.94(s,1H),8.03(dd,J＝7.9,1.3Hz,1H),7.72(d,J＝9.0Hz,2H),7.65(m,1H),7.47(dd,J＝14.0,7.5Hz,2H),7.32(d,J＝9.0Hz,2H),5.20(s,1H),3.16(s,2H),2.80(d,J＝9.0Hz,2H),2.53(d,J＝4.6Hz,4H),2.01(m,3H),1.61(d,J＝45.4Hz,4H),0.87(d,J＝6.1Hz,3H).MS(ESI),m/z:393.17[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ:9.93(s,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,1H),7.80(d,J＝8.9Hz,2H),7.29(d,J＝8.9Hz,2H),7.05(m,2H),5.04(s,1H),3.89(s,3H),3.27(d,J＝8.6Hz,2H),2.64(d,J＝26.1Hz,4H),1.76(t,J＝3.4Hz,4H).MS(ESI),m/z:395.15[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ:9.02(s,1H),7.88(d,J＝8.8Hz,1H),7.76(d,J＝8.9Hz,2H),7.49(d,J＝8.9Hz,2H),7.05(m,2H),5.02(s,1H),3.89(s,3H),3.45(s,2H),3.07(s,3H),1.77(s,5H).MS(ESI),m/z:409.17[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ:9.93(s,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,1H),7.80(d,J＝8.9Hz,2H),7.29(d,J＝8.9Hz,2H),7.05(m,2H),5.04(s,1H),3.89(s,3H),3.62(m,8H),3.14(d,J＝15.3Hz,2H).MS(ESI),m/z:411.15[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.03(s,1H),7.98(d,J＝8.8Hz,1H),7.72(d,J＝8.9Hz,2H),7.39(d,J＝8.9Hz,2H),7.05(m,2H),5.02(s,1H),3.89(s,3H),2.60(d,J＝58.5Hz,4H),2.39(s,4H),2.18(s,3H).MS(ESI),m/z:424.18[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ:9.93(s,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,1H),7.80(d,J＝8.9Hz,2H),7.29(d,J＝8.9Hz,2H),7.05(m,2H),5.04(s,1H),3.89(s,3H),3.62(m,9H),3.14(d,J＝15.3Hz,3H).MS(ESI),m/z:423.18[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H),9.74(s,1H),8.55(s,1H),8.10(d,J＝7.8Hz,1H),7.70(d,J＝8.8Hz,2H),7.49(t,J＝7.3Hz,1H),7.26(t,J＝8.8Hz,3H),7.17(t,J＝7.6Hz,1H),5.54(s,1H),3.25(s,2H),2.60(d,J＝5.3Hz,4H),1.80–1.72(m,4H).MS(ESI),m/z:363.18[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H),9.72(s,1H),8.55(s,1H),8.10(d,J＝7.9Hz,1H),7.68(d,J＝8.8Hz,2H),7.49(t,J＝7.2Hz,1H),7.26(dd,J＝8.1,6.2Hz,3H),7.17(t,J＝7.6Hz,1H),5.54(d,J＝1.3Hz,1H),3.12(s,2H),2.51(s,4H),2.36(d,J＝24.3Hz,4H),2.18(s,3H).MS(ESI),m/z:392.22[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H),9.87(s,1H),8.55(s,1H),8.10(d,J＝7.8Hz,1H),7.69(d,J＝8.8Hz,2H),7.49(t,J＝7.2Hz,1H),7.26(dd,J＝7.9,5.2Hz,3H),7.17(t,J＝7.6Hz,1H),5.54(s,1H),3.84(dt,J＝11.4,3.4Hz,2H),3.33(s,2H),3.28(dd,J＝11.5,2.1Hz,2H),2.68–2.58(m,1H),1.77(d,J＝12.5Hz,2H),1.31(ddd,J＝14.5,11.5,3.7Hz,2H).MS(ESI),m/z:393.19[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),9.71(s,1H),8.56(s,1H),8.11(d,J＝7.8Hz,1H),7.69(d,J＝8.8Hz,2H),7.49(dd,J＝11.3,4.1Hz,1H),7.27(t,J＝7.6Hz,3H),7.20–7.13(m,1H),5.55(s,1H),3.07(s,2H),2.50(td,J＝3.9,2.1Hz,4H),1.62–1.53(m,4H),1.45–1.37(m,2H).MS(ESI),m/z:377.20[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),9.82(s,1H),8.57(s,1H),8.11(d,J＝7.7Hz,1H),7.70(d,J＝8.8Hz,2H),7.55–7.44(m,1H),7.27(dd,J＝7.9,5.2Hz,3H),7.20–7.13(m,1H),5.55(s,1H),3.50(dd,J＝10.1,5.8Hz,4H),3.18(s,2H),2.58–2.52(m,2H),2.50–2.46(m,2H),2.00(s,3H).MS(ESI),m/z:420.20[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.00(s,1H),9.93(s,1H),8.65(s,1H),8.16(d,J＝8.1Hz,1H),7.71(d,J＝8.8Hz,2H),7.50(t,J＝7.7Hz,1H),7.28(dd,J＝11.4,8.6Hz,3H),7.17(t,J＝7.3Hz,1H),5.56(s,1H),3.39(s,4H),3.19(s,2H),2.51–2.47(m,4H),1.41(s,9H).MS(ESI),m/z:478.24[M+H]+.
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.13–8.08(m,1H),7.69(d,J＝8.8Hz,2H),7.58(t,J＝7.7Hz,1H),7.41–7.26(m,4H),5.86(s,1H),3.49(s,2H),2.88(q,J＝7.2Hz,4H),1.20(t,J＝7.2Hz,6H).MS(ESI),m/z:365.20[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),9.71(s,1H),8.57(s,1H),8.12(d,J＝8.0Hz,1H),7.70(d,J＝8.7Hz,2H),7.50(t,J＝7.4Hz,1H),7.27(t,J＝8.1Hz,3H),7.18(t,J＝7.5Hz,1H),5.56(s,1H),3.10(s,2H),2.85(d,J＝11.4Hz,2H),2.14(t,J＝10.7Hz,2H),1.60(d,J＝11.4Hz,2H),1.33–1.21(m,3H),0.92(d,J＝6.0Hz,3H).MS(ESI),m/z:391.21[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.97(s,1H),9.74(s,1H),8.56(s,1H),8.11(d,J＝8.0Hz,1H),7.69(d,J＝8.5Hz,2H),7.50(t,J＝7.4Hz,1H),7.27(t,J＝7.4Hz,3H),7.18(t,J＝7.4Hz,1H),5.55(s,1H),3.13(s,2H),2.52(s,4H),2.45(s,4H),2.34(dd,J＝14.1,7.0Hz,2H),1.00(t,J＝7.1Hz,3H).MS(ESI),m/z:406.22[M+H]+.
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.08(d,J＝7.9Hz,1H),7.68(d,J＝8.8Hz,2H),7.57(t,J＝7.2Hz,1H),7.40–7.26(m,5H),5.86(s,1H),3.82–3.74(m,4H),3.20(s,2H),2.65–2.58(m,4H).MS(ESI),m/z:379.18[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.96(s,1H),9.78(s,1H),8.57(s,1H),8.12(d,J＝8.0Hz,1H),7.70(d,J＝8.7Hz,2H),7.50(t,J＝7.6Hz,1H),7.27(t,J＝7.6Hz,3H),7.18(t,J＝7.6Hz,1H),5.55(s,1H),3.16(s,2H),3.02–2.95(m,2H),2.87–2.77(m,1H),2.57(s,6H),2.22(t,J＝11.2Hz,2H),1.89(d,J＝11.7Hz,2H),1.73–1.60(m,2H).MS(ESI),m/z:420.23[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.98(s,1H),10.35(s,1H),8.58(s,1H),8.11(d,J＝8.1Hz,1H),7.66(d,J＝8.7Hz,2H),7.51(t,J＝7.6Hz,1H),7.29(t,J＝9.0Hz,3H),7.18(t,J＝7.6Hz,1H),5.58(s,1H),3.80(s,2H),2.94(q,J＝7.1Hz,2H),1.18(dd,J＝9.0,5.4Hz,3H).MS(ESI),m/z:337.16[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.70(s,1H),10.53(s,1H),7.96(dd,J＝19.8,5.3Hz,2H),7.62(d,J＝7.1Hz,2H),7.43(t,J＝8.7Hz,2H),7.27(s,1H),5.34(s,1H),3.44(s,2H),2.70(s,4H),1.78(s,4H).MS(ESI),m/z:382.16[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.67(s,1H),10.28(s,1H),7.96(dd,J＝19.0,10.6Hz,2H),7.60(dd,J＝16.8,8.6Hz,2H),7.42(dd,J＝16.5,8.4Hz,2H),7.27(t,J＝7.5Hz,1H),5.34(s,1H),3.19(s,2H),2.55(s,4H),2.44(s,4H),2.21(s,3H).MS(ESI),m/z:411.18[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.61(s,1H),10.26(s,1H),7.97(dd,J＝9.0,6.3Hz,2H),7.62(dd,J＝12.0,4.8Hz,2H),7.41(q,J＝8.9Hz,2H),7.27(t,J＝8.0Hz,1H),5.34(s,1H),3.13(s,2H),2.49–2.42(m,4H),1.61–1.52(m,4H),1.40(d,J＝4.8Hz,2H).MS(ESI),m/z:396.17[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.69(s,1H),10.46(s,1H),7.97(t,J＝10.6Hz,2H),7.62(s,2H),7.47–7.39(m,2H),7.27(t,J＝7.5Hz,1H),5.34(s,1H),3.50(d,J＝3.8Hz,4H),3.26(s,2H),2.56(s,2H),2.50–2.46(m,2H),2.00(s,3H).MS(ESI),m/z:439.18[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.70(s,1H),10.42(s,1H),8.02–7.92(m,2H),7.66–7.57(m,2H),7.43(t,J＝9.0Hz,2H),7.30–7.23(m,1H),5.34(s,1H),3.36(s,4H),3.23(s,2H),2.63(s,6H),1.06(d,J＝5.1Hz,3H).MS(ESI),m/z:425.20[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.63(s,1H),10.08(s,1H),7.95(dd,J＝30.0,10.2Hz,2H),7.58(dd,J＝20.2,7.5Hz,2H),7.49–7.19(m,3H),5.34(s,1H),3.40(s,4H),3.20(s,2H),2.50(s,4H),1.41(s,9H).MS(ESI),m/z:497.22[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.67(s,1H),10.39(s,1H),8.02–7.92(m,2H),7.66–7.57(m,2H),7.43(dd,J＝17.8,8.7Hz,2H),7.27(dd,J＝11.2,4.1Hz,1H),5.34(s,1H),3.24(s,2H),3.00(s,3H),2.66(s,6H),2.24(t,J＝11.4Hz,2H),2.00(d,J＝10.9Hz,2H),1.77(dd,J＝11.9,3.2Hz,2H).MS(ESI),m/z:439.21[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.67(s,1H),10.31(s,1H),7.97(ddd,J＝15.4,10.6,1.6Hz,2H),7.66–7.55(m,2H),7.42(dd,J＝18.4,9.1Hz,2H),7.31–7.21(m,1H),5.34(s,1H),3.70–3.58(m,4H),3.20(s,2H),2.57–2.52(m,4H).MS(ESI),m/z:398.15[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.67(s,1H),10.32(s,1H),7.97(ddd,J＝15.5,10.6,1.6Hz,2H),7.67–7.58(m,2H),7.48–7.37(m,2H),7.27(dd,J＝11.3,4.0Hz,1H),5.35(s,1H),2.70(d,J＝5.8Hz,4H),1.06(t,J＝7.1Hz,6H).MS(ESI),m/z:384.17[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.66(s,1H),10.36(s,1H),8.04–7.89(m,2H),7.61(dd,J＝14.2,7.3Hz,2H),7.42(dd,J＝20.1,8.7Hz,2H),7.27(t,J＝7.6Hz,1H),5.34(s,1H),3.17(d,J＝4.2Hz,2H),2.92(s,2H),2.26(s,2H),1.61(d,J＝11.8Hz,2H),1.30(dd,J＝21.9,10.5Hz,3H),0.92(d,J＝6.0Hz,3H).MS(ESI),m/z:410.19[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.63(s,1H),10.16(s,1H),7.99(dd,J＝8.0,1.0Hz,1H),7.93(dd,J＝13.1,2.3Hz,1H),7.65–7.59(m,1H),7.54(dd,J＝8.9,1.4Hz,1H),7.44(t,J＝8.9Hz,1H),7.37(d,J＝8.1Hz,1H),7.27(dd,J＝11.6,4.5Hz,1H),5.34(s,1H),3.84(dt,J＝11.4,3.4Hz,2H),3.33(s,2H),3.28(dd,J＝11.5,2.0Hz,3H),2.64(ddd,J＝14.3,10.2,4.0Hz,1H),1.77(dd,J＝12.5,1.7Hz,2H),1.35–1.25(m,2H).MS(ESI),m/z:412.19[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.63(s,1H),7.99(d,J＝7.3Hz,1H),7.92(dd,J＝13.1,2.3Hz,1H),7.66–7.59(m,1H),7.54(dd,J＝8.9,1.4Hz,1H),7.44(t,J＝8.9Hz,1H),7.37(d,J＝8.2Hz,1H),7.27(t,J＝7.4Hz,1H),5.34(s,1H),3.33(s,3H),2.60(q,J＝7.1Hz,2H),1.06(t,J＝7.1Hz,3H).MS(ESI),m/z:356.14[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.63(s,1H),9.99(s,1H),7.90–7.82(m,3H),7.59(ddd,J＝10.9,6.2,1.6Hz,3H),7.35(d,J＝7.7Hz,1H),7.29–7.24(m,1H),5.58(s,1H),3.12(s,2H),2.50–2.45(m,4H),1.58(dt,J＝11.0,5.7Hz,4H),1.42(d,J＝5.0Hz,2H).MS(ESI),m/z:394.16[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.63(s,1H),9.98(s,1H),7.86(dd,J＝10.6,8.0Hz,3H),7.62–7.55(m,3H),7.35(d,J＝7.7Hz,1H),7.29–7.23(m,1H),5.57(d,J＝1.1Hz,1H),3.13(s,2H),2.85(d,J＝11.6Hz,2H),2.14(t,J＝10.4Hz,2H),1.60(d,J＝10.2Hz,2H),1.36–1.21(m,3H),0.92(d,J＝6.1Hz,3H).MS(ESI),m/z:408.17[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.62(s,1H),10.04(s,1H),7.87(dd,J＝15.0,8.2Hz,3H),7.58(t,J＝7.8Hz,3H),7.35(d,J＝8.0Hz,1H),7.27(d,J＝8.0Hz,1H),5.57(s,1H),3.30(s,2H),2.61(s,4H),1.77(dd,J＝6.5,3.2Hz,4H).MS(ESI),m/z:380.14[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.63(s,1H),10.09(s,1H),7.86(dd,J＝14.6,8.3Hz,3H),7.64–7.55(m,3H),7.35(d,J＝8.2Hz,1H),7.25(dd,J＝11.3,4.1Hz,1H),5.57(s,1H),3.51(dd,J＝10.1,6.2Hz,4H),3.23(s,2H),2.59–2.53(m,2H),2.49(d,J＝9.3Hz,2H),2.00(s,3H).MS(ESI),m/z:437.17[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.67(s,1H),10.19(s,1H),7.86(dd,J＝18.9,8.2Hz,3H),7.58(t,J＝8.3Hz,3H),7.38(d,J＝8.2Hz,1H),7.25(t,J＝7.6Hz,1H),5.57(s,1H),3.17(d,J＝7.6Hz,2H),2.54(s,4H),2.38(s,4H),2.18(s,3H).MS(ESI),m/z:409.17[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.59(s,1H),10.03(s,1H),7.82(dd,J＝11.4,8.6Hz,3H),7.55(dd,J＝12.6,8.0Hz,3H),7.31(d,J＝8.2Hz,1H),7.22(t,J＝7.6Hz,1H),5.53(s,1H),3.73–3.53(m,4H),3.15(s,2H),2.47(s,4H).MS(ESI),m/z:396.14[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.63(s,1H),9.95(s,1H),7.87(dd,J＝18.0,8.4Hz,3H),7.63–7.54(m,3H),7.35(d,J＝8.2Hz,1H),7.30–7.21(m,1H),5.58(s,1H),3.21(s,2H),2.63(q,J＝7.1Hz,4H),1.04(t,J＝7.1Hz,6H).MS(ESI),m/z:382.16[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.64(s,1H),10.06(s,1H),7.87(dd,J＝12.9,8.5Hz,3H),7.64–7.54(m,3H),7.36(d,J＝8.2Hz,1H),7.26(t,J＝7.5Hz,1H),5.57(s,1H),3.18(s,2H),2.96(d,J＝11.2Hz,2H),2.52(s,1H),2.37(s,6H),2.19(t,J＝11.2Hz,2H),1.82(d,J＝11.0Hz,2H),1.66–1.52(m,2H).MS(ESI),m/z:437.20[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.63(s,1H),10.07(s,1H),7.86(dd,J＝10.9,8.7Hz,3H),7.59(dd,J＝12.5,8.0Hz,3H),7.35(d,J＝8.2Hz,1H),7.26(t,J＝7.6Hz,1H),5.57(s,1H),3.40(m,4H),3.21(s,2H),2.49(m,4H),1.41(s,9H).MS(ESI),m/z:495.21[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.63(s,1H),10.02(s,1H),7.86(t,J＝8.5Hz,3H),7.65–7.52(m,3H),7.35(d,J＝8.1Hz,1H),7.26(t,J＝7.6Hz,1H),5.57(s,1H),3.17(s,2H),2.55(s,4H),2.44(s,4H),2.34(q,J＝7.1Hz,2H),1.00(t,J＝7.2Hz,3H).MS(ESI),m/z:423.18[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.62(s,1H),10.03(s,1H),7.86(t,J＝9.1Hz,3H),7.67–7.54(m,3H),7.35(d,J＝8.1Hz,1H),7.25(dd,J＝11.3,4.1Hz,1H),5.57(s,1H),3.33(s,2H),2.60(q,J＝7.1Hz,2H),1.06(t,J＝7.1Hz,3H).MS(ESI),m/z:354.13[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.63(s,1H),10.16(s,1H),7.85(dd,J＝13.4,4.8Hz,3H),7.68–7.51(m,3H),7.35(d,J＝7.8Hz,1H),7.30–7.21(m,1H),5.57(s,1H),3.84(dt,J＝11.4,3.4Hz,2H),3.38(s,2H),3.28(m,3H),2.64(ddd,J＝14.3,10.2,4.0Hz,1H),1.82–1.74(m,2H),1.36–1.23(m,2H).MS(ESI),m/z:410.15[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.54(s,1H),9.83(s,1H),7.98(d,J＝7.9Hz,1H),7.80(d,J＝8.9Hz,2H),7.60(t,J＝7.7Hz,1H),7.36(d,J＝8.2Hz,1H),7.25(t,J＝7.3Hz,3H),5.32(s,1H),3.10(s,2H),2.48(s,4H),1.64–1.54(m,4H),1.42(d,J＝4.8Hz,2H).MS(ESI),m/z:378.18[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.55(s,1H),9.82(s,1H),7.97(d,J＝7.8Hz,1H),7.80(d,J＝8.8Hz,2H),7.60(t,J＝7.4Hz,1H),7.36(d,J＝8.2Hz,1H),7.25(t,J＝7.1Hz,3H),5.32(s,1H),3.11(s,2H),2.85(d,J＝11.4Hz,2H),2.13(t,J＝11.0Hz,2H),1.59(d,J＝11.1Hz,2H),1.36–1.21(m,3H),0.91(d,J＝5.9Hz,3H).MS(ESI),m/z:392.20[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.54(s,1H),9.89(s,1H),7.97(d,J＝7.3Hz,1H),7.78(d,J＝8.9Hz,2H),7.64–7.56(m,1H),7.36(d,J＝8.2Hz,1H),7.26(dd,J＝7.5,4.9Hz,3H),5.31(s,1H),3.19(s,2H),2.63(s,8H),2.35(s,3H).MS(ESI),m/z:393.19[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.55(s,1H),9.96(s,1H),7.97(d,J＝7.8Hz,1H),7.78(d,J＝8.9Hz,2H),7.61(t,J＝7.7Hz,1H),7.36(d,J＝8.2Hz,1H),7.26(t,J＝7.9Hz,3H),5.30(s,1H),3.31(s,2H),3.02(m,6H),2.83(m,4H),1.20(t,J＝7.1Hz,3H).MS(ESI),m/z:421.20[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.54(s,1H),9.87(s,1H),7.98(d,J＝7.9Hz,1H),7.81(d,J＝8.8Hz,2H),7.60(t,J＝7.6Hz,1H),7.36(d,J＝8.2Hz,1H),7.25(t,J＝8.8Hz,3H),5.31(s,1H),3.27(s,2H),2.61(s,4H),1.76(s,4H).MS(ESI),m/z:364.16[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.54(s,1H),9.90(s,1H),7.97(d,J＝8.5Hz,1H),7.79(d,J＝8.9Hz,2H),7.62–7.56(m,1H),7.35(d,J＝8.2Hz,1H),7.25(dd,J＝8.1,4.1Hz,3H),5.30(s,1H),3.39(m,4H),3.18(s,2H),2.49(m,4H),1.40(s,9H).MS(ESI),m/z:479.23[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.54(s,1H),9.84(s,1H),7.97(d,J＝8.0Hz,1H),7.79(d,J＝8.8Hz,2H),7.60(t,J＝7.6Hz,1H),7.35(d,J＝8.2Hz,1H),7.25(t,J＝7.2Hz,3H),5.31(s,1H),3.12(s,2H),2.92(d,J＝11.5Hz,2H),2.51(m,1H),2.26(s,6H),2.16(t,J＝11.2Hz,3H),1.76(d,J＝11.7Hz,2H),1.54(dd,J＝20.4,11.4Hz,2H).MS(ESI),m/z:421.22[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.54(s,1H),9.98(s,1H),7.97(d,J＝7.5Hz,1H),7.78(d,J＝8.9Hz,2H),7.59(t,J＝7.2Hz,1H),7.35(d,J＝8.2Hz,1H),7.25(dd,J＝7.8,5.5Hz,3H),5.31(s,1H),3.84(d,J＝11.3Hz,2H),3.34(d,J＝6.9Hz,2H),3.30–3.24(m,2H),2.64(m,J＝10.3,5.1Hz,1H),1.77(d,J＝11.4Hz,2H),1.31(dd,J＝19.3,11.2Hz,2H).MS(ESI),m/z:407.21[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.53(s,1H),9.89(s,1H),7.97(d,J＝8.0Hz,1H),7.78(d,J＝8.9Hz,2H),7.59(t,J＝7.7Hz,1H),7.35(d,J＝8.2Hz,1H),7.25(dd,J＝7.6,5.1Hz,3H),5.30(s,1H),3.69–3.61(t,4H),3.15(s,2H),2.53(t,J＝4.4Hz,4H).MS(ESI),m/z:380.16[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.54(s,1H),9.92(s,1H),7.97(d,J＝7.7Hz,1H),7.79(d,J＝8.9Hz,2H),7.60(t,J＝7.2Hz,1H),7.35(d,J＝8.2Hz,1H),7.24(dd,J＝7.9,4.3Hz,3H),5.31(s,1H),3.51(d,J＝4.1Hz,4H),3.20(s,2H),2.57–2.53(m,2H),2.48(d,J＝4.8Hz,2H),2.00(s,3H).MS(ESI),m/z:447.19[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.54(s,1H),9.79(s,1H),7.97(d,J＝7.3Hz,1H),7.80(d,J＝8.9Hz,2H),7.62–7.57(m,1H),7.35(d,J＝8.2Hz,1H),7.29–7.19(m,3H),5.31(s,1H),3.18(s,2H),2.62(q,J＝7.1Hz,4H),1.04(t,J＝7.1Hz,6H).MS(ESI),m/z:366.18[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.56(s,1H),10.45(s,1H),7.97(d,J＝7.3Hz,1H),7.76(d,J＝8.9Hz,2H),7.68–7.55(m,1H),7.36(d,J＝8.2Hz,1H),7.32–7.21(m,3H),5.31(s,1H),3.77(s,2H),2.91(q,J＝7.2Hz,2H),1.18(t,J＝7.2Hz,3H).MS(ESI),m/z:338.15[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.04(s,1H),7.98(d,J＝8.0Hz,1H),7.91(d,J＝13.0Hz,1H),7.65–7.51(m,2H),7.47–7.33(m,2H),7.26(t,J＝7.6Hz,1H),5.34(s,1H),3.13(s,2H),2.79(s,4H),2.46(s,4H).MS(ESI),m/z:397.17[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.68(s,1H),10.32(s,1H),7.96(t,J＝12.0Hz,2H),7.59(d,J＝7.9Hz,2H),7.41(d,J＝6.6Hz,2H),7.26(t,J＝7.5Hz,1H),5.33(s,1H),3.15(s,2H),2.50(m,8H),1.00(s,9H).MS(ESI),m/z:453.23[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.70(s,1H),10.53(s,1H),8.02–7.94(m,2H),7.62(t,J＝8.0Hz,2H),7.44(t,J＝8.7Hz,2H),7.27(t,J＝7.4Hz,1H),5.34(s,1H),3.74(s,2H),3.53(s,2H),3.27(s,2H),2.59(s,4H),1.98(ms,1H),0.71(m,J＝8.5Hz,4H).MS(ESI),m/z:465.19[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.74(s,1H),9.97(s,1H),7.84(d,J＝8.7Hz,2H),7.51–7.03(m,5H),6.49(d,J＝9.0Hz,1H),3.11(s,2H),2.83(d,J＝8.2Hz,2H),2.13(s,2H),1.58(d,J＝10.7Hz,2H),1.46–1.16(m,3H),0.91(s,3H).MS(ESI),m/z:410.19[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.73(s,1H),9.98(s,1H),7.83(t,J＝10.4Hz,2H),7.42(d,J＝8.6Hz,1H),7.35–7.22(m,2H),7.17(dd,J＝17.8,8.7Hz,2H),6.49(d,J＝9.5Hz,1H),3.38(s,4H),3.17(s,2H),2.48(d,J＝4.9Hz,4H),1.40(s,9H).MS(ESI),m/z:497.23[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.73(s,1H),9.99(s,1H),7.88–7.79(m,2H),7.43(d,J＝8.9Hz,1H),7.32(d,J＝8.9Hz,1H),7.26(dd,J＝8.9,2.6Hz,1H),7.22–7.13(m,2H),6.50(d,J＝9.6Hz,1H),3.74(s,2H),3.54(s,2H),3.20(s,2H),2.56(s,2H),2.50(s,2H),1.97(m,J＝12.6,7.7,4.8Hz,1H),0.77–0.69(m,4H).MS(ESI),m/z:465.19[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.72(s,1H),9.93(s,1H),7.82(dd,J＝18.7,5.9Hz,2H),7.41(d,J＝9.0Hz,1H),7.31(d,J＝8.9Hz,1H),7.25(dd,J＝8.9,2.6Hz,1H),7.21–7.11(m,2H),6.49(d,J＝9.6Hz,1H),3.14(s,2H),2.54(m,4H),2.42(m,4H),2.25(s,3H).MS(ESI),m/z:411.10[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.72(s,1H),9.87(s,1H),7.88–7.78(m,2H),7.43(d,J＝8.9Hz,1H),7.36–7.23(m,2H),7.22–7.11(m,2H),6.49(d,J＝9.6Hz,1H),3.07(s,2H),2.45(s,4H),1.62–1.51(m,4H),1.40(d,J＝4.9Hz,2H).MS(ESI),m/z:396.17[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.72(s,1H),9.96(s,1H),7.82(dd,J＝16.8,5.9Hz,2H),7.42(d,J＝8.8Hz,1H),7.35–7.22(m,2H),7.22–7.11(m,2H),6.49(d,J＝9.6Hz,1H),3.70–3.59(m,4H),3.14(s,2H),2.50(d,J＝1.1Hz,4H).MS(ESI),m/z:398.17[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.73(s,1H),9.98(s,1H),7.82(dd,J＝16.0,5.8Hz,2H),7.43(d,J＝8.9Hz,1H),7.35–7.23(m,2H),7.23–7.13(m,2H),6.50(d,J＝9.6Hz,1H),3.50(d,J＝4.3Hz,4H),3.18(s,2H),2.53(d,J＝4.6Hz,2H),2.48–2.44(m,2H),2.00(s,3H).MS(ESI),m/z:439.18[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.72(s,1H),9.85(s,1H),7.89–7.79(m,2H),7.46(d,J＝8.9Hz,1H),7.31(d,J＝8.9Hz,1H),7.25(dd,J＝8.9,2.6Hz,1H),7.22–7.11(m,2H),6.49(d,J＝9.6Hz,1H),3.17(s,2H),2.60(q,J＝7.1Hz,4H),1.02(t,J＝7.1Hz,6H).MS(ESI),m/z:384.17[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.72(s,1H),9.95(s,1H),7.90–7.77(m,2H),7.44(d,J＝8.8Hz,1H),7.36–7.22(m,2H),7.22–7.11(m,2H),6.49(d,J＝9.6Hz,1H),3.27(s,2H),2.60(s,4H),1.76(s,4H).MS(ESI),m/z:382.15[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.73(s,1H),9.95(s,1H),7.82(t,J＝12.2Hz,2H),7.48–7.05(m,5H),6.50(d,J＝9.4Hz,1H),3.18(s,2H),2.97(d,J＝10.6Hz,3H),2.77–2.54(m,6H),2.23(t,J＝11.2Hz,2H),1.90(d,J＝9.1Hz,2H),1.66(d,J＝10.5Hz,2H).MS(ESI),m/z:439.21[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.74(s,1H),10.72(s,1H),7.90–7.69(m,2H),7.36–7.15(m,5H),6.51(d,J＝9.5Hz,1H),3.31(s,2H),3.03(dd,J＝14.4,7.1Hz,2H),1.25–1.14(t,3H).MS(ESI),m/z:356.14[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.73(s,1H),10.00(s,1H),7.82(t,J＝12.0Hz,2H),7.47–7.08(m,5H),6.50(d,J＝9.6Hz,1H),3.48(s,2H),3.32(s,2H),3.09(s,4H),2.70(s,2H),1.34(s,9H).MS(ESI),m/z:453.23[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.48(s,1H),9.94(s,1H),7.87(dd,J＝17.8,5.9Hz,2H),7.64(d,J＝8.7Hz,1H),7.51(d,J＝8.8Hz,1H),7.29(t,J＝9.0Hz,1H),6.85(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),6.76(d,J＝2.1Hz,1H),6.36(d,J＝9.5Hz,1H),3.11(s,2H),2.82(d,J＝11.4Hz,2H),2.12(t,J＝11.2Hz,2H),1.59(d,J＝11.2Hz,2H),1.42–1.19(m,3H),0.91(d,J＝6.0Hz,3H).MS(ESI),m/z:410.19[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.49(s,1H),10.04(s,1H),7.91–7.80(m,2H),7.64(d,J＝8.7Hz,1H),7.50(d,J＝8.8Hz,1H),7.30(t,J＝9.0Hz,1H),6.84(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),6.76(d,J＝2.1Hz,1H),6.36(d,J＝9.5Hz,1H),3.70–3.61(m,4H),2.51(s,4H).MS(ESI),m/z:498.15[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.49(s,1H),10.07(s,1H),7.92–7.78(m,2H),7.65(d,J＝8.6Hz,1H),7.46(d,J＝8.6Hz,1H),7.31(t,J＝9.0Hz,1H),6.91–6.70(m,2H),6.36(d,J＝9.5Hz,1H),3.31(s,2H),3.17(s,4H),2.77-2.45(d,J＝20.0Hz,7H).MS(ESI),m/z:411.18[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.48(s,1H),10.05(s,1H),7.91–7.81(m,2H),7.63(t,J＝9.9Hz,1H),7.49(d,J＝8.8Hz,1H),7.30(t,J＝9.0Hz,1H),6.83(dt,J＝16.9,8.5Hz,1H),6.76(d,J＝2.2Hz,1H),6.36(d,J＝9.5Hz,1H),3.58–3.45(m,4H),3.20(s,2H),2.53(dd,J＝8.6,3.8Hz,2H),2.49–2.44(m,2H),2.01(d,J＝10.8Hz,3H).MS(ESI),m/z:439.18[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.48(s,1H),10.03(s,1H),7.86(dd,J＝11.5,5.6Hz,2H),7.64(d,J＝8.6Hz,1H),7.49(d,J＝8.9Hz,1H),7.30(t,J＝9.0Hz,1H),6.84(dd,J＝8.6,2.1Hz,1H),6.76(s,1H),6.36(d,J＝9.5Hz,1H),3.37(d,J＝13.9Hz,4H),3.19(s,2H),2.48(s,3H),1.40(s,9H).MS(ESI),m/z:497.22[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.49(s,1H),9.98(d,J＝24.3Hz,1H),7.92–7.74(m,2H),7.62(t,J＝13.5Hz,1H),7.51(d,J＝8.6Hz,1H),7.28(t,J＝8.9Hz,1H),6.84(d,J＝6.8Hz,1H),6.76(s,1H),6.35(d,J＝9.4Hz,1H),3.27(s,2H),2.59(s,4H),1.76(s,4H).MS(ESI),m/z:482.16[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.48(s,1H),9.95(s,1H),7.86(dd,J＝19.2,5.9Hz,2H),7.64(d,J＝8.7Hz,1H),7.50(dd,J＝8.8,1.0Hz,1H),7.29(t,J＝9.0Hz,1H),6.84(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),6.76(d,J＝2.1Hz,1H),6.36(d,J＝9.5Hz,1H),3.09(s,2H),2.46(s,4H),1.64–1.50(m,4H),1.40(d,J＝4.2Hz,2H).MS(ESI),m/z:396.17[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.50(s,1H),10.05(s,1H),7.89–7.80(m,2H),7.65(d,J＝8.7Hz,1H),7.48(d,J＝8.8Hz,1H),7.31(t,J＝9.0Hz,1H),6.83(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),6.77(d,J＝2.1Hz,1H),6.36(d,J＝9.5Hz,1H),3.59–3.39(m,2H),3.32(s,2H),3.11(d,J＝39.2Hz,4H),2.70(s,2H),1.32(s,9H).MS(ESI),m/z:453.23[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.48(s,1H),10.06(s,1H),7.91–7.81(m,2H),7.64(d,J＝8.7Hz,1H),7.50(d,J＝8.8Hz,1H),7.30(t,J＝9.0Hz,1H),6.84(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),6.76(d,J＝2.1Hz,1H),6.36(d,J＝9.5Hz,1H),3.74(s,2H),3.54(s,2H),3.21(s,2H),2.57(s,2H),2.50–2.45(m,2H),2.03–1.91(m,1H),0.78–0.64(m,4H).MS(ESI),m/z:465.19[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.48(s,1H),10.02(s,1H),7.94–7.76(m,2H),7.65(d,J＝8.6Hz,1H),7.48(d,J＝8.6Hz,1H),7.30(t,J＝9.0Hz,1H),6.84(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),6.76(s,1H),6.36(d,J＝9.5Hz,1H),3.20(s,2H),2.99(d,J＝11.3Hz,3H),2.71(d,J＝12.9Hz,6H),2.24(m,J＝11.3Hz,2H),1.92(d,J＝11.0Hz,2H),1.68(m,J＝20.6,10.2Hz,2H).MS(ESI),m/z:439.21[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.53–11.42(m,1H),9.98–9.87(m,1H),7.95–7.76(m,2H),7.68–7.61(m,1H),7.58–7.50(m,1H),7.32–7.24(m,1H),6.89–6.83(m,1H),6.79–6.71(m,1H),6.39–6.31(m,1H),3.18(s,2H),2.67–2.56(m,4H),1.04(d,J＝7.1Hz,6H).MS(ESI),m/z:384.17[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.50(s,1H),7.83(dd,J＝17.3,12.1Hz,2H),7.65(d,J＝8.7Hz,1H),7.42(d,J＝8.7Hz,1H),7.33(t,J＝8.9Hz,1H),6.84(dd,J＝8.6,2.0Hz,1H),6.77(s,1H),6.36(d,J＝9.5Hz,1H),3.73(s,2H),2.87(q,J＝7.3Hz,2H),1.16(t,J＝7.3Hz,3H).MS(ESI),m/z:354.14[M+H]+.
1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.11(d,J＝7.3Hz,1H),7.77(d,J＝8.9Hz,2H),7.67–7.60(m,1H),7.39(d,J＝8.2Hz,1H),7.34(t,J＝7.7Hz,1H),7.23(d,J＝9.0Hz,2H),5.57(s,1H),3.30(s,2H),3.16(s,4H),2.86(s,4H),1.32(s,9H).MS(ESI),m/z:379.16[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.54(s,1H),9.98(s,1H),7.97(d,J＝7.5Hz,1H),7.78(d,J＝8.9Hz,2H),7.59(t,J＝7.2Hz,1H),7.35(d,J＝8.2Hz,1H),7.25(dd,J＝7.8,5.5Hz,3H),5.31(s,1H),3.84(d,J＝11.3Hz,2H),3.34(d,J＝6.9Hz,2H),3.30–3.24(m,2H),2.64(m,J＝10.3,5.1Hz,1H),1.77(d,J＝11.4Hz,2H),1.31(dd,J＝19.3,11.2Hz,2H).MS(ESI),m/z:394.17[M+H]+.
药效学试验部分
以下代表性实验(不限于此)用于分析本发明化合物的生物活性
1.体外活性
过量的细胞外基质(ECM)主要由胶原组成，是纤维化疾病的病理标志物，因此胶原合成的检测是评估纤维化疾病的有效指标。根据我们之前的研究和其他报道，由TGF-β诱导的大鼠成纤维细胞(NRK-49F)会产生许多类似于体内纤维化特征的细胞外胶原。因此，它已被认为是有效的、方便的体外抗纤维化筛选模型。
1.1抗纤维化活性
NRK-49细胞培养于含有10％FBS、50U/ml的青霉素和50μg/ml的链霉素的1640培养基中，置于5％CO2、37℃孵箱中培养传代。NRK-49F细胞铺96孔板(104个细胞/孔)，1640+5％FBS培养基培养3d，去细胞上清，加入1640+1％ITS培养2d，去细胞上清，加入含有TGF-β(5ng/ml)与10μM待筛化合物的1640+1％ITS培养基培养2d。除去细胞上清，加入100μl/孔4％多聚甲醛固定30min，PBS清洗两次，100μl/孔0.1％PSR染液室温孵育4h，去除染色液，加入100μl/孔0.1％乙酸清洗3遍，晾干后显微镜下拍照。加入100μl/孔0.1M NaOH，室温震荡30分钟充分溶解沉淀，酶标仪540nm波长处测定每孔OD值，筛选出具有抑制胶原沉积作用的化合物。总胶原蛋白累积抑制＝(给药A值-对照A值)/(模型A值-对照A值)×100％。所有测定重复三次。Nintedanib作为阳性药物。
1.2细胞毒性
将NRK-49F细胞以0.5×105个细胞/ml的密度接种在96孔板中，在100μl悬浮液中培养过夜，实验组加入浓度为10μM的药物。72小时后，向每个孔中加入20μl5％(m/v)MTT溶液，并在培养箱中温育4小时。然后向每个孔中加入150μlDMSO。最后，在酶标仪上测量每个孔的吸光度(A值)。存活率＝给药值-零A值)/(空白A值-零A值)×100％。所有测定重复三次。Nintedanib作为阳性药物。
1.3胶原沉积抑制率和细胞毒性实验结果
表1.NH-4取代香豆素母核化合物的胶原抑制率和细胞毒性
表2.O-4取代香豆素母核化合物的胶原抑制率和细胞毒性
表3.NH-4取代和S-4取代的2-喹啉酮母核化合物的胶原抑制率和细胞毒性
表4.O-4取代2-喹啉酮母核化合物的胶原抑制率和细胞毒性
表5.O-6取代和O-7取代的2-喹啉酮母核化合物的胶原抑制率和细胞毒性
1.4划痕实验及其结果
炎症的发生和加剧往往伴随着纤维细胞、免疫细胞等的迁移和组织愈合带来的血管增生等现象。我们选择几个在TGF-β诱导的NRK-49F细胞上具有良好胶原沉积抑制性和较低毒性的化合物，随后与HUVEC细胞共同孵育，在0h、12h、24h后探究其对人静脉内皮细胞迁移能力的影响。
实验具体步骤：1.先用marker笔在六孔板背后，用直尺均匀化3条横线，横穿过孔；2.用完全培养基将生长在对数期的细胞铺板，每孔5x106个HUVEC细胞；3.第二天细胞长满后用灭过菌的200uL枪尖尽量垂直于背后的横线划痕，枪头垂直，不能倾斜；4.用PBS洗细胞3次，洗去划下的细胞，换成不含血清的培养基；5.空白组不做任何处理，诱导组用10ng/ml的TGF-β诱导细胞迁移，给药组在加10ng/ml的TGF-β同时加入梯度浓度的化合物进行处理，此时拍照代表0h；6.放入37度5％CO2培养箱进行培养，按12、24小时拍照取样。
如图1所示，化合物21a、25k、29f对HUVEC细胞de1迁移抑制性最强，表明这些化合物可能对纤维化过程中过度的组织愈合与修复有抑制性。
1.5化合物对COL1A1,α-SMA,and p-Smad3蛋白表达的抑制性
胶原蛋白I型α1(COL1A1)，α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在纤维化疾病中过表达，其通常被认为是纤维化标志物。为了进一步研究胶原抑制率较高的化合物的抗纤维化活性，研究了它们在体外抑制COL1A1，α-SMA蛋白质表达的能力。TGF-β与其受体结合并募集下游Smad3蛋白，导致静息成纤维细胞分化为分泌ECM的肌成纤维细胞。因此，TGF-β/Smad3途径已成为纤维化许多尝试的目标。
使用具有1mM苯甲基磺酰氟(PMSF)和蛋白酶抑制剂混合物的RIPA缓冲液收获蛋白质裂解物，通过二辛可宁酸(BCA)试剂盒测定蛋白质浓度。将相同蛋白质(30-40μg)的每种样品在10％-12％SDS/PAGE凝胶上在80V下分离20分钟，然后转变为120V持续1小时。将蛋白质在80-100V下转移到PVDF膜上1小时，将膜在含有1‰Tween 20的PBS中的5％(wt/vol)干奶中封闭，然后在4℃下与指定的一抗孵育过夜。在与HRP-缀合的第二抗体温育后，用SuperLumia ECL Plus HRP底物试剂盒溶液(K22030，ABBKine)检测免疫反应条带。使用的一抗是：α-SMA(251411，ZENBIO)，胶原蛋白I(14695-1-AP，蛋白质技术)，p-smad3(AF3363，Affinity)，GAPDH(AB0037，Abways)，使用的二抗是：Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)HRP(AB0101,Abways),Goat Anti-Mouse IgG(H+L)HRP(AB0102,Abways)。
从图2和图3可以看出化合物9d和29f对COL1A1,α-SMA,and p-Smad3蛋白表达的抑制性。
2.药动学实验
Nintedanib的口服生物利用度为12％，低的生物利用度限制了其在临床上的进一步应用。化合物9d和29f的口服生物利用度分别为39.88％和41.55％，显示了良好的成药性。具体数据见表6、表7。
表6.化合物9d的药物代谢参数
表7.化合物29f的药物代谢参数
实验方案：通过SD大鼠口服静脉给药,考察待测化合物的药代动力学情况。
样品配制：称量15mg左右的待测化合物，加2％的吐温80和2％的乙醇，以及生理盐水，配成1mg/ml的9d或29f化合物溶液，待给药用。
样品采集：5只SD大鼠(成都达硕实验动物有限公司，许可证号：SCXK(川)2015-030)，雌雄各半，分别按5mg/kg静脉给药、10mg/kg口服给药，给药前0min和给药后5min、15min、30min、1h、2h、4h、6h、8h、10h和24h血浆。采集约0.2ml血液，将收集的血液3500r 9d或29f化合物离心15min，收集上清血浆，-20℃冻存待测。
样品测定：准备相应的仪器和设备；标准溶液的配置，用移液枪准确吸取一定量的待测化合物储备液(1mg/ml)，用甲醇稀释至EP管中，配成浓度分别为：19.53，39.06，78.125，156.25，312.5，625，1250，2500，5000，10000ng/ml的待测化合物标准品溶液；标准曲线的建立，取45μl空白血浆于各个EP管中，分别加入5μl上述各浓度的9d或29f化合物标准品溶液，涡旋混匀，加入200μl含12.5ng/ml内标SAHA的甲醇沉淀蛋白，涡旋3min，离心(13000rpm，15min)，取上清液2μl进样。得到待测化合物理论浓度分别是1.95，3.91，7.81，15.63，31.25，62.5，125，250，500，1000ng/ml的待测溶液；血浆样品的制备，采集的血浆样品经室温解冻后，涡旋混合均匀。取50μl血浆于各个EP管中，加入200μl含12.5ng/ml内标SAHA的甲醇沉淀蛋白，涡旋3min，离心(13000rpm，15min)，取2μl进样分析；摸索液相条件；最后整理数据，计算相关PK值。
3.在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化模型上的体内活性
肺纤维化是一种长期的进行性肺病，伴有细胞外基质的过度沉积，细胞外基质由胶原，纤维连接蛋白和其他炎症细胞组成。为了在体内探索化合物9d、29f的抗纤维化效力，使用博来霉素诱导的肺纤维化模型。在注射博来霉素作为阳性药物后，分别以50mg/kg/天的剂量口服施用Nintedanib(尼达尼布)。化合物也分别以50和100mg/kg/天的剂量口服给药。
建模：
试剂配制：a.水合氯醛配制：水合氯醛配制成3％溶液，按1ml/100g的比例，每只小鼠体重为20g，约注射200μl；b.博来霉素配制：Bleomycin一瓶为15U，先加入5ml生理盐水，配为3U/ml的液体，再稀释为1U/ml的工作液使用。按照3.5mg/kg的比例，每只小鼠体重约为20g，约注射75μl。
建模：小鼠麻醉后，使用胶带贴在解剖蜡盘上，剃去喉及胸之间的毛，将喉部皮肤剪开，使用镊子钝性分离气管周围的肌肉，将气管挑出后，经气管往里注射75μl配好的博来霉素溶液，将小鼠上下颠倒使博来霉素均匀分布于肺部，再缝合肌肉层及气管层。
羟脯氨酸是胶原蛋白的生物标志物之一，因此在给药的第14天和第28天测量。用常规羟脯氨酸测定试剂盒(南京建成生物工程研究所，A030-2)测量小鼠右肺中的胶原含量。简单地说，将右肺干燥并酸水解，然后过滤残余物并将PH值调节至6.5-8.0。使用氯胺-T分光光度吸光度进行羟脯氨酸分析。
3.1化合物9d在肺纤维化小鼠的体内效果
模型组第14天和第28天的羟脯氨酸含量与假手术组相比显着增加，这意味着博莱霉素诱导的肺纤维化模型成功建立。Nintedanib组在第28天与假手术组区分，长期用药可能会降低纤维化程度。在50mg/kg/天的剂量下，化合物9d和Nintedanib组之间抑制纤维化的体内作用不明显。然而，100mg/kg/天剂量的化合物9d表明其具有更好的治疗效果，因为其羟脯氨酸含量较低(图4A)。此外，两种剂量(50mg/kg/天和100mg/kg/天)的9d存活率约为90％，优于Nintedanib组和模型组，表明9d具有较低的毒性和较好的疗效。
假手术组的肺组织切片显示清晰的肺结构，支气管纤毛上皮整齐排列，支气管和血管周间质间隙几乎没有水肿。相反，模型组中的肺泡结构被破坏，很明显地观察到支气管上皮细胞的变性和坏死(图4C↓)。肺泡间质中存在许多炎性细胞浸润，主要是淋巴细胞和中性粒细胞(图4D右↓)。药物治疗(Nintedanib组、9d组)延迟了肺泡数量的减少和肺泡结构的破坏。在肺动脉附近，药物治疗组中的炎性细胞浸润也减少，尤其是在9d-100mg/kg组(图4)。
3.2化合物29f在肺纤维化小鼠的体内效果
模型组第14天和第28天的羟脯氨酸含量与假手术组相比显着增加，这意味着博莱霉素诱导的肺纤维化模型成功建立。
假手术组的切片显示清晰的肺结构，支气管纤毛上皮整齐排列，支气管和血管周间质间隙几乎没有水肿。相反，模型组中的肺泡结构被破坏，很明显地观察到支气管上皮细胞的变性和坏死。肺泡间质中存在许多炎性细胞浸润，主要是淋巴细胞和中性粒细胞。药物治疗(Nintedanib组、29f组)延迟了肺泡数量的减少和肺泡结构的破坏。在肺动脉附近，药物治疗组中的炎性细胞浸润也减少，尤其是在29f组中以100mg/kg(图5)。
4.在四氯化碳诱导的肝纤维化模型上的体内活性
因为纤维化具有共同的病理机制，为了探究化合物在体内对急性肝损伤小鼠模型早期出现的肝纤维化中的作用，通过CCl4诱导小鼠得到急性肝损伤模型。谷草转氨酶(Aspartate transaminase，AST)和谷丙转氨酶(Alanine transaminase，ALT)水平是评价肝损伤程度的标准，二者水平越高，说明肝损伤程度越高。我们通过检测两者水平变化来评估肝损伤严重程度；并且进一步对肝组织切片进行苏木精—伊红染色法(Hematoxylin-eosin staining，H&E)直接观察肝脏损伤情况。
急性肝损伤模型的建立：
第一天，每只小鼠按1ml/kg的量腹腔注射CCl4-Olive Oil溶液，第二天到第三天，每只小鼠按5mg/kg的剂量腹腔注射化合物，第四天，处死小鼠，手机外周血和肝脏，进行下一步实验。
正式实验：按照CCl4:Olive Oil＝1:1.5配制CCl4 4ml，按照1ml/kg剂量，每只小鼠(25g)腹腔注射25μl，分别称取5mg Nintedanib和化合物，按照30％PEG400+0.5％Tween80+5％glycol propylene+64.5％H2O的配制方案，用研钵研磨后，配制成1mg/ml的溶液，在CCl4注射24h后，对小鼠给予化合物，每只小鼠(25g)腹腔注射125μl，连续注射两天。
处死：在第三天，小鼠腹腔给药完成后，小鼠禁食16小时，第二天处死小鼠，眼眶取血及取出全部肝脏，留待后续实验，给药期间，小鼠外周血放置4℃冰箱过夜后，按4℃，3500rpm的条件，离心15min，离心后取上清，冻存于-80℃冰箱，准备进行外周血ALT检测，小鼠肝脏取出后，PBS洗涤一次，在纸上吸干水分，取一半放置于4％多聚甲醛中，固定48小时以上后，进行脱水后续工作和蜡块包埋，以备做H&E染色以及免疫组化实验。
4.1化合物9d在肺纤维化小鼠的体内效果
相比模型组，化合物9d和阳性药Nintedanib可以稳定持续降低ALT水平。同时，H&E病理切片反映，化合物9d和Nintedanib都能明显抑制肝组织坏死，延缓肝纤维化进程，保护肝脏免于损伤(图6)。
5化合物体内外活性总结
本发明内容涉及到4-取代香豆素、4-取代-2-喹啉酮、6-取代-2-喹啉酮、7-取代-2-喹啉酮衍生物的制备及其活性。这些化合物对TGF-β诱导的NRK-49F细胞的胶原沉积有一定的抑制性，同时具有较低的细胞毒性。通过蛋白质印迹分析还观察到胶原抑制率高的化合物在体外还抑制TGF-β诱导的COL1A1，α-SMA和p-Smad3蛋白表达，这表明化合物通过抑制TGF-β/Smad3信号通路来减少细胞间基质ECM的沉积。化合物在CCl4诱导的急性肝损伤小鼠模型上能显著降低ALT水平，延缓肝组织结构的破坏。更重要的是，化合物通过降低肺组织中的羟脯氨酸含量和炎症细胞浸润减轻博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化，这也可能与其抑制TGF-β途径和抗炎有关。考虑到其良好的药代动力学特征，抗纤维化效果和体内毒性，该类型可能是治疗包括肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化在内的组织纤维化疾病的潜在的活性候选化合物。
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