本发明公开了一种稳定表达几丁二糖脱乙酰酶的枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用,属于基因工程技术领域。本发明通过筛选整合位点,提高整合拷贝数,构建了可以稳定高效表达几丁二糖脱乙酰酶Dac的食品安全级工程菌株。与现有技术相比,几丁二糖脱乙酰酶胞外酶活得到了极大的提高,发酵周期大大缩短。本转化方法简单易行,条件温和,高效环保,产物得率高。此法有利于解决传统合成法中污染严重,产率低下等问题,而且此法易于控制,利于推广应用。

本发明提供了一种重组酰胺水解酶基因及其应用,所述重组酰胺水解酶基因包括SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。本发明还提供了一种重组载体、一种重组细胞、一种重组酰胺水解酶的制备方法及其制备得到的重组酰胺水解酶。本发明所述重组酰胺水解酶基因在受体细胞中的表达效率高,为酰胺水解酶的工厂化生产提供了条件；所述酰胺水解酶的制备纯化方法简单高效,所得酰胺水解酶具有良好的催化活性及稳定性,具有应用于生产实际中的价值。

本发明公开了一种淤泥地层地下管廊地基换填砂加固方法,第一步,现场脲酶提取液制备；第二步,管廊地基换填砂预处理；第三步,管廊地基换填砂加固；首先在管廊地基下方进行地下支护结构施作,并在围护区域内对管廊地基下部淤泥进行开挖；在待回填区域进行插销拼装的木模板搭建；将预处理换填海砂在木模板内进行EICP分层加固回填,直至回填至指定标高；回填结束后将木模板进行完整拆除,待同一节管廊的换填砂垫层EICP分层加固回填分段完成后,拆除管廊地基下方的地下支护结构,施作管廊的主体结构。通过对现有的换填砂加固方法进行改良,结合淤泥地层特殊的地下地质情况,以创造性地转用于淤泥地层的地下管廊地基加固。