本发明提供一种在酸性条件下具有更高稳定性的突变蛋白酶。该突变蛋白酶由下述氨基酸序列构成,该氨基酸序列对于序列号2的氨基酸序列或与其具有至少90％同一性的氨基酸序列,在相当于序列号2的氨基酸序列的303位的位置的氨基酸残基被其他的氨基酸残基取代。

本发明公开了一种枯草芽孢杆菌角蛋白酶的异源表达与表征及其在羊皮脱毛中的应用,属于生物技术领域。本发明所述的角蛋白酶基因全长是通过挖掘Bacillus sp. LCB12全基因数据而获得,其基因全长1140bp,编码379个氨基酸,并通过PCR体外扩增了该基因。本发明为首次实现角蛋白酶VT104K基因在枯草芽孢杆菌SCK6中的异源表达、纯化和表征,并将重组角蛋白酶应用于山羊皮脱毛。该角蛋白酶具有良好的酶学特性,且脱毛性能优异,在制革工艺中拥有广阔的应用前景。

本发明公开了一种热稳定性提高的角蛋白酶突变体及应用,属于基因工程和酶工程技术领域。本发明的突变体为A165E、Q170T、N292F、L190Q、H92N和S171G,上述突变体在较好的保持催化活性的基础上使热稳定性获得不同程度提升,其中Q170T突变体具有最优热稳定性,在60℃的半衰期由野生型的17.3min提升到38.5min。六个位点组合突变体的半衰期显著改善至66.1min,最适反应温度由40℃提高至60℃。突变体的催化活性和热稳定性均较好,较野生型角蛋白酶更具应用价值和潜力。并且基于计算机辅助分析的蛋白质热稳定性提升方法可以成为工业酶热稳定性改造的通用途径。

本发明涉及包含具有不同净电荷特性的第一蛋白酶和第二蛋白酶的洗涤剂组合物、以及新颖的蛋白酶变体。

本发明公开了一种提升菌体生长和产生物酶潜力的基因表达盒,属于工业生物技术领域。本发明提供如SEQ ID NO.1所示的菌体密度依赖型自诱导启动子。本发明提供的启动子能够有效调控宿主细胞的生长和角蛋白酶的表达过程,使菌体密度提高了50％,酶活力最高可达到3500U·mL～(-1),是对照菌的2.9倍。本发明通过使用菌体密度依赖型启动子有效调控了产酶工程菌的生长与产酶过程,减少产酶对宿主的影响,从而提高菌体量及产酶量。本发明为工业上生产角蛋白酶等宿主毒性蛋白酶类提供了有效的解决方法。