阅读说明：本技术 一种灵芝菌丝体多糖的制备方法及其应用 (Preparation method and application of ganoderma lucidum mycelium polysaccharide ) 是由 王中振 谢涛 于 2020-06-08 设计创作，主要内容包括：本发明属于植物提取技术领域,具体涉及一种灵芝菌丝体多糖及其制备方法和应用。本发明采用含有丰富的灵芝多糖的灵芝菌丝体为提取原料,通过原料预处理、脱脂处理、超临界CO<Sub>2</Sub>提取、酶解、醇沉淀等工艺步骤制得灵芝菌丝体多糖。本发明提供的灵芝菌丝体多糖的制备方法制得的灵芝菌丝体多糖的提取率达到15.4％以上,纯度达到76.1％以上。本发明采用超临界CO<Sub>2</Sub>提取技术和酶解技术对灵芝菌丝体进行多糖提取,提高了多糖的提取率,避免了原材料的浪费,节约生产成本,制得的灵芝菌丝体多糖应用于保健品和药物的制备,具有良好的功效,经济效益和的和会效益显著。(The invention belongs to plant extractionThe technical field, in particular to a ganoderma lucidum mycelium polysaccharide and a preparation method and application thereof. The invention adopts ganoderma lucidum mycelium containing rich ganoderma lucidum polysaccharide as extraction raw material, and the ganoderma lucidum mycelium is subjected to pretreatment, degreasing treatment and supercritical CO 2 Extracting, performing enzymolysis, precipitating with ethanol, etc. to obtain Ganoderma mycelia polysaccharide. The extraction rate of the ganoderma lucidum mycelium polysaccharide prepared by the preparation method of the ganoderma lucidum mycelium polysaccharide provided by the invention reaches more than 15.4%, and the purity of the ganoderma lucidum mycelium polysaccharide reaches more than 76.1%. The invention adopts supercritical CO 2 The extraction technology and the enzymolysis technology carry out polysaccharide extraction on the ganoderma lucidum mycelia, the extraction rate of the polysaccharide is improved, the waste of raw materials is avoided, the production cost is saved, the prepared ganoderma lucidum mycelia polysaccharide is applied to the preparation of health-care products and medicines, the effect is good, and the economic benefit and the concordant benefit are obvious.)

一种灵芝菌丝体多糖的制备方法及其应用

技术领域

本发明属于植物提取技术领域，具体涉及一种灵芝菌丝体多糖及其制备方法和应用。

背景技术

灵芝菌丝体是灵芝孢子萌发形成的菌丝，灵芝子实体所需要的构成物质，有一半以上的营养物质源于菌丝体重贮存的养分，所以菌丝体的营养含量和灵芝菌丝体多糖的含量一般比灵芝子实体和灵芝孢子粉高出许多倍。

灵芝菌丝体多糖由三股单糖链构成，其构型与DNA、RNA相似，是一种螺旋状立体构型物，螺旋层之间主要以氢键固定。灵芝菌丝体多糖在单糖组成、糖苷键构型、分子量、旋光度、溶解度等某些理化性质方面存在显著差异。在已提取到的有200多种灵芝菌丝体多糖中，大多数是异多糖，即除含有葡萄糖外，还含有半乳糖、甘露糖、***糖、木糖、岩藻糖、鼠李糖等其它单糖；由于来源不同，分子量可从数万到数十万不等，多数伴有分支，部分多糖还含有肽链。

灵芝多糖是灵芝中最有效的成分之一，灵芝多糖具有刺激宿主非特异性抗性、免疫特异反应以及抑制肿瘤生理活性的特性。此外，灵芝多糖在免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、保护心脑血管、保肝解毒、降血压、减轻过敏反应等诸多方面也具有良好的功效。灵芝多糖是灵芝功能的灵魂，灵芝多糖含量的多少决定产品的功效，是灵芝治疗各种疾病的主要成分。

申请号为ZL201910800585.8的专利文本公开了一种灵芝多糖提取技术，其提取工艺包括原料预处理、灵芝粗多糖提取、灵芝多糖脱蛋白、灵芝提取液提纯、醇沉提取液等步骤，其中灵芝粗多糖提取采用热水浸提，并以超声提取辅助，通过酶解蛋白和醇沉步骤进一步纯化，最终得到灵芝多糖。虽然此提取方法确实可以得到一定的灵芝多糖，但是其灵芝多糖的纯度不高，且其采用灵芝为提取原料，在提取过程中造成了大量的原料浪费，提取成本较高，不适于工业化生产。

综上所述，现有技术中普遍存在灵芝多糖纯度低、原材料浪费严重、不适于工业化生产等技术问题。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种灵芝菌丝体多糖的制备方法及其应用。本发明提供的灵芝菌丝体多糖的纯度高、作用效果好，直接采用多糖含量丰富的灵芝菌丝体为提取原料，避免了原料的浪费，节约成本，有利于实现工业化生产。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种灵芝菌丝体多糖的制备方法，具体包括如下步骤：

S1、取干燥的灵芝菌丝体放入粉碎机中粉碎至8～10μm，然后加入有机溶剂进行脱脂处理，离心分离，取下层沉淀于50～70℃下烘干，制得灵芝菌丝体粗粉；

S2、取步骤S1制得的灵芝菌丝体粗粉，加入10～20倍量的去离子水，然后进行超临界CO₂提取，过滤，制得水提液；

S3、取步骤S2制得的水提液，加入复合酶，在400～500转/分的搅拌状态下进行保温酶解，酶解时间为3～5h，制得酶解液；

S4、将步骤S3制得的酶解液加热至100～120℃，保温1h后自然冷却至20℃，然后进行喷雾干燥，制得多糖粗粉；

S5、取步骤S4制得的多糖粗粉，加入8～10倍量无水乙醇，在600～800转/分的条件下搅拌1～1.5h，离心分离，去上层清液进行喷雾干燥，即得。

进一步的，所述步骤S1中的有机溶剂加入量为灵芝菌丝体质量的8～10倍；有机溶剂为丙二醇甲醚、丙酮和二甲基亚砜的混合物；脱脂处理时间为1～3h。

更进一步的，所述丙二醇甲醚、丙酮和二甲基亚砜的混合质量比为2～3:4～7:1～2。

进一步的，所述步骤S2中超临界CO₂提取的条件为：压力30～35Mpa，提取温度为50～60℃，提取时间为4～5h。

进一步的，所述步骤S3中的复合酶由纤维素酶、角蛋白酶和半纤维素酶按质量比为5～7:1～3:3～5组成。

进一步的，所述步骤S5中的无水乙醇的体积分数为95％。

本发明还提供了一种利用所述灵芝菌丝体多糖的制备方法制得的灵芝菌丝体多糖在保健品和药物中的用途。

进一步的，所述药物包括治疗免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、治疗心脑血管疾病、降血压、止咳、抗过敏的片剂及口服液。

本发明采用灵芝菌丝体为灵芝菌丝体多糖的提取原料，有效解决了子实体多糖的苦涩口感，制得的灵芝菌丝体多糖应用于口服液中口感更佳。另外灵芝菌丝体的纤维含量低，椴木赤多糖含量较高，且灵芝菌丝体中三萜成分含量较低，因此灵芝菌丝体多糖的提取率较高，采用灵芝菌丝体进行灵芝菌丝体多糖的提取可以有效提高多糖的提取率，简化了后期提纯多糖的工艺步骤，综合利用效果好。

本发明提供的灵芝菌丝体多糖的制备方法采用有机溶剂进行处理，可以有效去除灵芝菌丝体中含有的酯类物质，为灵芝菌丝体多糖的高效提取打下基础。超临界CO₂提取技术是利用超临界CO₂对灵芝菌丝体多糖的溶解作用，利用压力和温度对超临界CO₂的溶解能力的影响进行提取的，在超临界状态下，将灵芝菌丝体多糖提取出来。采用由纤维素酶、角蛋白酶和半纤维素酶构成的复合酶处理水提液可以有效去除水提液中的蛋白质、氨基酸和核酸，提高灵芝菌丝体多糖的纯度，酶解后通过加热至100～120℃，保温1h可以有效地将酶灭活。最后采用乙醇沉淀法去除蛋白质和小分子杂质，进一步提高灵芝菌丝体多糖的纯度。

与现有技术相比，本发明具有如下优势；

(1)本发明提供的灵芝菌丝体多糖的制备方法制得的灵芝菌丝体多糖的提取率达到15.4％以上，纯度达到76.1％以上；

(2)本发明采用超临界CO₂提取技术和酶解技术对灵芝菌丝体进行多糖提取，二者相辅相成，提高了多糖的提取率，避免了原材料的浪费，节约生产成本；

(3)本发明提供的灵芝菌丝体多糖的制备方法工艺简单，条件可控，易于实现工业化生产；制得的灵芝菌丝体多糖应用于保健品和药物的制备，具有良好的功效，经济效益和的和会效益显著。

具体实施方式

以下通过具体实施方式进一步描述本发明，但本发明不仅仅限于以下实施例。本领域技术人员根据本发明的基本思路，可以做出各种修改，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范之内。

实施例1、一种灵芝菌丝体多糖

所述灵芝菌丝体多糖的制备方法，包括如下步骤：

S1、取干燥的灵芝菌丝体放入粉碎机中粉碎至8μm，然后加入8倍量的有机溶剂进行脱脂处理，有机溶剂由丙二醇甲醚、丙酮和二甲基亚砜按质量比为2:4:1组成，脱脂处理时间为1h，离心分离，取下层沉淀于50℃下烘干，制得灵芝菌丝体粗粉；

S2、取步骤S1制得的灵芝菌丝体粗粉，加入10倍量的去离子水，然后进行超临界CO₂提取，超临界CO₂提取的条件为：压力30Mpa，提取温度为50℃，提取时间为4h；过滤，制得水提液；

S3、取步骤S2制得的水提液，加入复合酶，复合酶由纤维素酶、角蛋白酶和半纤维素酶按质量比为5:1:3组成，在400转/分的搅拌状态下进行保温酶解，酶解时间为3h，制得酶解液；

S4、将步骤S3制得的酶解液加热至100℃，保温1h后自然冷却至20℃，然后进行喷雾干燥，制得多糖粗粉；

S5、取步骤S4制得的多糖粗粉，加入8倍量体积分数为95％的无水乙醇，在600转/分的条件下搅拌1h，离心分离，去上层清液进行喷雾干燥，即得。

实施例2、一种灵芝菌丝体多糖

所述灵芝菌丝体多糖的制备方法，包括如下步骤：

S1、取干燥的灵芝菌丝体放入粉碎机中粉碎至8.5μm，然后加入8.5倍量的有机溶剂进行脱脂处理，有机溶剂由丙二醇甲醚、丙酮和二甲基亚砜按质量比为3:5:2组成，脱脂处理时间为1.5h，离心分离，取下层沉淀于55℃下烘干，制得灵芝菌丝体粗粉；

S2、取步骤S1制得的灵芝菌丝体粗粉，加入14倍量的去离子水，然后进行超临界CO₂提取，超临界CO₂提取的条件为：压力31Mpa，提取温度为53℃，提取时间为4.2h；过滤，制得水提液；

S3、取步骤S2制得的水提液，加入复合酶，复合酶由纤维素酶、角蛋白酶和半纤维素酶按质量比为6:2:3组成，在420转/分的搅拌状态下进行保温酶解，酶解时间为3.5h，制得酶解液；

S4、将步骤S3制得的酶解液加热至105℃，保温1h后自然冷却至20℃，然后进行喷雾干燥，制得多糖粗粉；

S5、取步骤S4制得的多糖粗粉，加入8.5倍量体积分数为95％的无水乙醇，在650转/分的条件下搅拌1.2h，离心分离，去上层清液进行喷雾干燥，即得。

实施例3、一种灵芝菌丝体多糖

所述灵芝菌丝体多糖的制备方法，包括如下步骤：

S1、取干燥的灵芝菌丝体放入粉碎机中粉碎至9μm，然后加入9倍量的有机溶剂进行脱脂处理，有机溶剂由丙二醇甲醚、丙酮和二甲基亚砜按质量比为2:6:1组成，脱脂处理时间为2h，离心分离，取下层沉淀于58℃下烘干，制得灵芝菌丝体粗粉；

S2、取步骤S1制得的灵芝菌丝体粗粉，加入16倍量的去离子水，然后进行超临界CO₂提取，超临界CO₂提取的条件为：压力33Mpa，提取温度为55℃，提取时间为4.5h；过滤，制得水提液；

S3、取步骤S2制得的水提液，加入复合酶，复合酶由纤维素酶、角蛋白酶和半纤维素酶按质量比为7:2:4组成，在450转/分的搅拌状态下进行保温酶解，酶解时间为4h，制得酶解液；

S4、将步骤S3制得的酶解液加热至110℃，保温1h后自然冷却至20℃，然后进行喷雾干燥，制得多糖粗粉；

S5、取步骤S4制得的多糖粗粉，加入9倍量体积分数为95％的无水乙醇，在700转/分的条件下搅拌1.3h，离心分离，去上层清液进行喷雾干燥，即得。

实施例4、一种灵芝菌丝体多糖

所述灵芝菌丝体多糖的制备方法，包括如下步骤：

S1、取干燥的灵芝菌丝体放入粉碎机中粉碎至9.5μm，然后加入9.5倍量的有机溶剂进行脱脂处理，有机溶剂由丙二醇甲醚、丙酮和二甲基亚砜按质量比为3:7:2组成，脱脂处理时间为2.5h，离心分离，取下层沉淀于65℃下烘干，制得灵芝菌丝体粗粉；

S2、取步骤S1制得的灵芝菌丝体粗粉，加入18倍量的去离子水，然后进行超临界CO₂提取，超临界CO₂提取的条件为：压力34Mpa，提取温度为58℃，提取时间为4.7h；过滤，制得水提液；

S3、取步骤S2制得的水提液，加入复合酶，复合酶由纤维素酶、角蛋白酶和半纤维素酶按质量比为7:3:5组成，在470转/分的搅拌状态下进行保温酶解，酶解时间为4.5h，制得酶解液；

S4、将步骤S3制得的酶解液加热至115℃，保温1h后自然冷却至20℃，然后进行喷雾干燥，制得多糖粗粉；

S5、取步骤S4制得的多糖粗粉，加入9.5倍量体积分数为95％的无水乙醇，在750转/分的条件下搅拌1.4h，离心分离，去上层清液进行喷雾干燥，即得。

实施例5、一种灵芝菌丝体多糖

所述灵芝菌丝体多糖的制备方法，包括如下步骤：

S1、取干燥的灵芝菌丝体放入粉碎机中粉碎至10μm，然后加入10倍量的有机溶剂进行脱脂处理，有机溶剂由丙二醇甲醚、丙酮和二甲基亚砜按质量比为3:6:1组成，脱脂处理时间为3h，离心分离，取下层沉淀于70℃下烘干，制得灵芝菌丝体粗粉；

S2、取步骤S1制得的灵芝菌丝体粗粉，加入20倍量的去离子水，然后进行超临界CO₂提取，超临界CO₂提取的条件为：压力35Mpa，提取温度为50℃，提取时间为5h；过滤，制得水提液；

S3、取步骤S2制得的水提液，加入复合酶，复合酶由纤维素酶、角蛋白酶和半纤维素酶按质量比为6:2:5组成，在500转/分的搅拌状态下进行保温酶解，酶解时间为5h，制得酶解液；

S4、将步骤S3制得的酶解液加热至120℃，保温1h后自然冷却至20℃，然后进行喷雾干燥，制得多糖粗粉；

S5、取步骤S4制得的多糖粗粉，加入10倍量体积分数为95％的无水乙醇，在800转/分的条件下搅拌1.5h，离心分离，去上层清液进行喷雾干燥，即得。

对比例1、一种灵芝菌丝体多糖

所述灵芝菌丝体多糖的制备方法与实施例3类似。

本对比例与实施例3的区别为：本对比例中步骤S1中的有机溶剂由丙二醇甲醚、丙酮和二甲基亚砜按质量比为1:1:1组成.

对比例2、一种灵芝菌丝体多糖

所述灵芝菌丝体多糖的制备方法与实施例3类似。

本对比例与实施例3的区别为：本对比例中步骤S2中超临界CO₂提取的条件为：压力25Mpa，提取温度为80℃，提取时间为6h。

对比例3、一种灵芝菌丝体多糖

所述灵芝菌丝体多糖的制备方法与实施例3类似。

本对比例与实施例3的区别为：本对比例中步骤S3中的复合酶由纤维素酶、角蛋白酶和半纤维素酶按质量比为1:1:1组成。

试验例、灵芝菌丝体多糖含量的检测

试验样品：实施例1～5、对比例1～3制得的灵芝菌丝体多糖；

试验方法：采用苯酚硫酸法，以葡萄糖含量c为横坐标(μg)，吸光度A为纵坐标绘制标准曲线，得线性方程A＝0.0067c+0.0005，相关系数为0.9992。取灵芝菌丝体多糖配置成摩尔浓度为0.1mol/L的多糖溶液，同法显色后测吸光度A，带入方程计算灵芝菌丝体多糖的含量；灵芝菌丝体多糖的提取率为灵芝菌丝体多糖的含量与灵芝菌丝体粉含量的比值。

试验结果：试验结果见表1。

表1灵芝菌丝体多糖含量检测结果

由表1可知，本发明提供的从灵芝菌丝体中提取多糖的工艺能够实现灵芝菌丝体多糖的提取率达到15.4％以上，提取到的灵芝菌丝体多糖的纯度达到76.1％以上，与现有技术相比，本发明具有重大的进步。其中实施例3制得的灵芝菌丝体多糖的提取率最高，纯度最好，为本发明的最佳实施例。

与实施例3相比，对比例1改变了脱脂处理过程中的有机溶剂的用量比，但是其制得的灵芝菌丝体多糖的纯度较低，提取率也较低，这说明本发明提供的灵芝菌丝体多糖的制备方法中有机溶剂的比例已达到最佳比例，更改用量比会造成提取率降低的不良后果。对比例2改变了超临界CO₂提取的条件，降低了提取压力，升高了提取温度，延长了提取时间，但是灵芝菌丝体多糖的提取率及灵芝菌丝体多糖的纯度明显不如实施例3，这是由于降低超临界CO₂提取的压力会降低灵芝菌丝体多糖在超临界CO₂中的溶解度，从而造成提取率降低，而升高提取温度和延长提取时间均不能弥补这一缺陷。对比例3改变了步骤S3中复合酶的用量比，但是灵芝菌丝体多糖的提取率及灵芝菌丝体多糖的纯度明显不如实施例3，这说明本发明提供的灵芝菌丝体多糖的制备方法中复合酶所含有的成分的比例已达到最佳比例。

上述实施例仅例示性说明本发明的原理及功效，而并非限制本发明。本领域任何熟悉此技术的认识皆不可在违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修改。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所提供的技术思想下完成的一切等效修饰或改变，仍由本发明的权利要求所涵盖。