阅读说明：本技术 一种用于预防和/或治疗苯并芘暴露的产品 (Product for preventing and/or treating benzopyrene exposure ) 是由 于雷雷 田丰伟 张凌宇 翟齐啸 陆文伟 崔树茂 王刚 赵建新 张灏 陈卫 于 2020-07-13 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种用于预防和/或治疗苯并芘暴露的产品,属于微生物技术领域以及医药技术领域。本发明提供了一种可预防和/或治疗苯并芘暴露的药品,此药品的有效成分为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661,此植物乳杆菌CCFM8661能够有效缓解苯并芘暴露,具体体现在：显著降低苯并芘暴露小鼠粪便中苯并芘代谢物3-羟基苯并芘的含量；显著降低苯并芘暴露小鼠血清中谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)的活性；显著降低苯并芘暴露小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平；显著改善并芘暴露小鼠的行为学指标；显著提高苯并芘暴露小鼠粪便中短链脂肪酸的含量。(The invention discloses a product for preventing and/or treating benzopyrene exposure, and belongs to the technical field of microorganisms and medicines. The invention provides a medicine capable of preventing and/or treating benzopyrene exposure, the effective component of the medicine is Lactobacillus plantarum (Lactobacillus plantarum) CCFM8661, and the Lactobacillus plantarum CCFM8661 can effectively relieve the benzopyrene exposure, and is specifically represented as follows: the content of benzopyrene metabolite 3-hydroxy benzopyrene in the mouse feces exposed by benzopyrene is remarkably reduced; the activity of glutamic-oxaloacetic transaminase (AST) and glutamic-pyruvic transaminase (ALT) in the serum of a benzopyrene-exposed mouse is obviously reduced; the levels of superoxide dismutase (SOD) and Malondialdehyde (MDA) in the brain tissue of the mouse exposed by benzopyrene are obviously reduced; the behavioral indexes of the pyrene-exposed mice are obviously improved; the content of short-chain fatty acid in the feces of the mice exposed by benzopyrene is obviously improved.)

一种用于预防和/或治疗苯并芘暴露的产品

技术领域

本发明涉及一种用于预防和/或治疗苯并芘暴露的产品，属于微生物技术领域以及医药技术领域。

背景技术

苯并芘(benzopyrene)是一种由5个苯环构成的多环芳烃，其分子式为C₂₀H₁₂，分子量为252.30，常温下为无色至淡黄色针状晶体(纯品)，性质稳定，沸点310～312℃，熔点178℃，不溶于水，微溶于乙醇、甲醇，溶于苯、甲苯、二甲苯、氯仿、***、丙酮等有机溶剂。

1933年，英国科学家J.W.Cook等人首次从沥青中分离得到苯并芘纯品，并通过动物实验证明了苯并芘可诱导小鼠产生了皮肤癌，由此，苯并芘被确认为是第一个化学环境致癌物，长期暴露于含有苯并芘的环境无疑会对人体造成极大的危害(具体可见参考文献“Cancer Letters，2004，207:157-163.”、“Pulmonary Pharmacology&Therapeutics，2011，24:133-140.”和“Journal of Toxicology&Environmental Health Part A，2003，66(13):1189-1205.”)。

与此同时，苯并芘在环境中是广泛存在的，其来源主要有两个方面：一是工业生产和生活过程中煤炭、石油和天然气等燃料不完全燃烧产生的废气，包括汽车尾气、橡胶生产以及吸烟产生的烟气等，通过对水源、大气和土壤的污染进入到蔬菜、水果、粮食、水产品和肉类等人类赖以生存的食物中；二是食物在熏制、烘烤和煎炸过程中，脂肪、胆固醇、蛋白质和碳水化合物等在高温条件下会发生热裂解反应，再经过环化和聚合反应就能够形成包括苯并芘在内的多环芳烃类物质，尤其是当食品在烟熏和烘烤过程中发生焦糊现象时，苯并芘的生成量将会比普通食物增加10～20倍。可见，人们在日常生活中几乎每时每刻都暴露于含有苯并芘的环境中。因此，急需找到一种可有效预防和/或治疗苯并芘暴露的产品。

发明内容

[技术问题]

本发明要解决的技术问题是提供一种可预防和/或治疗苯并芘暴露的产品。

[技术方案]

为解决上述问题，本发明提供了植物乳杆菌CCFM8661在制备预防和/或治疗苯并芘暴露的药品中的应用，所述植物乳杆菌CCFM8661保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为CGMCC No.5494，保藏日期为2011年11月29日。

本发明的一种实施方式中，所述药品中，植物乳杆菌CCFM8661的活菌数为不低于1×10⁶CFU/mL或1×10⁶CFU/g。

本发明的一种实施方式中，所述药品含有植物乳杆菌CCFM8661、药物载体和/或药用辅料。

本发明的一种实施方式中，所述药物载体包含微囊、微球、纳米粒和/或脂质体。

本发明的一种实施方式中，所述药用辅料包含赋形剂和/或附加剂。

本发明的一种实施方式中，所述赋形剂包含溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂、反絮凝剂、助滤剂和/或释放阻滞剂。

本发明的一种实施方式中，所述附加剂包含微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素和/或精制卵磷脂。

本发明的一种实施方式中，所述药品的剂型为粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。

本发明还提供了一种用于预防和/或治疗苯并芘暴露的药品，所述药品含有植物乳杆菌CCFM8661；所述植物乳杆菌CCFM8661保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为CGMCC No.5494，保藏日期为2011年11月29日。

本发明的一种实施方式中，所述药品中，植物乳杆菌CCFM8661的活菌数为不低于1×10⁶CFU/mL或1×10⁶CFU/g。

本发明的一种实施方式中，所述药品含有植物乳杆菌CCFM8661、药物载体和/或药用辅料。

本发明的一种实施方式中，所述药物载体包含微囊、微球、纳米粒和/或脂质体。

本发明的一种实施方式中，所述药用辅料包含赋形剂和/或附加剂。

本发明的一种实施方式中，所述赋形剂包含溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂、反絮凝剂、助滤剂和/或释放阻滞剂。

本发明的一种实施方式中，所述附加剂包含微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素和/或精制卵磷脂。

本发明的一种实施方式中，所述药品的剂型为粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。

本发明还提供了植物乳杆菌CCFM8661在清除苯并芘中的应用，所述植物乳杆菌CCFM8661保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为CGMCC No.5494，保藏日期为2011年11月29日。

本发明还提供了一种苯并芘清除剂，所述苯并芘清除剂含有植物乳杆菌CCFM8661；所述植物乳杆菌CCFM8661保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为CGMCCNo.5494，保藏日期为2011年11月29日。

有益效果：

1、本发明提供了一种可预防和/或治疗苯并芘暴露的药品，此药品的有效成分为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661，此植物乳杆菌CCFM8661能够有效缓解苯并芘暴露，具体体现在：

(1)显著降低苯并芘暴露小鼠粪便中苯并芘代谢物3-羟基苯并芘的含量；

(2)显著降低苯并芘暴露小鼠血清中谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)的活性；

(3)显著降低苯并芘暴露小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平；

(4)显著改善并芘暴露小鼠的行为学指标；

(5)显著提高苯并芘暴露小鼠粪便中短链脂肪酸的含量。

2、本发明提供了一种苯并芘清除剂，此苯并芘清除剂能够清除苯并芘，具体体现在：将其有效成分植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661添加至含有苯并芘的二甲基亚砜(DMSO)中培养2h，即可使二甲基亚砜(DMSO)中苯并芘的清除率达60％以上。

附图说明

图1：不同植物乳杆菌清除二甲基亚砜(DMSO)中苯并芘的清除率。

图2：不同组别苯并芘暴露小鼠粪便中苯并芘代谢物3-羟基苯并芘的含量。

图3：不同组别苯并芘暴露小鼠血清中谷草转氨酶(AST)的活性。

图4：不同组别苯并芘暴露小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)的活性。

图5：不同组别苯并芘暴露小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)的水平。

图6：不同组别苯并芘暴露小鼠脑组织中丙二醛(MDA)的水平。

图7：不同组别苯并芘暴露小鼠的静止时间。

图8：不同组别苯并芘暴露小鼠的总路程。

图9：不同组别苯并芘暴露小鼠的中央区活动时间。

图10：不同组别苯并芘暴露小鼠的周边区活动时间。

图11：不同组别苯并芘暴露小鼠粪便中乙酸的含量。

图12：不同组别苯并芘暴露小鼠粪便中丙酸的含量。

图13：不同组别苯并芘暴露小鼠粪便中异丁酸的含量。

图14：不同组别苯并芘暴露小鼠粪便中丁酸的含量。

图15：不同组别苯并芘暴露小鼠粪便中异戊酸的含量。

图16：不同组别苯并芘暴露小鼠粪便中戊酸的含量。

具体实施方式

下述实施例中涉及的SPF级8周龄雄性BALB/C小鼠购自斯莱克实验动物有限公司；下述实施例中涉及的脱脂乳购自福麦斯生物技术有限公司；下述实施例中涉及的玉米油购自阿拉丁生化科技股份有限公司；下述实施例中涉及的脱脂奶粉购自纽瑞兹食品有限公司；下述实施例中涉及的苯并芘标准品购自美国sigma公司；下述实施例中涉及的二甲基亚砜(DMSO)购自国药集团化学试剂有限公司；下述实施例中涉及的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661的保藏编号为CGMCC No.5494，记载于公开号为CN102586148A的专利申请文本中；下述实施例中涉及的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)CCFM382的保藏编号为CGMCC No.9734，记载于公开号为CN104357349A的专利申请文本中；下述实施例中涉及的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8610的保藏编号为CGMCC No.6077，记载于公开号为CN102827796A的专利申请文本中；下述实施例中涉及的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Lp45的保藏编号为CGMCC No.8072，记载于公开号为CN110192654A的专利申请文本中。

下述实施例中涉及的培养基如下：

MRS固体培养基(g/L)：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖20g/L、乙酸钠2g/L、酵母粉5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、K₂PO₄·3H₂O 2.6g/L、MgSO₄·7H₂O 0.1g/L、MnSO₄0.05 g/L、吐温801mL/L、琼脂20g/L、半胱氨酸氨酸盐0.5g/L，pH为6.8。

MRS液体培养基(g/L)：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖20g/L、乙酸钠2g/L、酵母粉5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、K₂PO₄·3H₂O 2.6g/L、MgSO₄·7H₂O 0.1g/L、MnSO₄0.05 g/L、吐温801mL/L、半胱氨酸氨酸盐0.5g/L，pH为6.8。

下述实施例中涉及的检测方法如下：

活菌数的检测方法：采用国标《GB 4789.35-2016食品安全国家标准食品微生物学检测乳酸菌检测》。

下述实施例中涉及的植物乳杆菌菌体和菌悬液的制备方法如下：

将植物乳杆菌菌液划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经5000g离心15min，得到植物乳杆菌菌体；将植物乳杆菌菌体经pH为7.2的磷酸盐缓冲液洗涤3次后重悬于浓度为130g/L的脱脂奶粉溶液中至菌浓度为1.5×10¹⁰CFU/mL，得到菌悬液，将菌悬液于-80℃下保存待用。

实施例1：植物乳杆菌CCFM8661对苯并芘的清除作用

具体步骤如下：

准确称取10mg的苯并芘标准品溶于1mL二甲基亚砜中，充分混匀溶解后使用0.22μm微孔滤膜进行过滤除菌，得到浓度为10mg/mL的苯并芘标准品母液；准确称取10mg/mL的苯并芘标准品母液100μL用二甲基亚砜定容至100mL，得到浓度为10μg/mL的苯并芘标准品母液；以不添加植物乳杆菌菌体的浓度为10μg/mL的苯并芘标准品母液作为空白对照，将3×10⁹CFU的植物乳杆菌CCFM571菌体、植物乳杆菌CCFM595菌体、植物乳杆菌CCFM8610菌体、植物乳杆菌Lp45菌体、植物乳杆菌CCFM438菌体、植物乳杆菌CCFM726菌体、植物乳杆菌CCFM408菌体、植物乳杆菌CCFM8661菌体、植物乳杆菌CCFM634菌体、植物乳杆菌CCFM175菌体、植物乳杆菌CCFM242菌体、植物乳杆菌CCFM361菌体、植物乳杆菌CCFM259菌体、植物乳杆菌CCFM382菌体、植物乳杆菌FJSWX14-5菌体、植物乳杆菌DYNDL58M4菌体、植物乳杆菌PS3-9菌体、植物乳杆菌FFJND7-L5菌体、植物乳杆菌HY9-10菌体、植物乳杆菌M2-05-R02菌体、植物乳杆菌FJSZJ4-L5菌体、植物乳杆菌4L-4菌体、植物乳杆菌VNMWLT1M12菌体依次分别与1mL浓度为10μg/mL的苯并芘标准品母液混合后于37℃、150r/min的条件下共培养2h，得到培养液1～23；将培养液1～2412000rpm离心10min，取上清用0.22μm微孔滤膜进行过滤除菌，得到滤液1～23；其中，植物乳杆菌CCFM571、植物乳杆菌CCFM595、植物乳杆菌CCFM438、植物乳杆菌CCFM726、植物乳杆菌CCFM408、植物乳杆菌CCFM634、植物乳杆菌CCFM175、植物乳杆菌CCFM242、植物乳杆菌CCFM361、植物乳杆菌CCFM259、植物乳杆菌FJSWX14-5、植物乳杆菌DYNDL58M4、植物乳杆菌PS3-9、植物乳杆菌FFJND7-L5、植物乳杆菌HY9-10、植物乳杆菌M2-05-R02、植物乳杆菌FJSZJ4-L5、植物乳杆菌4L-4、植物乳杆菌VNMWLT1M12均是从人或动物粪便以及发酵制品中筛选得到的。

通过HPLC法检测滤液1～23中苯并芘的含量，并根据公式：清除率(％)＝[(空白对照中苯并芘的含量-滤液中苯并芘的含量)/空白对照中苯并芘的含量]×100％，计算滤液1～23中苯并芘的清除率，检测结果见图1；其中，HPLC法的检测条件为：色谱柱WatersAtlantis C18,150mm×4.6mm×5μm；流动相为乙腈:水＝88:12，流速1mL/min，检测器为荧光检测器，检测波长406nm，上样量为20μL，苯并芘的出峰时间为12～14min。

由图1可知，滤液8中苯并芘的含量最低(低至1.6μg)、苯并芘的清除率最高(高达60.8％)。可见，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661可有效清除二甲基亚砜中的苯并芘。

实施例3：植物乳杆菌CCFM8661对苯并芘暴露小鼠的影响

具体步骤如下：

1、实验方法

取32只SPF级8周龄雄性BALB/C小鼠，随机分为4组，每组8只，4组分别为：载体对照组(Control)、模型组(Modle)、CCFM382干预组和CCFM8661干预组。所有小鼠饲养于25±2℃、相对湿50±5％、12h光照/12h黑暗的标准化实验室中，适应性喂养一周后开始实验。

实验共35天：实验期间，载体对照组小鼠按照50mg/kg.bw的剂量每天灌胃玉米油，并且，按照0.2mL/只的剂量每天灌胃浓度为130g/L的脱脂奶粉溶液；模型组小鼠按照50mg/kg.bw的剂量每天灌胃含有苯并芘溶液(苯并芘溶液是通过将苯并芘溶于玉米油得到的)，并且，按照0.2mL/只的剂量每天灌胃浓度为130g/L的脱脂奶粉溶液；CCFM382干预组小鼠按照50mg/kg.bw的剂量每天灌胃含有苯并芘溶液(苯并芘溶液是通过将苯并芘溶于玉米油得到的)，并且，按照0.2mL/只的剂量每天灌胃植物乳杆菌CCFM382菌悬液；CCFM8661干预组小鼠按照50mg/kg.bw的剂量每天灌胃含有苯并芘溶液(苯并芘溶液是通过将苯并芘溶于玉米油得到的)，并且，按照0.2mL/只的剂量每天灌胃植物乳杆菌CCFM8661菌悬液。灌胃结束后处死所有小鼠，收集小鼠的血液、粪便、脑组织和肝组织；另取0.1g肝组织匀浆用，在0.1g肝组织中加入9倍组织块重量的预冷的生理盐水充分研磨，使肝组织匀浆化，4℃下6000rpm离心15分钟，弃脂肪和沉淀，小心收集上清即为肝匀浆液。

2、实验结果

2.1、不同植物乳杆菌对苯并芘暴露小鼠粪便中苯并芘代谢物3-羟基苯并芘含量的影响

通过HPLC法检测小鼠粪便中3-羟基苯并芘的含量，检测结果见图2；其中，HPLC法的检测条件为：色谱柱Waters Atlantis C18,150mm×4.6mm×5μm；流动相为甲醇:水＝97:3(pH4.5)，流速0.5mL/min，检测器为荧光检测器，检测波长450nm，上样量为20μL，3-羟基苯并芘的出峰时间为9～11min。

由图2可知，载体对照组小鼠粪便中3-羟基苯并芘的含量为268845ng/g干粪便、模型组小鼠粪便中3-羟基苯并芘的含量为268845ng/g干粪便、CCFM382干预组小鼠粪便中3-羟基苯并芘的含量为208963ng/g干粪便、CCFM8661干预组小鼠粪便中3-羟基苯并芘的含量为139921ng/g干粪便。可见，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661可有效降低苯并芘暴露小鼠粪便中苯并芘代谢物3-羟基苯并芘的含量。

2.2、不同植物乳杆菌对苯并芘暴露小鼠血清生化指标的影响

利用全自动血清生化分析仪测定各组小鼠的血清生化指标，包括血清中谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)的活性，以及，血清中HDL-C、LDL-C、TC、TG、ALP、TP、TBIL、GGT、ALB和LDH的活性，检测结果见图3-4和表1-2。

在动物模型的肝脏损伤研究中，谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)通常被作为考察脊椎动物肝脏功能的标志性指标。由图3-4可知，与载体对照组相比，模型组小鼠血清中谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)的活性显著增加，说明苯并芘暴露会造成小鼠肝损伤；与模型组相比，CCFM8661干预组小鼠血清中谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)的活性显著下降，可见，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661可有效缓解苯并芘暴露对小鼠造成的肝损伤。

血清中HDL-C、LDL-C、TC、TG、ALP、TP、TBIL、GGT、ALB和LDH的活性也是考察脊椎动物肝脏功能的指标。由表1-2可知，与载体对照组相比，模型组小鼠血清中HDL-C的水平下降，这表明苯并芘暴露小鼠的肝脏处于损伤状态；与模型组相比，植物乳杆菌CCFM8661干预显著提高了小鼠血清中HDL-C的水平，使其恢复到对照组的水平。与载体对照组相比，模型组小鼠血清中TC总胆固醇和TG甘油三酸酯的水平降低，这表明苯并芘暴露对小鼠肝脏造成轻微损害并影响总胆固醇和甘油三酸酯的合成；与模型组相比，植物乳杆菌CCFM8661干预显著提高了小鼠血清中TC与TG的水平，使其恢复到对照组水平。与对照组相比，模型组小鼠血清中TBIL的水平显著升高，其值的升高反映了小鼠肝脏受到了损伤，产生了炎症；与模型组相比，植物乳杆菌CCFM8661干预显著缓解了小鼠血清中TBIL水平的病理性升高。综上，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661可有效缓解苯并芘暴露对小鼠造成的肝损伤。

2.3、不同植物乳杆菌对苯并芘暴露小鼠氧化应激指标的影响

通过ELISA试剂盒测定各组小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量，检测结果见图5-6。

超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内抗氧化系统中重要的组成，由图5可知，与载体对照组相比，模型组小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)的含量显著增加，小鼠脑组织中SOD水平的升高表明小鼠体内苯并芘代谢会产生大量的超氧阴离子自由基，导致ROS水平的增加，进而诱导SOD的活性增加，最终导致需要反应的超氧自由基增多，这说明小鼠在最高剂量下处于较高的氧化应激状态；与模型组相比，CCFM8661干预组小鼠小鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)的含量显著下降，可见，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661可有效缓解苯并芘暴露导致的小鼠氧化应激。

丙二醛(MDA)水平反映了机体脂质过氧化的程度，侧面反映了细胞受损的程度，由图6可知，与载体对照组相比，模型组小鼠脑组织中丙二醛(MDA)的含量显著增加，这说明苯并芘暴露小鼠的脑组织细胞受到严重损伤；与模型组相比，植物乳杆菌CCFM8661干预组小鼠脑组织中丙二醛(MDA)的含量显著下降，可见，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661可有效缓解苯并芘暴露导致的小鼠氧化应激。

2.4、不同植物乳杆菌对苯并芘暴露小鼠行为学指标的影响

参考文献“中国药理学通报，2012，28(2):289-293”和“中国细胞生物学学报，2011，33(11):1191-1196.”测定各组小鼠的行为学指标，检测结果见图7-10。

悬尾实验是一种经典而又能快速评价抗抑郁药物、兴奋药物、镇静药物药效的方法。其原理是利用小鼠悬尾后企图逃脱但又无法逃脱，从而放弃挣扎，进入特有的抑郁不动状态，实验过程中记录动物不动时间来反映抑郁状态，抗抑郁药物、兴奋药物能明显地缩短改变其状态。因此，可采用悬尾实验来考察不同植物乳杆菌对苯并芘暴露小鼠毒物兴奋效应的影响。其中，小鼠的运动路程代表了其自主活动能力，在中央格停留时间是动物对空间认知能力的反映，身体异常的小鼠会远离空旷环境，迅速离开中央格，沿周边活动；如果对新环境的认知能力差.则小鼠停留在中央格的时间也会缩短。

由图7-10可知，与载体对照组相比，模型组小鼠与植物乳杆菌CCFM382干预组小鼠进入静止不动的时间显著降低；与模型组相比，植物乳杆菌CCFM8661干预则显著提高了苯并芘暴露小鼠静止不动的时间。与载体对照组相比，模型组小鼠在旷场中运动总路程降低；与模型组相比，植物乳杆菌CCFM8661干预显著改善了苯并芘暴露小鼠的运动能力，使其运动路程显著增加。与载体对照组相比，模型组小鼠在旷场中心区停留时间减少；植与模型组相比，植物乳杆菌CCFM8661干预显著提高了苯并芘暴露小鼠在旷场中央停留的时间，使其探索中央区域的时间显著增加。可见，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661可有效缓解苯并芘暴露导致的小鼠行为学的改变。

2.5、不同植物乳杆菌对苯并芘暴露小鼠粪便中短链脂肪酸含量的影响

将收集得到的粪便置于液氮中，后转移至-80℃冰箱，在进行短链脂肪酸含量的检测前取出，进行真空冷冻干燥，准确称取0.05g冻干后的粪便样品溶解于0.5mL饱和氯化钠溶液中，浸泡30min，组织匀浆机匀浆，加入0.02mL浓度为10％的硫酸，震荡30s，在通风橱内向粪便溶液中准确加入1mL***溶液，震荡30s后离心15min(14000rpm、4℃)，移取上清液至含有0.3g无水硫酸钠的离心管中，震荡均匀，离心15min(14000rpm、4℃)，取上清至气质容量瓶中，通过GC-MS检测短链脂肪酸含量，检测结果见图11-16。

由图11-16可知，与载体对照组相比，模型组小鼠粪便中短链脂肪酸的含量显著降低；与模型组相比，植物乳杆菌CCFM8661干预则显著提高了苯并芘暴露小鼠短链脂肪酸的含量。可见，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CCFM8661可有效缓解苯并芘暴露导致的小鼠肠道代谢异常。

表1不同组别苯并芘暴露小鼠的血清生化指标

	HDL-C(mmol/L)	LDL-C(mmol/L)	TC(mmol/L)	TG(mmol/L)	ALP(U/L)
						Control	3.57±0.19<sup>b</sup>	0.36±0.03<sup>a</sup>	3.58±0.18<sup>ab</sup>	1.72±0.29<sup>ab</sup>	152.1±6.6<sup>b</sup>
Modle	3.37±0.17<sup>ab</sup>	0.38±0.06<sup>ab</sup>	3.34±0.18<sup>a</sup>	1.44±0.24<sup>a</sup>	153.3±6.1<sup>b</sup>
						CCFM382	3.18±0.16<sup>a</sup>	0.37±0.04<sup>a</sup>	3.49±0.29<sup>ab</sup>	1.69±0.29<sup>ab</sup>	135±8.2b<sup>a</sup>
CCFM8661	3.64±0.39<sup>b</sup>	0.42±0.02<sup>b</sup>	3.76±0.34<sup>b</sup>	1.97±0.20<sup>b</sup>	147.5±7.9<sup>b</sup>

表2不同组别苯并芘暴露小鼠的血清生化指标

	TP(g/L)	TBIL(umol/L)	GGT(U/L)	ALB(g/L)	LDH(U/L)
						Control	50.7±2.3<sup>a</sup>	0.60±0.14<sup>a</sup>	1.84±0.46<sup>a</sup>	28.8±3.3<sup>a</sup>	850.4±110.4<sup>a</sup>
Modle	52.7±1.3<sup>ab</sup>	1.4±0.15<sup>c</sup>	2.12±0.31<sup>a</sup>	31.7±0.6<sup>b</sup>	907.9±54.9<sup>ab</sup>
						CCFM382	53±2.0<sup>ab</sup>	1.11±0.19<sup>bc</sup>	1.71±0.29<sup>a</sup>	30.8±1.1<sup>ab</sup>	948.5±111.2<sup>ab</sup>
CCFM8661	52.1±1.9<sup>ab</sup>	1.02±0.15<sup>b</sup>	1.96±0.37<sup>a</sup>	31.8±2.1<sup>b</sup>	836±129.7<sup>a</sup>

实施例4：植物乳杆菌CCFM8661的应用

具体步骤如下：

植物乳杆菌CCFM8661可用于制备菌粉，菌粉的具体制备过程如下：

植物乳杆菌CCFM8661划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经5000g离心15min，得到菌泥；将菌泥用pH为7.2的磷酸盐缓冲液清洗3次后用保护剂重悬至浓度为1×10¹⁰CFU/mL，得到菌悬液；将菌悬液在温度37℃下预培养60min后冻干，得到植物乳杆菌CCFM8661菌粉；

其中，培养基的制备方法为：使用以培养基总重量计87.7％的水将10％酶水解脱脂乳、0.5％葡萄糖、1.5％胰蛋白胨与0.3％酵母浸膏溶解，然后调整其pH为6.8，得到培养基；

保护剂的成分包含：100g/L脱脂奶粉、30mL/L甘油、100g/L麦芽糊精、150g/L海藻糖和10g/L L-谷氨酸钠。

实施例5：植物乳杆菌CCFM8661的应用

具体步骤如下：

植物乳杆菌CCFM8661可用于制备牛乳，发酵乳的具体制备过程如下：

植物乳杆菌CCFM8661划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经5000g离心15min，得到菌泥；将菌泥用pH为7.2的磷酸盐缓冲液清洗3次后用保护剂重悬至浓度为1×10¹⁰CFU/mL，得到菌悬液；将菌悬液在温度37℃下预培养60min后冻干，得到植物乳杆菌CCFM8661菌粉；

其中，培养基的制备方法为：使用以培养基总重量计87.7％的水将10％酶水解脱脂乳、0.5％葡萄糖、1.5％胰蛋白胨与0.3％酵母浸膏溶解，然后调整其pH为6.8，得到培养基；

保护剂的成分包含：100g/L脱脂奶粉、30mL/L甘油、100g/L麦芽糊精、150g/L海藻糖和10g/L L-谷氨酸钠。

将脱脂奶在95℃热杀菌20min后冷却至4℃，得到原料；在原料中添加植物乳杆菌CCFM8661菌粉至浓度为不低于1×10⁶CFU/mL，得到牛乳。

实施例6：植物乳杆菌CCFM8661的应用

具体步骤如下：

植物乳杆菌CCFM8661可用于制备豆奶，豆奶的具体制备过程如下：

植物乳杆菌CCFM8661划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经5000g离心15min，得到菌泥；将菌泥用pH为7.2的磷酸盐缓冲液清洗3次后用保护剂重悬至浓度为1×10¹⁰CFU/mL，得到菌悬液；将菌悬液在温度37℃下预培养60min后冻干，得到植物乳杆菌CCFM8661菌粉；

其中，培养基的制备方法为：使用以培养基总重量计87.7％的水将10％酶水解脱脂乳、0.5％葡萄糖、1.5％胰蛋白胨与0.3％酵母浸膏溶解，然后调整其pH为6.8，得到培养基；

保护剂的成分包含：100g/L脱脂奶粉、30mL/L甘油、100g/L麦芽糊精、150g/L海藻糖和10g/L L-谷氨酸钠。

将大豆在温度80℃下浸泡2h后去除大豆皮，得到去皮大豆；将去皮大豆沥去浸泡水后加沸水磨浆，得到豆浆；将豆浆在高于80℃的温度条件下保温12min，得到熟豆浆；将熟豆浆用150目筛网过滤后离心分离，得到粗豆奶；将粗豆奶加热到温度140～150℃后迅速导入真空冷却室进行抽真空，使得粗豆奶中的异味物质随着水蒸汽迅速排出，得到熟豆奶；将熟豆奶降温至约37℃后在熟豆奶中添加植物乳杆菌CCFM8661菌粉至浓度为不低于1×10⁶CFU/mL，得到豆奶。

实施例7：植物乳杆菌CCFM8661的应用

具体步骤如下：

植物乳杆菌CCFM8661可用于制备果蔬饮料，果蔬饮料的具体制备过程如下：

植物乳杆菌CCFM8661划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经5000g离心15min，得到菌泥；将菌泥用pH为7.2的磷酸盐缓冲液清洗3次后用保护剂重悬至浓度为1×10¹⁰CFU/mL，得到菌悬液；将菌悬液在温度37℃下预培养60min后冻干，得到植物乳杆菌CCFM8661菌粉；

其中，培养基的制备方法为：使用以培养基总重量计87.7％的水将10％酶水解脱脂乳、0.5％葡萄糖、1.5％胰蛋白胨与0.3％酵母浸膏溶解，然后调整其pH为6.8，得到培养基；

保护剂的成分包含：100g/L脱脂奶粉、30mL/L甘油、100g/L麦芽糊精、150g/L海藻糖和10g/L L-谷氨酸钠。

将新鲜水果和蔬菜洗净后榨汁，得到果蔬汁；将果蔬汁在温度140℃下高温热杀菌2秒，得到杀菌后的果蔬汁；将杀菌后的果蔬汁降温至约37℃后在杀菌后的果蔬汁中添加植物乳杆菌CCFM8661菌粉至浓度为不低于1×10⁶CFU/mL，得到果蔬饮料。

实施例8：植物乳杆菌CCFM8661的应用

具体步骤如下：

植物乳杆菌CCFM8661可用于制备胶囊制品，胶囊制品的具体制备过程如下

植物乳杆菌CCFM8661划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经5000g离心15min，得到菌泥；将菌泥用pH为7.2的磷酸盐缓冲液清洗3次后用保护剂重悬至浓度为1×10¹⁰CFU/mL，得到菌悬液；菌悬液添加至浓度为30g/L的海藻酸钠溶液中至浓度为2×10⁹CFU/mL后，充分搅拌，使得植物乳杆菌CCFM8661的细胞均匀地分散于海藻酸钠溶液中，得到混合液；将混合液挤压到浓度为20g/L的氯化钙溶液中形成胶粒；待形成的胶粒静止固化30min后，过滤收集胶粒；将收集得到的胶粒进行冷冻干燥48h，得到粉剂；将粉剂装入到药用胶囊中，得到胶囊制品；

其中，培养基的制备方法为：使用以培养基总重量计87.7％的水将10％酶水解脱脂乳、0.5％葡萄糖、1.5％胰蛋白胨与0.3％酵母浸膏溶解，然后调整其pH为6.8，得到培养基。

实施例9：植物乳杆菌CCFM8661的应用

具体步骤如下：

植物乳杆菌CCFM8661可用于制备发酵乳，发酵乳的具体制备过程如下：

植物乳杆菌CCFM8661划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经5000g离心15min，得到菌泥；将菌泥用pH为7.2的磷酸盐缓冲液清洗3次后用保护剂重悬至浓度为1×10¹⁰CFU/mL，得到菌悬液；将菌悬液在温度37℃下预培养60min后冻干，得到植物乳杆菌CCFM8661菌粉；

其中，培养基的制备方法为：使用以培养基总重量计87.7％的水将10％酶水解脱脂乳、0.5％葡萄糖、1.5％胰蛋白胨与0.3％酵母浸膏溶解，然后调整其pH为6.8，得到培养基；

保护剂的成分包含：100g/L脱脂奶粉、30mL/L甘油、100g/L麦芽糊精、150g/L海藻糖和10g/L L-谷氨酸钠。

将植物乳杆菌CCFM8661菌粉与商业干粉发酵剂保加利亚乳杆菌和商业干粉发酵剂嗜热链球菌按照质量比1:1:1的比例混合，得到发酵剂；将糖添加至鲜奶中至浓度为50g/L，得到混合液；将混合液在65℃、20MPa的条件下进行均质后在95℃下保温杀菌5min，得到发酵原料；将发酵原料降温至35℃后以0.03％(v/v)的接种量将发酵剂接种至发酵原料中，于35℃下保温发酵16h，得到发酵乳；将发酵乳于42℃下放置4h进行凝乳后，在4℃下冷藏24h进行后熟，得到发酵乳成品。

实施例10：植物乳杆菌CCFM8661的应用

具体步骤如下：

植物乳杆菌CCFM8661可用于制备片剂，片剂的具体制备过程如下：

植物乳杆菌CCFM8661划线于MRS固体培养基上，37℃条件下培养48h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，连续活化两代，得到活化液；将活化液按2％(v/v)的接种量接种于培养基中，37℃条件下培养18h，得到菌液；将菌液经5000g离心15min，得到菌泥；将菌泥用pH为7.2的磷酸盐缓冲液清洗3次后用保护剂重悬至浓度为1×10¹⁰CFU/mL，得到菌悬液；将菌悬液在温度37℃下预培养60min后冻干，得到植物乳杆菌CCFM8661菌粉；

其中，培养基的制备方法为：使用以培养基总重量计87.7％的水将10％酶水解脱脂乳、0.5％葡萄糖、1.5％胰蛋白胨与0.3％酵母浸膏溶解，然后调整其pH为6.8，得到培养基；

保护剂的成分包含：100g/L脱脂奶粉、30mL/L甘油、100g/L麦芽糊精、150g/L海藻糖和10g/L L-谷氨酸钠。

称取植物乳杆菌CCFM8661菌粉25.7重量份、淀粉55.0重量份、纤维素衍生物4.5重量份、羧甲基淀粉钠12.0重量份、滑石粉0.8重量份、蔗糖1.0重量份与水1.0重量份，得到原材料；将原材料混合，得到湿颗粒；将湿颗粒用中南制药机械厂的压片机进行压片后使用青州市益康中药机械有限公司的小型药物干燥机进行干燥，得到片剂。

虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。