本发明公开了七种RNA病毒核酸检测质控品及其制备方法,属于临床检验学和应用分子生物学领域。本发明具有序列表SEQ ID NO.3～SEQ ID NO.13所示的核苷酸序列。本发明采用优化的MS2噬菌体病毒样颗粒包装技术,分别将七种RNA病毒的重组常规检测区域序列包裹至MS2衣壳蛋白中,制备了七种病毒的MS2病毒样颗粒核酸检测质控品。质控品充分模拟天然病毒粒子结构、性能稳定、耐核酸酶、无任何传染危险性,实现从核酸提取、逆转录及扩增检测的全流程的质量监控和评估。该质控品通用性好,检测区域广泛,适用于常规检测方法和多种检测试剂盒的质量控制,克服了不同试剂盒不能共用质控品的难题。

本发明公开了一种人肝纤维化诱导模型的工具细胞株构建方法,属于生物技术领域。本发明提供一种重组慢病毒载体,包括插入有绿色荧光基因EGFP及人TGF-β1基因的慢病毒载体,所述慢病毒载体选用Tet-On诱导表达慢病毒系统,基于该重组慢病毒载体可构建一种人肝纤维化诱导模型的工具细胞株。该重组慢病毒载体能通过诱导剂Dox持续诱导TGF-β1的过表达,弥补了传统肝纤维化诱导方法过程中需要持续添加重组的TGF-β1因子操作繁琐、费时、成本高、批次差异大等缺陷；且对细胞的毒性小,且制备方法简单,易于工业化生产。

本发明公开了一种Nluc标记的重组猪δ冠状病毒感染性克隆质粒构建及其应用,针对猪δ冠状病毒,采用BAC系统和CRISPR/Cas9技术相结合的方式,基于已构建成功的PDCoV感染性克隆质粒,先通过CRISPR/Cas9切割PDCoV感染性克隆质粒,再通过同源重组方式获得Nluc基因替换NS6基因的重组质粒,转染细胞后拯救出稳定表达Nluc的重组病毒,通过药物实验证实该重组病毒可为抗猪δ冠状病毒药物的筛选研究提供非常有价值的技术工具。

本发明公开了一种基于转录调控序列重布的反向遗传操作方法及其应用,其中,所述方法为根据HuN4-F112感染性克隆全长测序以及转录调控前导序列(Leader TRS),下游转录调控序列(body TRSs)一级核心6碱基序列的鉴定,将HuN4-F112全基因组设计为分别包含Leader TRS,Body TRSs在内的六段基因组序列,分别设计用于Leader TRS,Body TRSs核心6碱基序列C-(5)C-(6)定点突变的引物,获得全基因组转录调控序列整体突变的基因组片段。该TRS circuit突变PRRS弱毒疫苗株能够有效抵抗自然环境中普遍发生的基因组间重组现象,对临床上PRRS的有效防控有重要意义。

本发明提供了抑制长链非编码RNA MALAT1表达的shRNA,其针对Genbank中MALAT1转录本序列NR-002847.3的286、743、1048、4807位点或其他转录本序列中的对应位点设计；本申请还提供了相应质粒、慢病毒、药物组合物及其在治疗认知障碍中的应用。本发明的MALAT1-shRNA干扰质粒能显著特异性抑制海马神经元内MALAT1的表达,促进神经元细胞周期的进程,抑制神经元凋亡和凋亡关键蛋白的表达,从而起到抵抗应激诱导的神经元细胞损伤的作用。

本发明属于神经工程技术领域,具体涉及一种在神经元细胞特异性高效表达的迷你启动子pAPP。本发明提供了一种迷你启动子pAPP及其应用,所述启动子pAPP的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明另一方面提供了应用该启动子pAPP在重组腺相关病毒载体、重组腺相关病毒、重组腺相关病毒的试剂盒、基因治疗载体中,以及在制备操控神经细胞、基因编辑和/或基因治疗试剂中的应用。本发明提供的迷你启动子pAPP使外源基因得以在全脑范围内的神经元中高效表达,在基因编辑和基因治疗领域具有广泛的应用前景。

本发明属于病毒基因工程技术领域,具体涉及一种猪繁殖与呼吸综合征突变病毒RvJXwn-nsp1α-G90A,并进一步公开其应用。本发明所述猪繁殖与呼吸综合征突变病毒RvJXwn-nsp1α-G90A,通过将高致病性的PRRSV毒株JXwn06非结构蛋白nsp1α的第90位氨基酸由甘氨酸突变为丙氨酸获得突变病毒,获取了诱导降解其靶细胞-猪肺泡巨噬细胞(PAMs)PAMs细胞表面SLA-I分子功能受损的突变毒株。该突变病毒感染宿主细胞后,可诱导降解靶细胞表面SLA-I分子的功能严重受损,且该突变病毒遗传性质表现稳定,可作为猪繁殖与呼吸综合征的疫苗侯选株,用于预防猪繁殖与呼吸综合征,具有良好的应用前景。

本发明公开了一种重组溶瘤痘苗病毒、制备方法及其用途,所述重组溶瘤痘苗病毒可操作地插入能够表达CD47纳米抗体的外源基因,所述外源基因插入痘苗病毒TK基因中；所述外源基因的DNA序列如SEQ ID NO.1所示；所述外源基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。重组溶瘤痘苗病毒在制备用于预防或治疗肿瘤或/和癌症的药物中的用途。所述肿瘤或/和癌症包括乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、胃癌、结肠腺癌。本申请创造性地将CD47纳米抗体基因插入溶瘤痘苗病毒,使得溶瘤痘苗病毒在肿瘤细胞中复制并裂解细胞,杀死肿瘤细胞的同时,表达CD47纳米抗体,促进巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用,从而提高了治疗效果。

本发明公开了3种重组腺病毒以及SARS-CoV-2 Spike蛋白的RBD以及它们的应用。本发明提供了重组腺病毒：表达序列表的序列3所示蛋白质的重组腺病毒；表达序列表的序列5所示蛋白质的重组腺病毒；表达序列表的序列1所示蛋白质的重组腺病毒。序列表的序列1所示的蛋白质即全长SARS-CoV-2 Spike蛋白。序列表的序列3所示的蛋白质即具有膜锚定信号肽的SARS-CoV-2受体结合域RBD蛋白。序列表的序列5所示的蛋白质即具有分泌型信号肽的SARS-CoV-2受体结合域RBD蛋白。本发明研发的针对新型冠状病毒SARS-CoV-2的疫苗具有重要的理论指导价值和广泛的应用前景,为新型冠状病毒肺炎的根治提供了可能性。

本发明提供了可受微小RNA调控的分离的重组溶瘤痘病毒及其应用。所述分离的重组溶瘤痘病毒能够受微小RNA调控,所述微小RNA的表达量在哺乳动物的肿瘤细胞中比在同种哺乳动物的正常细胞中低,其中该重组溶瘤痘病毒基因组中的E10R基因的3’UTR区域中整合有所述微小RNA的靶序列。本发明的重组溶瘤痘病毒在多种肿瘤细胞中的复制均明显高于正常细胞,从而具有更好的肿瘤特异性、安全性,并且能够显著抑制肿瘤细胞的生长。此外,本发明为癌症治疗提供了更加丰富和有效的产品线,能够提供效果更好、肿瘤特异性更高、更加安全的产品。