阅读说明：本技术 一种磷脂酰丝氨酸的制备方法 (Preparation method of phosphatidylserine ) 是由 程彦 邓颖妍 于 2020-04-21 设计创作，主要内容包括：本发明属于食品保健品领域,具体涉及一种磷脂酰丝氨酸的制备方法。本发明提供的磷脂酰丝氨酸的制备方法,包括如下步骤：S1、将大豆卵磷脂和溶剂加入均质机中混合,得到混合液I；S2、向步骤S1所得的混合液I中加入酶液混合均匀,制得混合液II；S3、向步骤S2所得的混合液II制得加入有机溶剂萃取3～5次,制得磷脂酰丝氨酸半成品；S4、将步骤S3所得的磷脂酰丝氨酸半成品顺次通过硅胶柱和阳离子交换树脂,制得磷脂酰丝氨酸。本发明提供的磷脂酰丝氨酸的制备方法简单,易于实现工业化,制得的磷脂酰丝氨酸纯度较高,同时安全性较高,对我国磷脂工业,保健食品以及药品工业都将具有重要意义。(The invention belongs to the field of food health products, and particularly relates to a preparation method of phosphatidylserine. The preparation method of phosphatidylserine provided by the invention comprises the following steps: s1, adding soybean lecithin and a solvent into a homogenizer for mixing to obtain a mixed solution I; s2, adding the enzyme solution into the mixed solution I obtained in the step S1, and uniformly mixing to obtain a mixed solution II; s3, adding an organic solvent into the mixed liquid II obtained in the step S2, and extracting for 3-5 times to obtain a semi-finished product of phosphatidylserine; s4, making the semi-finished product of phosphatidylserine obtained in the step S3 pass through a silica gel column and cation exchange resin in sequence to prepare the phosphatidylserine. The preparation method of the phosphatidylserine provided by the invention is simple, the industrialization is easy to realize, the purity of the prepared phosphatidylserine is high, and the safety is high, so that the preparation method has important significance for the phospholipid industry, the health food industry and the pharmaceutical industry in China.)

一种磷脂酰丝氨酸的制备方法

技术领域

本发明属于食品保健品领域，具体涉及一种磷脂酰丝氨酸的制备方法。

背景技术

磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)是天然存在的磷脂族，它是细胞膜磷脂的重要组分，是能够调控细胞膜关键蛋白功能状态的唯一磷脂。尤其在人体的神经系统，是大脑的细胞膜的重要组成分之一，同时对大脑的各种功能(尤其是对大脑的记忆力和情绪的稳定)起到重要的调节作用，如它能影响着细胞膜的流动性、通透性，并且能激活多种酶类的代谢和合成。

磷脂酰丝氨酸广泛存在于动物、高等植物的种子以及微生物的生物膜中，对许多细胞代谢过程有重要的调节作用。动物试验及临床应用表明，磷脂酰丝氨酸对防治老年痴呆症、改善记忆和认知能力、缓解精神压力及抑郁症都有显著疗效。同时磷脂酰胆碱也是一种具有乳化、渗透、湿润和抗氧化等独特功能的天然乳化剂，在医药、保健品、食品、日化、饲料、皮革等领域中都有广泛的用途。

通常动物是磷脂酰丝氨酸的主要来源，由于疯牛病等原因，动物来源的磷脂酰丝氨酸产品的安全性遭到质疑。人们开始尝试从天然植物中提取磷脂酰丝氨酸或磷脂酰胆碱，但也面临着提取方法中步骤繁杂，得率低，产品价格昂贵的问题。中国专利申请CN107266492A公开了一种磷脂酰丝氨酸的提取方法，其中，所述提取方法包括：1)向牛脑中加入氯仿和甲醇混合浸提，制得混合物M1；2)将步骤1)中制得的混合物M1过滤，取滤液，而后向滤液中加入氯化钠水溶液后静置，待分层后，去除溶液层，得到油脂层M2；3)向步骤2)中制得的油脂层M2中加入洗涤液混合，去除溶液，得到混合物M3；4)将步骤3)中制得的混合物M3采用薄层色谱法进行分离后收集，制得磷脂酰丝氨酸。该方法虽然实现了能从牛脑中提取磷脂酰丝氨酸，使牛脑得到有效利用的效果。但是由于疯牛病等动物疾病的原因，利用动物细胞提取磷脂酰丝氨酸的方法，其提取产品可能存在安全隐患。

近年来国内外关于磷脂酶D转化法合成磷脂酰丝氨酸的方法受到关注，酶转化法具有反应条件温和、反应易控、高效简单等优势，并且由于近几年绿色生物质溶剂的快速发展，在酶法中有替代传统溶剂的趋势，可以加以开发和利用。

所以，提供一种制备方法相对简单，制得的纯度较高的磷脂酰丝氨酸是本发明亟需解决的问题。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种磷脂酰丝氨酸的制备方法。本发明提供的磷脂酰丝氨酸，制得的磷脂酰丝氨酸纯度较高，同时安全性较高，且本发明整体工艺简单，易于实现工业化，对我国磷脂工业，保健食品以及药品工业都将具有重要意义。

本发明的技术方案是：

一种磷脂酰丝氨酸的制备方法，所述制备方法包括：

S1、将大豆卵磷脂和溶剂加入均质机中混合，得到混合液I；

S2、向步骤S1所得的混合液I中加入酶液混合均匀，制得混合液II；

S3、向步骤S2所得的混合液II制得加入有机溶剂萃取3～5次，制得磷脂酰丝氨酸半成品；

S4、将步骤S3所得的磷脂酰丝氨酸半成品顺次通过硅胶柱和阳离子交换树脂，制得磷脂酰丝氨酸。

进一步地，所述步骤S1中的大豆卵磷脂的用量为60～80重量份，所述溶剂的用量为260～400重量份；所述步骤S2中酶液的用量为70～60重量份；所述步骤S3中的有机溶剂的用量为300～800重量份。

更进一步地，所述步骤S1中的大豆卵磷脂的用量为70重量份，所述溶剂的用量为350重量份；所述步骤S2中酶液的用量为75重量份；所述步骤S3中的有机溶剂的用量为600重量份。

进一步地，所述步骤S1中的溶剂为去离子水、柠檬烯和环己烷溶解甲醇可溶物按重量比20：1～3：5～12组成。

更进一步地，所述步骤S1中的溶剂为去离子水、柠檬烯和环己烷溶解甲醇可溶物按重量比20：2：9组成。

进一步地，所述步骤S2中的酶液为L-丝氨酸和磷脂酶D按重量比13～16:2～6组成，所述L-丝氨酸的浓度为0.15～0.2g/ml，所述磷脂酶D的酶活为3～5U/ml。

更进一步地，所述步骤S2中的酶液为L-丝氨酸和磷脂酶D按重量比14:5组成，所述L-丝氨酸的浓度为0.18g/ml，所述磷脂酶D的酶活为4U/ml。

进一步地，所述步骤S3中的有机溶剂为乙醇、甲醇和正己烷按重量比2:7:3组成。

进一步地，所述步骤S2中混合过程的混合温度为25～30℃，混合时间为28～42h。

更进一步地，所述步骤S2中混合过程的混合温度为28℃，混合时间为35h。

另外，本发明还提供了一种所述的磷脂酰丝氨酸的制备方法制得的磷脂酰丝氨酸。

进一步地，本发明的另一个目的在于提供一种使用所述的磷脂酰丝氨酸的制备方法制得的磷脂酰丝氨酸，以及磷脂酰丝氨酸在制备营养品、保健品、食品、药品或化妆品中的应用。

本发明中结合物质的理化性质和现有的分离方法，选择了大豆卵磷脂为原料，以有机溶剂萃取、硅胶柱纯化等方法得到磷脂酰丝氨酸，可作为新资源食品添加剂使用，经济附加值高；整个生产过程用时20～30h，提高了大豆卵磷脂的利用价值，节约生产设备，降低和缩短了生产成本和时间。

本发明提供的磷脂酰丝氨酸的制备方法，在步骤S2的溶剂中添加了一定量的柠檬烯，柠檬烯是一种单萜类化合物，有一定的柠檬香味，可以从柑橘皮中提取，在香精香料行业有重要的应用。本发明意外的发现，当在步骤S2的溶剂中添加量一定量的柠檬烯后，能有效的提高磷脂酰丝氨酸的含量，由试验例一的实验数据可以看出，在步骤S2的溶剂中未添加柠檬烯时，所制备的磷脂酰丝氨酸的含量有大幅度的下降。

与现有技术相比，本发明的方法制备的磷脂酰丝氨酸具有如下有益效果：

(1)本发明提供的磷脂酰丝氨酸的制备方法，选择了大豆卵磷脂为原料，与从牛脑，蛋黄等原料中获得磷脂酰丝氨酸比较，具有更安全的特点，与酶转化合成法相比较，具有成本低廉，来源广泛，耗时短的特点，降低了生产成本。

(2)本发明提供的磷脂酰丝氨酸的制备方法，本发明整体工艺简单，易于实现工业化，制得的磷脂酰丝氨酸含量在90％以上，纯度较高，对我国磷脂工业，保健食品以及药品工业都将具有重要意义。

具体实施方式

以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的保护范围之内。

其中，本发明所用试剂均为常用试剂，均可在常规试剂生产销售公司购买。

实施例1一种磷脂酰丝氨酸的制备方法

所述的磷脂酰丝氨酸的制备方法，所述制备方法包括：

S1、将60重量份的大豆卵磷脂和260重量份的溶剂加入均质机中混合，得到混合液I；

S2、向步骤S1所得的混合液I中加入70重量份的酶液混合均匀28h，混合温度为25℃，制得混合液II；

S3、向步骤S2所得的混合液II制得加入300重量份的有机溶剂萃取3次，制得磷脂酰丝氨酸半成品；

S4、将步骤S3所得的磷脂酰丝氨酸半成品顺次通过硅胶柱和阳离子交换树脂，制得磷脂酰丝氨酸。

所述步骤S1中的溶剂为去离子水、柠檬烯和环己烷溶解甲醇可溶物按重量比20：3：12组成。

所述步骤S2中的酶液为L-丝氨酸和磷脂酶D按重量比13:6组成，所述L-丝氨酸的浓度为0.15g/ml，所述磷脂酶D的酶活为3U/ml。

所述步骤S3中的有机溶剂为乙醇、甲醇和正己烷按重量比2:7:3组成。

实施例2一种磷脂酰丝氨酸的制备方法

所述的磷脂酰丝氨酸的制备方法，所述制备方法包括：

S1、将70重量份的大豆卵磷脂和350重量份的溶剂加入均质机中混合，得到混合液I；

S2、向步骤S1所得的混合液I中加入75重量份的酶液混合均匀35h，混合温度为28℃，制得混合液II；

S3、向步骤S2所得的混合液II制得加入600重量份的有机溶剂萃取4次，制得磷脂酰丝氨酸半成品；

S4、将步骤S3所得的磷脂酰丝氨酸半成品顺次通过硅胶柱和阳离子交换树脂，制得磷脂酰丝氨酸。

所述步骤S1中的溶剂为去离子水、柠檬烯和环己烷溶解甲醇可溶物按重量比20：2：9组成。

所述步骤S2中的酶液为L-丝氨酸和磷脂酶D按重量比14:5组成，所述L-丝氨酸的浓度为0.18g/ml，所述磷脂酶D的酶活为4U/ml。

所述步骤S3中的有机溶剂为乙醇、甲醇和正己烷按重量比2:7:3组成。

实施例3一种磷脂酰丝氨酸的制备方法

所述的磷脂酰丝氨酸的制备方法，所述制备方法包括：

S1、将80重量份的大豆卵磷脂和400重量份的溶剂加入均质机中混合，得到混合液I；

S2、向步骤S1所得的混合液I中加入80重量份的酶液混合均匀42h，混合温度为30℃，制得混合液II；

S3、向步骤S2所得的混合液II制得加入800重量份的有机溶剂萃取5次，制得磷脂酰丝氨酸半成品；

S4、将步骤S3所得的磷脂酰丝氨酸半成品顺次通过硅胶柱和阳离子交换树脂，制得磷脂酰丝氨酸。

所述步骤S1中的溶剂为去离子水、柠檬烯和环己烷溶解甲醇可溶物按重量比20：1：5组成。

所述步骤S2中的酶液为L-丝氨酸和磷脂酶D按重量比16:2组成，所述L-丝氨酸的浓度为0.2g/ml，所述磷脂酶D的酶活为5U/ml。

所述步骤S3中的有机溶剂为乙醇、甲醇和正己烷按重量比2:7:3组成。

对比例1一种磷脂酰丝氨酸的制备方法

所述的磷脂酰丝氨酸的制备方法，所述制备方法包括：

S1、将70重量份的大豆卵磷脂和350重量份的溶剂加入均质机中混合，得到混合液I；

S2、向步骤S1所得的混合液I中加入75重量份的酶液混合均匀35h，混合温度为28℃，制得混合液II；

S3、向步骤S2所得的混合液II制得加入600重量份的有机溶剂萃取4次，制得磷脂酰丝氨酸半成品；

S4、将步骤S3所得的磷脂酰丝氨酸半成品顺次通过硅胶柱和阳离子交换树脂，制得磷脂酰丝氨酸。

所述步骤S1中的溶剂为去离子水、环己烷溶解甲醇可溶物按重量比20：9组成。

所述步骤S2中的酶液为L-丝氨酸和磷脂酶D按重量比14:5组成，所述L-丝氨酸的浓度为0.18g/ml，所述磷脂酶D的酶活为4U/ml。

所述步骤S3中的有机溶剂为乙醇、甲醇和正己烷按重量比2:7:3组成。

与实施例2的区别在于，步骤S1中的溶剂中未添加柠檬烯。

对比例2一种磷脂酰丝氨酸的制备方法

所述的磷脂酰丝氨酸的制备方法，所述制备方法包括：

S1、将70重量份的大豆卵磷脂和350重量份的溶剂加入均质机中混合，得到混合液I；

S2、向步骤S1所得的混合液I中加入75重量份的酶液混合均匀35h，混合温度为28℃，制得混合液II；

S3、向步骤S2所得的混合液II制得加入600重量份的有机溶剂萃取4次，制得磷脂酰丝氨酸半成品；

S4、将步骤S3所得的磷脂酰丝氨酸半成品顺次通过硅胶柱和阳离子交换树脂，制得磷脂酰丝氨酸。

所述步骤S1中的溶剂为去离子水、柠檬烯和环己烷溶解甲醇可溶物按重量比1：1：1组成。

所述步骤S2中的酶液为L-丝氨酸和磷脂酶D按重量比14:5组成，所述L-丝氨酸的浓度为0.18g/ml，所述磷脂酶D的酶活为4U/ml。

所述步骤S3中的有机溶剂为乙醇、甲醇和正己烷按重量比2:7:3组成。

与实施例2的区别在于，所述步骤S1中的溶剂为去离子水、柠檬烯和环己烷溶解甲醇可溶物按重量比1：1：1组成。

对比例3一种磷脂酰丝氨酸的制备方法

所述的磷脂酰丝氨酸的制备方法，所述制备方法包括：

S1、将70重量份的大豆卵磷脂和350重量份的溶剂加入均质机中混合，得到混合液I；

S2、向步骤S1所得的混合液I中加入75重量份的酶液混合均匀35h，混合温度为28℃，制得混合液II；

S3、向步骤S2所得的混合液II制得加入600重量份的有机溶剂萃取4次，制得磷脂酰丝氨酸半成品；

S4、将步骤S3所得的磷脂酰丝氨酸半成品顺次通过硅胶柱和阳离子交换树脂，制得磷脂酰丝氨酸。

所述步骤S1中的溶剂为去离子水、柠檬烯和环己烷溶解甲醇可溶物按重量比20：2：9组成。

所述步骤S2中的酶液为L-丝氨酸和磷脂酶D按重量比1:1组成，所述L-丝氨酸的浓度为0.18g/ml，所述磷脂酶D的酶活为4U/ml。

所述步骤S3中的有机溶剂为乙醇、甲醇和正己烷按重量比2:7:3组成。

与实施例2的区别在于，所述步骤S2中的酶液为L-丝氨酸和磷脂酶D按重量比为1:1组成。

试验例一、磷脂酰丝氨酸含量测定

1、试验材料：实施例1～3，对比例1～4制备的磷脂酰丝氨酸。

2、试验方法：通过HPLC法测定实施例1～3，对比例1～3制备的磷脂酰丝氨酸的含量。

3、试验结果

试验结果如表1所示。

表1磷脂酰丝氨酸含量测定

由表1可知，通过HPLC法测定的本发明实施例1～3制得的磷脂酰丝氨酸的含量，可得，实施例1～3的磷脂酰丝氨酸含量均在85％以上，其中实施例2的效果最好，磷脂酰丝氨酸的含量为92.1％，为本发明的最佳实施例。而当对比例1～2改变了制备步骤S2中的溶剂的组分及含量时，以及对比例3中改变了制备步骤S3中酶液的组分比例时，所得的磷脂酰丝氨酸的含量有了大幅的下降，说明了本发明的制备方法各步骤及添加的各成分配比合理，协同作用，通过提高了本发明中制得的磷脂酰丝氨酸的含量。

上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。