一种博落回生物碱的提取和纯化工艺
阅读说明：本技术 一种博落回生物碱的提取和纯化工艺 (Extraction and purification process of macleaya cordata alkaloid ) 是由 谈满良 罗炼辉 李小冬 赵会平 于 2020-06-02 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种博落回生物碱的提取和纯化工艺,包括以下步骤：取博落回粉末,加入石油醚,水浴回流；取药渣,加入酸乙醇,静置,超声提取,抽滤,滤液浓缩；干燥成粗博落回生物碱粉末；用蒸馏水分别配制聚乙二醇溶液和硫酸铵溶液；将聚乙二醇溶液、硫酸铵溶液、蒸馏水、粗博落回生物碱粉末混合；置于摇床中振摇,充分混合均匀,离心；用胶头滴管吸取上下相溶液,测量紫外吸光度,并以血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的标准溶液作参比；分别测定上、下相溶液中各生物碱的含量,计算萃取率。本发明方法简单,萃取率高,血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的萃取率最高分别为99.74%、99.44%、99.65%、99.49%。(The invention provides a macleaya cordata alkaloid extraction and purification process, which comprises the following steps: adding petroleum ether into herba Macleayae Cordatae powder, and refluxing in water bath; collecting residue, adding acid ethanol, standing, ultrasonic extracting, vacuum filtering, and concentrating the filtrate; drying to obtain crude macleaya cordata alkaloid powder; preparing a polyethylene glycol solution and an ammonium sulfate solution by using distilled water respectively; mixing polyethylene glycol solution, ammonium sulfate solution, distilled water, and coarse Macleaya cordata alkaloid powder; shaking in shaking table, mixing, and centrifuging; sucking the upper and lower phase solutions with rubber dropper, measuring ultraviolet absorbance, and using standard solution of sanguinarine, chelerythrine, macleaya cordata alkali, and berberine as reference; and respectively measuring the content of each alkaloid in the upper phase solution and the lower phase solution, and calculating the extraction rate. The method is simple, the extraction rate is high, and the extraction rates of sanguinarine, chelerythrine, macleaya cordata alkali and berberine are respectively 99.74%, 99.44%, 99.65% and 99.49%.)
技术领域
本发明涉医药化学领域，具体涉及一种博落回生物碱的提取和纯化工艺。
背景技术
博落回又名号筒杆，三钱三，勃勒回，山梧桐等，系罂粟科植物博落回的带根全草入药，广泛分布于长江流域以南各省，特别是云、贵、川较为多见，遍生于荒山野坡，随处可见，并可人工种植。博落回辛、苦、温、有大毒，有驱风解毒，散瘀肿及杀虫驱虫之功用。民间用其治疗痈肿疔毒，恶疮溃疡，烫伤顽癣、风湿痹症、跌打损伤、疥疮等体表疾患，因其大毒，不作内用。现代医学研究表明，博落回的有效药用成分为生物碱，同时也提取分离出血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、原阿片碱、小檗碱等多种，合称总生物碱。博落回总生物碱具有抗菌消炎、抑制多种病原菌、抗病毒、清热解毒、增强免疫功能、抗多种肿瘤的作用，广泛用于人、畜多种感染性疾病治疗；并可杀虫、杀菌，多用于蔬菜、水果、棉花、粮食作物的病虫害防治等多种生物活性的医药、兽药、生物农药原料，是一种纯天然绿色生物“三药 ”产品。
为了更好的利用博落回生物碱，使其应用最大化，效果最大化，则必须对其进行纯化，从而为生产中最有效的开发利用博落回总生物碱、发挥博落回的最大经济效益提供科学依据。
发明内容
要解决的技术问题：本发明的目的是提供一种博落回生物碱的提取和纯化工艺，方法简单，萃取率高，血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的萃取率最高分别为99.74%、99.44%、99.65%、99.49%。
技术方案：一种博落回生物碱的提取和纯化工艺，包括以下步骤：
步骤1：取博落回粉末，按质量比1:10-15的比例加入石油醚，60℃下水浴回流2-3h；
步骤2：取药渣，加入1%酸乙醇，静置30 min，超声提取30-50min，抽滤，滤液浓缩至25mL，其中，药渣和1%酸乙醇的料液比为1:25-35；
步骤3：干燥成粗博落回生物碱粉末；
步骤4：用蒸馏水分别配制质量分数为40%的聚乙二醇溶液和质量分数30%的硫酸铵溶液；
步骤5：将聚乙二醇溶液、硫酸铵溶液、蒸馏水、粗博落回生物碱粉末混合；
步骤6：置于摇床中，200-250r/min下振摇2-3h，充分混合均匀，在5000r/min的转速下离心5min；
步骤7：用胶头滴管吸取上下相溶液，测量紫外吸光度，并以血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的标准溶液作参比；
步骤8：分别测定上、下相溶液中血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的含量，计算萃取率。
进一步优选的，所述步骤2中提取温度为40-60℃、超声功率为120-160W。
进一步优选的，所述步骤4中聚乙二醇PEG为PEG1000、PEG2000、PEG6000。
进一步优选的，所述步骤5中聚乙二醇溶液、硫酸铵溶液、蒸馏水、粗博落回生物碱粉末的液固比为4:3:7:1。
进一步优选的，所述步骤8中测定含量的计算式为：R = Vt/Vb，式中：R为相比，Vt、Vb分别是上、下相体积，mL；K = Ct/Cb，式中：K为分配系数；Ct，Cb分别是上、下相生物碱的质量浓度，mg/L；萃取率（Y）/% =1/[1+1/(RK)]。
有益效果：
1. 本发明采用的提取纯化方法为液-液萃取法，具有活性成分损失小、分离步骤少、操作条件温和、易于放大，且不存在有机溶剂残留的优。
2. 本发明方法取得了最佳分离提纯工艺，萃取率高，血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的萃取率最高分别为99.74%、99.44%、99.65%、99.49%。
具体实施方式
实施例1
一种博落回生物碱的提取和纯化工艺，包括以下步骤：
步骤1：取博落回粉末，按质量比1:10的比例加入石油醚，60℃下水浴回流2h；
步骤2：取药渣，加入1%酸乙醇，静置30 min，在提取温度为40℃、超声功率为120W下超声提取30min，抽滤，滤液浓缩至25 mL，其中，药渣和1%酸乙醇的料液比为1:25；
步骤3：干燥成粗博落回生物碱粉末；
步骤4：用蒸馏水分别配制质量分数为40%的PEG1000溶液和质量分数30%的硫酸铵溶液；
步骤5：将液固比为4:3:7:1的聚乙二醇溶液、硫酸铵溶液、蒸馏水、粗博落回生物碱粉末混合；
步骤6：置于摇床中，200r/min下振摇2h，充分混合均匀，在5000r/min的转速下离心5min；
步骤7：用胶头滴管吸取上下相溶液，测量紫外吸光度，并以血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的标准溶液作参比；
步骤8：分别测定上、下相溶液中血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的含量，计算萃取率，计算式为：R = Vt/Vb，式中：R为相比，Vt、Vb分别是上、下相体积，mL；K = Ct/Cb，式中：K为分配系数；Ct，Cb分别是上、下相生物碱的质量浓度，mg/L；萃取率（Y）/% =1/[1+1/(RK)]。
血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的萃取率分别为99.65%、99.04%、99.69%、99.54%。
实施例2
一种博落回生物碱的提取和纯化工艺，包括以下步骤：
步骤1：取博落回粉末，按质量比1:10的比例加入石油醚，60℃下水浴回流2.5h；
步骤2：取药渣，加入1%酸乙醇，静置30 min，在提取温度为45℃、超声功率为130W下超声提取35min，抽滤，滤液浓缩至25 mL，其中，药渣和1%酸乙醇的料液比为1:30；
步骤3：干燥成粗博落回生物碱粉末；
步骤4：用蒸馏水分别配制质量分数为40%的PEG2000溶液和质量分数30%的硫酸铵溶液；
步骤5：将液固比为4:3:7:1的聚乙二醇溶液、硫酸铵溶液、蒸馏水、粗博落回生物碱粉末混合；
步骤6：置于摇床中，200r/min下振摇2h，充分混合均匀，在5000r/min的转速下离心5min；
步骤7：用胶头滴管吸取上下相溶液，测量紫外吸光度，并以血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的标准溶液作参比；
步骤8：分别测定上、下相溶液中血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的含量，计算萃取率，计算式为：R = Vt/Vb，式中：R为相比，Vt、Vb分别是上、下相体积，mL；K = Ct/Cb，式中：K为分配系数；Ct，Cb分别是上、下相生物碱的质量浓度，mg/L；萃取率（Y）/% =1/[1+1/(RK)]。
血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的萃取率分别为99.69%、99.23%、99.51%、99.37%。
实施例3
一种博落回生物碱的提取和纯化工艺，包括以下步骤：
步骤1：取博落回粉末，按质量比1:15的比例加入石油醚，60℃下水浴回流2.5h；
步骤2：取药渣，加入1%酸乙醇，静置30 min，在提取温度为50℃、超声功率为140W下超声提取40min，抽滤，滤液浓缩至25 mL，其中，药渣和1%酸乙醇的料液比为1:30；
步骤3：干燥成粗博落回生物碱粉末；
步骤4：用蒸馏水分别配制质量分数为40%的PEG2000溶液和质量分数30%的硫酸铵溶液；
步骤5：将液固比为4:3:7:1的聚乙二醇溶液、硫酸铵溶液、蒸馏水、粗博落回生物碱粉末混合；
步骤6：置于摇床中，250r/min下振摇2.5h，充分混合均匀，在5000r/min的转速下离心5min；
步骤7：用胶头滴管吸取上下相溶液，测量紫外吸光度，并以血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的标准溶液作参比；
步骤8：分别测定上、下相溶液中血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的含量，计算萃取率，计算式为：R = Vt/Vb，式中：R为相比，Vt、Vb分别是上、下相体积，mL；K = Ct/Cb，式中：K为分配系数；Ct，Cb分别是上、下相生物碱的质量浓度，mg/L；萃取率（Y）/% =1/[1+1/(RK)]。
血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的萃取率分别为99.71%、99.34%、99.62%、99.45%。
实施例4
一种博落回生物碱的提取和纯化工艺，包括以下步骤：
步骤1：取博落回粉末，按质量比1:13的比例加入石油醚，60℃下水浴回流2.5h；
步骤2：取药渣，加入1%酸乙醇，静置30 min，在提取温度为55℃、超声功率为150W下超声提取45min，抽滤，滤液浓缩至25 mL，其中，药渣和1%酸乙醇的料液比为1:35；
步骤3：干燥成粗博落回生物碱粉末；
步骤4：用蒸馏水分别配制质量分数为40%的PEG1000、PEG2000、PEG6000溶液和质量分数30%的硫酸铵溶液；
步骤5：将液固比为4:3:7:1的聚乙二醇溶液、硫酸铵溶液、蒸馏水、粗博落回生物碱粉末混合；
步骤6：置于摇床中，250r/min下振摇3h，充分混合均匀，在5000r/min的转速下离心5min；
步骤7：用胶头滴管吸取上下相溶液，测量紫外吸光度，并以血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的标准溶液作参比；
步骤8：分别测定上、下相溶液中血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的含量，计算萃取率，计算式为：R = Vt/Vb，式中：R为相比，Vt、Vb分别是上、下相体积，mL；K = Ct/Cb，式中：K为分配系数；Ct，Cb分别是上、下相生物碱的质量浓度，mg/L；萃取率（Y）/% =1/[1+1/(RK)]。
血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的萃取率分别为99.73%、99.42%、99.60%、99.34%。
实施例5
一种博落回生物碱的提取和纯化工艺，包括以下步骤：
步骤1：取博落回粉末，按质量比1:15的比例加入石油醚，60℃下水浴回流3h；
步骤2：取药渣，加入1%酸乙醇，静置30 min，在提取温度为60℃、超声功率为160W下超声提取50min，抽滤，滤液浓缩至25 mL，其中，药渣和1%酸乙醇的料液比为1:35；
步骤3：干燥成粗博落回生物碱粉末；
步骤4：用蒸馏水分别配制质量分数为40%的PEG6000溶液和质量分数30%的硫酸铵溶液；
步骤5：将液固比为4:3:7:1的聚乙二醇溶液、硫酸铵溶液、蒸馏水、粗博落回生物碱粉末混合；
步骤6：置于摇床中，250r/min下振摇3h，充分混合均匀，在5000r/min的转速下离心5min；
步骤7：用胶头滴管吸取上下相溶液，测量紫外吸光度，并以血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的标准溶液作参比；
步骤8：分别测定上、下相溶液中血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的含量，计算萃取率，计算式为：R = Vt/Vb，式中：R为相比，Vt、Vb分别是上、下相体积，mL；K = Ct/Cb，式中：K为分配系数；Ct，Cb分别是上、下相生物碱的质量浓度，mg/L；萃取率（Y）/% =1/[1+1/(RK)]。
血根碱、白屈菜红碱、博落回碱、小檗碱的萃取率分别为99.74%、99.44%、99.65%、99.49%。