阅读说明：本技术 一种抑制α-葡萄糖苷酶活性羊栖菜制品制备方法和羊栖菜制品 (Preparation method of sargassum fusiforme product for inhibiting activity of alpha-glucosidase and sargassum fusiforme product ) 是由 杨海龙 周化斌 于 2020-06-29 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种抑制α-葡萄糖苷酶活性羊栖菜制品制备方法和羊栖菜制品,该制备方法为以保藏编号为CGMCC5856的蛹虫草菌为制备专用菌,以羊栖菜为原料,通过发酵方式制备获得。经蛹虫草发酵的羊栖菜抑制α-葡萄糖苷酶活性可以提高50.85％-62.71％。(The invention discloses a preparation method of a sargassum fusiforme product for inhibiting activity of alpha-glucosidase and the sargassum fusiforme product, wherein the preparation method is to take cordyceps militaris with the preservation number of CGMCC5856 as a special preparation bacterium and take sargassum fusiforme as a raw material to prepare the sargassum fusiforme product in a fermentation mode. The activity of the sargassum fusiforme fermented by cordyceps militaris for inhibiting the activity of alpha-glucosidase can be improved by 50.85-62.71%.)

一种抑制α-葡萄糖苷酶活性羊栖菜制品制备方法和羊栖菜 制品

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域和糖尿病保健食物领域，具体是指抑制α-葡萄糖苷酶活性羊栖菜制品制备方法和羊栖菜制品。

背景技术

随着我国社会经济的快速发展，人们生活方式改变，全球的疾病谱也发生了变化。高血压、糖尿病，冠心病等慢性非传染性疾病发生率逐渐增多，趋于年轻化，严重危害着人类的健康。其中，糖尿病(Diabetes Mellitus)已成为我国患病率增长速度最快的疾病之一，国际糖尿病联盟(International Diabetes Federation，IDF)公布的第8版糖尿病地图概要显示：2017年糖尿病成人患者(20-79岁)在全球有4.25亿人，中国占总人数的1/4，是糖尿病患者最多的国家，预计到2040年，这一数字将会增加到6.42亿，而中国糖尿病患者也将达到1.51亿(薄其凤，陈羽嫣，2019.肠道菌群调节与2型糖尿病相关性研究进展.上海预防医学，31(3):242-246)。餐后高血糖是Ⅱ型糖尿病的重要症状之一，α-葡萄糖苷酶催化小肠内蔗糖、麦芽糖等寡糖的水解进而导致体内血糖升高，目前临床上用于抑制α-葡萄糖苷酶活性的代表性药物包括有阿卡波糖(acarbose)、福格列波糖(voglibose)、米格列醇(miglitol)等，疗效良好，但长期使用会造成人体肝、肾损伤及消化道反应等副作用(丁浩淼，孙弢，夏彭奎，汤倩，王忠华，汪财生，陈海敏，钱国英，2019.羊栖菜组分多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用.核农学报，33(2):0297-0304)，选用具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的天然药食两用材料是防止糖尿病并减少副作用的有效途径。

羊栖菜(Sargassum fusiforme)是日本、中国、韩国和朝鲜沿海地区的海洋蔬菜和药用海藻。在我国，羊栖菜有悠久的入药史，《本草纲目》、《神农本草经》等药典均有记载，现代药理学研究表明，羊栖菜具有增进机体免疫力、延缓衰老、降血糖、降血脂等功效(谢何杰，叶慧娴，沈婷，罗晓双，杨盈，南海函，2014.羊栖菜化学成分和药理活性的研究进展.浙江农业科学,(4):487-491)。

但是传统的羊栖菜加工方法都是采用煮熟凉拌调料食用，其抑制α-葡萄糖苷酶活性的能力不强，因此有必要对此进行改进。

发明内容

为解决现有技术存在的问题和不足，本发明的目的是提供一种抑制α-葡萄糖苷酶活性羊栖菜制品制备方法和羊栖菜制品。通过该制备专用菌经蛹虫草发酵的羊栖菜可提高抑制α-葡萄糖苷酶活性能力，从而使得制备的羊栖菜具有防止糖尿病的保健作用。

为实现上述目的，本发明的第一个方面是提供抑制α-葡萄糖苷酶活性羊栖菜制品制备方法。

为实现上述目的，其技术方案是以保藏编号为CGMCC5856的蛹虫草菌为制备专用菌，以羊栖菜为原料，通过发酵方式制备获得。

进一步设置是包括以下步骤：

(1)种子培养：将所述的蛹虫草菌接种到黄豆芽培养基上，在温度为23-25℃、转速为140-180r/min条件下回转式深层发酵5-7天，得到蛹虫草菌种子液；培养基组成是黄豆芽含量200g/L、葡萄糖含量20-30g/L、蛋白胨含量1-3g/L、玉米粉含量为3-5g/L；

(2)发酵：干燥的羊栖菜经粉碎后过60-80目筛，称取100g羊栖菜粉末，置于发酵容器中，加入80-100mL蒸馏水，搅拌均匀，121℃灭菌30min；冷却后接入10-15％体积质量比的蛹虫草菌种子液，搅拌均匀，25-28℃条件下静置发酵6-12天。

本发明的第二个目的是提供一种如所述制备方法所制备的抑制α-葡萄糖苷酶活性羊栖菜制品。

本发明的有益效果在于：

本发明方法具有工艺简单，成本较低，经本发明方法处理后，可以显著提升羊栖菜抑制α-葡萄糖苷酶的活性，具实施例检测，经蛹虫草发酵的羊栖菜抑制α-葡萄糖苷酶活性可以提高50.85％-62.71％。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合实施例对本发明作进一步地详细描述。

实施例1羊栖菜抑制α-葡萄糖苷酶活性能力测定

(1)样品制备及试剂配制

称取0.5g羊栖菜粉末，加入5mL 80％乙醇，45℃，210W超声提取45min，然后8000rpm/min离心15min，取上清液待用。

(2)抑制α-葡萄糖苷酶活性能力测定

依据反应体系依次加入3mL 0.1mol/L磷酸缓冲液(pH 6.8)和100μL1.625U/mL的α-葡萄糖苷酶溶液，混合均匀，于37℃水浴保温10min，取出，然后加入200μL样品溶液和100μL 5mmol/L PNPG(对硝基苯-α-D葡萄糖苷，4-Nitrophenylα-D-glucopyranoside)，充分混匀，于37℃水浴反应10min，反应结束后迅速加入200μL 0.1mol/L的Na₂CO₃溶液终止反应，在405nm处测定吸光值(As)；。同等条件下，分别用磷酸缓冲液代替样品溶液测定吸光值(Ac)和酶溶液测定吸光值(Ab)。根据下列公式计算出α-葡萄糖苷酶抑制率。

抑制率％＝[Ac-(As-Ab)/Ac]×100％

其中：Ac：对照组吸光度值；As：样品组吸光度值；Ab：空白组吸光度值。

(3)未经发酵羊栖菜抑制α-葡萄糖苷酶活性为59％。

实施例2

本实施例采用蛹虫草菌(Cordyceps militaris)，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CGMCC5.856。菌种的有关性质可以参阅中国普通微生物菌种保藏管理委员会(CCGMC)菌种目录，本实施例不再详述。

将蛹虫草菌CGMCC5.856接种到黄豆芽种子培养基上，在温度为25℃、转速为160r/min条件下回转式深层发酵6天；干燥的羊栖菜经粉碎后过60目筛，称取100g羊栖菜粉末，置于发酵容器中，加入100mL蒸馏水，搅拌均匀，121℃灭菌30min；冷却后接入15％(v/w)的蛹虫草菌种子液，搅拌均匀，25-28℃条件下静置发酵6天。发酵结束后测定发酵羊栖菜抑制α-葡萄糖苷酶活性能力，发酵羊栖菜抑制α-葡萄糖苷酶活性为89％。

实施例3

将蛹虫草菌CGMCC5.856接种到黄豆芽种子培养基上，在温度为25℃、转速为160r/min条件下回转式深层发酵6天；干燥的羊栖菜经粉碎后过60目筛，称取100g羊栖菜粉末，置于发酵容器中，加入100mL蒸馏水，搅拌均匀，121℃灭菌30min；冷却后接入15％(v/w)的蛹虫草菌种子液，搅拌均匀，25-28℃条件下静置发酵8天。发酵结束后测定发酵羊栖菜抑制α-葡萄糖苷酶活性能力，发酵羊栖菜抑制α-葡萄糖苷酶活性为96％。

实施例4

将蛹虫草菌CGMCC5.856接种到黄豆芽种子培养基上，在温度为25℃、转速为160r/min条件下回转式深层发酵6天；干燥的羊栖菜经粉碎后过60目筛，称取100g羊栖菜粉末，置于发酵容器中，加入100mL蒸馏水，搅拌均匀，121℃灭菌30min；冷却后接入15％(v/w)的蛹虫草菌种子液，搅拌均匀，25-28℃条件下静置发酵10天。发酵结束后测定发酵羊栖菜抑制α-葡萄糖苷酶活性能力，发酵羊栖菜抑制α-葡萄糖苷酶活性为92％。

实施例5

将蛹虫草菌CGMCC5.856接种到黄豆芽种子培养基上，在温度为25℃、转速为160r/min条件下回转式深层发酵6天；干燥的羊栖菜经粉碎后过80目筛，称取100g羊栖菜粉末，置于发酵容器中，加入100mL蒸馏水，搅拌均匀，121℃灭菌30min；冷却后接入15％(v/w)的蛹虫草菌种子液，搅拌均匀，25-28℃条件下静置发酵12天。发酵结束后测定发酵羊栖菜抑制α-葡萄糖苷酶活性能力，发酵羊栖菜抑制α-葡萄糖苷酶活性为93％。

不同实施例结果的比较

实施例	抑制α-葡萄糖苷酶活性	活性提升率
			实施例1	59％	-
实施例2	89％	50.85
			实施例3	96％	62.71
实施例4	92％	55.93
			实施例5	93％	57.63

以上所揭露的仅为本发明较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作的等同变化，仍属本发明所涵盖的范围。