阅读说明：本技术 黑色素前体物多巴醌的制备方法及应用 (Preparation method and application of melanin precursor dopaquinone ) 是由 张天 杜成强 于 2020-07-20 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种黑色素前体物多巴醌的制备方法及应用,克服了传统染发剂中染发成分对苯二胺具有毒性的缺点。本发明的技术方案为：以黧豆提取物左旋多巴为主要生色活性物质,使用土豆皮提取的酪氨酸酶在生物工艺催化反应下生成黑色素前体多巴醌。本发明所制得的黑色素前体物多巴醌,替代了传统染发剂中染发成分对苯二胺,将其应用于染发剂中,使用植物提取物进行制备,制备过程对环境友好,安全环保,所制备得到的黑色素前体物多巴醌对人体没有毒性。(The invention discloses a preparation method and application of a melanin precursor dopaquinone, which overcome the defect that a hair dyeing component p-phenylenediamine in a traditional hair dye has toxicity. The technical scheme of the invention is as follows: largyrum pruriens extract levodopa is used as a main chromogenic active substance, and tyrosinase extracted from potato peel is used for generating dopaquinone precursor of melanin under the catalysis reaction of a biological process. The prepared melanin precursor dopaquinone replaces a hair dyeing component p-phenylenediamine in the traditional hair dye, is applied to the hair dye, is prepared by using the plant extract, is environment-friendly and safe and environment-friendly in the preparation process, and has no toxicity to a human body.)

黑色素前体物多巴醌的制备方法及应用

技术领域

本发明属于特殊化妆品领域，具体涉及一种黑色素前体物多巴醌的制备方法及应用。

背景技术

现代化学染发剂以对苯二胺的发现与使用为起始，虽然已经过了多年的优化与改进，但仍不能避免这类物质及其衍生物所带来的的毒性和副作用。原因是其关键原料PPD(对苯二胺)及PTD(2，5-二氨基甲苯)是引起***反应的主要变应原，而且渗透能力强，在染发的过程中会通过毛囊快速扩散到体内，从而带来健康隐患和不适的感觉。我国规定PPD及PTD在染发剂中的最高允许浓度分别为6%和10%，而欧洲最高浓度为2%和4%。据统计，PPD的致敏率为0.1%～l%，过敏患者斑贴试验的PPD致敏率为2%～5%。PPD引起美发从业人员接触性皮炎则更常见，发生率为19%～35%。另外染发剂中还含有其他不安全的助剂：间苯二酚能刺激皮肤及粘膜，经皮肤迅速吸收，引起中毒症状；对氨基苯酚、邻氨基苯酚、间氨基苯酚具有苯胺和苯酚的双重毒性，经皮肤吸收引起高铁血红蛋质症和哮喘；巯基乙酸具有较强烈的刺激性，与眼接触可致严重损害，对皮肤有致敏作用，可引起皮炎。因此这类染发剂虽然高效，但并不安全，且染发的过程中会散发出让人不适的气味，严重影响染发的体验。

植物染发剂利用天然染料与带正电荷的表面活性剂组合成粒径小的颗粒，附着在头发表面，可以使用几种植物染料混合呈现不同的颜色，或以植物染料与水溶性色素搭配出不同颜色，由于染料分子只以吸附的方式与毛鳞片作用，一般归类于暂时型或半永久型染发剂，此类植物来源主要是一些色素含量较为丰富的植物，主要包括海娜、甘兰菊、小粟碱、番红花、姜黄素等。但以海娜粉为首的纯植物染发剂其中也含PPD类物质，实质是在对苯二胺染发剂中添加部分植物提取物，其中有效的染色成分仍是对身体有毒有害的对苯二胺类物质。

发明内容

本发明的目的是要提供一种黑色素前体物多巴醌的制备方法及应用。

为了达到上述目的，本发明提供一种黑色素前体物多巴醌的制备方法，以黧豆提取物左旋多巴为主要生色活性物质，使用土豆皮提取的酪氨酸酶在生物工艺催化反应下生成黑色素前体多巴醌。

一种黑色素前体物多巴醌的制备方法，具体步骤如下：

步骤一、黧豆提取物的制备：

将藜豆粉碎，用30%乙醇与0.1%乙酸的混合液常温提取，过滤，得提取液；将提取液减压浓缩，析出结晶，静置过夜，过滤，得左旋多巴粗品；粗品溶解过滤，滤液加少量维生素C， 调节pH为3.5，析出结晶，静置4h，过滤；滤饼洗涤干燥，得黧豆提取物；

步骤二、酪氨酸粗酶冻干粉的制备：

马铃薯块茎过夜，清水解冻，得碎皮屑，加入聚乙烯吡略烷酮和磷酸缓冲液匀浆，过滤，缓慢加入硫酸铵粉末，离心；取上清液继续加入硫酸铵，离心；沉淀真空冷冻干燥，得到酪氨酸粗酶冻干粉；

步骤三、利用步骤一和二制得的提取物进行生物催化反应：

配置浓度为10%黧豆提取物溶液，加入生物反应器中，将温度控制在35℃，按照黧豆提取物溶液体积的1/10的比例，加入质量分数30%酪氨酸粗酶冻干粉溶液，进行生物转化反应，定时取样检测，当300nm的吸光度大于2.0并且475nm的吸光度大于0.5时，终止生物转化反应，得到黑色素前体物粗品；

步骤四、对步骤三所得的黑色素前体物粗品进行离心去蛋白、活性炭吸附去黑色素颗粒、乙酸乙酯萃取、旋转蒸发除溶剂纯化处理，得到黑色素前体物多巴醌。

根据上述制备方法制得的黑色素前体物多巴醌在染发剂方面的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明制得黑色素前体物多巴醌，替代了传统染发剂中染发成分对苯二胺，将其应用于染发剂中，使用植物提取物进行制备，制备过程对环境友好，安全环保，所制备得到的黑色素前体物多巴醌对人体没有毒性。

附图说明

图1为实施例制得的黑色素前体物多巴醌制得的染发剂的染发效果图。

具体实施方式

下面将结合具体实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式包括但不限于以下实施例表示的范围。

实施例

步骤一、黧豆提取物的制备：

将藜豆粉碎，用含0.1%乙酸的30%乙醇水液常温提取3次，每次24h。过滤，得提取液。将提取液减压(21.3kPa)浓缩，待浓缩至密度1.02-1.05，有结晶析出时，在5℃静置过夜，过滤，得左旋多巴粗品。粗品用1N盐酸溶解，加活性炭搅拌、脱色、过滤，滤液加少量维生素C用2N氨水中和至pH3.5，析出大量结晶。5℃静置4h，过滤。滤饼用含少量维生素C的蒸馏水洗2次，丙酮淋洗脱水1次。65℃干燥得黧豆提取物终品。

步骤二、土豆皮提取物的制备；

1kg洗净的马铃薯块茎，-20℃预冷过夜，用清水解冻，得碎皮屑50g，加入2 g经过滤的聚乙烯吡略烷酮(PVPP)，加200 mL磷酸缓冲液(0.1 mol/L，pH 6.5)匀浆。四层纱布过滤，缓慢加入经研磨的硫酸铵粉末，使达到30%饱和度，于10000 r/min离心10 min。取上清液继续加入经研磨的硫酸铵，使达到70%饱和度，于10000 r/min离心20 min。沉淀直接经真空冷冻干燥，得到酪氨酸粗酶冻干粉，-70℃冰箱保存备用。

步骤三、利用步骤一和二制得的提取物进行生物催化反应，获得染发所需黑色素前体物粗品：

配置浓度为10%黧豆提取物终品溶液10L，将其加入容量体积为50L生物反应器中，利用温度控制系统，将温度控制在35℃,按照黧豆提取物终品溶液体积的1/10的比例，加入上一步提取的30%酪氨酸粗酶冻干粉溶液，然后通入压缩空气，保持空气压力为0.10Mpa，空气流量为10LPM，进行生物转化反应，并且定时取样检测。取出的液体样品离心，取上清液稀释20倍后，在紫外分光光度计中测定300nm以及475nm的吸光度。当300nm的吸光度大于2.0并且475nm的吸光度大于0.5时，终止生物转化反应。

步骤四、对步骤三所得的黑色素前体物进行离心去蛋白、活性炭吸附去黑色素颗粒、乙酸乙酯萃取、旋转蒸发除溶剂等各步纯化处理，得到黑色素前体物多巴醌。

使用上述实施例制得的黑色素前体物多巴醌制得的染发剂对6组纯白发丝在不同温度下染色，1h后清洗发丝，比较染色效果。

编号	1	2	3	4	5	6
							染发温度/℃	25	30	35	38	40	42
染色效果	灰黑	黑棕	黑色	黑色	黑色	黑色

使用上述实施例制得的黑色素前体物多巴醌制得的染发剂对3组不同发质的人进行真人测试，室温下染发时间1h，头发发色由灰白变为黑色。

以上内容仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明权利要求书的保护范围之内。