阅读说明：本技术 从甲壳类捕获物中生产蛋白质磷脂复合物的方法 (Method for producing protein phospholipid complex from crustacean capture ) 是由 英奇·布鲁海姆 斯蒂格·瑞莫伊 于 2018-11-30 设计创作，主要内容包括：本发明请求保护一种从含蛋白质的甲壳类捕获物中生产蛋白质磷脂复合物的方法,其中水解反应发生,而甲壳类捕获物中的蛋白质未发生实质性变性。还要求保护一种从甲壳类捕获物中生产稳定蛋白质磷脂乳液的方法。还要求保护一种生产甲壳动物油的方法,其中该油分离自经水解的甲壳类捕获物。请求保护其它生产蛋白质磷脂复合物的方法,其涉及不去壳、去壳、以及去壳后再加回壳以形成该蛋白质磷脂复合物。(The present invention claims a method for producing protein phospholipid complexes from protein-containing crustacean traps, wherein hydrolysis occurs without substantial denaturation of the proteins in the crustacean traps. A method of producing a stable protein phospholipid emulsion from a crustacean trap is also claimed. Also claimed is a process for producing a crustacean oil, wherein said oil is separated from a hydrolysed crustacean trap. Other methods of producing protein phospholipid complexes are claimed which involve no shelling, and adding the shell back after shelling to form the protein phospholipid complex.)

从甲壳类捕获物中生产蛋白质磷脂复合物的方法

技术领域

本申请要求提交于2017年12月4日的美国临时申请系列号62/594,105的权益，将其以参考形式引入本文。

背景技术

近年来，科学研究表明富含欧米茄-3(ω-3)脂肪酸(如二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA))的饮食对健康有益。这些脂肪酸已被证明是维持大脑健康所必需的，研究表明它们还能够促进心血管健康，减少炎症，预防关节炎，改善胃健康，同时还具有抗抑郁作用。

欧米茄-3脂肪酸天然存在于各种食物中，包括某些鱼类、甲壳类动物、坚果和种子等。此外，欧米茄-3脂肪酸的浓缩物形式构成了维生素和补充剂产业的一个重要部分。在欧米茄-3脂肪酸的动物源性来源中，鱼油作为一种受欢迎的维生素来源而受到重视。然而，鱼油胶囊有一个缺点，即通常会留下“鱼腥味”。

科学家正在研究欧米茄-3脂肪酸的替代来源，以确定它们是否具有更好的生物利用性。例如，一些研究初步表明，源自南极磷虾的磷虾油可能是欧米茄-3脂肪酸的一个优质来源，因为它比鱼油更具有更好的生物利用性。请参见Ramprasath等发表于《健康与疾病中的脂质》(2013，12:178)的文章，“健康人群服用从磷虾油中获得的n-3脂肪酸补充剂4周后，相对于鱼油，其欧米茄-3指数可见增强性的增加”，以及Schuchardt等发表于《健康与疾病中的脂质》(2011，10:145)的文章，“EPA和DHA在不同欧米茄-3脂肪酸配方中的血浆磷脂中的结合-鱼油与磷虾油的生物利用度比较研究”。有人推测，这些欧米茄-3脂肪酸附着在磷脂上，从而使其比附着在甘油三酯上的鱼类来源的欧米茄-3脂肪酸具有更高的生物利用度。见Schuchardt等。此外，磷虾作为世界上最大的生物量，同时每年只收获不到1％的海洋磷虾，因此其是可持续的资源；磷虾也在市场推广中被认为没有余味，同时其汞含量微不可测的；并且磷虾含有抗氧化剂虾青素。

虽然磷虾油似乎是欧米茄-3脂肪酸的优质来源，但仍然需要一种更好的方法来加工磷虾，以收获欧米茄-3脂肪酸，并生产出一种生物可利用、含水量和其他污染物低的产品，并允许在下游进行进一步的加工以利用磷虾蛋白生产优质磷虾油和其他产品。更具体地说，需要一种生产蛋白质磷脂复合物的新方法，其中消化酶通过水解失活，而磷虾内的蛋白质在水解步骤中并不发生实质性的变性，以及需要一种生产稳定的蛋白质磷脂乳液的新方法，其中乳液不分离，而且其水分含量足够低以防止微生物生长。

发明内容

本发明的一个方面涉及一种生产蛋白质磷脂复合物(PPC)的方法，其步骤包括：a)对甲壳类捕获物进行粉碎以提供含蛋白质的经粉碎的甲壳类捕获物；b)将经粉碎的甲壳类捕获物与蛋白水解酶接触以提供经水解的甲壳类捕获物而不使蛋白质发生实质性变性；和c)分离经水解的甲壳类捕获物以提供PPC。

在一个实施方案中，上述接触步骤包括第二酶。优选地，所述第二酶可包括几丁质酶、胶原酶或另一种蛋白水解酶。蛋白水解酶优选为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶的混合物。

在一个实施方案中，上述接触步骤中的蛋白水解酶包括金属内肽酶中的至少一种。在另一实施方案中，所述蛋白水解酶不包括外肽酶。

在一个实施方案中，上述接触步骤包括与第一蛋白酶混合物和第二蛋白酶混合物接触。所述第一蛋白酶混合物含有至少一种碱性蛋白酶，而所述第二蛋白酶混合物含有酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。

优选地，所述第一蛋白酶混合物包括经粉碎的甲壳类捕获物总重量的0.3-0.5％；而所述第二蛋白酶混合物包括经粉碎的甲壳类捕获物总重量的0.03-0.05％。

在优选实施方案中，所述蛋白酶来自地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)。

在一个实施方案中，上述接触步骤包括与细胞壁降解酶接触。

优选地，经粉碎的甲壳类捕获物与蛋白水解酶接触超过100分钟以提供经水解的甲壳类捕获物。所述接触步骤可以包括有机溶剂。所述接触步骤可以包括在45-75℃的温度范围内温育经粉碎的甲壳类捕获物。

经粉碎的甲壳类动物优选是磷虾。在上述粉碎步骤中，所述甲壳类捕获物可通过制浆、碾磨、研磨和/或碎片化(shredding)进行处理。

用该方法生产的PPC含有小于15％w/w的水含量。

磷虾中的蛋白质可以包括消化酶和其他蛋白质(消化酶除外)。

本发明的另一方面涉及一种制备稳定的蛋白质磷脂乳液的方法，其步骤包括：a)将甲壳类捕获物进行粉碎以提供经粉碎的甲壳类捕获物；b)将经粉碎的甲壳类捕获物与蛋白水解酶接触以提供经水解的甲壳类捕获物；以及c)分离经水解的甲壳类捕获物以提供稳定的蛋白质磷脂乳液。

在一个实施方案中，上述接触步骤包括第二酶。优选地，所述第二酶可包括几丁质酶、胶原酶或另一种蛋白水解酶。所述蛋白水解酶优选为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶的混合物。

经粉碎的甲壳类动物优选的是磷虾。在上述粉碎步骤中，所述甲壳类捕获物可通过制浆、碾磨、研磨和/或碎片化进行处理。

在一个实施方案中，上述接触步骤中的蛋白水解酶包括至少一种金属内肽酶。在另一实施方案中，所述蛋白水解酶不包括外肽酶。上述接触步骤还可包括有机溶剂。

上述接触步骤可包括在45-75℃的温度范围内温育经粉碎的甲壳类捕获物。

根据该方法生产的蛋白质磷脂乳液可包括v/v45-55％v/v的水含量。

本发明的另一方面涉及一种稳定的蛋白质磷脂乳液，包括水、蛋白质和脂质。

本发明的另一方面涉及一种生产甲壳类油的方法，其步骤包括：a)粉碎甲壳类捕获物以提供含蛋白质的经粉碎的甲壳类捕获物；b)将经粉碎的甲壳类捕获物与蛋白水解酶接触以提供经水解的甲壳类捕获物而不使蛋白质发生实质性变性；以及c)分离经水解的甲壳类捕获物以提供甲壳类油。

优选地，所述甲壳动物油是磷虾油，经粉碎的甲壳动物捕获物是经粉碎的磷虾。优选地，所述蛋白水解酶包括酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶的混合物。在一个实施方案中，该方法在没有提取(extraction)步骤的情况下执行。

本发明的另一方面涉及一种营养补充剂，包括甲壳类动物油和选自由以下项组成的组中的另一种油：亚麻籽油、南瓜籽油、油菜籽(canola oil)、大豆油、核桃油、鱼油、海豹油、微藻油、贻贝油和虾油。优选的，所述油是绿唇贻贝油。另外，优选的甲壳动物油是磷虾油。

本发明的另一方面涉及一种生产蛋白质磷脂复合物的方法，其步骤包括a)粉碎甲壳类捕获物以提供含蛋白质的经粉碎的甲壳类捕获物；b)将经粉碎的甲壳类捕获物与蛋白水解酶接触以提供经水解的甲壳类捕获物而不使蛋白质变性；以及c)分离经水解的甲壳类捕获物以提供蛋白质磷脂复合物，其中在上述分离步骤中，壳不会从经水解的甲壳类捕获物中移除并且是蛋白质磷脂复合物的一部分。优选的，所述甲壳类捕获物是磷虾。

本发明的另一方面涉及一种生产蛋白质磷脂复合物的方法，其步骤包括a)粉碎甲壳类捕获物以提供含蛋白质的经粉碎的甲壳类捕获物；b)将经粉碎的甲壳类捕获物与蛋白水解酶接触以提供经水解的甲壳类捕获物而不使蛋白质变性；以及c)分离经水解的甲壳类捕获物以提供蛋白质磷脂复合物，其步骤包括(1)将壳从经水解的甲壳类捕获物中分离；(2)对经水解的甲壳类捕获物进行巴氏杀菌，以使酶失活；(3)通过分离去除多余的水；以及(4)向经水解的甲壳类捕获物中添加壳，以提供蛋白质磷脂复合物。

优选地，在步骤(1)中，可以用过滤器或筛子将壳与经水解的甲壳类捕获物分离。在另一优选实施方案中，在步骤(3)中可以通过水平离心机去除多余的水。在步骤(4)中，出于实用的目的，优选的，将壳单独地或与不溶性颗粒一起添加回来。

本发明的优点是，可以对水解参数(包括酶)进行选择以使得消化酶失活(即水解)，同时所有蛋白质的损伤最小，也即没有实质性的变性并且可供将来使用，从而使得每次捕获的价值最大化。此外，与变性蛋白质相比，部分水解蛋白质能够以不利于生物生长的形式保留更多的水，这意味着PPC可能含有更高水平的水，这有利于整体加工性和贮存性，而不会增加生物活性。经水解的蛋白质对水生物种也具有很高的可消化性和营养价值，因此生产磷虾油的副产品可以整合进水产饲料中。

另一个优点是制备稳定的蛋白质磷脂乳液，该乳液在高温下不会分离，并且含有低水含量以防止微生物活动，并且可能有利于运输。PPC和稳定的蛋白质磷脂乳液都可以进一步加工，从而可以提取高质量的甲壳类动物油，并且剩余的水解蛋白也可以进行进一步的利用。

附图说明

图1是生产蛋白质磷脂复合物的方法的一个实施方案的流程图。在该流程图中，虚线表示可选步骤。例如，外骨骼组分可以在水解步骤之后可选地移除，并且在经水解的磷虾经过巴氏杀菌并且去除多余的水之后可选地地添加回来。

图2是生产乳液或油的方法的一个实施方案的流程图。

具体实施方式

本发明的一个方面涉及一种生产蛋白质磷脂复合物(PPC)的方法。特别的，该方法的加工参数确保磷虾中天然存在的消化酶在水解过程中失活，同时保持未被水解相关加工条件实质性变性的高质量蛋白质。

甲壳类捕获物

第一步涉及提供甲壳类捕获物。甲壳类是指具有外骨骼并被归类为甲壳亚门一部分的任何海洋生物。甲壳类捕获物包括但不限于磷虾、虾、龙虾、螃蟹、水蚤和/或藤壶。优选的，所述甲壳类捕获物是磷虾，例如南极磷虾(Euphausia Superba)。甲壳类捕获物可以是新鲜的或之前冷冻过的。然而，在60分钟内捕获的新鲜磷虾是优选的待加工的甲壳类捕获物，在30分钟内捕获的新鲜磷虾是更优选的待加工的甲壳类捕获物。

粉碎甲壳类捕获物

将甲壳类捕获物进行粉碎(对于刚捕获的磷虾，进行立即粉碎)，以形成粉碎的甲壳类捕获物。粉碎包括机械地将甲壳类捕获物破解成更小的碎片或更小的颗粒大小，以便更有利于后续的加工步骤。以下数值可以以任何方式组合，以产生粉碎的甲壳类捕获物颗粒大小的最小值、最大值或其范围：1mm、2mm、3mm、4mm、5mm、6mm、7mm、8mm、9mm、10mm、11mm、12mm、13mm、14mm、15mm、16mm、17mm、18mm、19mm、20mm、21mm、22mm、23mm、24mm和25mm。例如，粉碎的甲壳类捕获物的颗粒大小可以是约1-25mm，优选的约3-15mm，更优选的约3-6mm。

甲壳类捕获物可使用任何常规方法粉碎，以实现特定颗粒大小范围。例如，粉碎装置可以研磨、制浆、碾磨和/或碎片化甲壳类捕获物。粉碎装置的实例包括但不限于刀式碎片化机、搅拌机和均质机。

粉碎过程发生的温度大约为甲壳类捕获物新鲜(例如在60分钟内捕获的磷虾)捕获时的水的环境温度。因此，温度可以介于约-2℃和约+l℃之间，优选的，约0℃到约+6℃。

水解

第二步涉及用一种或多种蛋白水解酶接触粉碎的甲壳类捕获物，以提供水解的甲壳类捕获物。水解的甲壳类捕获物是在粉碎的甲壳类捕获物发生水解反应时形成的。水解是一种化学反应或过程，可由生物剂(如蛋白水解酶)引起或介导，从而使天然蛋白质序列变短(即，例如，通过破坏氨基酸序列一级结构的肽键)以形成较小的肽和游离氨基酸。

粉碎后的甲壳类捕获物需要被水解，以便使甲壳类捕获物在死亡时释放的消化酶(如脂肪酶和磷脂酶)失活。如果这些消化酶在释放后没有失活，那么它们将破坏甲壳类捕获物中的磷脂和脂肪酸。为了灭活消化酶，在一定条件下，将粉碎的甲壳类捕获物与蛋白水解酶接触，形成水解的甲壳类捕获物。蛋白水解酶是专为靶向消化酶而选择的，对磷虾体内的其他蛋白质的损伤最小，这些蛋白质可在下游利用，同时从粉碎的甲壳类捕获物的外骨骼中分离出一些磷脂和肽。

对于诸如酶的选择、温度、pH值和时间等水解条件进行选择，以获得具有特定水解程度的部分水解的甲壳类捕获物。部分水解的捕获物作为优选，这样可以使消化酶失活，而其他蛋白质可以分解成更小的肽和游离氨基酸。相比之下，完全水解的甲壳类捕获物并非优选，因为这将意味着捕获物中的所有蛋白质都被分解成游离氨基酸。

水解度可以通过本领域已知的方法来确定，例如pH-stat、三硝基苯磺酸(TNBS)、邻苯二甲醛(OPA)、三氯乙酸可溶性氮(SN-TCA)和甲醛滴定法。以下百分比可组合成一个范围，或单独用作最小值或最大值，用以指定水解度：10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％和99％。例如，甲壳类捕获物中超过约30％的蛋白质被水解。更优的，甲壳类捕获物中超过约40％的蛋白质被水解。在另一实施方案中，水解度可高至90％，用以指定水解几乎完成。

此外，部分水解的蛋白质可以增加蛋白质的消化率。例如，部分水解的蛋白的消化率(pepsic digestibility)大约为85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％或95％。优选的，部分水解蛋白质的消化率约为91％。增加的消化率意味着部分水解的蛋白质对不能合成必需氨基酸的动物有营养。因此，对于将部分水解的蛋白质副产品用作水生物种和/或宠物的饲料补充对很多人有兴趣。

消化率可通过标准的体内操作或较新体外操作进行测量。此前，研究人员使用大鼠、公鸡(rooster)和/或鸡(chicken)来测定动物在喂饲含蛋白质化合物时经消化的蛋白质的量，从而在体内确定消化率。对动物粪便中的氮含量进行分析，可以指示产品中可消化蛋白质的含量。较新一些的方法是通过向与胺官能团或羧酸官能团反应的水解蛋白质溶液中添加光谱试剂来体外确定蛋白质消化率的，从而可以光学地评估酶消化过程中释放的氨基酸酸量。

此外，可以特异性对蛋白水解酶、水解条件和水解持续时间进行选择来灭活消化酶，而不使磷虾内的任何蛋白质(包括消化酶和其他蛋白质，也即除消化酶以外的蛋白质)发生实质性的变性。变性发生在蛋白质失去其原有的四级、三级和/或二级结构时。

在另一实施方案中，消化酶未变性或其他蛋白质未变性。未经变性的部分水解的蛋白质是优选的，因为它们被发现以不适于生物生长的形式保留大量水，比以不适于生物生长的形式保留较少水的变性蛋白质多2、3、4、5、6、7、8、9或10倍的时间。保水能力可以通过提高产品的流动性和贮存性来提高PPC的利用率。因此，能够使得PPC或含有部分水解的蛋白质的任何其他下游产品在较长时间内保持大量的水而不促进生物生长则是有利的。

其他蛋白质没有发生实质性变性，可以定义为磷虾内其他蛋白质变性的比例为0％，小于1％、小于2％、小于3％、小于4％、小于5％、小于6％、小于7％、小于8％、小于9％、小于10％、小于20％、小于25％，或小于30％。

优选的，水解反应在粉碎的甲壳类捕获物与蛋白水解酶接触并温育时发生。温育的最佳温度是激活特定酶的温度，该酶有助于消化酶的水解，而不会使甲壳类捕获物中的其他蛋白质发生变性。通过本领域已知的任何方法可以在处理过程中获得所述温度。优选地，将蛋白水解酶添加到热水中，然后在搅拌下与粉碎的甲壳类捕获物混合。或者，可以将蛋白水解酶添加到水中，然后加热混合物，或者将酶、水和粉碎的甲壳类捕获物混合在一起，然后加热。

以下百分比值可以进行组合，从而根据粉碎的捕获物的重量来确定接触步骤中添加的水量的最小值、最大值或范围：35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％和55％。例如，水的添加量多至粉碎的捕获物重量的约50％。在另一个实例中，根据粉碎的捕获物重量添加约45％到约50％的水。

可将以下值进行组合用来确定粉碎甲壳类捕获物最佳水解(即温育)温度的最小值、最大值或范围：45℃、46℃、47℃、48℃、49℃、50℃、5l℃、52℃、53℃、54℃、55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃、6l℃、62℃、63℃、64℃、65℃、66℃、67℃，68℃、69℃、70℃、7l℃、72℃C、73℃、74℃和75℃。例如，接触步骤包括在约45℃到约75℃的温度范围内温育粉碎的甲壳类捕获物。这些温度可适用于水的温度或水、酶和/或粉碎的甲壳类混合物的温度。例如，在将水与蛋白水解酶混合之前，可将水加热至约60℃的温度。在另一实例中，酶在约45℃至约65℃下可最佳地发挥作用。

所使用的酶的量可由本领域普通技术人员确定，以使足够的消化酶失活而不使磷虾内的其他蛋白质发生实质性变性，并从粉碎的甲壳类捕获物的外骨骼中分离一些磷脂和肽。

例如，蛋白水解酶的用量可小于粉碎的甲壳类捕获物总重量的约0.1％。以下数值可以以任何方式组合，从而确定蛋白水解酶的量占粉碎甲壳动物总重量百分比的包含最小值和最大值的范围：0.3％、0.29％、0.28％、0.27％、0.26％、0.25％、0.24％、0.23％、0.22％、0.21％、0.2％、0.19％、0.18％、0.17％、0.16％、0.15％、0.14％、0.13％、0.12％、0.11％，0.1％，0.09％，0.08％，0.07％，0.06％，0.05％，0.04％，0.03％，0.02％和0.01％。在一个实施方案中，蛋白水解酶可在步骤b)中使用，基于粉碎的甲壳动物捕获物的总重量，其用量约为0.01％至0.1％。

可以对溶液的pH值进行调整，以确保基于所使用的特定蛋白水解酶以最佳方式进行水解。

水解步骤可能需要任何合理的时间来生成水解的甲壳类捕获物。影响水解所需时间的因素包括混合物的温度和pH值，以及反应是否在搅拌条件下，以及多大的搅拌强度。

例如，水解可能需要不到100分钟。以下以分钟为单位的值可以以任何方式组合以确定水解所需时间的最小值和最大值的范围：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39和40。例如，水解可能需要约15-18分钟，或者水解可能需要不到约45分钟。

在另一实施方案中，水解可能需要超过100分钟。以下以分钟为单位的值可以以任何方式组合以确定水解所需时间的最小值和最大值的范围：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110，115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235和240。例如，水解可能需要约100-180分钟，或者水解可能需要不到约180分钟。

蛋白水解酶

本发明中有用的蛋白水解酶是食品级酶，其通过水解沿着蛋白质主链的肽键将大蛋白分子切割成小分子。如本文所使用的，术语“蛋白水解酶(proteolytic enzyme)”、“蛋白酶(protease)”和“肽酶(peptidase)”可互换使用。如本文所使用的，术语“外肽酶”是指通过切割肽键去除肽或蛋白质的末端氨基酸的水解酶。末端氨基酸是在蛋白质或肽的N-末端或C-末端的大约10个氨基酸内的氨基酸。如本文所用，术语“内肽酶”是指催化多肽或蛋白质内肽键断裂的酶。肽酶是指它作用于肽键，而内肽酶是指这些是内键。

蛋白水解酶包括但不限于酯酶，如羧酸酯水解酶、硫酯水解酶、磷酸单酯水解酶、磷酸酶、磷酸二酯水解酶、三磷酸单酯水解酶、硫酸酯水解酶、硫酸酯酶、二磷酸单酯水解酶和磷酸三酯水解酶；糖基化酶，如糖苷酶，即水解O-和S-糖基化合物的酶以及水解N-糖基化合物的酶；作用于醚键(如水解硫醚和三烷基磺酸)的酶；肽酶，包括外肽酶，如氨基肽酶、二肽基肽酶和三肽基肽酶，羧肽酶(丝氨酸型羧肽酶、金属羧肽酶、半胱氨酸型羧肽酶)，二肽酶，欧米茄肽酶和肽基二肽酶，以及内肽酶，如丝氨酸内肽酶、半胱氨酸内肽酶、天冬氨酸内肽酶、金属内肽酶(如Ab Enzymes公司的7089，CAS 9001-92-7)，以及苏氨酸内肽酶；在单个亚类中水解卤化碳化合物的酶；作用于磷氮键的酶；作用于硫氮键的酶；水解C-磷酸基的酶；作用于硫硫键的酶；以及作用于碳硫键的酶。

以上每一类水解酶的例子如下。羧酸酯水解酶包括羧酸酯酶、芳基酯酶、三酰甘油脂肪酶、磷脂酶A2、溶血磷脂脂肪酶、乙酰酯酶、乙酰胆碱酯酶、胆碱酯酶、托啡酯酶、果胶酯酶、固醇酯酶、叶绿素酶、L-阿拉伯内酯酶、葡萄糖醛酸乳糖酶、尿醛酸乳糖酶、单宁酶、羟丁酸二聚体水解酶、酰甘油脂肪酶、3-氧代苹果酸烯醇乳糖酶、l,4-乳糖酶、半乳糖脂肪酶、4-吡哆醇内酯酶、酰肌醇水解酶、氨基酰tRNA水解酶、D-阿拉伯内酯酶、6-磷酸葡萄糖内酯酶、磷脂酶Al、6-乙酰葡萄糖脱乙酰基酶、脂蛋白脂肪酶、二氢香豆素水解酶、柠檬酸-D-环-内酯酶、类固醇内酯酶、三醋酸内酯酶、放线菌素内酯酶、Orssellinate-depside水解酶、头孢菌素C脱乙酰基酶、氯化水解酶、α-氨基酸酯酶、4-甲基草酰乙酸酯酶、羧甲基丁烯醇酸酶、脱氧水杨酸A-环-内酯酶、1-烷基-2-乙酰甘油磷酸胆碱酯酶、镰刀菌素C-鸟氨酸酯酶、芥子碱酯酶、蜡酯水解酶、佛波醇二酯水解酶、磷脂酰肌醇脱乙酰基酶、唾液酸O-乙酰酯酶、乙酰氧基丁酸基苯脱乙酰基酶、乙酰水杨酸脱乙酰基酶、甲基伞形乙酸酯脱乙酰基酶、2-吡喃酮-4,6-二羧酸内酯酶、N-乙酰半乳糖氨基聚糖脱乙酰基酶、保幼激素酯酶、邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯酯酶、蛋白质谷氨酸甲酯酯酶、l-顺式维甲酸棕榈酸酯水解酶、维甲酸异构酶、l-鼠李素-1,4-内酯酶、5-(3,4-二乙酰氧基-1-炔基)-2,2'-二硫苯脱乙酰基酶、脂肪酰乙酯合酶、木糖醇-1,4-内酯酶、头孢曲酯苄酯酶、乙酰烷基甘油乙酰水解酶、乙酰木聚糖酯酶、阿魏酸酯酶、角质酶、聚(3-羟基丁酸)解聚酶、聚(3-羟基辛酸)解聚酶、酰氧基酰水解酶、多聚尿苷醛酯酶、激素敏感脂肪酶、乙酰苹果酸酯酶、群体猝灭N-酰基高丝氨酸内酯酶、磷酸酯酶、单萜ε-内酯水解酶、可卡因酯酶、吡甲酰-[酰基载体蛋白]甲酯酯酶、鼠李糖乳糖醛酸乙酰酯酶、伏马菌素B1酯酶、拟除虫菊酯水解酶、蛋白磷酸酶甲基酯酶-l、全反式维甲酸酯13顺式异构酶、2-氧代-3-(5-氧呋喃-2-亚基)丙酸内酯酶、4-磺基脲内酯水解酶、霉酚酸酰葡萄糖醛酸酯酶、云芝半缩醛醋酸酯酯酶、阿克拉霉素甲基酯酶、D-氨基酰-tRNA脱酰基酶、甲基化二甲川甲基水解酶、[Wnt蛋白]O-棕榈酰-L-丝氨酸水解酶、6-脱氧-6-磺基葡萄糖醛酸乳糖酶、叶绿素a水解酶、聚(对苯二甲酸乙二酯)水解酶以及单(对苯二甲酸乙二酯)水解酶。

硫酯水解酶包括乙酰辅酶A水解酶、棕榈酰辅酶A水解酶、琥珀酰辅酶A水解酶、3-羟基异丁酰辅酶A水解酶、羟甲基戊二酰辅酶A水解酶、羟酰谷氨酰胺水解酶、谷胱甘肽硫酯酶、甲酰辅酶A水解酶、乙酰乙酰辅酶A水解酶、S-甲酰谷胱甘肽水解酶、S-琥珀酰谷胱甘肽水解酶、油酰-[酰基载体蛋白]水解酶、柠檬酸裂解酶脱乙酰酶、(S)-甲基丙二酰辅酶A水解酶、ADP-依赖短链酰基辅酶A水解酶、ADP-依赖中链酰基辅酶A水解酶、酰基辅酶A水解酶、十二烷基-[酰基载体蛋白]水解酶、棕榈酰[蛋白]水解酶、4-羟基苯甲酰辅酶A硫酯酶、苯乙酰辅酶A水解酶、胆红素辅酶A水解酶、1,4-二羟基-2-萘甲酰辅酶A水解酶、氟乙酰辅酶A硫酯酶、(3S)-苹果酰辅酶A硫酯酶、二氢莫纳可林L-[洛伐他汀非酮类合酶]硫酯酶以及2-氨基苯甲酰辅酶A硫酯酶。

磷酸单酯水解酶包括碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、磷酸丝氨酸磷酸酶、磷脂酸磷酸酶、5'-核苷酸酶、3'-核苷酸酶、3'(2'),5'-二磷酸核苷酸酶、3-植酸酶、葡萄糖-6-磷酸酶、葡萄糖-1-磷酸酶、果糖双磷酸酶、海藻糖磷酸酶、甲基磷酸硫甘油酸磷酸酶、组氨酸磷酸酶、蛋白-丝氨酸/苏氨酸磷酸酶、[磷酸化酶]磷酸酶、磷酸乙醇酸磷酸酶、甘油-2-磷酸酶、磷酸甘油酸磷酸酶、甘油-1-磷酸酶、甘露醇-1-磷酸酶、糖磷酸酶、蔗糖磷酸磷酸酶、肌醇磷酸磷酸酶、4-植酸酶、磷脂酰甘油磷酸酶、ADP-磷酸甘油酸磷酸酶、N-酰基神经氨酸-9-磷酸酶、核苷酸酶、多核苷酸3'-磷酸酶、多核苷酸5'-磷酸酶、脱氧核苷酸3'-磷酸酶、胸腺嘧啶酸5'-磷酸酶、磷酸肌醇5-磷酸酶、景天庚酮糖双磷酸酶、3-磷酸甘油酸磷酸酶、链霉素-6-磷酸酶、胍脱氧核糖基-scyllo-肌醇-4-磷酸酶、4-硝基苯基磷酸酶、[糖原-合成酶-D]磷酸酶、[丙酮酸脱氢酶(乙酰转移)]-磷酸酶、[乙酰辅酶A羧化酶]-磷酸酶、3-脱氧甘露醇-八烯酸-8-磷酸酶、果糖-2,6-二磷酸2-磷酸酶、[羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(NADPH)]-磷酸酶、蛋白酪氨酸-磷酸酶、[丙酮酸激酶]-磷酸酶、山梨醇-6-磷酸酶、多萜基磷酸酶、[3-甲基-2-氧代丁酸脱氢酶(2-甲基丙醇基转移)]-磷酸酶、[肌球蛋白轻链]磷酸酶、果糖-2,6-二磷酸6-磷酸酶、钙调素结合蛋白磷酸酶、肌醇-聚磷酸5-磷酸酶、肌醇-l,4-二磷酸1-磷酸酶、糖末端-磷酸酶、烷基乙酰甘油磷酸酶、磷酸烯醇丙酮酸磷酸酶、多肌醇聚磷酸磷酸酶、2-羧基-D-阿糖醇-l-磷酸酶、磷脂酰肌醇-3-磷酸酶、磷脂酰肌醇-3,4-二磷酸4-磷酸酶、磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸3-磷酸酶、2-脱氧葡萄糖-6-磷酸酶、葡萄糖基甘油3-磷酸酶、甘露糖基-3-磷酸甘油酸磷酸酶、2-磷酸硫辛酸磷酸酶、5-植酸酶、腺苷钴胺/α-利巴唑磷酸酶、吡哆醛磷酸酶、磷酸乙醇胺/磷酸胆碱磷酸酶、磷脂磷酸磷酸酶、酸性还原酮合酶、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸4-磷酸酶、甘露糖基果糖磷酸磷酸酶、2,3-二磷酸甘油酯3-磷酸酶、二酰甘油二磷酸磷酸酶、D-甘油-β-D-甘露糖-庚糖l,7-二磷酸7-磷酸酶、D-甘油-α-D-甘露糖-庚糖1,7-二磷酸7-磷酸酶、ADP核糖1”-磷酸磷酸酶、葡萄糖基-3-磷酸甘油酸磷酸酶、磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸5-磷酸酶、2-羟基-3-酮-5-甲基硫戊烯基-l-磷酸磷酸酶、5”-磷酸核糖霉素磷酸酶、5'-脱氧核苷酸酶、麦芽糖6'-磷酸磷酸酶、7-甲基鸟苷核苷酸酶、kanosamine-6-磷酸磷酸酶、L-半乳糖1-磷酸酶、D-半乳糖1-磷酸酶、磷脂酰肌醇-3,5-二磷酸3-磷酸酶、假尿苷5'-磷酸酶、3',5'-核苷二磷酸磷酸酶、IMP-特异性5'-核苷酸酶、硫胺磷酸磷酸酶、缬草胺A7'-磷酸磷酸酶、FMN水解酶、3-脱氧-D-甘油-D-半乳糖-非ulopyranosonate 9-磷酸酶、5-氨基-6-(5-磷酸-D-核糖氨基)尿嘧啶磷酸酶以及N-乙酰-D-muramate-6-磷酸磷酸酶。

磷酸二酯水解酶包括磷酸二酯酶I、甘油磷酸胆碱磷酸二酯酶、磷脂酶C、磷脂酶D、磷酸肌醇磷酸酯酶C、鞘氨醇磷酸二酯酶、丝氨酸乙醇胺磷酸二酯酶、[酰基载体蛋白]磷酸二酯酶、2',3'-环核苷酸2'-磷酸二酯酶、3',5'-环核苷酸磷酸二酯酶、3',5'-环GMP磷酸二酯酶、2',3'-环核苷酸3'磷酸二酯酶、甘油磷酸胆碱胆碱磷酸二酯酶、烷基甘油磷酸乙醇胺磷酸二酯酶、CMP-N-酰基神经氨酸磷酸二酯酶、鞘磷脂磷酸二酯酶D、甘油-1,2-环磷酸2-磷酸二酯酶、甘油磷酸肌醇肌醇磷酸二酯酶、甘油磷酸肌醇甘油磷酸二酯酶、N-乙酰葡萄糖胺-l-磷酸二酯α-N-乙酰葡萄糖胺苷酶、甘油磷酸二酯磷酸二酯酶、长萜基磷酸葡萄糖磷酸二酯酶、长萜基磷酸甘露糖磷酸二酯酶、糖基磷脂酰肌醇磷脂酶D、葡萄糖-l-磷酸-D-甘露糖基糖蛋白磷酸二酯酶、环鸟苷酸特异性磷酸二酯酶、3',5'-环腺苷酸磷酸二酯酶、N-乙酰磷脂酰乙醇胺-水解磷脂酶D、磷酸核糖基l,2-环磷酸磷酸二酯酶、7,8-二氢新喋呤2',3’-环磷酸二酯酶、磷酸核糖基l,2-环磷酸1,2-二磷酸二酯酶以及RNA2',3’-环3'-磷酸二酯酶。

三磷酸单酯水解酶包括dGTP酶。

硫酸酯水解酶包括芳基硫酸酯酶、甾基硫酸酯酶、糖硫酸酯酶、N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸酯酶、胆碱-硫酸酯酶、纤维素聚硫酸酯酶、大脑苷硫酸酯酶、软骨素-4-硫酸酯酶、软骨素-6-硫酸酯酶、二硫葡萄糖胺-6-硫酸酯酶、N-乙酰半乳糖胺-4-硫酸酯酶、艾杜糖-2-硫酸酯酶、N-乙酰氨基葡萄糖-6-硫酸酯酶、N-磺基葡糖胺-3-硫酸酯酶、单甲基硫酸酯酶、D-乳酸-2-硫酸酯酶、葡萄糖醛酸酯-2-硫酸酯酶以及和(R)特异性次级烷基硫酸酯酶。

二磷酸单酯水解酶包括异戊二烯基二磷酸酶、鸟苷-3',5'-双(二磷酸)3'-二磷酸酶、单萜烯基二磷酸酶、香叶基香叶基二磷酸二磷酸酶、法门基二磷酸酶、结核球蛋白醇合酶、异结核杆菌素合酶、(13E)-labda-7,13-二烯-15-醇合酶、香叶基二磷酸二磷酸酶，以及(+)-科拉韦洛尔合酶。

磷酸三酯水解酶包括芳基二烷基磷酸酶和二异丙基氟磷酸酶。

产生5'-磷酸单酯的外切脱氧核糖核酸酶包括外切脱氧核糖核酸酶I、外切脱氧核糖核酸酶III、外切脱氧核糖核酸酶(lambda诱导的)、外切脱氧核糖核酸酶(噬菌体SP3诱导的)、外切脱氧核糖核酸酶V、外切脱氧核糖核酸酶VII、腺苷-5'-二磷酸-5'-[DNA]二磷酸酶，以及鸟苷-5'-二磷酸-5'-[DNA]二磷酸酶。

产生3'-磷酸单酯的外切脱氧核糖核酸酶包括5'至3'外切脱氧核糖核酸酶(核苷3'-磷酸形成)，以及DNA-3'-二磷酸-5'-鸟苷二磷酸酶。

产生5'-磷酸单酯的外切核糖核酸酶包括外切核糖核酸酶II、外切核糖核酸酶H、寡核苷酸酶、聚(A)特异性核糖核酸酶，以及核糖核酸酶D。

产生3'-磷酸单酯的外切核糖核酸酶包括酵母核糖核酸酶。

具有核糖或脱氧核糖核酸活性并产生5'-磷酸单酯的外切核酸酶包括毒液外切核酸酶。

具有核糖核酸或脱氧核糖核酸活性并产生3'-磷酸单酯的外切核酸酶，如脾外切核酸酶；

产生5'-磷酸单酯的内切脱氧核糖核酸酶包括脱氧核糖核酸酶I、脱氧核糖核酸酶IV、I型位点特异性脱氧核糖核酸酶、II型位点特异性脱氧核糖核酸酶、III型位点特异性脱氧核糖核酸酶、CC-偏好性内切脱氧核糖核酸酶、脱氧核糖核酸酶V、T₄-脱氧核糖核酸酶II和T₄-脱氧核糖核酸酶IV。

产生3'-磷酸单酯的内切脱氧核糖核酸酶包括脱氧核糖核酸酶II。

曲霉菌脱氧核糖核酸酶K1包括交叉连接的内切脱氧核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶X。

对改变碱基具有特异性的位点特异性内切脱氧核糖核酸酶包括脱氧核糖核酸酶(嘧啶二聚体)。

产生5'-磷酸单酯的内切核糖核酸酶也包括在内。

绒胞菌多头核糖核酸酶包括核糖核酸酶α、核糖核酸酶III、核糖核酸酶H、核糖核酸酶P、核糖核酸酶IV、核糖核酸酶P4、核糖核酸酶M5、核糖核酸酶[聚(U)-特异性]、核糖核酸酶IX、tRN酶Z、核糖核酸酶E，以及逆转录病毒核糖核酸酶H；产生3'-磷酸单酯的内切核糖核酸酶，如核糖核酸酶T₂。

枯草芽孢杆菌核糖核酸酶包括核糖核酸酶T₁、核糖核酸酶U₂和胰腺核糖核酸酶。

肠杆菌核糖核酸酶包括核糖核酸酶F、核糖核酸酶V和rRNA内切核糖核酸酶。

还包括与核糖或脱氧核糖核酸具有活性并产生5'-磷酸单酯的内切核糖核酸酶、曲霉核酸酶Sl和粘质沙雷氏菌核酸酶。

与核糖或脱氧核糖核酸具有活性并产生3'-磷酸单酯的内切核糖核酸酶包括微球菌核酸酶。

还包括糖基化酶。

糖苷酶，即水解O-和S-糖基化合物的酶、包括α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡聚糖l,4-α-葡萄糖苷酶、纤维素、内切-l,3(4)-β-葡聚糖酶、菊粉酶、内切-l,4-β-木聚糖酶、低聚-l,6-葡萄糖苷酶、右旋糖酶、几丁质酶、聚半乳糖醛酸酶、溶菌酶、外切-α-唾液酸酶、α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶、β-呋喃果糖苷酶、α,α-海藻糖酶、β-葡萄糖醛酸酶、内切-1,3-β-木聚糖酶、淀粉-α-1,6-葡萄糖苷酶、透明质酸葡萄糖胺酶、透明质酸葡萄糖醛酸酶、木聚糖1,4-β-木糖苷酶、β-D-岩藻糖苷酶、葡聚糖内切1,3-β-D-葡萄糖苷酶、α-L-鼠李糖苷酶、支链淀粉酶、GDP-葡萄糖苷酶、β-L-鼠李糖苷酶、岩藻多糖酶、葡萄糖基神经酰胺酶、半乳糖基神经酰胺酶、半乳糖基半乳糖基神经酰胺酶、蔗糖α-葡萄糖苷酶、α-N-乙酰半乳糖苷酶、α-N-乙酰葡萄糖苷酶、α-L-岩藻糖苷酶、β-N-乙酰己糖胺酶、β-N-乙酰半乳糖胺酶、环麦芽糖糊精、非还原端α-L-阿拉伯糖呋喃糖酶、葡萄糖醛酸二糖葡萄糖醛酸酶、异支链淀粉酶、葡聚糖l,3-β-葡萄糖苷酶、葡聚糖内切-1,3-α-葡萄糖苷酶、葡聚糖l,4-α-麦芽糖四糖水解酶、霉菌葡聚糖酶、糖基神经酰胺酶、l,2-α-L-岩藻糖苷酶、2,6-β-果聚糖6-左聚糖生物水解酶、左旋聚糖酶、槲皮素酶、半乳聚糖l,4-α-半乳糖醛酸酶、异淀粉酶、葡聚糖l,6-α-葡萄糖苷酶、葡聚糖内切-l,2-β-葡萄糖苷酶、木聚糖l,3-β-木糖苷酶、地衣聚糖酶、葡聚糖1,4-β-葡萄糖苷酶、葡聚糖内切1,6-β-葡萄糖苷酶、L-艾杜糖苷酶、甘露聚糖1,2-(1,3)-α-甘露糖苷酶、甘露聚糖内切-1,4-β-甘露糖苷酶、果聚糖β-果糖苷酶、β-琼脂糖酶、外切聚-α-半乳糖醛酸酶、κ-角叉菜胶酶、葡聚糖1,3-α-葡萄糖苷酶、6-磷酸-β-半乳糖苷酶、6-磷酸-β-葡萄糖苷酶、荚膜多糖内切1,3-α-半乳糖苷酶-、非还原端β-L-阿拉伯吡喃糖苷酶、阿拉伯半乳聚糖内切-β-l,4-半乳糖苷酶、纤维素l,4-β-纤维二糖糖苷酶(非还原端)、肽聚糖β-N-乙酰壁酰胺酶、α,α-磷酸海藻糖酶、葡聚糖l,6-α-异麦芽糖苷酶、右旋糖酐l,6-α-异麦芽糖三糖苷酶、甘露糖基糖蛋白内切-β-N-乙酰葡萄糖苷酶、内切-α-N-乙酰半乳糖苷酶、葡聚糖l,4-α-麦芽己糖苷酶、阿拉伯聚糖内切-l,5-α-L-阿拉伯聚糖酶、甘露聚糖l,4-甘露二糖苷酶、甘露聚糖内切-l,6-a-甘露糖苷酶、血型物质内切-l,4-b-半乳糖苷酶、硫酸角质素-1,4-β-半乳糖苷酶、甾基-β-葡萄糖苷酶、3α(S)-精苷β-葡萄糖苷酶、甘露糖基低聚糖葡萄糖苷酶、蛋白质-葡糖基半乳糖基羟基赖氨酸葡萄糖苷酶、乳糖酶、内切半乳糖胺酶、l,3-α-L-岩藻糖苷酶、2-脱氧葡萄糖苷酶、甘露糖基低聚糖l,2-α-甘露糖苷酶、甘露糖基低聚糖l,3-l,6-α-甘露糖苷酶、分支右旋糖酐外切l,2-α-葡萄糖苷酶、葡聚糖l,4-α-麦芽三糖水解酶、苦杏仁苷β-葡萄糖苷酶、野黑樱苷β-葡萄糖苷酶、巢菜苷β-葡萄糖苷酶、低聚木葡聚糖β-葡萄糖苷酶、聚甘露糖醛酸水解酶、麦芽糖-6'-磷酸葡萄糖苷酶、内切糖苷神经酰胺酶、3-脱氧-2-辛酮糖苷酶(octulosonidase)、萝卡辛β-葡萄糖苷酶、松柏苷β-葡萄糖苷酶、l,6-α-L-岩藻糖苷酶、甘草酸水解酶、内切-α-唾液酸酶、糖蛋白内切-α-l,2-甘露糖苷酶、木聚糖α-l,2-葡萄糖醛酸酶、几丁质酶、葡聚糖l,4-α-麦芽糖水解酶、二果糖酸酐合酶、新支链淀粉酶、葡聚糖阿拉伯糖木聚糖内切-l,4-β-木聚糖酶、甘露聚糖外切-l,2-l,6-α-甘露糖苷酶、a-葡萄糖醛酸酶、乳糖-N-乙糖苷酶、4-α-D-{(l→4)-α-D-葡聚糖}海藻糖海藻糖水解酶、极限糊精酶、聚(ADP-核糖)糖水解酶、3-脱氧辛酮糖酸酶、半乳聚糖l,3-β-半乳糖苷酶、β-呋喃半乳糖苷酶、硫代葡萄糖苷酶、β-樱草苷酶、低聚木糖聚糖还原端特异性纤维二水解酶、木糖葡聚糖-特异性内切-β-1,4-葡聚糖酶、甘露糖基糖蛋白内切-β-甘露糖苷酶、果聚糖β-(2,1)-果糖苷酶、果聚糖β-(2,6)-果糖苷酶、木糖葡聚糖-特异性外切-β-1,4-葡聚糖酶、低聚糖还原端木聚糖酶、ι-角叉菜胶酶、α-琼脂糖酶、α-新琼脂糖-低聚糖水解酶、β-芹菜糖基-β-葡糖苷酶、λ-角叉菜胶酶、1,6-α-D-甘露糖苷酶、半乳聚糖内切-1,6-β-半乳糖苷酶、外切-1,4-β-D-氨基葡糖苷酶、类肝素酶、黄芩苷-β-D-葡糖醛酸酶、橙皮苷6-O-α-L-鼠李糖基-β-D-葡糖苷酶、蛋白质O-GlcNAc酶、甘露糖基甘油酸水解酶、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖水解酶、不饱和鼠李糖半乳糖醛酸基水解酶、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖半乳糖醛酸水解酶、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖鼠李糖水解酶、β-D-吡喃葡糖基脱落酸β-葡糖苷酶、纤维素1,4-β-纤维二糖糖苷酶(还原端)、α-D-木糖苷木糖水解酶、β-紫菜酶(porphyranase)、吉兰糖四糖不饱和葡糖醛酸糖基水解酶、不饱和软骨素二糖水解酶、半乳聚糖内切β-1,3-半乳聚糖酶、4-羟基-7-甲氧基-3-氧代-3,4-二氢-2H-1,4-苯并恶嗪-2-基葡糖苷β-D-葡糖苷酶、UDP-N-乙酰氨基葡糖2-表异构酶(水解)、UDP-N,N'-二乙酰基细菌胺2-表异构酶(水解)、非还原端β-L-阿拉伯呋喃糖苷酶、原薯蓣皂苷26-O-β-D-葡萄糖苷酶、(Ara-f)3-Hypβ-L-阿拉伯糖苷酶、avenacosidase、薯蓣皂苷糖苷酶(形成薯蓣皂苷元)、薯蓣皂苷糖苷酶(3-O-β-D-Glc-薯蓣皂苷元形成)、人参皂苷酶III型、人参皂苷Rb1β-葡萄糖苷酶、人参皂苷酶I型、人参皂苷酶IV型、20-O-多糖苷人参皂苷酶、极限糊精α-1,6-麦芽四糖水解酶、β-1,2-甘露糖苷酶、α-甘露聚糖内切1,2-α-甘露聚糖酶、磺基喹硫苷酶、外切几丁质(非还原末端)、外切几丁质酶(还原端)、内切几丁质酶、羧甲基纤维素酶、1,3-α-异麦芽糖苷酶、以及异麦芽糖葡糖水解酶。

水解N-糖基化合物包括嘌呤核苷酶、肌苷核苷酶、尿苷核苷酶、腺苷酸核苷酶、NAD+糖水解酶、ADP-核糖环化酶/环ADP-核糖水解酶、腺苷核苷酶、核糖嘧啶核苷酶、腺苷同型半胱氨酸核苷酶、嘧啶-5'-核苷酸核苷酶、β-天冬氨酸-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶、肌苷酸核苷酶、1-甲基腺苷核苷酶、NMN核苷酶、DNA脱氧核糖核酸糖基酶、甲基硫代腺苷核苷酶、脱氧核糖嘧啶内切核苷酶、[蛋白质ADP核糖精氨酸]水解酶、DNA-3-甲基腺嘌呤糖基酶I、DNA-3-甲基腺嘌呤糖基酶II、rRNAN-糖基酶、DNA-甲酰胺嘧啶糖基化酶、ADP-核糖-[二氮还原酶]水解酶、N-甲基核苷酶、futalosine水解酶、尿嘧啶DNA糖基化酶、双链尿嘧啶DNA糖基化酶、胸腺嘧啶DNA糖基化酶、和氨基脱氧futalosine核苷酶。

硫醚和三烷基磺酸水解酶包括腺苷同型半胱氨酸酶和腺苷蛋氨酸水解酶。

乙醚水解酶包括isochorismatase、溶酶体生成酶、反式环氧琥珀酸水解酶、白三烯-A4水解酶、肝氧蛋白-环氧水解酶、柠檬烯-l,2-环氧水解酶、微粒体环氧水解酶、可溶性环氧水解酶、胆固醇-5,6-氧化物水解酶、氧杂环庚三烯-CoA水解酶、chorismatase、2,4-二硝基苯甲醚O-脱甲基酶，和反式-2,3-二氢-3-羟基邻氨基苯甲酸合酶。

氨基肽酶包括亮氨酰氨肽酶、膜丙氨酰氨肽酶、胱氨酰氨肽酶、三肽氨基肽酶、脯氨酰氨肽酶、氨肽酶B、谷氨酰氨肽酶、Xaa-Pro氨肽酶、细菌亮氨酰氨肽酶、梭菌氨肽酶、胞浆丙氨酰氨肽酶、氨肽酶Y、Xaa-Trp氨肽酶、色氨酰氨肽酶、甲硫氨酰氨肽酶、D-立体特异性氨肽酶、氨肽酶Ey、天冬氨酰氨肽酶、氨肽酶I、PepB氨肽酶、氨肽酶S、Xaa-His二肽酶、Xaa-Arg二肽酶、Xaa-甲基-His二肽酶、Glu-Glu二肽酶、Xaa-Pro二肽酶、Met-Xaa二肽酶、非立体特异性二肽酶、胞浆非特异性二肽酶、膜二肽酶、b-Ala-His二肽酶、二肽酶E和D-Ala-D-Ala二肽酶。

二肽基肽酶和三肽基肽酶包括二肽基肽酶I、二肽基肽酶II、二肽基肽酶III、二肽基肽酶IV、二肽基二肽酶、三肽基肽酶I、三肽基肽酶II、Xaa-Pro二肽基肽酶和Xaa-Xaa-Pro三肽基肽酶、肽基二肽酶、如肽基二肽酶A、肽基二肽酶B、肽基二肽酶Dcp和藻青素、丝氨酸型羧肽酶、如溶酶体Pro-Xaa羧肽酶、丝氨酸型D-Ala-D-Ala羧肽酶、羧肽酶C和羧肽酶D、金属羧肽酶、如羧肽酶A、羧肽酶B、赖氨酸羧肽酶、Gly-Xaa羧肽酶、丙氨酸羧肽酶、壁氨酰五肽羧肽酶、羧肽酶E、谷氨酸羧肽酶、羧肽酶M、壁氨酰四肽羧肽酶、锌D-Ala-D-Ala羧肽酶、羧肽酶A2、膜Pro-Xaa羧肽酶、tubulinyl-Tyr羧肽酶、羧肽酶T、羧肽酶Taq、羧肽酶U、谷氨酸羧肽酶II、金属羧肽酶D和血管紧张素转换酶2。

半胱氨酸型羧肽酶包括组织蛋白酶X。

ω肽酶包括酰氨酰肽酶、肽基甘氨酸酰胺酶、焦谷氨酰肽酶I、b-天冬氨酰肽酶、焦谷氨酰肽酶II、N-甲酰甲硫酰基肽酶、g-谷氨酰水解酶、g-D-谷氨酰-间-二氨基庚二酸酯肽酶和泛素酰水解酶1。

丝氨酸内肽酶包括糜蛋白酶、糜蛋白酶C、metridin、胰蛋白酶、凝血酶、凝血因子Xa、纤溶酶、肠肽酶、顶体酶、a-裂解内肽酶、谷氨酰胺内肽酶、组织蛋白酶G、凝血因子VIIa、凝血因子IXa、黄瓜蛋白酶、脯氨酰寡肽酶、凝血因子Xia、brachyuran、血浆激肽释放酶、组织激肽释放酶、胰腺弹性蛋白酶、白细胞弹性蛋白酶、凝血因子XIIa、糜酶、补体亚组分Clr、补体亚组分Cls、经典补体途径C3/C5转化酶、补体因子I、补体因子D、补体途径C3/C5转化酶、cerevisin、hypoderminC、赖氨酰内肽酶、内肽酶La、g-肾素、venombin AB、亮氨酰内肽酶、类胰蛋白酶、scutelarin、kexin、枯草杆菌素、Oryzin、肽酶K、热霉素、热蛋白酶、内肽酶So、t-纤溶酶原激活剂、蛋白C(激活的)、胰内肽酶E、胰弹性蛋白酶II、IgA特异性丝氨酸内肽酶、u-纤溶酶原激活剂、venombin A、furin、成髓细胞素、semenogelase、颗粒酶A、颗粒酶B、链霉素A、链霉素B、谷氨酰胺基内肽酶II、寡肽酶B、鲎凝血因子C、鲎凝血因子B、鲎凝血酶、LexA阻遏酶、信号肽酶I、togavirin、黄素、内肽酶Clp、前蛋白转化酶1、前蛋白转化酶2、蛇毒因子V激活剂、lactocepin、次晶蛋白、hepacivirin、spermosin、sedolisin、黄单胞菌素、C末端处理肽酶、藻红菌素、甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2、菱形蛋白酶、hepsin、肽酶Do、HtrA2肽酶、基质蛋白酶、C5a肽酶、aqualysin1、位点l蛋白酶、疫病毒NS3多蛋白肽酶、马动脉炎病毒丝氨酸肽酶、传染性胰腺坏死双病毒Vp4肽酶、SpoIVB肽酶、角质层糜蛋白酶、激肽释放酶8、激肽释放酶13和输卵管素。

半胱氨酸内肽酶包括组织蛋白酶B、木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、灌藦蛋白酶、梭菌蛋白酶、链霉素、奇异果蛋白酶、组织蛋白酶L、组织蛋白酶H、组织蛋白酶T、甘氨酰内肽酶、癌症促凝剂、组织蛋白酶S、picornain3C、picornain2A、caricain、菠萝蛋白酶、茎菠萝蛋白酶、水果菠萝蛋白酶、豆蛋白酶、组织溶酶原、半胱天冬蛋白酶-1、牙龈卟啉菌蛋白酶R、组织蛋白酶K、adenain、博莱霉素水解酶、组织蛋白酶F、组织蛋白酶O、组织蛋白酶V、核包涵体a内肽酶、辅助组分蛋白酶、L肽酶、牙龈卟啉菌蛋白酶K、staphopain、分离酶、V-组织内肽酶、cruzipain、钙蛋白酶-L、钙蛋白酶-2、钙蛋白酶-3、半胱天冬蛋白酶-2、半胱天冬蛋白酶-3、半胱天冬蛋白酶-4、半胱天冬蛋白酶-5、半胱天冬蛋白酶-6、半胱天冬蛋白酶-7、半胱天冬蛋白酶-8、半胱天冬蛋白酶-9、半胱天冬蛋白酶10、半胱天冬蛋白酶-11、肽酶1(螨)、calicivirin、zingipain、Ulpl肽酶、SARS冠状病毒主蛋白酶、分拣酶A和分拣酶B。

天冬氨酸内肽酶包括胃蛋白酶A、胃蛋白酶B、胃亚蛋白酶、凝乳酶、组织蛋白酶D、猪笼草蛋白酶、肾素、HIV-l retropepsin、前阿黑皮素转换酶、曲霉胃蛋白酶I、曲霉胃蛋白酶II、青霉胃蛋白酶、根霉胃蛋白酶、内座壳胃蛋白酶、毛霉胃蛋白酶、假丝酵母胃蛋白酶、saccharopepsin、红酵母胃蛋白酶、acrocylindropepsin、polyporopepsin、密孔菌胃蛋白酶、scytalidopepsin A、scytalidopepsin B、组织蛋白酶E、barrierpepsin、信号肽酶II、plasmepsin I、plasmepsinII、phytepsin、yapsin 1、thermopsin、前菌毛素肽酶、诺达病毒内肽酶、膜天冬氨酸蛋白酶1、膜天冬氨酸蛋白酶2、HIV-2retropepsin、纤溶酶原激活剂Pla、omptin、人内源性逆转录病毒K内肽酶、HycI肽酶。

金属内肽酶包括大响尾蛇金属内肽酶A、微生物胶原酶、白细胞溶素、间质胶原酶、脑啡肽酶、envelysin、IgA特异性金属内肽酶、前胶原N-内肽酶、thimet寡肽酶、溶神经素、溶基质素1、跨膜肽酶A、前胶原C-内肽酶、肽基Lys金属内肽酶、虾红素、溶基质素2、基质分解素、明胶酶A、弧菌溶血素、假溶血素、热溶血素、杆菌溶血素、金溶菌素、aureolysin、coccolysin、mycolysin、b溶菌金属内肽酶、肽基Asp金属内肽酶、中性粒细胞胶原酶、明胶酶B、利什曼溶蛋白、saccharolys in、gametolysin、deuterolysin、serralysin、大响尾蛇金属内肽酶B、大响尾蛇金属内肽酶C、atroxase、大响尾蛇金属内肽酶F、去整合素、horrilysin、ruberlysin、bothro pasin、bothrolysin、ophiolysin、trimerelysin I、trimerelysin II、mucrolysin、pitrilysin、胰岛素溶酶、O-唾液糖蛋白内肽酶、罗素溶素、线粒体中间肽酶、dactylysin、nardilysin、magnolysin、跨膜肽酶B、线粒体加工肽酶、巨噬细胞弹性蛋白酶、choriolysinL、choriolysinH、tentoxilysin、bontoxilysin、寡肽酶A、内皮素转换酶1、纤溶酶、jararhagin、fragilysin、溶葡球菌酶、flavastacin、snapal ysin、gpr内肽酶、papplaysin-l、膜型基质金属蛋白酶-1、ADAM10内肽酶、ADAMTS-4内肽酶、炭疽致死因子内肽酶、Ste24内肽酶、S2P内肽酶、ADAM 17内肽酶和AD AMTS 13内肽酶。

苏氨酸内肽酶包括蛋白酶体内肽酶复合物和HslU-HslV肽酶。

还包括未知催化机制的内肽酶。

作用于除肽键以外的碳氮键的线性酰胺包括天冬酰胺酶、谷氨酰胺酶、ω酰胺酶、酰胺酶、脲酶、β-脲酰丙酸酶、脲酰琥珀酶、甲酰天冬氨酸去甲酰化酶、芳基甲酰胺酶、甲酰四氢叶酸去甲酰酶、青霉素酰胺酶、生物素酶、芳基酰胺酶、N-酰基-脂肪族-L-氨基酸氨基水解酶、天冬氨酸酰化酶、乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶、酰基赖氨酸脱乙酰基酶、琥珀酰基-二氨基庚二酸酯去琥珀酸酶、烟酰胺酶、瓜氨酸酶、N-乙酰-β-丙氨酸脱乙酰基酶、泛酸酶、神经酰胺酶、胆酰甘氨酸水解酶、N-乙酰氨基葡萄糖-6-磷酸酯脱乙酰基酶、N4-(β-N-乙酰氨基葡萄糖基)-L-天冬酰胺酶、N-乙酰壁氨酰-L-丙氨酸酰胺酶、2-(乙酰氨基甲基)琥珀酸水解酶、5-氨基五酰胺酶、甲酰蛋氨酸去甲酰酶、马尿酸水解酶、N-乙酰氨基葡萄糖胺去乙酰基酶、D-谷氨酰胺酶、N-甲基-2-氧戊二酸水解酶、谷氨酰胺-(天冬酰胺基)酶、烷基酰胺酶、acylagmatine酰胺酶、几丁质脱乙酰基酶、烟酰胺核苷酸酰胺酶、肽基谷氨酰胺酶、蛋白质谷氨酰胺谷氨酰胺酶、6-氨基己酸寡聚物外水解酶、N-乙酰二氨基庚二酸脱乙酰酶、乙酰亚精胺脱乙酰基酶、甲酰胺酶、戊酰胺酶、4-乙酰氨基丁酰-CoA脱乙酰基酶、肽-N4-(N-乙酰-β-葡糖胺基)天冬酰胺酰胺酶、N-氨基甲酰氨基酪胺酰胺酶、脲基甲酸酯水解酶、长链脂肪酰基谷氨酸脱酰酶、N,N-二甲基甲酰胺酶、色氨酸酰胺酶、N-苄氧羰基甘氨酸水解酶、N-氨甲酰肌氨酸酰胺酶、N-(长链酰基)乙醇胺脱酰酶、含羞草酶、乙酰腐胺脱乙酰基酶、4-乙酰氨基丁酸脱乙酰基酶、Nα-苄氧基羰基亮氨酸水解酶、茶氨酸水解酶、2-(羟甲基)-3-(乙酰氨基甲基)琥珀酸水解酶、4-亚甲基谷氨酰胺酶、N-甲酰谷氨酸去甲酰酶、糖鞘脂脱酰基酶、阿古霉素A脱酰基酶、N-阿魏酰甘氨酸脱酰基酶、D-苯甲酰精氨酸-4-硝基苯胺酰胺酶、肉碱酰胺酶、鹅去氧胆红素水解酶、尿烷酶、芳烷基酰胺酶、N-氨甲酰-D-氨基酸水解酶、谷胱甘肽亚精胺酰胺酶、邻苯二甲酰酰胺酶、N-酰基-D-氨基酸脱酰酶、N-酰基-D-谷氨酸脱酰酶、N-酰基-D-天冬氨酸脱酰酶、双缩脲酰胺水解酶、(S)-N-乙酰-l-苯乙胺水解酶、扁桃酰胺酰胺酶、N-氨甲酰-L-氨基酸水解酶、肽去甲酰化酶、N-乙酰氨基葡萄糖基磷脂酰肌醇脱乙酰基酶、腺苷钴胺水解酶、N-取代甲酰胺去甲酰酶、泛碱水解酶、戊二酰-7-氨基头孢烷酸酰化酶、γ-谷氨酰-γ-氨基丁酸水解酶、N-丙二酰脲水解酶、琥珀酰谷氨酸脱琥珀酸酶、酰基高丝氨酸内酯酰化酶、组蛋白脱乙酰基酶、脂肪酸酰胺水解酶、(R)-酰胺酶、L-脯氨酸酰胺水解酶、2-氨基-5-甲酰氨基-6-核糖氨基嘧啶-4(3H)-酮-5'-单磷酸酯去甲酰酶、N-乙酰-1-D-肌醇-2-氨基-2-脱氧-α-D-葡萄糖基吡喃糖苷脱乙酰基酶、肽聚糖-N-乙酰葡萄糖胺脱乙酰基酶、几丁质二糖脱乙酰基酶、N-甲酰马来酸去甲酰酶、马来酸酐氨基水解酶、UDP-3-O-酰基-N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰基酶、鞘磷脂脱乙酰酶、过氧化脲基丙烯酸酯/脲基丙烯酸酯氨基水解酶、2-氧戊二酸酰胺酶、2'-N-乙酰帕罗曼胺脱乙酰基酶、2”'-乙酰-6”'-羟基新霉素C脱乙酰基酶、N-酰基-芳香-L-氨基酸氨基水解酶、霉硫醇S-共轭酰胺酶、脲基乙醇酸氨基水解酶、6-氨基己酸低聚物内水解酶、γ-谷氨酰巯基半胱氨酸S-氧化物水解酶、Pup氨基水解酶、蛋白质N-末端天冬酰胺氨基水解酶、蛋白质N-末端谷氨酰胺氨基水解酶、γ-谷氨酰苯胺水解酶、蛋白质脱糖酶、N2-乙酰基-L-2,4-二氨基丁酸脱乙酰基酶、氨基水解酶和茉莉单酰-L-氨基酸水解酶。

在环酰胺中包括巴比妥酶、二氢嘧啶酶、二氢乳清酸酶、羧甲基乙内酰脲酶、尿囊酶、β-内酰胺酶、咪唑啉丙酸酶、5-氧代脯氨酸酶(ATP水解)、肌酐酶、L-赖氨酸-内酰胺酶、6-氨基己酸-环二聚体水解酶、2,5-二氧哌嗪水解酶、N-甲基乙内酰脲酶(ATP水解)、氰尿酸酰胺水解酶、马来酰亚胺水解酶、羟基异尿酸水解酶、enamidase、链霉素水解酶、靛红水解酶。

线性脒包括精氨酸酶、胍基乙酸酶、肌酸酶、尿囊酶、甲酸氨基酰乳酸脱氨酶、精氨酸脱氨酶、胍基丁酸酶、甲酸氨基酰谷氨酸脱氨酶、尿囊酸脱氨酶、D-精氨酸酶、胍丁胺酶、胍丁胺脱氨酶、甲酸氨基酰谷氨酸脱氨酶、氨基天冬氨酸酶、蛋白质-精氨酸脱氨酶、甲基胍丁酶、胍丙脯酸酶、二甲基精氨酸酶、diguanidinobutanase、亚甲二胺脱氨酶、proclavaminate amidinohydrolase、N-琥珀酰精氨酸二水解酶酶、N1-氨丙基胍丁胺尿素水解酶、Nω-羟基-L-精氨酸氨基水解酶和(S)-尿苷甘氨酸氨基水解酶。

环脒包括胞嘧啶脱氨酶、腺嘌呤脱氨酶、鸟嘌呤脱氨酶、腺苷脱氨酶、胞苷脱氨酶、AMP脱氨酶、ADP脱氨酶、氨基咪唑酶、亚甲基四氢叶酸环水解酶、IMP环水解酶、蝶呤脱氨酶、dCMP脱氨酶、dCTP脱氨酶、鸟苷脱氨酶、GTP环水解酶I、磷酸腺苷脱氨酶、ATP脱氨酶、磷酸核糖AMP环水解酶、巯乙胺脱氨酶、肌酐脱氨酶、l-吡咯啉-4-羟基-2-羧酸脱氨酶、稻瘟霉素-S脱氨酶、墨蝶呤脱氨酶、GTP环水解酶II、二氨基羟基磷酸核糖基氨基嘧啶脱氨酶、亚甲基四氢甲蝶呤环水解酶、S-腺苷同型半胱氨酸脱氨酶、GTP环水解酶IIa、dCTP脱氨酶(形成dUMP)、S-甲基-5'-硫代腺苷脱氨酶、8-氧鸟嘌呤脱氨酶、tRNA(腺嘌呤34)脱氨酶、tRNAAla(腺嘌呤37)脱氨酶、tRNA(胞嘧啶8)脱氨酶、mRNA(胞嘧啶6666)脱氨酶、双链RNA腺嘌呤脱氨酶、单链DNA胞嘧啶脱氨酶、GTP环水解酶IV、aminodeoxyfutalosine脱氨酶、5'-脱氧腺苷脱氨酶、N-异丙基氰尿酰胺异丙氨水解酶、hydroxydechloroatrazineethylaminohydrolase、四氢嘧啶水解酶、三聚氰胺脱氨酶、cAMP脱氨酶。

在腈中包括腈水解酶、蓖麻碱腈水解酶、氰丙氨酸腈水解酶、芳基乙腈酶、溴苯腈腈水解酶、脂肪族腈水解酶和硫氰酸水解酶。

其他化合物包括核黄素酶、氨基嘧啶氨基水解酶、2-氨基粘酸脱氨酶、氨基葡萄糖-6-磷酸脱氨酶、l-氨基环丙烷-l-羧酸脱氨酶、5-硝基邻氨基苯甲酸氨基水解酶、2-硝基咪唑硝基水解酶、2-亚氨基丁酸酯/2-亚氨基丙酸脱氨酶、和2-氨基粘液脱氨酶(2-羟基粘康酸酯形成)。

作用于酸酐的含磷酐包括无机二磷酸酶、三偏磷酸酶、腺苷三磷酸酶、三磷酸腺苷双磷酸酶、核苷二磷酸磷酸酶、酰基磷酸酶、ATP二磷酸酶、核苷酸二磷酸酶、内多磷酸酶、外多磷酸酶、dCTP二磷酸酶、ADP核糖二磷酸酶、腺苷四磷酸酶、核苷三磷酸酶、CDP甘油二磷酸酶、双(5'-核苷)-四磷酸酶(不对称)、FAD二磷酸酶、5'-酰基磷酸腺苷水解酶、ADP糖二磷酸酶、NAD+二磷酸酶、dUTP二磷酸酶、核苷磷酸酰基水解酶、三磷酸酶、CDP二酰甘油二磷酸酶、十一烷基二磷酸磷酸酶、硫胺素三磷酸酶、双(5'-腺苷)-三磷酸酶、磷酸核糖ATP二磷酸酶、胸苷三磷酸酶、鸟苷-5'-三磷酸酶、3'-二磷酸磷酸酶、双(5'-核苷)-四磷酸酶(对称)、鸟苷二磷酸酶、dolichyldiphosphatase、寡糖-二磷酸多萜醇二磷酸酶、UDP-糖二磷酸酶、二磷酸肌醇多磷酸酶、Mn2+依赖性ADP核糖/CDP-醇二磷酸酶、UDP-2,3-二酰基葡萄糖胺二磷酸酶、8-氧代-dGTP二磷酸酶、2-羟基-dATP二磷酸酶、UDP-2,4-二乙酰氨基-2,4,6-三脱氧-P-L-异丙烯酸酶水解酶、8-氧代-dGDP磷酸酶、5'-(N7甲基5'-三磷酸鸟苷)-[mRNA]二磷酸酶、二腺苷六磷酸水解酶(AMP形成)、二腺苷六磷酸水解酶(ATP形成)、5'-(N7-甲基鸟苷5'-三磷酸)-[mRNA]水解酶、α-D-核糖l-甲基膦酸酯5-三磷酸二磷酸酶、肌苷二磷酸磷酸酶、(d)CTP二磷酸酶、XTP/dITP二磷酸酶、二氢喋呤三磷酸二磷酸酶、香叶基二磷酸磷酸水解酶。

在含磺酰的酐中包括腺苷酸硫酸酯酶和磷酸腺苷酸硫酸酯酶。

作用于酐催化以催化物质的转膜运动包括磷脂转位ATP酶、Mg2+输入ATP酶、Cd2+输出ATP酶、Cu2+输出ATP酶、Zn2+输出ATP酶、H+输出ATP酶、Na+输出ATP酶、Ca2+转运ATP酶、Na+/K+交换ATP酶、H+/K+交换ATP酶、Cl-传输ATP酶、K+转运ATP酶、H+转运双节ATP酶、Na+转运双节ATP酶、亚砷酸盐转运ATP酶、单糖转运ATP酶、寡糖转运ATP酶、麦芽糖转运ATP酶、甘油-3-磷酸转运ATP酶、极性氨基酸转运ATP酶、非极性氨基酸转运ATP酶、寡肽转运ATP酶、镍转运ATP酶、硫酸盐转运ATP酶、硝酸盐转运ATP酶、磷酸盐转运ATP酶、膦酸盐转运ATP酶、钼酸盐转运ATP酶、Fe3+转运ATP酶、多胺转运ATP酶、季胺转运ATP酶、维生素B12转运ATP酶、铁螯合转运ATP酶、锰转运ATP酶、牛磺酸转运ATP酶、鸟嘌呤转运ATP酶、荚膜多糖转运ATP酶、脂多糖转运ATP酶、磷壁酸转运ATP酶、血红素转运ATP酶、β-葡聚糖转运ATP酶、肽转运ATP酶、异种转运ATP酶、镉转运ATP酶、脂肪酰CoA转运ATP酶、α因子转运ATP酶、通道电导控制ATP酶、蛋白质分泌ATP酶、线粒体蛋白转运ATP酶、叶绿体蛋白转运ATP酶、Ag+输出ATP酶、Cu+输出ATP酶、钨酸盐输入ATP酶。

作用于酸酐以促进细胞和亚细胞运动的包括肌球蛋白ATP酶、动力蛋白ATP酶、微管切断ATP酶、正末端定向的驱动蛋白ATP酶、负末端定向的驱动蛋白ATP酶、融合ATP酶的囊泡、过氧化物酶体组装ATP酶、蛋白酶体ATP酶、伴侣ATP酶、非伴侣分子伴侣ATP酶、核质蛋白ATP酶、DNA解旋酶和RNA解旋酶。

对GTP起促进细胞和亚细胞运动作用的包括异三聚体G蛋白GTP酶、小单体GTP酶、蛋白质合成GTP酶、信号识别颗粒GTP酶、动态GTP酶和微管蛋白GTP酶。

作用于酮类物质中碳碳键包括草酰乙酸酶、富马酰乙酰乙酸酶、犬尿氨酸酶、根皮素水解酶、酰基丙酮酸水解酶、乙酰丙酮酸水解酶、b-二酮水解酶、2,6-二氧-6-苯基己基-3-烯酸水解酶、2-羟基粘康酸-6-半醛水解酶、环己烷-l、3-二酮水解酶、环己烷-1,2-二酮水解酶水解酶、钴-前咕啉5A水解酶、2-羟基-6-氧代-6-(2-氨基苯基)己基-2,4-二烯酸酯水解酶、2-羟基-6-oxonona-2,4-二烯二酸酯水解酶、4,5:9,l0-双断裂-3-羟基-5,9,17-三氧雄甾-1(10)、2-二烯-4-酸酯水解酶、6-氧代樟脑水解酶、2,6-二羟伪氧烟碱水解酶、3-富马酸丙酮酸水解酶、6-氧环己-l-烯-l-羰基CoA水合酶、3D-(3,5/4)-三羟基环己烷-l、2-二酮酰氢化酶(开环)和马来酰丙酮酸水解酶。

作用于卤化碳化合物中卤化物键的包括烷基卤化酶、(S)-2-卤代酸脱卤酶、卤代乙酸脱卤酶、卤代烷脱卤酶、4-氯苯甲酸酯脱卤酶、4-氯苯甲酰-CoA脱卤酶、阿特拉津氯水解酶、(R)-2-卤代酸脱卤酶、2-卤代酸脱卤酶(构型反转)、和2-卤酸脱卤酶(构型保持)。

作用于磷氮键的包括磷酸酰胺酶、蛋白质精氨酸磷酸酶和磷酸组氨酸磷酸酶。

作用于硫氮键的包括N-磺基葡萄糖胺硫磺基水解酶和环磺酸磺基水解酶。

作用于碳磷键的包括膦酰基乙醛水解酶、膦酰基乙酸酯水解酶和膦酰基丙酮酸水解酶。作用于硫硫键的有三硫酸酯水解酶。

作用于碳硫键的有UDP硫基喹诺酮糖合成酶、2'-羟基联苯-2-亚硫酸盐脱硫酶、3-亚硫酸盐丙基-CoA脱硫酶、二硫化碳水解酶和[CysO硫载体蛋白]-S-L-半胱氨酸水解酶。

首选的市售酶包括硫醇蛋白酶(来自Enzybel International S.A.，CAS9001-73-4的木瓜蛋白酶)、丝氨酸内切蛋白酶(来自Novozymes的Protamex)和包含来自枯草芽孢杆菌培养物的内肽酶活性的中性蛋白酶，即金属内肽酶，枯草中性蛋白酶(来自Ab酶的7089，CAS 9001-92-7)。

在一个实施方案中，可以使用蛋白酶混合物。合适的蛋白酶混合物包括一种或多种酸性、中性或碱性蛋白酶。

酸性蛋白酶是在酸性条件下(如pH 2.0-5.0、2.0-3.0、2.0-4.0或3.0-5.0)表现出最大活性和稳定性的蛋白质消化酶，在pH值高于6.0时失活。酸性蛋白酶通常具有较低的等电点和较低的碱性氨基酸含量。

中性蛋白酶在较窄的pH范围内(pH 5-8)具有活性，并且可能具有相对较低的耐热性。中性蛋白酶包括半胱氨酸蛋白酶、金属蛋白酶和一些丝氨酸蛋白酶。

碱性蛋白酶的特征在于其在碱性pH下如至少pH 9、至少pH 10、至少pH 11，具有高活性。碱性蛋白酶的例子包括丝氨酸蛋白酶。它们具有广泛的底物特异性，包括酯水解活性和酰胺酶活性。丝氨酸蛋白酶的等电点一般在pH 4～6之间。丝氨酸碱性蛋白酶在高碱性pH下具有活性，是丝氨酸蛋白酶的最大亚群。

在一个实施方案中，蛋白酶混合物包括来自地衣芽孢杆菌的蛋白酶。本领域已知来自地衣芽孢杆菌的酸性、中性和碱性蛋白酶。例如，见Yilmaz等，J Enzyme Inhib MedChem，2016，31(6)：1241-1247；Rao等，微生物学和分子生物学评论，1998，62(3)：597-635；和Jellouli等，过程生物化学，2011，46(6)：1248-1256。

在一个实施方案中，蛋白酶混合物包括从曲霉属的生物体中获得的食品级细胞壁降解酶。曲霉细胞壁降解酶的实例包括mylase、果胶酶、木聚糖酶和纤维素酶。具体的例子包括b-葡萄糖苷酶、内切葡聚糖酶、滤纸酶、聚半乳糖醛酸酶和果胶酸裂解酶。

在一个实施方案中，本发明的方法包括添加具有至少一种碱性蛋白酶的第一蛋白酶混合物；和具有至少一种酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶的第二蛋白酶混合物。

第一蛋白酶混合物包括至少一种、至少两种、至少三种或至少四种碱性蛋白酶。在一个实施方案中，碱性蛋白酶来自地衣芽孢杆菌。在一个实施方案中，第一蛋白酶混合物仅包括内切蛋白酶。

在一个实施方案中，第一蛋白酶混合物包括一种碱性蛋白酶。

在一个实施方案中，第一蛋白酶混合物包括两种碱性蛋白酶。在一个实施方案中，第一碱性蛋白酶和第二碱性蛋白酶总计为第一蛋白酶混合物的蛋白酶的100％。在一个实施方案中，第一碱性蛋白酶为蛋白酶混合物的1-80％，而第二碱性蛋白酶为蛋白酶混合物的1-80％。在一个实施方案中，第一碱性蛋白酶为蛋白酶混合物的1-30％，而第二碱性蛋白酶为蛋白酶混合物的70-99％。在一个实施方案中，第一碱性蛋白酶为蛋白酶混合物的1-10％，而第二碱性蛋白酶为蛋白酶混合物的9-99％。在一个实施方案中，第一碱性蛋白酶和第二碱性蛋白酶以相同比例存在于第一蛋白酶混合物中。

在一个实施方案中，第一蛋白酶混合物包括三种碱性蛋白酶。在一个实施方案中，第一碱性蛋白酶、第二碱性蛋白酶和第三碱性蛋白酶总计为第一蛋白酶混合物的蛋白酶的100％。在一个实施方案中，第一碱性蛋白酶为蛋白酶混合物的1-80％，第二碱性蛋白酶为蛋白酶混合物的1-80％，而第三碱性蛋白酶为蛋白酶混合物的1-80％。在一个实施方案中，第一碱性蛋白酶为蛋白酶混合物的1-30％，第二碱性蛋白酶为蛋白酶混合物的1-30％，而第三碱性蛋白酶为蛋白酶混合物的50-98％。在一个实施方案中，第一碱性蛋白酶为蛋白酶混合物的1-10％，第二碱性蛋白酶为蛋白酶混合物的1-30％，而第三碱性蛋白酶为蛋白酶混合物的10-98％。在一个实施方案中，第一碱性蛋白酶、第二碱性蛋白酶和第三碱性蛋白酶以相同比例存在于第一蛋白酶混合物中。

第二蛋白酶混合物包括：酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶中的至少一种。在一个实施方案中，酸性蛋白酶、中性蛋白酶或碱性蛋白酶来自地衣芽孢杆菌。第二蛋白酶混合物的蛋白酶可包括外切蛋白酶和内切蛋白酶。

在一个实施方案中，第二蛋白酶混合物包括酸性蛋白酶和中性蛋白酶。在一个实施方案中，酸性蛋白酶和中性蛋白酶总计为第二蛋白酶混合物的蛋白酶的100％。在一个实施方案中，第二蛋白酶混合物包括1-80％酸性蛋白酶和1-80％中性蛋白酶。在一个实施方案中，酸性蛋白酶为蛋白酶混合物的1-30％，而中性蛋白酶为蛋白酶混合物的70-99％。在一个实施方案中，酸性蛋白酶为蛋白酶混合物的1-10％，而中性蛋白酶为蛋白酶混合物的9-99％。在一个实施方案中，酸性蛋白酶和中性蛋白酶以相等比例存在于第二蛋白酶混合物中。

在一个实施方案中，第二蛋白酶混合物包括酸性蛋白酶和碱性蛋白酶。在一个实施方案中，酸性蛋白酶和碱性蛋白酶总计为第二蛋白酶混合物的蛋白酶的100％。在一个实施方案中，第二蛋白酶混合物包括1-80％酸性蛋白酶和1-80％碱性蛋白酶。在一个实施方案中，酸性蛋白酶为蛋白酶混合物的1-30％，而碱性蛋白酶为蛋白酶混合物的70-99％。在一个实施方案中，酸性蛋白酶为蛋白酶混合物的1-10％，而碱性蛋白酶为蛋白酶混合物的9-99％。在一个实施方案中，酸性蛋白酶和碱性蛋白酶以相同比例存在于第二蛋白酶混合物中。

在一个实施方案中，第二蛋白酶混合物包括中性蛋白酶和碱性蛋白酶。在一个实施方案中，第一中性蛋白酶和碱性蛋白酶总计为第二蛋白酶混合物的蛋白酶的100％。在一个实施方案中，第二蛋白酶混合物包括1-80％中性蛋白酶和1-80％碱性蛋白酶。在一个实施方案中，中性蛋白酶为蛋白酶混合物的1-30％，而碱性蛋白酶为蛋白酶混合物的70-99％。在一个实施方案中，中性蛋白酶为蛋白酶混合物的1-10％，而碱性蛋白酶为蛋白酶混合物的9-99％。在一个实施方案中，中性蛋白酶和碱性蛋白酶以相等比例存在于第二蛋白酶混合物中。

在一个实施方案中，第二蛋白酶混合物包括酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。在一个实施方案中，酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶总计为第二蛋白酶混合物的蛋白酶的100％。在一个实施方案中，第二蛋白酶混合物包含1-80％酸性蛋白酶、1-80％中性蛋白酶和1-80％碱性蛋白酶。在一个实施方案中，第二蛋白酶混合物包含1-10％酸性蛋白酶、1-30％中性蛋白酶和60-98％碱性蛋白酶。在一个实施方案中，酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶以相同比例存在于第二蛋白酶混合物中。

在一个实施方案中，第一蛋白酶混合物的碱性蛋白酶不在第二蛋白酶混合物中。

在一个实施方案中，第一蛋白酶混合物/第二蛋白酶混合物的量为第一蛋白酶混合物的0.2-0.6％和第二蛋白酶混合物的0.02-0.06％。在一个实施方案中，第一蛋白酶混合物/第二蛋白酶混合物的量为第一蛋白酶混合物的0.3-0.5％和第二蛋白酶混合物的0.03-0.05％。在一个实施方案中，第一蛋白酶混合物的量约为0.4％，第二蛋白酶混合物的量约为0.04％。

用于第一蛋白酶混合物的优选市售蛋白酶混合物包括Endocut-02L(TailorFood/Tailorzyme)。用于第二蛋白酶混合物的优选市售蛋白酶混合物包括Exocut-BL(TailorFood/Tailorzyme)。代替一种或多种蛋白酶或除一种或多种蛋白酶外Exocut-BL可以包括来自曲霉的细胞壁降解酶。

以下数值可以以任何方式组合，以确定Endocut蛋白酶混合物的最小和最大数量占粉碎的甲壳动物捕获物总重量百分比的范围：0.01％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％或1.5％。

以下数值可以以任何方式组合，以确定Exocut蛋白酶混合物的最小和最大数量占粉碎的甲壳动物总重量百分比的范围：0.005％、0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.25％或0.5％。

在其中一个实施方案中，Endocut/Exocut的用量为0.2-0.6％Endocut蛋白酶的混合物和0.02-0.06％Exocut蛋白酶的混合物。在另一个实施方案中，Endocut/Exocut的用量为0.3-0.5％Endocut蛋白酶混合物和0.03-0.05％Exocut蛋白酶混合物。在一个实施方案中，Endocut蛋白酶量约为0.4％，Exocut蛋白酶酶量约为0.04％。

在一个实施方案中，将第一蛋白酶混合物和第二蛋白酶混合物同时添加到粉碎的甲壳动物捕获物中。

在一个实施方案中，水解步骤包括在使甲壳类捕获物与第二蛋白酶混合物接触之前使甲壳类捕获物与第一蛋白酶混合物接触。在本实施方案中，在添加第二蛋白酶混合物之前，可以以任何方式组合以下以分钟为单位的数值，以创建第一蛋白酶混合物水解所需时间的最小值和最大值的范围：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28，29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235和240。例如，在添加第二蛋白酶混合物之前，使用第一蛋白酶混合物将粉碎的甲壳类捕获物水解1-10分钟。

在一个实施方案中，水解步骤包括在将甲壳类捕获物与第一蛋白酶混合物接触之前将第二蛋白酶混合物与粉碎的甲壳类捕获物接触。在本实施方案中，在添加第一蛋白酶混合物之前，可以以任何方式组合以下以分钟为单位的值，以创建第二蛋白酶混合物水解所需时间的最小值和最大值的范围：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28，29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235和240。例如，在添加第一种蛋白酶混合物之前，使用第二蛋白酶混合物将粉碎的甲壳类捕获物水解1-10分钟。在另一实施方案中，使用包含几丁质酶或胶原酶的第二酶。这种酶可与第一酶或酶组合一起使用。

在另一实施方案中，用于水解的酶不包含外肽酶。

接触步骤还可以包括使用有机溶剂。有用有机溶剂的实例包括但不限于乙醇、丙酮和乙酸乙酯。

终止水解反应

可以通过使酶失活来终止水解反应。酶可通过不同方式失活，包括添加抑制剂、去除辅助因子(例如通过透析的关键离子)、通过热失活和/或通过任何其他失活手段。

每种酶失活的条件可能不同，但通常包括提高溶液的pH值和温度。例如，失活7089开始于pH值>7.5和温度大于55℃。选择的条件是，酶在不会使粉碎的甲壳类捕获物的蛋白质变性的温度下失活。以下温度可以以任何方式组合以确定使得酶失活而不使甲壳类捕获物的蛋白质变性的最低温度、最高温度或温度范围：85℃、86℃、87℃、88℃、89℃、90℃、9l℃、92℃、93℃、94℃、95℃、96℃、97℃、98℃、99℃和100℃。例如，酶A可在约90℃或优选在约92℃至约98℃之间的温度下失活。

如上所述，水解在正确的时刻停止，以便甲壳类捕获物优选地仅部分水解以产生水解甲壳类捕获物，其中蛋白质具有特定水解度。此外，本领域普通技术人员能够确定特定酶水解的条件和持续时间，以及确定产生经水解的甲壳类捕获物的条件，其中一定百分比的甲壳类捕获物被水解。

分离以提供蛋白质磷脂复合物

第三步是分离水解的甲壳类捕获物以提供PPC。在此步骤中，可以使用各种过程来确保PPC满足某些标准。例如，PPC的脂质含量约为30-55％。在另一实例中，可降低氟化物水平以产生PPC，其中氟化物含量小于约5mg/kg PPC。

降低氟含量的方法多种多样。例如，甲壳类捕获物的外骨骼，即外壳、甲壳和/或壳，通常含氟量很高。从水解的甲壳类捕获物去除外骨骼(如壳)是降低氟含量的一种方法。壳可以通过各种方法去除，例如使用过滤器、筛子、倾析器或离心机。例如，可选择过滤器或筛子的开口尺寸，以便在不移除大部分或任何非壳水解产物的情况下移除所有或大部分壳。标准编织网筛可用于筛孔尺寸从约125mm、25mm、4mm、1mm、250μm、45μm和20μm中选择。美国专利8557297和9068142以及Bruheim等，公开了从甲壳动物材料中降低氟化物含量的方法，在此通过引用将其说明全部并入。

在此过程中，还可以在不同的时间点去除壳。例如，可以在水解后，但在巴氏杀菌和酶失活之前，立即用倾析器或筛子除去壳。

通过超临界提取和/或亚临界流体提取生产磷虾油时，也可以在下游降低氟含量。因此，水解后的壳可以从主工艺线去除，酶失活后再引入主工艺线。换言之，在干燥之前，可以将壳和/或任何其他不溶性颗粒重新引入主工艺线。将壳和/或任何其他不溶性颗粒重新引入主工艺线可能有助于PPC的利用，因为壳的存在允许产品被包装成坚固的块体，这些块体更容易分解，并允许在下游加工步骤中有更大的流动性。不溶性颗粒优选食品级，且可容易地从PPC下游去除。不溶性微粒的例子包括纤维。

或者，在加工过程中的任何时候都不必去除壳，壳可能是PPC的一部分。如上所述，与壳有关的任何过量氟都可以通过超临界处理下游去除。

在另一个例子中，可以降低的水平以防止分离步骤中的微生物活动。PPC的含水量是指微生物不太可能生长的水的百分比。以下百分比可用于创建PPC含水量的最小值、最大值或范围值：1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％或15％w/w。例如，基于PPC的总重量，PPC含水量小于约15％。理想情况下，水活度(activity)小于约0.85，最好小于约0.65。

水解后的水可以通过一个以上的脱水步骤去除，脱水步骤可能包括分离过程之前、过程中或之后的干燥和机械去除。优选的脱水方法包括真空低温干燥和软沉积物用沉降离心机或卧式离心机处理。任何分离方法都可以使用，例如一个倾析器和一个分离器。首选的分离器使用旋转力旋转样品，将样品分离成层。

卧式离心机是指能够在Z平面(与传统离心机在X平面和/或Y平面不同)旋转混合物的任何设备。旋转是由螺旋式输送机元件在管形外壳内水平对齐产生的。然后，感应离心力将较重的颗粒分层到外壳的外缘，而较轻的颗粒则形成更靠近外壳中心的层。一些卧式离心机被改造成包括一个扩展的分离路径和诱导高重力。首选的卧式离心机是Flottweg能够机械地将水与沉积物分离。是一种改良的卧式离心机，包括长水平澄清/分离区，产生高离心力(5000至10000g)。S3E-3型号的滤杯直径为12”，滤杯转速为7750转/分，尺寸为90”x 28”x30”，重量为2315磅。

蛋白质磷脂乳液

本发明的另一方面涉及一种生产稳定的蛋白质磷脂乳液的方法。在这种方法中，选择特定的酶和工艺参数，以确保最终产品是稳定的乳液。需要一种稳定的乳液来保护功能性成分，如磷脂、脂肪酸和水解的蛋白质，并改善这些功能性成分的处理、稳定性和功效。

稳定的乳液定义为在室温或稍高的温度下，通过视觉检查和/或粘度测量确定为不分离的乳液。以下温度可代表最低或最高温度，或可组合以产生用于定义高温的温度范围：20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃、41℃、42℃、43℃、44℃，和45℃。以下以月为单位的时间段可以表示最小值或最大值，也可以组合成一个范围，用于定义乳液在上述高温下必须保持稳定的时间要求：3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个月。例如，稳定的乳液可以被定义为在4个月高至约40℃的温度下不分离的乳液，或者在另一个实例中，在6个月的环境温度(例如，在20℃到25℃之间)下不分离的乳液。此外，稳定的乳液含有理想的水含量以防止微生物生长，并符合人类食用的安全指南。

如上所述，甲壳类捕获物在第一步中被粉碎。在第二步中，粉碎后的甲壳类捕获物与蛋白水解酶接触以提供水解的甲壳类捕获物。在此步骤中，酶的选择对于确保酶不抑制磷脂形成稳定的乳液至关重要。接触步骤的参数如上所述。

在第三步中，分离水解的甲壳类捕获物以提供稳定的磷脂乳液。第三步可包括流体提取过程，例如超临界处理。

稳定的蛋白质磷脂乳液的含水量的可以是以下任一值，它们代表单个最小值和最大值，也可以组合成一个范围：40％v/v、41％v/v、42％v/v、43％v/v、44％v/v、45％v/v、46％v/v、47％v/v、48％v/v、49％v/v、50％v/v、51％v/v、52％v/v、53％v/v、54％v/v、55％v/v、56％v/v、57％v/v、58％v/v、59％v/v和60％v/v。例如，优选的水含量约为45-55％v/v。

本发明的另一方面涉及一种稳定的蛋白质磷脂乳液，包括水、蛋白质和脂质。

甲壳动物油

本发明的另一方面涉及一种生产甲壳动物油的方法。该方法包括以下步骤：粉碎甲壳类捕获物以提供包含蛋白质的粉碎的甲壳类捕获物；将粉碎的甲壳类捕获物与一种或多种蛋白水解酶接触以提供水解的甲壳类捕获物而不使蛋白质发生实质性变性；以及分离水解的甲壳类捕获物以提供PPC。这些步骤如上所述。该方法还包括第四步，涉及从PPC中提取甲壳类动物油。

提取步骤优选地涉及使用流体提取从PPC分离油。优选的流体包括超临界二氧化碳、乙醇、丙酮和/或C₁-C₃一元醇。超临界二氧化碳是指在其临界温度和临界压力或更高温度下，由处于流体状态的二氧化碳组成的混合物，其特性膨胀到像气体一样充满容器，但密度却像液体一样。二氧化碳在31.1℃和72.9atm/7.39mpa以上变得超临界。

美国专利号9034388至Bruheim等中描述了从PPC中提取甲壳类动物油的一些方法，其内容通过引用全部并入。美国专利号9068142至Bruheim等中也讨论了超临界处理，其内容通过引用全部并入。

例如，甲壳类动物油可以通过两个阶段的过程从PPC中提取。在第一阶段，用纯超临界二氧化碳或二氧化碳加上约1-10％的共溶剂(如乙醇)萃提取去除中性脂质。在第二阶段，甲壳动物油用超临界二氧化碳和大约10-30％的乙醇提取。

优选的甲壳动物油是磷虾油，粉碎的甲壳动物捕获物最好是粉碎的磷虾。

甲壳动物油优选含有约400-500g/Kg磷脂和约200-260g/Kg欧米茄-3脂肪酸。

一种或多种其它营养油可与本发明的甲壳动物油结合以创造具有健康益处的单一剂型。营养油可从其他海洋来源、植物来源或其他动物来源中提取。营养油的一些例子包括但不限于植物油(如亚麻籽油、南瓜籽油、油菜籽油、大豆油或核桃油)、鱼油、海豹油、微藻油、贻贝油和虾油。另一个优选的额外的海洋资源是绿唇贻贝油。

上面讨论的甲壳动物油适合给予至人类和动物(如狗)，以获得各种健康益处。例如，宠物，如狗，被直接给予磷虾油胶囊或磷虾油直接放在他们的食物。

本发明的另一方面涉及一种不经提取步骤(即不存在提取步骤)生产甲壳动物油的方法。该方法包括以下步骤：将甲壳类捕获物粉碎以提供含有蛋白质的粉碎的甲壳类捕获物；将粉碎的甲壳类捕获物与蛋白水解酶接触以提供水解的甲壳类捕获物而不使蛋白质发生实质性变性；以及分离水解的甲壳类捕获物以提供游离甲壳动物油。优选的蛋白水解酶是那些能够提供几乎完全水解的酶，以释放甲壳类动物油作为游离的油。例如，首选的蛋白水解酶是地衣芽孢杆菌酸性、中性和碱性蛋白酶的混合物。

在本说明书中对“一个实施方案(one embodiment)”、“实施方案(anembodiment)”、“一个实例(one example)”或“an example(实例)”的引用意味着结合该实施方案或实例描述的特定特征、结构或特性包括在本发明实施方案的至少一个实施方案中。因此，在本说明书的各个地方出现的短语“在一个实施方案中”、“在实施方案中”、“一个实例”、或“实例”不一定都指同一个实施方案或实例。此外，在一个或多个实施例或示例中，特定特征、结构或特性可以组合成任何合适的组合和/或子组合。此外，还应理解，附图是为了向本领域普通技术人员进行解释。

此外，除非有明确相反的规定，“或”指的是包含性的“或”，而不是排他性的“或”。例如，条件“A或B”由下列任一项满足：“a为真(或存在)，B为假(或不存在)”，“A为假(或不存在)，B为真(或存在)”，以及“A和B均为真(或存在)”。

实例

实例1：

在捕获后的30分钟内，新鲜的磷虾用刀具切碎成大约3-6毫米大小的颗粒。此时磷虾的温度大约为1-2摄氏度。加入淡水(多至磷虾重量的50％w/w)和酶(磷虾重量的约0.2％w/w)的混合物，加热至约50℃。水解大约需要30分钟。酶的用量、温度和水解时间选择是关键，以确保磷虾蛋白在水解过程中不变性。

水解后，用筛子或倾析器将壳与主工艺线分离。然后对主要生产线中的水解的磷虾进行巴氏杀菌，以保证卫生质量和酶的失活。巴氏杀菌在90℃下进行至少10分钟。水解后的磷虾随后用沉淀分离器进行干燥，以机械方式分离多余的水，并进行低温真空干燥。最终的产品是PCC。

实例2：

磷虾按实例1所述方式进行处理，但水解后的倾析器步骤被移除。水解后磷虾绕过了倾析器。因此，磷虾壳留在水解后的磷虾，沿着主工艺线进行巴氏杀菌，然后进行沉淀分离和低温真空干燥。

因此，磷虾壳仍然与PPC混合。将磷虾壳与产品混合在一起是有益的，因为壳可以使坚固的产品块在加工过程中容易破碎，增加流动性。另一个好处是，水解后仍与壳相连的任何小蛋白质部分仍与产品一起保存，而不是与壳分离。

由于壳的存在，产品中过量的氟化物可以在超临界提取期间下游去除。

实例3：

磷虾水解后，将磷虾壳与主加工线分离。然而，在绕过失活过程和沉淀分离过程之后，也即在干燥之前，将壳重新引入主工艺线。

因此，虽然已经描述了本发明的优选实施方案，但是本领域技术人员将认识到，可以在不背离本发明精神的情况下做出其他实施例，其中包括在本文所述权利要求的真实范围内的所有进一步的修改和改变。

实例4：

把500公斤磷虾(切碎至5毫米)加入到500公斤水中。Tailorzymes公司的Endocut/Exocut蛋白酶分别以0.4％和0.04％的剂量添加。反应在55℃下进行2小时。倾析器以5400转/分的速度运行，流速为800升/小时。分离器以大约8200转/分的速度运行，流速为1000升/小时，每300秒释放一次。释放时间是指用于水解物释放的时间。

表1：实例1中的重量决算表。

产品	重量(kg)	重量(％)	干燥物质(％)	产率(％)
					壳	55	5.7	30	3.44
水解物	700	73	9.5	13.85
					PPC	160	16.7	25	8.33
损失	45	4.6

实例5：

500公斤的磷虾加入到500公斤水中。Endocut/Exocut蛋白酶分别以0.4％和0.04％的剂量添加。反应温度55℃，反应时间2小时。

倾析器以5400转/分的速度运行，流量为800升/小时。温度上升到90度，水解产物在分离器上进行处理，分离器转速为8200转/分，流量为1000升/小时。水解产物的释放量逐步增加到每900秒释放一次。

表2：实例2中的重量决算表。

产品	重量(kg)	重量(％)	干燥物质(％)	产率(％)
					壳	43	7.17	28	4.3
水解物	409	68.17	9.5	12.95
					PPC	105	17.50	25	8.75
损失	43	7.17

实例6：

300公斤磷虾加入到300公斤水和Corrolase7089(剂量为0.15％)中。反应在55℃的温度下进行，总反应时间为1小时，然后进入倾析器(去壳)，接着在失活前继续反应2小时。

倾析器的转速为2800转/分，流量为650升/小时。分离器的转速约为8200转/分，流量为1000升/小时，每300秒释放一次。没有形成游离油。

表3：实例3中的重量决算表。

产品	重量(kg)	重量(％)	干燥物质(％)	产率(％)
					壳	40	4.2	30	2.5
水解物	750	78	9.5	14.84
					PPC	120	12.5	25	6.25
损失	50	5.3

实例7：

220公斤磷虾与55公斤水和Corrolase7089(剂量为0.15％)混合。反应在55℃的温度下进行，反应时间为倾析前进行1小时，然后在失活前进行2小时。

倾析器的转速为2800转/分，流量为650升/小时。分离器的转速约为8200转/分，流量为1000升/小时，每300秒释放一次。没有形成游离油。

表4：实例4中的重量决算表。

产品	重量(kg)	重量(％)	干燥物质(％)	产率(％)
					壳	26	9.45	32	3.78
水解物	178	64.73	14	11.33
					PPC	55	20	25	6.25
损失	16	5.82

实例8：

将500公斤磷虾与125公斤水和Endocut/Exocut(分别以0.4％和0.04％的剂量)混合。反应温度为55℃。反应在倾析前进行1小时，然后在失活前进行30分钟。倾析器：2800转/分，流量650升/小时。

表5：实例5中的重量决算表。

产品	重量(kg)	重量(％)	干燥物质(％)	产率(％)
					壳	50	8	32	3.2
水解物	517	87.2	14	14.48
					PPC	33	5.28	25	1.65
损失	25	4

分离器的转速约为8200转/分，流量为1000升/小时，每600秒释放一次。

在设定(即反压力)发生一些变化后，可以将游离油从分离器中分离出来。油的成分如下(表6)。

表6：在实例5中形成的游离油的成分。

实例9:

通过微滤和纳滤进一步处理来自实例1的水解产物，以去除小于300-400道尔顿的分子。

将50％DM水解产物用水稀释至8的锤度值。

用喷雾干燥法干燥保留物。

将干燥后的产品与饮料混合，制成无嗅无味饮料。

实例10:

酶水解在DistekPremiere5100溶解系统中以55℃和150rpm的条件进行。Endocut-02L的酶剂量从1kg/ton到5kg/ton不等，而Exocut-BL的酶剂量从0.05kg/ton到0.4kg/ton不等，这两种蛋白酶的添加量都基于原料。在添加酶之前，原料在绞肉机中使用4.5mm研磨板和按照下表添加的水进行加工。在总反应时间为60或120分钟后，通过加热(95℃)进行失活，然后通过筛子初步分离壳，然后过滤剩余悬浮液。在一些试验中，最后的灭活是在壳分离后进行的。保留所有分数并加权，用于质量平衡计算和后分析。

表7：实验设置

表8：水解物的感官评价