具体实施方式

为了使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面对本发明的具体实施方 式做详细的说明，但不能理解为对本发明的可实施范围的限定。

为了对本发明的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解，现结合具体实施例对本 发明的技术方案进行以下详细说明，应理解这些实例仅用于说明本发明而不用于限制本发明 的范围。实施例中，各原始试剂材料均可商购获得，未注明具体条件的实验方法为所属领域 熟知的常规方法和常规条件，或按照仪器制造商所建议的条件。

如本文所用，术语“抗体”是指包含至少一个抗原结合位点的分子，所述抗原结合位点 免疫特异性地结合至特定的目标抗原靶标。因此，术语“抗体”包括但不限于全长抗体和/或 其变体，其片段，肽体及其变体，单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、由至少 两个完整的抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)、人抗体、人源化抗体和模拟抗体 的结构和/或功能的抗体模拟物或其指定片段或部分，包括单链抗体及其片段。抗体与靶标的 结合可引起多种作用，例如但不限于这种结合在体外、原位和/或体内调节、减少、增加、拮 抗、激动、减轻、减缓、阻断、抑制、消除和/或干扰至少一种靶标活性或结合，或受体活性 或结合。因此，本公开的抗体涵盖能够结合生物分子(例如抗原或受体)或其部分的抗体片段， 包括但不限于Fab、Fab'和F(ab')2、pFc'、Fd、单结构域抗体(sdAb)、可变片段(Fv)、单链可 变片段(scFv)或二硫化物连接的Fv(sdFv)；双功能抗体或二价双功能抗体；线性抗体；单链抗 体分子；由抗体片段形成的多特异性抗体。抗体可以是任何类型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、 IgA和IgY)，类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。

如本文所用，术语“单克隆抗体”是指得自一群基本上同种的抗体的抗体，即除了可能 存在少量可能天然发生的突变之外，构成群体的各个抗体是相同的。单克隆抗体是高度特异 性的，针对单个抗原位点。此外，与包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制 备物相反，每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。除了其特异性之外，单克隆抗体的优 点还在于其可以未污染其它抗体而合成。修饰语“单克隆”不应解释为需要通过任何特定方 法产生抗体。

如本文所用，术语HCDR与重链互补决定区含义相同，LCDR与轻链互补决定区含义相 同。

如本文所用，单克隆抗体包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定 物种或属于特定抗类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而所述链剩余的与衍生自另 一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，且这些抗体的片段，表 现出所需的生物活性。

如本文所用，术语“SAR-COV-2”也称作“新型冠状病毒”，指新发生的引起新型冠状病 毒肺炎(COVID-19)的病毒。

如本文所用，S蛋白指冠状病毒上的刺突蛋白(Spike protein)，SARS-CoV-2通过病毒表 面的刺突蛋白识别人体内细胞表面的ACE2并侵染宿主细胞。通过阻断冠状病毒SARS-CoV-2 表面的S蛋白可以有效抑制病毒黏附靶细胞受体，防止病毒侵入细胞。

如本文使用的术语"人源化抗体"包括具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变和恒定区的 抗体。本发明的人人源化抗体可包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如由随 机或体外位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。

如本文使用的术语抗"抗原结合片段"等包括任何天然存在的、酶学可获得的、合成的或 基因工程的特异性结合抗原以形成复合物的多肽或糖蛋白。如本文使用的术语抗体的"抗原结 合片段"与SAR-COV-2的S蛋白具有结合能力的一个或多个片段。

一方面，本发明提供抗SAR-COV-2全人源单克隆抗体或来源于该单克隆抗体的能够特异 性结合SAR-COV-2的生物活性片段，其中，该抗体9O21κ的重轻链CDR1、CDR2及CDR3区的氨基酸序列分别如下所示：

9O21κ-HCDR1：GFTFSSYS SEQ ID No：1；

9O21κ-HCDR2：ISSSGTFI SEQ ID No：2；

9O21κ-HCDR3：ARERFVGVLDI SEQ ID No：3；

9O21κ-LCDR1：QSISRY SEQ ID No：4；

9O21κ-LCDR:2：AAS SEQ ID No：5；以及

9O21κ-LCDR3：QQSYTNTWT SEQ ID No：6。

或者该抗体9O21λ的重轻链CDR1、CDR2及CDR3区的氨基酸序列分别如下所示：

9O21λ-HCDR1：GFTFSSYS SEQ ID No：1；

9O21λ-HCDR2：ISSSGTFI SEQ ID No：2；

9O21λ-HCDR3：ARERFVGVLDI SEQ ID No：3；

9O21λ-LCDR1：SSDVGGYNY SEQ ID No：11；

9O21λ-LCDR:2：DVG SEQ ID No：12；以及

9O21λ-LCDR3：SSYTGSSTLEGVI SEQ ID No：13。

在一些实施方式中，该抗体9O21κ的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，或该 序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列；

EVQLLESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMKWVRQAPGKGLEWVSTISSSGTFI KYADSLQGRFTITRDNAKTAVYLQMNSLRVEDTAVYYCARERFVGVLDIWGQGTMVTVSS SEQ ID No：7

且

该抗体的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示，或该序列经替换、缺失或添加一 个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列 STIMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKVLIYAASSLQSGVPSRFS GSGSGTDFTLIISNLQPEDFATYYCQQSYTNTWTFGRGTKVEIKR SEQ ID No：8。

在一些实施方式中，该抗体9O21λ的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，或该 序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列；

EVQLLESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMKWVRQAPGKGLEWVSTISSSGTFI KYADSLQGRFTITRDNAKTAVYLQMNSLRVEDTAVYYCARERFVGVLDIWGQGTMVTVSS SEQ ID No：7

且

该抗体的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示，或该序列经替换、缺失或添加 一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列 QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVGKRPSGVS NRFSGSKSGNTASLIISGLQAEDEADYYCSSYTGSSTL EGVIFGGGTKLTVTV SEQ ID No:15。

经ELISA实验验证，本发明所述抗SAR-COV-2全人源单克隆抗体可以靶向结合SAR-COV-2病毒的S蛋白。本发明所述抗体为全人源性单克隆抗体，相比鼠源抗体，全人源抗体的基因完全来源于人的基因，没有其他种属的成分，在人体内不发生抗鼠抗抗体等毒副 作用，具有更好的生物相容性，更适合和更有潜力成为治疗流感病毒的大分子药物。

另一方面，本发明提供编码本发明所述的抗SAR-COV-2全人源单克隆抗体的基因。在一 些实施方式中，所述基因包含编码具有上述所示的氨基酸的核苷酸序列。

在一些具体实施方式中，该核苷酸序列如下所示(以下序列仅为示例性，本领域技术人 员根据具体的氨基酸序列，可以设计其他可以翻译为所需氨基酸序列的核苷酸序列)：

编码抗体9O21κ或9O21λ重链可变区的核苷酸序列为：

Gaggtgcagctgttggagtcggggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtagttatagtatgaagtgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccatcagtagtagtggtactttcataaagtatgca gactcactgcagggccgattcaccatcaccagagacaacgccaagaccgcagtgtatctgcaaatgaacagcctgagagtcgaggacacgg ctgtttattactgtgcgaga gaacgattcgttggtgttttggatatctggggccaagggacaatggtcaccgtctcttca SEQ ID No：9

编码抗体9O21κ轻链可变区的核苷酸序列为：

Tcgacgattatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattagcaggtatttaaattggtatcagcaaaaaccagggaaagcccctaaggtcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttc agtggcagtggatctgggacagatttcactctcatcatcagcaatctgcaacctgaagattttgcaacttactactgtcaacagagttacactaacacgtggacgttcggccgagggaccaaggtggaaatcaagCGA SEQ ID No：10

编码抗体9O21λ轻链可变区的核苷酸序列为：

cagtctgCCctgactcagcctgcctccgtgtctgggtctcctggacagtcgatcaccatctcctgcactggaaccagcagtgacgttggtggttataactatgtctcctggtaccaacaacacccaggcaaagcccccaaactcatgatttatgatgtcggtaagcggccctcaggggtttctaat cgcttctctggctccaagtctggcaacacggcctccctgatcatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgcagctcatatacaggcagcagcactc tcgagggggtaatattcggcggagggaccaagctgaccgtcacagTA SEQ ID No：14

本发明抗体的重链可变区和轻链可变区序列中，其中下划线部分区域中的显示的是CDR 区。

另一方面，本发明提供含如上所述基因的载体。

再一方面，本发明提供含如上所述基因或如上所述载体的细胞。

再一方面，本发明提供一种产生所述抗SAR-COV-2全人源单克隆抗体或来源于该单克隆 抗体的能够特异性结合SAR-COV-2的生物活性片段的方法，该方法包括培养含编码抗 SAR-COV-2全人源单克隆抗体的重轻链的上述基因或上述载体的基因工程细胞或直接培养 上述细胞，收集，纯化得所述抗SAR-COV-2全人源单克隆抗体。

现有技术中存在采用噬菌体展示技术制备抗SAR-COV-2病毒人源单克隆抗体的方法，尽 管该方法具有生产成本低、不经过免疫和细胞融合等繁琐工作的优点，但是其缺点也比较明 显，从非免疫抗体库中获得的抗体往往亲和力不足、受外源基因转化率的限制、抗体库的库 容量不足以涵盖动物的抗体多样性等。本发明从病人的血液中分离分泌功能抗体的B细胞， 然后提取RNA和合成cDNA，从中克隆分泌目的抗体的基因，最后重组和表达全人源单克隆 抗体。该技术操作简单快捷，生产的人源抗体具有高亲和力和特异性，此外，可进一步采用 改进的从记忆B细胞中分离具有中和病毒功能或杀伤肿瘤功能的本发明所述单克隆抗体技 术，更是大大减少了繁琐操作和成本。

另一方面，本发明提供一种药物组合物，其包含本发明所述的抗SAR-COV-2全人源单克 隆抗体或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合SAR-COV-2的生物活性片段。

另一方面，本发明提供所述的抗SAR-COV-2全人源单克隆抗体或来源于该单克隆抗体的 能够特异性结合SAR-COV-2的生物活性片段或所述的药物组合物在制备用于治疗由 SAR-COV-2病毒引起的疾病的药物中的应用。

另一方面，本发明提供一种检测SAR-COV-2病毒水平的试剂盒，其含有本发明所述的抗 SAR-COV-2全人源单克隆抗体或来源于该单克隆抗体的能够特异性结合SAR-COV-2的生物 活性片段；在一些实施方式中，所述的试剂盒还含有第二抗体和用于检测的酶或荧光或放射 标记物，以及缓冲液；所述第二抗体例如为抗本发明所述单克隆抗体的抗抗体。

为了对本发明的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解，现结合具体实施例对本 发明的技术方案进行以下详细说明，应理解这些实例仅用于说明本发明而不用于限制本发明 的范围。实施例中，各原始试剂材料均可商购获得，未注明具体条件的实验方法为所属领域 熟知的常规方法和常规条件，或按照仪器制造商所建议的条件。

实施例1

(1)构建稳定表达CD40L的NTH-3T3细胞系(3T3-CD40L)

利用慢病毒建立3T3-CD40L饲养细胞。构建慢病毒表达载体pLVX-CD40L，转染293T细胞，转染第四天收集病毒上清液。活化NIH-3T3细胞，培养3代后用慢病毒感染，继续培 养并传代3次。利用流式细胞仪进行分选FITC荧光强度在MFI附近的细胞，重新加入至培 养瓶中，37℃，5％CO₂培养箱中培养和检测，其是将表达CD40L的3T3细胞和空载体pLVX(带 有ZxGreen)转染的3T3细胞分别用带有APC的抗CD40L染色，然后上流式细胞仪分析。结 果发现，所有3T3-CD40L饲养细胞都表达CD40L。当细胞长到80％～90％时，消化收集细胞， 浓度为每毫升1×10⁷细胞。置于辐射仪中进行5000rads辐射，冻存液重悬细胞，浓度为每毫 升3.5×10⁷细胞，分装1mL在冷冻小管，液氮冻存(可以保存2年)。

(2)记忆B细胞的分选和活化

用淋巴分离液分离和冻存曾经感染SAR-COV-2病毒的康复病人的PBMC，每管 10～50×10⁶细胞，冻存在液氮罐中。配制PBMC流式染色液，其成分如下表1所示

表1 PBMC流式染色液

解冻PBMC，加入上述PBMC流式染色液并在流式细胞仪上分选，分选出CD19⁺ IgM^–IgA^–IgD^–的记忆B细胞，细胞纯度需在90％以上，若低于90％，重复分选过程。配制 激活B细胞的混合培养基，如下表2所示：

表2

将记忆B细胞加入到混合培养基中，混匀后有限稀释在384孔板，每孔1个细胞，体积 为50μl，置于37℃，5％CO₂培养箱中静置培养。13天后，取上清液进行ELISA，获得人源单克隆抗体。

(3)人源单克隆抗体结合SAR-COV-2病毒的表面抗原S蛋白实验

表面抗原S蛋白购自义翘神州公司，具有免疫原性，抗S蛋白抗体可以SAR-COV-2流感病毒。对上述获得的上清液人源单克隆抗体进行ELISA实验，具体地：

(1)将100ng/100μL的SAR-COV-2病毒的HA蛋白包被在96孔酶标板中，每孔100μl；

(2)放置4℃冰箱过夜；

(3)用PBST溶液洗涤三遍，每孔加5％的脱脂奶粉溶液200μL，37℃孵育1小时；

(4)用PBST溶液洗涤三遍，加100μl没有感染病毒的正常人血清(阴性对照)或上清液，各三个重复；

(5)37℃孵育1小时后用PBST溶液洗涤三遍；

(6)以1:5000稀释带HRP的抗人IgG抗体(abcam)，加入酶标版中，每孔100μL；

(7)37℃孵育1小时后用PBST溶液洗涤三遍；

(8)每孔加100μL TMB底物溶液(Thermo Scientific)，37℃5分钟；

(9)每孔加终止溶液2M硫酸100μL，立刻在酶标仪中450nm波长检测吸光值。其结果如图1所示，ELISA实验表明本发明获得的人源单克隆抗体可以靶向结合SAR-COV-2病 毒的S蛋白。

实施例2人源化单克隆抗体基因的克隆

将实施例1获得的能够分泌结合SAR-COV-2病毒的抗体的B细胞进行裂解，取裂解液 进行RNA的反转录，获得人源抗体基因的PCR模板cDNA。设计和合成克隆抗体基因的引物，以cDNA为模板克隆抗体的重链和轻链的基因，并且送金唯智公司测序。具体地：

(1)将裂解后的B细胞液转移至96孔板(Eppendorf，030133366)。

(2)反转录体系：150ng随机引物(invitrogen,48190-011),0.5μL 10mM dNTP(Invitrogen, 18427-088),1μL 0.1M DTT(Invitrogen,18080-044),0.5％v/v IgepalCA-630(Sigma, I3021-50ML),4U RNAsin(Promega),6U Prime RNAse Inhibitor(Eppendorf)and 50 U III reverse transcriptase(Invitrogen,18080-044)，补DEPC水至14μL/孔。

(3)反转录反应程序：42℃，10min；25℃，10min；50℃，60min；94℃，5min。

(4)cDNA保存在-20℃。

(5)引物的设计和合成:

(6)用KOD-Plus-Neo(TOYOBO，KOD401)试剂盒PCR分别扩增抗体基因的重链 和轻链，40μL体系：3.5μL cDNA，20nM混合引物，4μL缓冲液(buffer)，4μL 2mM dNTPs， 2.4μLMgSO₄，1μL KOD。

(7)反应程序：94℃，2min；45个循环：98℃，10s；58℃，30s；68℃，28s。

(8)对扩增产物进行琼脂糖凝胶。

(9)抗体基因重链可变区PCR产物测序结果如下，其中：

抗体9O21κ的重链可变区核苷酸序列为如SEQ ID No:9所示序列：

SEQ ID No:9

Gaggtgcagctgttggagtcggggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtagttatagtatgaagtgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccatcagtagtagtggtactttcataaagtatgcagactc actgcagggccgattcaccatcaccagagacaacgccaagaccgcagtgtatctgcaaatgaacagcctgagagtcgaggacacggctgttta ttactgtgcgaga gaacgattcgttggtgttttggatatctggggccaagggacaatggtcaccgtctcttca

抗体基因重链可变区氨基酸序列为如SEQ ID No:7所示序列

SEQ ID No:7

EVQLLESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMKWVRQAPGKGLEWVSTISSSGTFIKYA DSLQGRFTITRDNAKTAVYLQMNSLRVEDTAVYYCARERFVGVLDIWGQGTMVTVSS

抗体9O21κ轻链可变区核苷酸序列为如SEQ ID No:10所示序列，

SEQ ID No:10

Tcgacgattatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattagcaggtatttaaattggtatcagcaaaaaccagggaaagcccctaaggtcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagtgg cagtggatctgggacagatttcactctcatcatcagcaatctgcaacctgaagattttgcaacttactactgtcaacagagttacactaacacgtggacgttcggccgagggaccaaggtggaaatcaagCGA

抗体基因轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:8所示序列；

SEQ ID No:8

STIMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKVLIYAASSLQSGVPSRFS GSGSGTDFTLIISNLQPEDFATYYCQQSYTNTWTFGRGTKVEIKR

对应地，其CDR区序列如下所示：

9O21κ-HCDR1：GFTFSSYS SEQ ID No：1；

9O21κ-HCDR2：ISSSGTFI SEQ ID No：2；

9O21κ-HCDR3：ARERFVGVLDI SEQ ID No：3；

9O21κ-LCDR1：QSISRY SEQ ID No：4；

9O21κ-LCDR:2：AAS SEQ ID No：5；

9O21κ-LCDR3：QQSYTNTWT SEQ ID No：6。

抗体9O21λ的重链可变区核苷酸序列为如SEQ ID No:9所示序列：

SEQ ID No:9

Gaggtgcagctgttggagtcggggggaggcctggtcaagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtagttatagtatgaagtgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaaccatcagtagtagtggtactttcataaagtatgcagactc actgcagggccgattcaccatcaccagagacaacgccaagaccgcagtgtatctgcaaatgaacagcctgagagtcgaggacacggctgttta ttactgtgcgaga gaacgattcgttggtgttttggatatctggggccaagggacaatggtcaccgtctcttca

抗体基因重链可变区氨基酸序列为如SEQ ID No:7所示序列

SEQ ID No:7

EVQLLESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMKWVRQAPGKGLEWVSTISSSGTFIKYA DSLQGRFTITRDNAKTAVYLQMNSLRVEDTAVYYCARERFVGVLDIWGQGTMVTVSS

抗体9O21λ轻链可变区核苷酸序列为如SEQ ID No:14所示序列，

SEQ ID No:14

cagtctgCCctgactcagcctgcctccgtgtctgggtctcctggacagtcgatcaccatctcctgcactggaaccagcagtgacgttggtggttataactatgtctcctggtaccaacaacacccaggcaaagcccccaaactcatgatttatgatgtcggtaagcggccctcaggggtttctaatcgcttc tctggctccaagtctggcaacacggcctccctgatcatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgcagctcatatacaggcagcagcactc tcgagggggtaatattcggcggagggaccaagctgaccgtcacagTA

抗体基因轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:15所示序列；

SEQ ID No:15

QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVGKRPSGVS NRFSGSKSGNTASLIISGLQAEDEADYYCSSYTGSSTLEGVIFGGGTKLTVTV

对应地，其CDR区序列如下所示：

9O21λ-HCDR1：GFTFSSYS SEQ ID No：1；

9O21λ-HCDR2：ISSSGTFI SEQ ID No：2；

9O21λ-HCDR3：ARERFVGVLDI SEQ ID No：3；

9O21λ-LCDR1：SSDVGGYNY SEQ ID No：11；

9O21λ-LCDR:2：DVG SEQ ID No：12；

9O21λ-LCDR3：SSYTGSSTLEGVI SEQ ID No：13

上述结果显示上清液中含有能够结合SAR-COV-2病毒的抗体。

最后说明的是：以上实施例仅用于说明本发明的实施过程和特点，而非限制本发明的技术方 案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解：依然 可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换， 均应涵盖在本发明的保护范围当中。

SEQUENCE LISTING

<110> 深圳先进技术研究院

<120> 抗SAR-COV-2全人源单克隆抗体及其制法与应用

<130> CP120010818C

<160> 15

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 8

<212> PRT

<213> 9O21κ-HCDR1

<400> 1

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser

1 5

<210> 2

<211> 8

<212> PRT

<213> 9O21κ-HCDR2

<400> 2

Ile Ser Ser Ser Gly Thr Phe Ile

1 5

<210> 3

<211> 11

<212> PRT

<213> 9O21κ-HCDR3

<400> 3

Ala Arg Glu Arg Phe Val Gly Val Leu Asp Ile

1 5 10

<210> 4

<211> 6

<212> PRT

<213> 9O21κ-LCDR1

<400> 4

Gln Ser Ile Ser Arg Tyr

1 5

<210> 5

<211> 3

<212> DNA

<213> 9O21κ-LCDR:2

<400> 5

aas 3

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 9O21κ-LCDR3

<400> 6

Gln Gln Ser Tyr Thr Asn Thr Trp Thr

1 5

<210> 7

<211> 118

<212> PRT

<213> 9O21κ重链可变区

<400> 7

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Lys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Thr Ile Ser Ser Ser Gly Thr Phe Ile Lys Tyr Ala Asp Ser Leu

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ala Lys Thr Ala Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Arg Phe Val Gly Val Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 8

<211> 108

<212> PRT

<213> 9O21κ轻链可变区

<400> 8

Ser Thr Ile Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ile Ile Ser Asn Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Asn Thr Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Arg Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 9

<211> 354

<212> PRT

<213> 编码抗体9O21κ或9O21λ重链可变区的核苷酸序

<400> 9

Gly Ala Gly Gly Thr Gly Cys Ala Gly Cys Thr Gly Thr Thr Gly Gly

1 5 10 15

Ala Gly Thr Cys Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Cys Cys Thr

20 25 30

Gly Gly Thr Cys Ala Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Gly Gly Gly Gly

35 40 45

Thr Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Ala Cys Thr Cys Thr Cys Cys Thr

50 55 60

Gly Thr Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Thr Gly Gly Ala Thr Thr

65 70 75 80

Cys Ala Cys Cys Thr Thr Cys Ala Gly Thr Ala Gly Thr Thr Ala Thr

85 90 95

Ala Gly Thr Ala Thr Gly Ala Ala Gly Thr Gly Gly Gly Thr Cys Cys

100 105 110

Gly Cys Cys Ala Gly Gly Cys Thr Cys Cys Ala Gly Gly Gly Ala Ala

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Thr Gly Gly Gly Thr Cys

130 135 140

Thr Cys Ala Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Gly Thr Ala Gly Thr Ala

145 150 155 160

Gly Thr Gly Gly Thr Ala Cys Thr Thr Thr Cys Ala Thr Ala Ala Ala

165 170 175

Gly Thr Ala Thr Gly Cys Ala Gly Ala Cys Thr Cys Ala Cys Thr Gly

180 185 190

Cys Ala Gly Gly Gly Cys Cys Gly Ala Thr Thr Cys Ala Cys Cys Ala

195 200 205

Thr Cys Ala Cys Cys Ala Gly Ala Gly Ala Cys Ala Ala Cys Gly Cys

210 215 220

Cys Ala Ala Gly Ala Cys Cys Gly Cys Ala Gly Thr Gly Thr Ala Thr

225 230 235 240

Cys Thr Gly Cys Ala Ala Ala Thr Gly Ala Ala Cys Ala Gly Cys Cys

245 250 255

Thr Gly Ala Gly Ala Gly Thr Cys Gly Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys

260 265 270

Gly Gly Cys Thr Gly Thr Thr Thr Ala Thr Thr Ala Cys Thr Gly Thr

275 280 285

Gly Cys Gly Ala Gly Ala Gly Ala Ala Cys Gly Ala Thr Thr Cys Gly

290 295 300

Thr Thr Gly Gly Thr Gly Thr Thr Thr Thr Gly Gly Ala Thr Ala Thr

305 310 315 320

Cys Thr Gly Gly Gly Gly Cys Cys Ala Ala Gly Gly Gly Ala Cys Ala

325 330 335

Ala Thr Gly Gly Thr Cys Ala Cys Cys Gly Thr Cys Thr Cys Thr Thr

340 345 350

Cys Ala

<210> 10

<211> 324

<212> DNA

<213> 编码抗体9O21κ轻链可变区的核苷酸序

<400> 10

tcgacgatta tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc aggtatttaa attggtatca gcaaaaacca 120

gggaaagccc ctaaggtcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca tcatcagcaa tctgcaacct 240

gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacacta acacgtggac gttcggccga 300

gggaccaagg tggaaatcaa gcga 324

<210> 11

<211> 9

<212> PRT

<213> 9O21λ-LCDR1

<400> 11

Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr

1 5

<210> 12

<211> 3

<212> PRT

<213> 9O21λ-LCDR:2

<400> 12

Asp Val Gly

1

<210> 13

<211> 13

<212> PRT

<213> 9O21λ-LCDR3

<400> 13

Ser Ser Tyr Thr Gly Ser Ser Thr Leu Glu Gly Val Ile

1 5 10

<210> 14

<211> 342

<212> DNA

<213> 编码抗体9O21λ轻链可变区的核苷酸序列

<400> 14

cagtctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60

tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacaa 120

cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgatgtcg gtaagcggcc ctcaggggtt 180

tctaatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgatcat ctctgggctc 240

caggctgagg acgaggctga ttattactgc agctcatata caggcagcag cactctcgag 300

ggggtaatat tcggcggagg gaccaagctg accgtcacag ta 342

<210> 15

<211> 114

<212> PRT

<213> 9O21λ轻链可变区氨基酸序列

<400> 15

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr

20 25 30

Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Tyr Asp Val Gly Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Ile Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Gly Ser

85 90 95

Ser Thr Leu Glu Gly Val Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val

100 105 110

Thr Val