一种链霉亲和素修饰γ-Fe2O3磁珠的制备方法
阅读说明：本技术 一种链霉亲和素修饰γ-Fe2O3磁珠的制备方法 (Preparation method of streptavidin modified gamma-Fe 2O3 magnetic beads ) 是由 李长全 谢宇 李诗琪 于 2020-04-07 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种链霉亲和素修饰γ-Fe2O3磁珠的制备方法,其包括以下步骤：步骤一、制备纳米γ-Fe2O3磁珠；步骤二、用AEAPS修饰纳米粒子表面；步骤三、在纳米γ-Fe2O3磁珠表面连接链霉亲和素。本发明的有益效果有：得到的成品粒径均一、形貌规整,可配套自动化设备进行高通量操作；吸附无过多现象,能确保在实验应用和检测中,结果重复性好。(The invention discloses a preparation method of streptavidin modified gamma-Fe 2O3 magnetic beads, which comprises the following steps: step one, preparing nano gamma-Fe 2O3 magnetic beads; modifying the surface of the nanoparticle by using AEAPS; and step three, connecting streptavidin to the surface of the nano gamma-Fe 2O3 magnetic bead. The invention has the following beneficial effects: the obtained finished product has uniform particle size and regular appearance, and can be matched with automatic equipment for high-throughput operation; the adsorption has no excessive phenomenon, and the result repeatability is good in experimental application and detection.)
技术领域
本发明涉及一种链霉亲和素修饰γ-Fe2O3磁珠的制备方法。
背景技术
近年来，核酸检测在感染性疾病的预防和控制、恶性肿瘤的早期诊断及精准治疗、遗传性疾病的早期筛查、动植物病毒的预防与控制、转基因检测等方面发挥着重要作用，其中链霉亲和素磁珠因其具有极高的结合亲和力，在生物领域具有广泛的应用。链霉亲和素磁珠是采用定向固定技术将重组中型链霉亲和素共价到形态规整、粒径均一的磁性微球上，形成单分子固定层，可用于生物素化核酸、抗体或其他生物素化配体和靶分子的分离和检测。目前对链霉亲和素磁珠的需求量越来越大。
发明内容
本发明要解决的技术问题，在于提供一种链霉亲和素修饰γ-Fe2O3磁珠的制备方法，
本发明通过下述方案实现：一种链霉亲和素修饰γ-Fe2O3磁珠的制备方法，其包括以下步骤：
步骤一、制备纳米γ-Fe2O3磁珠；
步骤二、用AEAPS修饰纳米粒子表面；
步骤三、在纳米γ-Fe2O3磁珠表面连接链霉亲和素。
所述步骤一中制备纳米γ-Fe2O3磁珠的方法如下：将Fe(NO3)3和乙二醇混合回流，去除溶胶在80℃下干燥，放入400℃的马弗炉中，得到产品。
所述步骤一中制备纳米γ-Fe2O3磁珠的方法如下：将Fe(NO3)3和乙二醇按摩尔比1:15混合回流12h，去除溶胶在80℃下干燥24h，放入400℃的马弗炉中2h，得到产品。
所述步骤二中用AEAPS修饰纳米粒子表面的方法如下：取步骤一所制得的纳米γ-Fe2O3磁珠加入到甲醇和丙三醇的混合溶液中，超声处理，将AEAPS加入到混合溶液中，超声处理，使溶液混合均匀；在5-90℃的反应条件下，进行反应，然后分离出粒子用甲醇清洗，最后真空干燥两小时，收集粒子。
所述步骤二中用AEAPS修饰纳米粒子表面的方法如下：取0.1g步骤一所制得的纳米γ-Fe2O3磁珠加入到甲醇和丙三醇的混合溶液中，超声处理1h，将AEAPS加入到混合溶液中，超声处理1h，使溶液混合均匀；在5-90℃的反应条件下，反应2-3个小时，然后分离出粒子用甲醇清洗2-3次，最后真空干燥两小时，收集粒子。
所述步骤三中在纳米γ-Fe2O3磁珠表面连接链霉亲和素方法如下：将链酶亲和素溶于的PB溶液中，将步骤二中修饰好氨基的粒子加入PB溶液中，用超声进行分散，将修饰好氨基的粒子PB悬浊液加入到上述链酶亲和素溶液，室温下进行振荡反应，反应完全后，用PB缓冲液洗涤清洗，最后将粒子分散在PB溶液中，在4℃下保存待用。
所述步骤三中在纳米γ-Fe2O3磁珠表面连接链霉亲和素方法如下：将2mg链酶亲和素溶于1mL的PB溶液中，PB溶液的浓度为0.1mol/L，pH＝7，将5mg步骤二中修饰好氨基的粒子加入2mL的PB溶液中，超声分散10min，将修饰好氨基的粒子PB悬浊液加入到上述链酶亲和素溶液，室温下振荡反应24h，反应完全后，用PB缓冲液洗涤清洗2次，最后将粒子分散在PB溶液中，在4℃下保存待用。
本发明的有益效果为：
1、本发明一种链霉亲和素修饰γ-Fe2O3磁珠的制备方法包括制备纳米γ-Fe2O3磁珠、用AEAPS修饰纳米粒子表面；在纳米γ-Fe2O3磁珠表面连接链霉亲和素，得到的成品粒径均一、形貌规整，可配套自动化设备进行高通量操作；
2、本发明一种链霉亲和素修饰γ-Fe2O3磁珠的磁珠上链霉亲和素的吸附无过多现象，能确保在实验应用和检测中，结果重复性好。
具体实施方式
下面对本发明进一步说明，但本发明保护范围不局限所述内容。
为了清楚，不描述实际实施例的全部特征，在下列描述中，不详细描述公知的功能和结构，因为它们会使本发明由于不必要的细节而混乱，应当认为在任何实际实施例的开发中，必须做出大量实施细节以实现开发者的特定目标，例如按照有关系统或有关商业的限制，由一个实施例改变为另一个实施例，另外，应当认为这种开发工作可能是复杂和耗费时间的，但是对于本领域技术人员来说仅仅是常规工作。
一种链霉亲和素修饰γ-Fe2O3磁珠的制备方法，其包括以下步骤：
步骤一、制备纳米γ-Fe2O3磁珠：将Fe(NO3)3和乙二醇按摩尔比1:15混合回流12h，去除溶胶在80℃下干燥24h，放入400℃的马弗炉中2h，得到产品。
步骤二、用AEAPS修饰纳米粒子表面：取0.1g步骤一所制得的纳米γ-Fe2O3磁珠加入到甲醇和丙三醇的混合溶液中，超声处理1h，将AEAPS加入到混合溶液中，超声处理1h，使溶液混合均匀；在5-90℃的反应条件下，反应2-3个小时，然后分离出粒子用甲醇清洗2-3次，最后真空干燥两小时，收集粒子。
步骤三、在纳米γ-Fe2O3磁珠表面连接链霉亲和素：将2mg链酶亲和素溶于1mL的PB溶液中，PB溶液的浓度为0.1mol/L，pH＝7，将5mg步骤二中修饰好氨基的粒子加入2mL的PB溶液中，超声分散10min，将修饰好氨基的粒子PB悬浊液加入到上述链酶亲和素溶液，室温下振荡反应24h，反应完全后，用PB缓冲液洗涤清洗2次，最后将粒子分散在PB溶液中，在4℃下保存待用。
尽管已经对本发明的技术方案做了较为详细的阐述和列举，应当理解，对于本领域技术人员来说，对上述实施例做出修改或者采用等同的替代方案，这对本领域的技术人员而言是显而易见，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。