本发明公开了一种氨肽酶的制备及其在蛋白脱苦中的应用,属于酶工程技术领域。本发明提供了一种氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的氨肽酶在酵母菌表达,其酶活达545U/mL。此氨肽酶对蛋白的脱苦能力强,将此蛋白水解酶以700U/g-(蛋白)的添加量就能够消除大豆蛋白、鱼蛋白和虾蛋白的苦味,反应条件温和、并且不改变肽的其他特性。因此,本发明的氨肽酶在蛋白脱苦中具备极高的应用前景。

本发明提供了山羊ACE2基因的克隆、蛋白的表达和纯化及其多克隆抗体的制备。提供了ACE2蛋白的氨基酸序列和基因序列,构建了ACE2原核表达载体,并对蛋白进行纯化。纯化后的蛋白能够制备效价较高的多克隆抗体,并且本发明中的抗原和多克隆抗体可以为进一步开发检测试剂盒奠定基础。ACE2自发现以来,对其多种功能进行了研究,ACE2作为一种强有力的负调节分子,平衡ACE的多种功能,通过靶向降解AngII,在全身各器官中表现出了保护性的作用；其次,作为SARS冠状病毒的必要受体,下调ACE2能够诱发严重的肺衰竭；ACE2和它的同源物Collectrin都同氨基酸转运载体相联系,分别在肾脏和肠道氨基酸吸收中起重要的作用。所以本发明无论是从基础研究还是临床运用上的意义都是十分重大的。

本发明涉及新冠病毒重组蛋白和人血管紧张素转换酶-2重组蛋白及其制备方法和应用；新冠病毒S1-NCTD重组蛋白具有的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,人血管紧张素转换酶-2重组蛋白具有的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；本发明还提供所述新冠病毒S1-NCTD重组蛋白和人血管紧张素转换酶-2重组蛋白在制备新冠病毒中和抗体的ELISA检测试剂盒上的应用。与现有技术相比,本发明利用基因工程技术在原核系统大肠杆菌中制备了该两种重组蛋白,均可以成功高效表达,且具有良好的抗原性,能很好地用以检测新冠病毒中和抗体,并在新冠疫苗接种后的免疫力评估中得到应用。相比较于其他传统方法更为安全高效,对于新冠病毒的基础研究以及临床检测具有积极意义。

本发明涉及ACE2胞外区与能使ACE2二聚化的多肽片段连接而形成的融合蛋白,其中优选人IgG1抗体的Fc片段,与人ACE2的胞外区连接形成融合蛋白。该蛋白可以很强的亲和力与RBD结合,同时,可以很好地抑制分子和细胞层面RBD与ACE2蛋白的结合。可以用于新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染的预防和治疗。

本文提供了存活靶向性嵌合(SURTAC)分子,以及它们用于将泛素分子从泛素化蛋白质去除的方法。在一个实施方式中,SURTAC分子包含第一结合结构域、第二结合结构域、和连接体结构域,其中第一结合结构域被配置以与泛素化蛋白质结合；第二结合结构域被配置以与泛素蛋白酶结合,泛素蛋白酶将一个或多个泛素从与第一结合结构域结合的泛素化蛋白质切割,并且连接体结构域被配置以将第一结合结构域与第二结合结构域连接。

本发明涉及融合蛋白及其在治疗冠状病毒引起的疾病中的应用,所述融合蛋白含ACE2部分和Fc段；其中,所述ACE2部分选自：ACE2蛋白胞外域或其突变体,所述胞外域含ACE2蛋白PD结构域的片段或其突变体；所述Fc段选自IgG1、IgG2和IgG4的Fc段或其突变体,且所述IgG1的Fc段无ADCC活性。

本发明涉及一种聚球藻血管紧张素转化酶抑制肽及其制备方法与应用。本发明的聚球藻血管紧张素转化酶抑制肽的序列为Val-Thr-Tyr(VTY)。本发明提供了一种聚球藻来源的新型血管紧张素转化酶抑制肽,该抑制肽结构新颖,分子量小,易被吸收并发挥作用,其对血管紧张素转化酶体外抑制IC-(50)值为8.93μg/mL。本发明的聚球藻ACE抑制肽(Val-Thr-Tyr)在ACE抑制剂和高血压治疗相关的药品和保健品方面有广泛的应用前景。

本发明公开了一种用于药物筛选的受体色谱载体的制备方法,将SpyCatcher纯化蛋白偶联至载体介质上作为通用载体,在受体蛋白序列中添加SpyTag标签并重组表达,利用SpyTag/SpyCatcher自连系统的固定化方式,通过共同孵育将带SpyTag标签受体蛋白的细胞裂解液中以捕获方式结合并定向固定到载体上,实现受体色谱载体的快速制备。该方法避免了针对不同受体蛋白的纯化过程,可适用于不同受体蛋白对应的色谱载体制备,并且受体定向固定、结合牢固、在生理条件下结合固定故能保持受体最佳活性,因而具有便捷性、通用性和实用性。

本发明公开了一种具有抑制二肽基肽酶IV功能的南极磷虾降血糖寡肽及用途,具体是以南极磷虾为原料,通过超声脱脂、酶解,膜超滤分级和色谱制备得到二肽基肽酶Ⅳ抑制寡肽Leu-Pro-Gly-Thr-Arg-Ile-Pro-Ala(LPGTRIPA),ESI-MS测定分子量为824.0Da。本发明制备的南极磷虾的二肽基肽酶Ⅳ抑制寡肽LPGTRIPA可显著抑制DPP-Ⅳ活力,显著降低模型小鼠餐后血糖水平,改善小鼠口服葡萄糖糖耐量和麦芽糖糖耐量,降低模型小鼠的甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)的含量,且安全无毒副作用,可应用于治疗或者辅助治疗II型糖尿病的特医食品、保健品和药物。

本发明涉及乳酸菌,特别是链球菌属菌株,其对cos型噬菌体的敏感性降低。本发明还涉及对这些乳酸菌进行工程化的方法以及这些乳酸菌用于发酵奶的用途。