阅读说明：本技术 一种远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的制备方法 (Preparation method of polygala tenuifolia medium and small polarity anti-senile dementia active component ) 是由 张翼 梁金月 张永平 孟德岩 刘亚月 聂影影 杨静明 杨文聪 千忠吉 宋采 于 2020-05-21 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的制备方法。该方法将远志粉碎得到远志生粉后,采用超声提取法,利用乙酸乙酯和石油醚的混合溶剂对远志生粉进行提取。本发明利用乙酸乙酯和石油醚的混合溶剂作为提取溶剂,采用超声波法对远志的中低极性抗老年痴呆活性成分进行提取,使其有效成分充分提取出来,且提取工艺稳定,利用正交试验分别得出了以抗氧化活性和乙酰胆碱酯酶抑制活性为指标的提取工艺,该提取工艺制备的得到的远志的中小极性抗老年痴呆活性成分与多不饱和脂肪酸相溶性较好,同时具有显著的抗氧化活性、乙酰胆碱酯酶抑制活性和对神经细胞损伤的保护活性,对于后期抗氧化剂、乙酰胆碱酯酶抑制剂和神经保护剂的研发具有重要意义。(The invention discloses a preparation method of a polygala tenuifolia medium and small polarity anti-senile dementia active component. The method comprises the steps of crushing polygala tenuifolia to obtain polygala tenuifolia raw powder, and extracting the polygala tenuifolia raw powder by using a mixed solvent of ethyl acetate and petroleum ether by adopting an ultrasonic extraction method. The method uses a mixed solvent of ethyl acetate and petroleum ether as an extraction solvent, adopts an ultrasonic method to extract the low-and-medium-polarity anti-senile dementia active ingredients of polygala tenuifolia, fully extracts the active ingredients, has a stable extraction process, and respectively obtains the extraction process taking the antioxidant activity and the acetylcholinesterase inhibition activity as indexes by using an orthogonal test.)

一种远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的制备方法

技术领域

本发明属于中药技术领域。更具体地，涉及一种远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的制备方法。

背景技术

远志为远志科植物远志Polygala tenuifolia Willd.或卵叶远志P.sibirica L.的干燥根，含有丰富的苷类、黄酮类、生物碱类以及多糖类等有效成分。远志的药理活性主要表现为益智安神、改善智力障碍和增加脑血流量等，其作用机制与有效降低胆碱酯酶活性有关。

目前，已报道的远志提取物的制备方法及其应用包括：通过粉碎远志苗，乙醇超声提取，减压浓缩等工序制备得到的远志提取物具有降血糖、抗痴呆、抗衰老和抗应激的作用；用30％～70％乙醇回流提取2～3次，每次1～2h，减压浓缩，大孔树脂富集，浓缩干燥等工序制备得到的远志提取物具有抗血小板聚集的作用；提取远志总皂苷后，加入盐酸溶解，煮沸水解，冷却，滤过，水洗等步骤制备得到的远志提取物具有镇定安神和祛痰的作用；远志醇提物和水提物的混合物用石油醚萃取后，回收，浓缩得到的有效部位B具有抗帕金森病的作用。可以看出，不同的提取工艺条件得到的远志提取物的有效成分及其功效均有差异。但是，目前还未有远志的中小极性物质的制备方法，亟需提供一种操作简便、快速的远志的中小极性物质的提取方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服上述现有技术的缺陷和不足，提供一种远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的制备方法。

本发明的目的是提供一种远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的制备方法。

本发明另一目的是提供所述方法制备得到的远志的中小极性抗老年痴呆活性成分。

本发明再一目的是提供所述远志的中小极性抗老年痴呆活性成分在制备抗氧化性剂、乙酰胆碱酯酶抑制剂或神经保护剂中的应用。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明首先提供了一种远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的制备方法，将远志粉碎得到远志生粉后，采用超声提取法，利用乙酸乙酯和石油醚的混合溶剂对远志生粉进行提取。

优选地，所述远志为远志的根或卵叶远志的根。

优选地，所述超声提取法的超声功率为280～320W。

更优选地，所述超声提取法的超声功率为300W。

优选地，所述乙酸乙酯和石油醚的混合溶剂的体积比为1～9：1。

更优选地，所述乙酸乙酯和石油醚的混合溶剂的体积比为1:1、7:3或9:1。

优选地，所述远志生粉的质量与乙酸乙酯和石油醚的混合溶剂的体积的比例为1:20～40。

更优选地，所述远志生粉的质量与乙酸乙酯和石油醚的混合溶剂的体积的比例为1:30。

优选地，所述超声提取法的提取次数为2～4次。

更优选地，所述超声提取法的提取次数为3～4次。

更进一步优选地，所述超声提取法的提取次数为3次或4次。

优选地，所述远志生粉的细度为75～95目。

更优选地，所述远志生粉的细度为85目。

所述远志的中小极性抗老年痴呆活性成分在制备抗氧化性剂、乙酰胆碱酯酶抑制剂或神经保护剂中的应用，也应在本发明的保护范围之内。

本发明具有以下有益效果：

本发明提供了一种远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的制备方法，利用乙酸乙酯和石油醚的混合溶剂作为提取溶剂，采用超声波法对远志的中低极性抗老年痴呆活性成分进行提取，使其有效成分充分提取出来，且提取工艺稳定；另外，本发明制备的得到的远志的中小极性抗老年痴呆活性成分与多不饱和脂肪酸相溶性较好，具有显著的抗氧化活性和乙酰胆碱酯酶抑制活性，同时对于神经细胞损伤具有较好的保护作用，为后期抗氧化剂、乙酰胆碱酯酶抑制剂和神经保护剂的研发提供了基础。

附图说明

图1是不同超声功率条件下得到的远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的活性曲线。

图2是不同提取溶剂比条件下得到的远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的活性曲线。

图3是不同提取次数条件下得到的远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的活性曲线。

图4是不同料液比条件下得到的远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的活性曲线。

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

实施例1远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的制备条件

本实施例以超声功率、提取溶剂比、提取次数、料液比为考察因素，探究这些因素对远志的中小极性抗老年痴呆活性成分提取效果的影响。

1、单因素实验

(1)实验方法

取干燥的远志的根，使用中药粉碎机粉碎至80目，得到远志生粉；称取50g远志生粉，然后分别进行以下考察：

超声功率的考察：在提取时间为30min、浸泡时间1.5h、料液比为1:25(g/mL)、提取次数2次、提取温度40℃的条件下，考察超声功率120W、165W、210W、255W、300W，对远志的中小极性抗老年痴呆活性成分提取效果的影响。

提取溶剂比的考察：在提取时间为30min，浸泡时间1.5h，料液比为1:25(g/mL)，超声功率225W，提取次数2次，提取温度40℃的条件下，考察溶剂比1(乙酸乙酯：石油醚＝9:1,v/v)、溶剂比2(乙酸乙酯：石油醚＝7:3,v/v)、溶剂比3(乙酸乙酯：石油醚＝5:5,v/v)、溶剂比4(乙酸乙酯：石油醚＝3:7,v/v)、溶剂比5(乙酸乙酯：石油醚＝1:9,v/v)、溶剂比6(乙酸乙酯：石油醚＝10:0,v/v)对远志的中小极性抗老年痴呆活性成分提取效果的影响。

提取次数的考察：在提取时间为30min、浸泡时间1.5h、料液比为1:25(g/mL)、超声功率225W、提取温度40℃的条件下，考察提取1次、2次、3次、4次、5次，对远志的中小极性抗老年痴呆活性成分提取效果的影响。

料液比的考察：在超声功率225W、提取时间30min、浸液时间1.5h、提取次数2次、提取温度40℃的条件下，考察料液比1:5、1:10、1:20、1:30、1:40(g/mL)，对远志的中小极性抗老年痴呆活性成分提取效果的影响。

料液比是指：远志生粉的质量(g)与乙酸乙酯和石油醚的混合溶剂的体积(mL)的比例。

进一步对以上获得的远志的中小极性抗老年痴呆活性成分进行抗氧化性和乙酰胆碱酯酶抑制活性测定，以最高浓度(1mg/mL)(DPPH自由基)清除率*(红景天中小极性活性成分)质量和最高浓度(乙酰胆碱酯酶)抑制率*(红景天中小极性活性成分)质量的值为评价指标，选取正交试验的中心值。

(2)实验结果

各个因素水平下得到的远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的质量如表1所示，可以看出，不同超声功率、不同提取溶剂比、不同提取次数、不同料液比条件下得到的远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的活性曲线依次如图1～图4所示，可以看出，当料液比为1:30(g/mL)、超声功率为255W、溶剂乙酸乙酯：石油醚＝7:3(v/v)、提取次数为3次时，远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的质量、最高浓度清除率*质量的值以及最高浓度抑制率*质量的值都较大，综合DPPH清除率和乙酰胆碱酯酶抑制率两方面考虑，以料液比为1:30(g/mL)、超声功率为255W、溶剂乙酸乙酯：石油醚＝7:3(v/v)、提取次数为3次作为实验的中心值进行下一步正交实验。

表1各个因素水平下得到的远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的质量

2、正交实验

(1)实验方法

按照以下表2的远志因素水平正交表进行正交实验L₉(3⁴)，以最高浓度清除率*质量或最高浓度抑制率*质量为指标对正交实验的结果进行分析。

表2远志因素水平正交表

(2)实验结果

远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的抗氧化活性的正交实验分析结果如表3所示，可以看出，影响超声提取远志中的抗氧化活性物质的主次关系分别为：超声功率>料液比>溶剂比>提取次数，超声提取远志中的抗氧化活性物质的最佳提取条件为：A₃B₃C₂D₃，即：提取4次、超声功率300W、料液比1:30(g/mL)、溶剂为乙酸乙酯：石油醚＝9:1(v/v)。

表3远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的抗氧化活性的正交实验分析结果

远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的乙酰胆碱酯酶抑制活性的正交实验分析结果如表4所示，可以看出，影响超声提取远志中的乙酰胆碱酯酶抑制活性物质的主次关系分别为：溶剂比>料液比>超声功率﹥提取次数，超声提取远志中的乙酰胆碱酯酶抑制活性物质的最佳提取条件为：A₂B₃C₂D₃，即提取3次、超声功率300W、料液比1:30(g/mL)、溶剂为乙酸乙酯：石油醚＝9:1(v/v)。

表4远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的乙酰胆碱酯酶抑制活性的正交实验分析结果

3、工艺验证实验

(1)实验方法

对以超声提取远志中的抗氧化活性物质的最佳提取因素组合为A₃B₃C₂D₃，以超声提取远志中的乙酰胆碱酯酶抑制活性物质的最佳提取因素组合为A₂B₃C₂D₃分别进行工艺验证实验，具体方法分别如下：

取干燥的远志的根，使用中药粉碎机粉碎至80目，得到远志生粉；称取50g远志生粉，在提取4次、超声功率300W、料液比1:30(g/mL)、溶剂为乙酸乙酯：石油醚＝9:1(v/v)条件下采用超声波法进行提取，验证最佳提取因素组合A₃B₃C₂D₃。

取干燥的远志的根，使用中药粉碎机粉碎至80目，得到远志生粉；称取50g远志生粉，在提取3次、超声功率300W、料液比1:30(g/mL)、溶剂为乙酸乙酯：石油醚＝9:1(v/v)提取3次、超声功率300W、料液比1:30(g/mL)、溶剂为乙酸乙酯：石油醚＝9:1(v/v)条件下采用超声波法进行提取，验证最佳提取因素组合A₂B₃C₂D₃。

(2)实验结果

最佳提取因素组合A₃B₃C₂D₃验证提取得到的远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的质量为10.6833g，最高浓度(1mg.mL^-1)清除率与质量的乘积为4.6325％_*g；验证得出最佳提取因素组合A₃B₃C₂D₃对具有抗氧化活性的远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的提取效果属于较高水平，且提取工艺稳定。

最佳提取因素组合A₂B₃C₂D₃验证提取得到的远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的质量为4.5892g，最高浓度(1mg.mL^-1)清除率与质量的乘积为3.5072％*g，验证得出最佳提取因素组合A₂B₃C₂D₃对具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的提取效果属于较高水平，且提取工艺稳定。

实施例2远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的制备

一种远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的制备方法为：取干燥的远志的根使用中药粉碎机粉碎至80目，得到远志生粉；称取50g远志生粉，在提取4次、超声功率300W、料液比1:30(g/mL)、溶剂为乙酸乙酯：石油醚＝9:1(v/v)条件下采用超声波法进行提取，得到远志的中小极性抗老年痴呆活性成分。

实施例3远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的制备

一种远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的制备方法为：取干燥的卵叶远志的根使用中药粉碎机粉碎至75目，得到卵叶远志生粉；称取50g卵叶远志生粉，在提取3次、超声功率300W、料液比1:30(g/mL)、溶剂为乙酸乙酯：石油醚＝9:1(v/v)提取3次、超声功率300W、料液比1:30(g/mL)、溶剂为乙酸乙酯：石油醚＝9:1(v/v)条件下采用超声波法进行提取，得到远志的中小极性抗老年痴呆活性成分。

实施例4远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的制备

一种远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的制备方法为：取干燥的远志的根使用中药粉碎机粉碎至95目，得到远志生粉；称取50g远志生粉，在提取2次、超声功率280W、料液比1:40(g/mL)、溶剂为乙酸乙酯：石油醚＝1:1(v/v)条件下采用超声波法进行提取，得到远志的中小极性抗老年痴呆活性成分。

实施例5远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的制备

一种远志的中小极性抗老年痴呆活性成分的制备方法为：取干燥的远志的根使用中药粉碎机粉碎至80目，得到远志生粉；称取50g远志生粉，在提取3次、超声功率320W、料液比1:20(g/mL)、溶剂为乙酸乙酯：石油醚＝7:3(v/v)条件下采用超声波法进行提取，得到远志的中小极性抗老年痴呆活性成分。

本发明通过老年痴呆体外模型活性实验验证得出：实施例2～5制备得到的远志的中小极性抗老年痴呆活性成分具有显著的抗氧化性活性和乙酰胆碱酯酶抑制活性，对于神经细胞损伤具有较好的保护作用。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。