阅读说明：本技术 乳酸菌的活菌数的减少抑制剂和不含乳成分的酸性饮料 (Inhibitor for reduction of viable count of lactic acid bacteria and acidic beverage containing no milk component ) 是由 尾崎悟 于 2019-03-27 设计创作，主要内容包括：本发明的课题在于提供在完全不含或实质上不含乳成分的含乳酸菌的饮料中能够使乳酸菌的活菌尽可能长期地存在的制剂。本发明的乳酸菌的活菌数的减少抑制剂是用于在完全不含或实质上不含乳成分的清凉饮料等饮料中添加乳酸菌的活菌时抑制其活菌数减少的酸性添加剂,其以乳酸及其盐中的至少一者作为有效成分。(The present invention addresses the problem of providing a preparation which enables viable bacteria of lactic acid bacteria to be present for as long as possible in a lactic acid bacteria-containing beverage which contains no or substantially no milk components. The inhibitor for reducing the number of viable bacteria of a lactic acid bacterium of the present invention is an acidic additive for inhibiting the reduction of the number of viable bacteria of a lactic acid bacterium when the viable bacteria of the lactic acid bacterium are added to a beverage such as a refreshing beverage containing no or substantially no milk component, and contains at least one of lactic acid and a salt thereof as an active ingredient.)

乳酸菌的活菌数的减少抑制剂和不含乳成分的酸性饮料

技术领域

本发明涉及乳酸菌的活菌数的减少抑制剂。另外，本发明涉及包含该乳酸菌的活菌数的减少抑制剂的有效成分的酸性饮料。

背景技术

通过以活菌形式让人摄取乳酸菌而给人带来各种健康效果。作为能够摄取活的乳酸菌的饮食品，已知有酸奶、乳酸菌饮料。酸奶和乳酸菌饮料包含乳成分。乳成分对乳酸菌具有保护效果。因此，保存酸奶和乳酸菌饮料时，难以杀灭乳酸菌。因此，在酸奶、乳酸菌饮料中，在数周的品尝期限内维持带来健康效果所需的乳酸菌的活菌数是相对容易的。

然而，不含有乳成分的清凉饮料等与酸奶、乳酸菌饮料相比，配方设计的自由度较大。因此，通过在清凉饮料中添加乳酸菌的活菌，从而对于例如零卡路里饮料、低卡路里饮料等在酸奶、乳酸菌饮料中无法实现的可满足广泛的消费者的商品，能够制造贩卖赋予了乳酸菌的健康效果的饮料。

然而，与酸奶、乳酸菌饮料相比，实质上不含乳成分等的液体中，在冷藏保存时容易杀灭乳酸菌。因此，迄今为止，在清凉饮料等实质上不含乳成分的饮料中很难以维持数周乳酸菌存活的状态。另外，通常，在清凉饮料中，为了改善风味和防止杂菌污染，大多数情况使用柠檬酸作为酸味剂。由于柠檬酸通常具有抗菌效果，因此由于添加柠檬酸而进一步促进清凉饮料中的乳酸菌的杀灭。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2007-089511号公报

专利文献2：日本特开2012-228218号公报

专利文献3：国际公开第2014/192905号

发明内容

发明要解决的问题

本发明的课题在于提供在完全不含或实质上不含乳成分的含乳酸菌的饮料中能够使乳酸菌的活菌尽可能长期地存在的制剂。

用于解决问题的方案

本发明的一个方案的乳酸菌的活菌数的减少抑制剂是用于在完全不含或实质上不含乳成分的清凉饮料等饮料中添加乳酸菌的活菌时抑制其活菌数减少的酸性添加剂，其以乳酸及其盐中的至少一者作为有效成分。需要说明的是，该乳酸菌的活菌数的减少抑制剂可以仅由乳酸及其盐中的至少一者构成，还可以包含除乳酸及其盐中的至少一者以外的成分。另外，上述的“完全不含乳成分”是指例如饮料中的乳成分的含有浓度低于0.1质量％，“实质上不含乳成分”是指例如饮料中的乳成分的含有浓度低于1质量％。

本发明人等进行了深入研究，结果发现：在完全不含或实质上不含乳成分的含乳酸菌的饮料中，乳酸和乳酸的盐具有抑制乳酸菌的活菌数减少的效果。具体而言，发现：在制备“作为酸味剂加入了柠檬酸及其钠盐的含乳酸菌/不含乳成分的清凉饮料”和“作为酸味剂加入了乳酸及其钠盐的含乳酸菌/不含乳成分的清凉饮料”，并对两含乳酸菌/不含乳成分的清凉饮料中的乳酸菌的活菌数的经时变化进行研究时，与前者相比，后者的乳酸菌的活菌数的减少速度得到缓和。即，该乳酸菌的活菌数的减少抑制剂还可以称为“缓和乳酸菌的活菌数的减少速度的制剂”。因此，上述的乳酸菌的活菌数的减少抑制剂具有抑制乳酸菌的活菌数减少的效果。因此，该乳酸菌的活菌数的减少抑制剂在完全不含或实质上不含乳成分的含乳酸菌的饮料中能够使乳酸菌的活菌尽可能长期地存在。

另外，乳酸当然是酸。因此，该乳酸菌的活菌数的减少抑制剂不仅具有上述效果，而且还能有助于改善风味和防止杂菌污染。

需要说明的是，上述的发明还可以表现为：“在完全不含或实质上不含乳成分的含乳酸菌的饮料中，将乳酸及其盐中的至少一者用作乳酸菌的活菌数的减少抑制剂的方法”、“乳酸及其盐中的至少一者用于作为完全不含或实质上不含乳成分的含乳酸菌的饮料中的乳酸菌的活菌数的减少抑制剂的应用”、“在完全不含或实质上不含乳成分的含乳酸菌的饮料中添加乳酸及其盐中的至少一者来抑制乳酸菌的活菌数减少的方法”、“在完全不含或实质上不含乳成分的含乳酸菌的饮料中添加乳酸及其盐中的至少一者以缓和乳酸菌的活菌数的减少速度的方法”。另外，从其它的观点出发，还可以表现为：“乳酸及其盐中的至少一者在制造用于抑制完全不含或实质上不含乳成分的含乳酸菌的饮料中乳酸菌的活菌数减少的制剂中的应用”、“乳酸及其盐中的至少一者在制造用于缓和完全不含或实质上不含乳成分的含乳酸菌的饮料中乳酸菌的活菌数的减少速度的制剂中的应用”。

本发明的另一方案的不含乳成分的酸性饮料含有乳酸菌的活菌、以及乳酸及其盐中的至少一者。需要说明的是，此处，“不含乳成分的酸性饮料”是指完全不含或实质上不含乳成分的酸性饮料。需要说明的是，该不含乳成分的酸性饮料优选为容器包装的饮料。原因在于容器包装的饮料容易发挥其效果。

如上所述，乳酸及其盐具有抑制乳酸菌的活菌数减少的效果。因此，在该不含乳成分的酸性饮料中，能够抑制乳酸菌的活菌数减少。因此，该不含乳成分的酸性饮料与之前的“不含乳成分但含乳酸菌的酸性饮料”相比，能够更长期地享受源自乳酸菌的活菌的效能。

需要说明的是，上述的另一方案的不含乳成分的酸性饮料中，乳酸及其盐的浓度总计优选在0.05wt％以上且1.0wt％以下的范围内，更优选在0.05wt％以上且0.5wt％以下的范围内。需要说明的是，此处，含乳酸但不含乳酸盐的情况，乳酸的浓度当然优选在0.05wt％以上且1.0wt％以下的范围内，更优选在0.05wt％以上且0.5wt％以下的范围内，含乳酸盐但不含乳酸的情况，乳酸盐的浓度当然优选在0.05wt％以上且1.0wt％以下的范围内，更优选在0.05wt％以上且0.5wt％以下的范围内。

具体实施方式

以下通过示出本发明的实施方式来对本发明进行详细地说明，但本发明不限定于以下所记载的各种方式。

-乳酸菌的活菌数的减少抑制剂-

本发明的实施方式的乳酸菌的活菌数的减少抑制剂是用于在完全不含或实质上不含乳成分的清凉饮料等饮料中添加乳酸菌的活菌时抑制其活菌数减少的添加剂，其以乳酸及其盐中的至少一者作为有效成分。作为乳酸的盐，例如可列举出钠盐。

优选：本发明的实施方式的乳酸菌的活菌数的减少抑制剂中标示出其用途、效能、功能、有效成分的种类、使用方法等的说明。此处所谓的“标示”包括用于让需求者知晓上述说明的全部标示。该标示只要是可想起/类推上述的标示内容那样的标示即可，无论标示的目的、标示的内容、标示的对象物/介质等如何均可以包括全部的标示。例如可列举出：在制品的包装/容器上标示上述说明；在与制品相关的广告/价格表或交易文件中记载上述说明并进行展示或发布；或者利用电磁方法(互联网等)提供以这些作为内容的信息。

将本发明的实施方式的乳酸菌的活菌数的减少抑制剂包装而成的制品例如为饮料添加剂的情况下，该饮料添加剂上优选附上例如“完全不含或实质上不含乳成分的含乳酸菌的饮料中的乳酸菌的活菌数的减少抑制”/“完全不含或实质上不含乳成分的含乳酸菌的饮料中的乳酸菌的活菌数的减少速度的缓和”等的标示。

需要说明的是，为了进行以上那样的标示而使用的语句不限定于上述的例子，还可以是与那样的意思为同义的语句。作为这样的语句，例如，对需求者可以容许如下各种语句：“抑制完全不含或实质上不含乳成分的含乳酸菌的饮料中乳酸菌的活菌数减少”、“使完全不含或实质上不含乳成分的含乳酸菌的饮料中乳酸菌的活菌数减少的速度缓和”、“有助于抑制完全不含或实质上不含乳成分的含乳酸菌的饮料中乳酸菌的活菌数减少”或“有助于使完全不含或实质上不含乳成分的含乳酸菌的饮料中乳酸菌的活菌数减少的速度缓和”等。

-不含乳成分的酸性饮料-

另外，本发明的另一实施方式的不含乳成分的酸性饮料含有乳酸菌的活菌、乳酸及其盐中的至少一者以及水。以下对这些成分和组成进行详细说明。

(1)成分

(1-1)乳酸菌的活菌

乳酸菌的活菌是活的乳酸菌。在本发明的实施方式中，该乳酸菌没有特别限定，可以是任意的乳酸菌。作为乳酸菌的一个例子，可列举出乳杆菌属(Lactobacillus)的乳酸菌、肉杆菌属(Carnobacterium)的乳酸菌、链球菌属(Streptococcus)的乳酸菌、乳球菌属(Lactococcus)的乳酸菌、肠球菌属(Enterococcus)的乳酸菌、片球菌属(Pediococcus)的乳酸菌、四联球菌(Tetragenococcus)的乳酸菌、明串珠菌属(Leuconostoc)的乳酸菌、双歧杆菌属(Bifidobacterium)的乳酸菌等乳酸菌。

作为乳杆菌属的乳酸菌，例如可列举出德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillusdelbrueckii subsp.bulgaricus)、加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)等。作为链球菌属的乳酸菌，例如可列举出嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)等。作为乳球菌属的乳酸菌，可列举出乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)等。

(1-2)乳酸及其盐

不含乳成分的酸性饮料中可以仅添加乳酸，可以仅添加乳酸菌的盐，或者还可以添加乳酸及其盐这两者。此处，作为乳酸的盐，例如可列举出钠盐。

(1-3)水

水为饮料用中可以使用的通常的水。

(1-4)其它成分

本发明的另一实施方式的不含乳成分的酸性饮料中在不损害本发明的主旨的范围内还可以包含除上述成分以外的成分。作为除上述成分以外的成分，例如可列举出脂质、维生素类、矿物类、有机碱、果汁、调味品(flavour)、功能性成分、食品添加物等在通常的饮料中包含的成分。作为脂质，例如可列举出猪油、鱼油等、它们的分提油、氢化油、酯交换油等动物性油脂；棕榈油、红花油、玉米油、菜籽油、椰子油、它们的分提油、氢化油、酯交换油等植物性油脂等。作为维生素类，例如可列举出维生素A、胡萝卜素类、维生素B族、维生素C、维生素D族、维生素E、维生素K族、维生素P、维生素Q、维生素B3、烟酸、泛酸、生物素、肌醇、胆碱、叶酸等，作为矿物类，例如可列举出钙、钾、镁、钠、铜、铁、锰、锌、硒等。作为功能性成分，例如可列举出低聚糖、葡糖胺、胶原、神经酰胺、蜂王浆(royal jelly)、多元酚等。作为食品添加物，例如可列举出乳化剂、稳定剂、增稠剂、甜味剂、防腐剂、抗氧化剂、着色剂、香料等。需要说明的是，这些成分可以组合2种以上来使用。另外，上述成分可以是天然物、天然物加工品、合成品中的任意者。

(2)组成

只要不丧失作为饮料的功能，则优选大量地添加健康效果高的乳酸菌，但在与乳酸及其盐中的至少一者的添加量的关系中，优选以不使不含乳成分的酸性饮料的酸味变得过强的程度添加健康效果高的乳酸菌。

乳酸及其盐中的至少一者的添加量优选以不使不含乳成分的酸性饮料的酸味变得过强的程度、即以不含乳成分的酸性饮料的pH为3.0～6.0的程度添加。另外，该添加量优选以乳酸及其盐的总计计为0.05wt％以上且1.0wt％以下的范围程度。乳酸的添加量优选为0.10wt％以上且0.40wt％以下的范围程度。乳酸的盐的添加量优选为0.01wt％以上且0.30wt％以下的范围程度。

含乳酸但不含乳成分的酸性饮料中的乳酸菌的活菌数在开始保存后经过6天时优选为含柠檬酸但不含乳成分的酸性饮料中的乳酸菌的活菌数的2倍以上，更优选为4倍以上，进一步优选为7倍以上。另外，含乳酸但不含乳成分的酸性饮料中的乳酸菌的活菌数在开始保存后经过5天时优选为含柠檬酸但不含乳成分的酸性饮料中的乳酸菌的活菌数的1.1倍以上，更优选为1.4倍以上，进一步优选为2倍以上，进一步优选为4倍以上，进一步优选为20倍以上，特别优选为30倍以上。

含乳酸但不含乳成分的酸性饮料中的乳酸菌的生存率在开始保存后经过6天时优选为5％以上，更优选为10％以上，进一步优选为30％以上。另外，含乳酸但不含乳成分的酸性饮料中的乳酸菌的生存率在开始保存后经过5天时优选为10％以上，更优选为20％以上。

实施例

以下示出实施例和比较例来对本发明进行进一步详细地说明，但本发明不限定于以下的实施例。

(实施例1)

制备具有以下的表1所示的实施例1的组成的清凉饮料。此外，将该清凉饮料在110℃下进行1分钟高压釜灭菌后，将该清凉饮料冷却至10℃以下。接着，在该已冷却的清凉饮料中以0.36wt％的比率添加加氏乳杆菌OLL2959的浓缩菌液(2.5×10¹¹cfu/mL)。需要说明的是，添加加氏乳杆菌OLL2959后的清凉饮料的pH为3.5。

需要说明的是，此处，加氏乳杆菌OLL2959于2006年3月31日(国内保藏日)保藏于国家技术评估学会，专利微生物保藏中心(NPMD)(日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8122号室)、并以保藏编号：NITE BP-224进行了基于布达佩斯条约的国际保藏(2007年11月21日由国内保藏移管至基于布达佩斯条约的保藏)。

此外，将含有上述的加氏乳杆菌OLL2959的清凉饮料填充至聚酯瓶中，利用常规方法测定在4℃下保存6天和9天时的加氏乳杆菌OLL2959的活菌数时，结果如表2的实施例1行所述。

(比较例1)

制备具有以下的表1所示的比较例1的组成的清凉饮料。此外，将该清凉饮料在110℃下进行1分钟高压釜灭菌后，将该清凉饮料冷却至10℃以下。接着，在该已冷却的清凉饮料中以0.36wt％的比率添加加氏乳杆菌OLL2959的浓缩菌液(2.5×10¹¹cfu/mL)。需要说明的是，添加加氏乳杆菌OLL2959后的清凉饮料的pH为3.5。

此外，将含有上述的加氏乳杆菌OLL2959的清凉饮料填充至聚酯瓶中，利用常规方法测定在4℃下保存6天和9天时的加氏乳杆菌OLL2959的活菌数时，结果如表2的比较例1行所述。

[表1]

	实施例1	比较例1
			柠檬酸(wt％)	0	0.22
柠檬酸钠(wt％)	0	0.08
			乳酸(wt％)	0.22	0
乳酸钠(wt％)	0.10	0
			赤藻糖醇(wt％)	2.38	2.38
高灵敏度甜味剂(wt％)	0.0155	0.0155
			稳定剂(wt％)	0.15	0.15
葡萄柚浓缩果汁(wt％)	0.20	0.20
			香料(wt％)	0.15	0.15
水(wt％)	96.78	96.81

[表2]

(实施例2·比较例2)

1.乳酸菌的培养

在37℃的温度环境下、用MRS培养基分别将德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1255活化培养3次。

需要说明的是，此处，德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1255于2005年2月10日(国内保藏日)保藏于国家技术评估学会，专利微生物保藏中心(NPMD)(日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室)、并以保藏编号：NITE BP-76进行了基于布达佩斯条约的国际保藏(2009年4月1日由国内保藏移管至基于布达佩斯条约的保藏)。

2.酸液的制备

制备0.5wt％的柠檬酸水溶液和0.5wt％的乳酸水溶液后，用氢氧化钠水溶液将各酸水溶液的pH调节为3.5。此外，用0.22μm过滤器对该得到的经pH调节后的酸水溶液进行过滤灭菌。

3.保存试验

将上述1.中得到的活化培养液离心分离而去除培养液，用与去除的培养液等量的生理盐水将残留的乳酸菌悬浮后，将该乳酸菌悬浮液0.5mL接种于上述的各酸水溶液5mL中。此外，利用常规方法测定刚进行该接种后的乳酸菌的活菌数、及将该乳酸菌接种酸水溶液在5℃下保存5天后的活菌数时，结果如表3的实施例2(乳酸水溶液)和比较例2(柠檬酸水溶液)行所述。

(实施例3·比较例3)

1.乳酸菌的培养

将德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1255替换为德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1171，除此以外与实施例2同样地对乳酸菌进行活化培养。

需要说明的是，此处，德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1171于2013年3月13日(原保藏日)在国家技术评估学会，专利微生物保藏中心(NPMD)(日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室)以保藏编号：NITE BP-01569进行了基于布达佩斯条约的国际保藏。

2.酸液的制备

利用与实施例2所示的方法相同的方法，制备pH3.5的柠檬酸水溶液和乳酸水溶液。

3.保存试验

利用与实施例2所示的方法相同的方法制备乳酸菌悬浮液后，将该乳酸菌悬浮液0.5mL接种于上述的各酸水溶液5mL中。此外，利用常规方法测定刚进行该接种后的乳酸菌的活菌数、及将该乳酸菌接种酸水溶液在5℃下保存5天后的活菌数时，结果如表3的实施例3(乳酸水溶液)和比较例3(柠檬酸水溶液)行所述。

(实施例4·比较例4)

1.乳酸菌的制备

将德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1255替换为植物乳杆菌OLL2712，除此以外与实施例2同样地对乳酸菌进行活化培养。

需要说明的是，此处，植物乳杆菌OLL2712于2010年7月2日在国家高级工业科学技术学院，国际专利生物保藏中心(IPOD，NITE)(日本国茨城县筑波市东1丁目1番1中央第6)(之后统一为国家技术评估学会，专利微生物保藏中心(NPMD)(日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室))以保藏编号：FERM BP-11262进行了基于布达佩斯条约的国际保藏。

2.酸液的制备

利用与实施例2所示的方法相同的方法，制备pH3.5的柠檬酸水溶液和乳酸水溶液。

3.保存试验

利用与实施例2所示的方法相同的方法制备乳酸菌悬浮液后，将该乳酸菌悬浮液0.5mL接种于上述的各酸水溶液5mL中。此外，利用常规方法测定刚进行该接种后的乳酸菌的活菌数、及将该乳酸菌接种酸水溶液在5℃下保存5天后的活菌数时，结果如表3的实施例4(乳酸水溶液)和比较例4(柠檬酸水溶液)行所述。

(实施例5·比较例5)

1.乳酸菌的制备

将德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1255替换为植物乳杆菌OLL203071，除此以外与实施例2同样地对乳酸菌进行活化培养。

需要说明的是，此处，植物乳杆菌OLL203071以保藏编号：NCIMB11974T保藏于NCIMB，可以从此获得。

2.酸液的制备

利用与实施例2所示的方法相同的方法，制备pH3.5的柠檬酸水溶液和乳酸水溶液。

3.保存试验

利用与实施例2所示的方法相同的方法制备乳酸菌悬浮液后，将该乳酸菌悬浮液0.5mL接种于上述的各酸水溶液5mL中。此外，利用常规方法测定刚进行该接种后的乳酸菌的活菌数、及将该乳酸菌接种酸水溶液在5℃下保存5天后的活菌数时，结果如表3的实施例5(乳酸水溶液)和比较例5(柠檬酸水溶液)行所述。

(实施例6·比较例6)

1.乳酸菌的制备

将嗜热链球菌OLS3289在37℃的温度环境下、用添加了葡萄糖2wt％的M-17培养基进行3次活化培养。

需要说明的是，此处，嗜热链球菌OLS3289(保藏编号：ATCC19258)可以由美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection；ATCC)在ATCC(R)目录编号19258下获得。

2.酸液的制备

制备0.5wt％的柠檬酸水溶液和0.5wt％的乳酸水溶液后，用氢氧化钠水溶液将各酸水溶液的pH调节为4.5。此外，用0.22μm过滤器对该得到的经pH调节后的酸水溶液进行过滤灭菌。

3.保存试验

利用与实施例2所示的方法相同的方法制备乳酸菌悬浮液后，将该乳酸菌悬浮液0.5mL接种于上述的各酸水溶液5mL中。此外，利用常规方法测定刚进行该接种后的乳酸菌的活菌数、及将该乳酸菌接种酸水溶液在5℃下保存5天后的活菌数时，结果如表3的实施例6(乳酸水溶液)和比较例6(柠檬酸水溶液)行所述。

(实施例7·比较例7)

1.乳酸菌的制备

将嗜热链球菌OLS3289替换为乳酸乳球菌OLS3310，同时将培养温度由37℃替换为30℃，除此以外与实施例6同样地对乳酸菌进行活化培养。

需要说明的是，此处，乳酸乳球菌OLS3310(保藏编号：JCM 5805T)由理化学研究所生物资源中心、美国典型培养物保藏中心(美国)、财团法人发酵研究所(日本国大阪府大阪市淀川区十三本町2丁目17番85号)、东京农业大学·菌株保存室(日本国东京都世田谷区樱丘1丁目1番1号)等获得。

2.酸液的制备

利用与实施例6所示的方法相同的方法，制备pH4.5的柠檬酸水溶液和乳酸水溶液。

3.保存试验

利用与实施例2所示的方法相同的方法制备乳酸菌悬浮液后，将该乳酸菌悬浮液0.5mL接种于上述的各酸水溶液5mL中。此外，利用常规方法测定刚进行该接种后的乳酸菌的活菌数、及将该乳酸菌接种酸水溶液在5℃下保存5天后的活菌数时，结果如表3的实施例7(乳酸水溶液)和比较例7(柠檬酸水溶液)行所述。

(实施例8·比较例8)

1.乳酸菌的制备

将加氏乳杆菌OLL2959在35℃的温度环境下、用乳清分解培养基培养。

需要说明的是，此处，加氏乳杆菌OLL2959于2006年3月31日(国内保藏日)保藏于国家技术评估学会，专利微生物保藏中心(NPMD)(日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8122号室)、并以保藏编号：NITE BP-224进行了基于布达佩斯条约的国际保藏(2007年11月21日由国内保藏移管至基于布达佩斯条约的保藏)。

2.酸液的制备

利用与实施例2所示的方法相同的方法，制备pH3.5的柠檬酸水溶液和乳酸水溶液。

3.保存试验

将上述1.中得到的培养液离心分离而去除培养液，以该沉淀物(浓缩乳酸菌)达到0.05wt％的浓度的方式将该沉淀物接种于上述的各酸水溶液5mL中。此外，利用常规方法测定刚进行该接种后的乳酸菌的活菌数、及将该乳酸菌接种酸水溶液在5℃下保存5天后的活菌数时，结果如表3的实施例8(乳酸水溶液)和比较例8(柠檬酸水溶液)行所述。

(实施例9)

1.乳酸菌的制备

将加氏乳杆菌OLL2959替换为加氏乳杆菌OLL2716，除此以外与实施例8同样地培养乳酸菌。

需要说明的是，此处，加氏乳杆菌OLL2716于1999年5月24日(国内保藏日)保藏于国家高级工业科学技术学院，国际专利生物保藏中心(IPOD，NITE)(日本茨城县筑波市东1丁目1番3号)(之后统一为国家技术评估学会，专利微生物保藏中心(NPMD)(日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室))、并以保藏编号：FERM BP-6999进行了基于布达佩斯条约的国际保藏(2000年1月14日由国内保藏移管至基于布达佩斯条约的保藏)。

2.酸液的制备

利用与实施例2所示的方法相同的方法，制备pH3.5的柠檬酸水溶液和乳酸水溶液。

3.保存试验

利用与实施例8所示的方法相同的方法得到沉淀物(浓缩乳酸菌)后，以该沉淀物(浓缩乳酸菌)达到0.05wt％的浓度的方式将该沉淀物接种于上述的各酸水溶液5mL中。此外，利用常规方法测定刚进行该接种后的乳酸菌的活菌数、及将该乳酸菌接种酸水溶液在5℃下保存5天后的活菌数时，结果如表3的实施例9(乳酸水溶液)和比较例9(柠檬酸水溶液)行所述。

[表3]

(考察)

实施例1的含加氏乳杆菌OLL2959的清凉饮料的保存6天后的活菌数约为比较例1的含加氏乳杆菌OLL2959的清凉饮料的保存6天后的活菌数的7倍。另外，比较例1的含加氏乳杆菌OLL2959的清凉饮料的保存9天后的活菌数低于作为检测界限的0.1×10⁸cfu/mL，但实施例1的含加氏乳杆菌OLL2959的清凉饮料的保存9天后的活菌数为0.9×10⁸cfu/mL。

实施例2的含德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1255的乳酸水溶液的保存5天后的活菌数约为比较例2的含德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1255的柠檬酸水溶液的保存5天后的活菌数的2倍。

实施例3的含德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1171的乳酸水溶液的保存5天后的活菌数约为比较例3的含德氏乳杆菌保加利亚亚种OLL1171的柠檬酸水溶液的保存5天后的活菌数的4倍。

实施例4的含植物乳杆菌OLL2712的乳酸水溶液的保存5天后的活菌数约为比较例4的含植物乳杆菌OLL2712的柠檬酸水溶液的保存5天后的活菌数的2倍。

实施例5的含植物乳杆菌OLL203071的乳酸水溶液的保存5天后的活菌数约为比较例5的含植物乳杆菌OLL203071的柠檬酸水溶液的保存5天后的活菌数的31倍。

实施例6的含嗜热链球菌OLS3289的乳酸水溶液的保存5天后的活菌数约为比较例6的含嗜热链球菌OLS3289的柠檬酸水溶液的保存5天后的活菌数的1.1倍。

实施例7的含乳酸乳球菌OLS3310的乳酸水溶液的保存5天后的活菌数约为比较例7的含乳酸乳球菌OLS3310的柠檬酸水溶液的保存5天后的活菌数的1.4倍。

实施例8的含加氏乳杆菌OLL2959的乳酸水溶液的保存5天后的活菌数约为比较例6的含加氏乳杆菌OLL2959的柠檬酸水溶液的保存5天后的活菌数的23倍。

实施例9的含加氏乳杆菌OLL2716的乳酸水溶液的保存5天后的活菌数约为比较例9的含加氏乳杆菌OLL2716的柠檬酸水溶液的保存5天后的活菌数的1.1倍。

由上述的结果，明确了乳酸具有使乳酸菌的活菌数的减少速度缓和的功能。

产业上的可利用性

本发明的乳酸菌的活菌数的减少抑制剂可以用于完全不含或实质上不含乳成分的含乳酸菌的饮料(例如，低卡路里的含乳酸菌的饮料、零卡路里的含乳酸菌的饮料)。

保藏编号

NITE BP-224

NITE BP-76

NITE BP-01569

FERM BP-6999

FERM BP-11262