本发明涉及一种耐热β-半乳糖苷酶及其在乳糖降解的应用。所述β-半乳糖苷酶氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的β-半乳糖苷酶Gal-T为结构与功能新颖的乳糖水解酶,其氨基酸序列与已有性质报道的β-半乳糖苷酶序列相似度仅为75.75％,是一个新酶。本发明所述的β-半乳糖苷酶产量可达460.4U/mL,最适反应温度为45℃,最适反应PH为7.5。本发明所述的β-半乳糖苷酶具有耐热性,在40℃-60℃的温度范围内显示出广泛的温度稳定性。本发明所述的β-半乳糖苷酶产量大,热稳定性好,具有优良的工业化应用潜质。

本发明公开了一种SFV-helper质粒,其是通过构建如SEQ ID NO.1所示的重组载体,并合成如SEQ ID NO.2所示的插入片段基因,再将所述插入片段基因克隆入所述重组载体而得。相应的,本发明还提供一种pSFVCs-LacZ病毒样颗粒及其制备方法,包括：(1)构建所述SFV-helper质粒；(2)将pSFVCs-LacZ、SFV-helper质粒体外转录成mRNA,然后将mRNA共电转入BHK细胞中,得到pSFVCs-LacZ病毒样颗粒。相应的,本发明还提供SFV-helper质粒、pSFVCs-LacZ病毒样颗粒的应用。实施本发明,能高效表达β-半乳糖苷酶,并具有较好的生物安全性。

本发明涉及基因工程技术领域,具体提供了一株高产酸性乳糖酶的黑曲霉菌株。申请人首先将来源于米曲霉(Aspergillus oryzae)的酸性乳糖酶基因在黑曲霉(Aspergillus niger)宿主中过表达,构建得到高效表达酸性乳糖酶的黑曲霉工程菌,然后进一步通过紫外诱变方法筛选获得一株酸性乳糖酶产量显著提高的突变菌株,保藏编号为CGMCC No.19280,可广泛应用于酸性乳糖酶的生产,有利于降低该酶的生产成本。

本发明涉及一种β-半乳糖苷酶及其在乳糖降解中的应用。所述β-半乳糖苷酶氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的β-半乳糖苷酶Gal39为结构与功能新颖的乳糖水解酶,其氨基酸序列与已有性质报道的β-半乳糖苷酶序列相似度仅为79.28％,是一个新酶。本发明所述的β-半乳糖苷酶产量可达366.2U/mL,最适反应温度为40℃,最适反应PH为7.5。本发明所述的β-半乳糖苷酶具有耐热性,在60℃下孵育1小时仍保持56.2％的酶活性。本发明所述的β-半乳糖苷酶产量大,稳定性好,具有优良的工业化应用潜质。

本发明公开了一种耐盐β-半乳糖苷酶GalNC2-13及其制备方法和应用,该β-半乳糖苷酶GalNC2-13氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,共592个氨基酸,理论分子量为67.83kDa,编码基因如SEQ ID NO.2所示。所述β-半乳糖苷酶GalNC2-13具有较好的NaCl稳定性,在食品工业、合成低聚半乳糖(GOS)及作为报告基因等具有较好的应用潜力。

本发明提供了一种κ-卡拉胶酶突变体及其应用,突变体是由如SEQ ID NO.1所示序列编码的野生型κ-卡拉胶酶分别经过其第42、51、155或198位氨基酸突变而产生的突变体。与野生型κ-卡拉胶酶相比,这些突变体的热稳定性得到了一定的提高,野生型酶(WT)在60℃热处理40min后仅保留了3.90％的相对酶活力,而突变酶Q42V、I51H、K155A、G198S分别保留了29.23％、6.12％、18.50％、19.77％的相对酶活力。从而使κ-卡拉胶酶在卡拉胶寡糖工业生产中具有良好的应用前景。

提供了一种包括AAVhu68衣壳和包含溶酶体β-半乳糖苷酶基因(例如,半乳糖苷酶β1基因,GBL1)的载体基因组的重组腺相关病毒(rAAV)(即,rAAVhu68.GBL1)。还提供了一种组合物,所述组合物含有有效量的rAAVhu68.GBL1,以改善GM1神经节苷脂病的症状,包含例如平均寿命延长、对饲管的需求减少、癫痫发生率和频率降低、神经认知衰退的进展减慢和/或神经认知发展改善。