阅读说明：本技术 对集胞藻pcc6803生长具有抑制作用的含色酮苯酰腙类化合物及其制备方法 (Chromone-containing phenylhydrazone compound with inhibiting effect on growth of Synechocystis PCC6803 and preparation method thereof ) 是由 涂其冬 宋伏冰 刘米米 王莹 周庭辉 郭辉 陈道驹 向鹏 李琪 邓怡冰 于 2020-05-19 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种对集胞藻PCC6803生长具有抑制作用的含色酮苯酰腙类化合物及其制备方法。该化合物的分子结构如式I所示,其中R<Sup>1</Sup>选自氢、卤素、硝基、羟基、羧基、C<Sub>1</Sub>-C<Sub>4</Sub>烷基；R<Sup>2</Sup>选自氢、溴、羟基或硝基；R<Sup>3</Sup>选自氢或羟基；R<Sup>4</Sup>选自氢、卤素、硝基、三氟甲基或羟基；R<Sup>5</Sup>选自氢或羟基。在此基础上,本发明进一步提供了该化合物的制备方法,在含有乙酸的乙醇环境中,将苯甲酰肼或其取代物与3-甲酰色酮或其取代物进行反应,生成本发明化合物。该化合物对集胞藻PCC6803具有较好的生长抑制作用,EC<Sub>50</Sub>值在0.8～29.8μM范围内,可用于制备相关的抑藻剂产品。<Image he="615" wi="700" file="DDA0002498293920000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>(The invention provides a chromone-containing phenylhydrazone compound with an inhibiting effect on the growth of synechocystis PCC6803 and a preparation method thereof. The molecular structure of the compound is shown as formula I, wherein R 1 Selected from hydrogen, halogen, nitro, hydroxy, carboxyl, C 1 ‑C 4 An alkyl group; r 2 Selected from hydrogen, bromine, hydroxyl or nitro; r 3 Selected from hydrogen or hydroxy; r 4 Selected from hydrogen, halogen, nitro, trifluoromethyl or hydroxy; r 5 Selected from hydrogen or hydroxyl. On the basis, the invention further provides a preparation method of the compound, which comprises the step of reacting benzoyl hydrazine or a substitute thereof with 3-formyl chromone or a substitute thereof in an ethanol environment containing acetic acid to generate the compound. The compound has good effect on Synechocystis PCC6803Growth inhibition of EC 50 The value is within the range of 0.8-29.8 mu M, and the product can be used for preparing related algistat products.)

对集胞藻PCC6803生长具有抑制作用的含色酮苯酰腙类化合 物及其制备方法

技术领域

本发明涉及化学合成技术领域，具体涉及一种对集胞藻PCC6803生长具有抑制作用的含色酮苯酰腙类化合物及其制备方法。

背景技术

近年来随着人类生活生产活动的扩大，大量的废水排入河流湖泊，水体的富营养化日趋严重，蓝藻暴发式繁殖，形成水华。蓝藻死后会释放出藻毒素，该毒素非常稳定，水溶性和耐热性好。藻毒素在水中高温煮沸也不易分解，一般的自来水处理工艺(比如混凝沉淀、过滤、加氯)也不能使其分解。藻毒素是一种强烈的促癌剂，能导致肝癌，毒性非常强，威胁极大。蓝藻水华后，水中含氧量减少，水生动物大量死亡，对水产业破坏极大。因此如何治理蓝藻水华成为人们亟待解决的问题。集胞藻PCC6803是蓝藻中最主要的一种，而且其毒性危害性最大，以其作为杀伤对象，可有效缓解蓝藻对水生环境的影响。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的缺陷，提供一种对集胞藻PCC6803生长具有抑制作用的含色酮苯酰腙类化合物及其制备方法，以解决现有技术中尚不存在此结构的化合物的技术问题。

本发明要解决的另一技术问题是，如何实现该化合物的高效制备。

本发明要解决的再一技术问题是，如何拓展抑藻剂的可选范围。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

对集胞藻PCC6803生长具有抑制作用的含色酮苯酰腙类化合物，其分子结构如以下式I所示：

其中，R¹选自氢、卤素、硝基、羟基、羧基、C₁-C₄烷基；

R²选自氢、溴、羟基或硝基；

R³选自氢或羟基；

R⁴选自氢、卤素、硝基、三氟甲基或羟基；

R⁵选自氢或羟基。

作为优选，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵，五者为相同或者不同的取代基。

在以上技术方案的基础上，本发明进一步提供了上述含色酮苯酰腙类化合物的制备方法，该方法是在含有乙酸的乙醇环境中，将式II化合物与式III化合物在室温下直接反应1～3小时得到的；

作为优选，所述反应完成后，抽滤，乙醇洗涤，对滤饼进行烘干，即得到所述含色酮苯酰腙类化合物。

在以上技术方案的基础上，本发明进一步提供了上述含色酮苯酰腙类化合物用于制备抑藻剂的应用。

进一步提供了上述含色酮苯酰腙类化合物用于抑制蓝藻生长的应用。

作为优选，所述蓝藻为集胞藻PCC6803。

作为优选，在该应用中，含色酮苯酰腙类化合物EC₅₀为0.8～29.8μM。

本发明提供了一种对集胞藻PCC6803生长具有抑制作用的含色酮苯酰腙类化合物及其制备方法。该化合物的分子结构如式I所示，其中R¹选自氢、卤素、硝基、羟基、羧基、C₁-C₄烷基；R²选自氢、溴、羟基或硝基；R³选自氢或羟基；R⁴选自氢、卤素、硝基、三氟甲基或羟基；R⁵选自氢或羟基。在此基础上，本发明进一步提供了该化合物的制备方法，在含有乙酸的乙醇环境中，将苯甲酰肼或其取代物与3-甲酰色酮或其取代物进行反应，生成本发明化合物。该化合物对集胞藻PCC6803具有较好的生长抑制作用，可用于制备相关的抑藻剂产品；实验验证表明，本发明系列化合物抑制集胞藻PCC6803的EC₅₀值在0.8～29.8μM范围内，充分证明其具有较高的活性，为其作为蓝藻抑制剂的用途提供了有力支撑。

附图说明

图1是本发明化合物的合成路线图。

具体实施方式

以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。

本发明提供的具有抑制集胞藻PCC6803生长的化合物为一类含色酮苯酰腙类化合物：氮’-[(4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]苯甲酰肼，其结构通式如I所示；

通式I中R¹代表氢、卤素、硝基、羟基、羧基、C₁-C₄烷基；R²代表氢、溴、羟基、硝基；R³代表氢或者羟基；R⁴代表氢、卤素、硝基、三氟甲基、羟基；R⁵代表氢或者羟基；R¹，R²，R³，R⁴，R⁵代表的取代基相同或者不相同。

本发明的具有上述通式I的化合物对蓝藻集胞藻PCC6803有较好的抑制作用，可作为杀藻剂的有效成份。

以通式I表示的氮’-[(4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]苯酰肼的制备方法，是使通式Ⅱ所表示的化合物与通式Ⅲ所表示的化合物在乙醇溶剂中，加催化量醋酸，室温直接反应得到。如图1所示。

上述反应在乙醇溶剂中进行，加催化量醋酸作催化剂，室温下反应2小时内即有较好收率，抽滤，乙醇洗涤，滤饼烘干即得产物，操作简单。

下面通过实施例1来具体地说明本发明的I式化合物的制备方法。

实施例1

化合物I-1

氮’-[(4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,5-二羟基苯甲酰肼制备

将1mmol的3,5-二羟基苯甲酰肼溶于11ml的乙醇中，加入1mmol的3-甲酰色酮，加2滴醋酸，保持室温状态下搅拌1小时，有白色不溶物生成。抽滤，乙醇洗涤，滤饼烘干即得白色粉末氮’-[(4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,5-二羟基苯甲酰肼，产率82％，熔点217-220℃。

分子式：C₁₇H₁₂N₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.79(s,1H,NH),9.56(s,2H,OH),8.84–6.30(m,9H,＝CH-O,CH＝N,ArH)；

HRMS(MALDI):m/z＝363.0372,calcd for C₁₇H₁₂N₂O₅[M+K]⁺:363.0383.

化合物2-19均按化合物I-1类似的方法制备

化合物I-2

氮’-[(6-氯-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,5-二羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为65％，熔点208-211℃。

分子式：C₁₇H₁₁ClN₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.84(s,1H,NH),9.62(s,2H,OH),8.88–6.32(m,8H,＝CH-O,CH＝N,ArH)；

HRMS(MALDI):m/z＝381.0267,calcd for C₁₇H₁₁ClN₂O₅[M+Na]⁺:381.0254。

化合物I-3

氮’-[(6-溴-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,5-二羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为72％，熔点212-215℃。

分子式：C₁₇H₁₁BrN₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.84(s,1H,NH),9.61(s,2H,OH),8.88–6.32(m,8H,＝CH-O,CH＝N,ArH).

HRMS(MALDI):m/z＝402.9951,calcd for C₁₇H₁₁BrN₂O₅[M+H]⁺:402.9930.

化合物I-4

氮’-[(6-氟-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,5-二羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为浅黄色粉末，产率为66％，熔点243-247℃。

分子式：C₁₇H₁₁FN₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.84(s,1H,NH),9.61(s,2H,OH),8.89–6.29(m,8H,＝CH-O CH＝N ArH)；

HRMS(MALDI):m/z＝365.0540,calcd for C₁₇H₁₁FN₂O₅[M+Na]⁺:365.0550.

化合物I-5

氮’-[(6-甲基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,5-二羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为85％，熔点216-219℃。

分子式：C₁₈H₁₄N₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.80(s,1H,NH),9.61(s,2H,OH),8.83–6.29(m,8H,＝CH-O,CH＝N,ArH),2.45(s,3H,CH₃)；

HRMS(MALDI):m/z＝361.0781,calcd for C₁₈H₁₄N₂O₅[M+Na]⁺:361.0800.

化合物I-6

氮’-[(6-乙基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,5-二羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为70％，熔点186-189℃。

分子式：C₁₉H₁₆N₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.81(s,1H,NH),9.61(s,2H,OH),8.82–6.27(m,8H,＝CH-O,CH＝N,ArH),2.76(q,J＝7.2Hz,2H,CH₂),1.23(t,J＝7.2Hz,3H,CH₃)；

HRMS(MALDI):m/z＝353.1150,calcd for C₁₉H₁₆N₂O₅[M+H]⁺:353.1137。

化合物I-7

氮’-[(6-异丙基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,5-二羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为54％，熔点192-195℃。

分子式：C₂₀H₁₈N₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.83(s,1H,NH),9.63(s,2H,OH),8.80–6.32(m,8H,＝CH-O,CH＝N,ArH),3.03(m,1H,CH),1.22(d,J＝6.9Hz,6H,CH₃)；

HRMS(MALDI):m/z＝367.1273,calcd for C₂₀H₁₈N₂O₅[M+H]⁺:367.1294。

化合物I-8

氮’-[(6-叔丁基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,5-二羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为灰色粉末，产率为81％，熔点176-179℃。

分子式：C₂₁H₂₀N₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.82(s,1H,NH),9.61(s,2H,OH),8.84–6.31(m,8H,＝CH-O,CH＝N,ArH),1.34(s,9H,CH₃)；

HRMS(MALDI):m/z＝381.1461,calcd for C₂₁H₂₀N₂O₅[M+H]⁺:381.1450.

化合物I-9

氮’-[(6-羟基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,5-二羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为90％，熔点220-224℃。

分子式：C₁₇H₁₂N₂O₆；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.75(s,1H,NH),10.13(s,1H,OH),9.55(s,2H,OH),8.78-6.35(m,8H,＝CH-O,CH＝N,ArH)；

HRMS(MALDI):m/z＝341.0788,calcd for C₁₇H₁₂N₂O₆[M+H]⁺:341.0774。

化合物I-10

氮’-[(6-羧基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,5-二羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为浅黄色色粉末，产率为80％，熔点>250℃。

分子式：C₁₈H₁₂N₂O₇；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ13.21(s,1H,COOH),11.82(m,1H,NH),9.57(s,2H,OH),8.87–6.35(m,8H,＝CH-O,CH＝N,ArH).

HRMS(MALDI):m/z＝391.0550,calcd for C₁₈H₁₂N₂O₇[M+Na]⁺:391.0542.

化合物I-11

氮’-[(4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,4-二羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为90％，熔点211-214℃。

分子式：C₁₇H₁₂N₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.72(s,1H,NH),9.67(s,1H,OH),9.27(s,1H,OH),8.84–6.71(m,9H,＝CH-O,CH＝N,ArH)；

HRMS(MALDI):m/z＝325.0843,calcd for C₁₇H₁₂N₂O₅[M+H]⁺:325.0824。

化合物I-12

氮’-[(6-氯-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,4-二羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为89％，熔点213-216℃。

分子式：C₁₇H₁₁ClN₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.74(s,1H,NH),9.68(s,1H,OH),9.27(s,1H,OH),8.85–6.73(m,8H,＝CH-O,CH＝N,ArH)；

HRMS(MALDI):m/z＝381.0260,calcd for C₁₇H₁₁ClN₂O₅[M+Na]⁺:381.0254.

化合物I-13

氮’-[(6-溴-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,4-二羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为浅黄色粉末，产率为78％，熔点218-222℃。

分子式：C₁₇H₁₁BrN₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.73(s,1H,NH),9.68(s,1H,OH),9.27(s,1H,OH),8.85–6.70(m,8H,＝CH-O,CH＝N,ArH)；

HRMS(MALDI):m/z＝402.9950,calcd for C₁₇H₁₁BrN₂O₅[M+H]⁺:402.9930.

化合物I-14

氮’-[(6-氟-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,4-二羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为76％，熔点222-226℃。

分子式：C₁₇H₁₁FN₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.73(s,1H,NH),9.68(s,1H,OH),9.27(s,1H,OH),8.85–6.71(m,8H,＝CH-O,CH＝N,ArH)；

HRMS(MALDI):m/z＝343.0751,calcd for C₁₇H₁₁FN₂O₅[M+H]⁺:343.0730。

化合物I-15

氮’-[(6-甲基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,4-二羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为87％，熔点220-223℃。

分子式：C₁₈H₁₄N₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.69(s,1H,NH),9.67(s,1H,OH),9.26(s,1H,OH),8.80–6.73(m,8H,＝CH-O,CH＝N,ArH),2.44(s,3H,CH₃)；

HRMS(MALDI):m/z＝361.0785,calcd for C₁₈H₁₄N₂O₅[M+Na]⁺:361.0800.

化合物I-16

氮’-[(6-乙基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,4-二羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为63％，熔点201-204℃。

分子式：C₁₉H₁₆N₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.70(s,1H,NH),9.67(s,1H,OH),9.27(s,1H,OH),8.81–6.71(m,8H,＝CH-O,CH＝N,ArH),2.75(q,J＝7.5Hz,2H,CH₂),1.22(t,J＝7.5Hz,3H,CH₃)；

HRMS(MALDI):m/z＝353.1153,calcd for C₁₉H₁₆N₂O₅[M+H]⁺:353.1137。

化合物I-17

氮’-[(6-异丙基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,4-二羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为67％，熔点202-206℃。

分子式：C₂₀H₁₈N₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.74(s,1H,NH),9.51(s,2H,OH),8.80–6.72(m,8H,＝CH-O,CH＝N,ArH),3.03(m,1H,CH),1.22(d,J＝6.9Hz,6H,CH₃)；

HRMS(MALDI):m/z＝367.1278,calcd for C₂₀H₁₈N₂O₅[M+H]⁺:367.1294。

化合物I-18

氮’-[(6-叔丁基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,4-二羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为灰绿色粉末，产率为38％，熔点205-208℃。

分子式：C₂₁H₂₀N₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.73(s,1H,NH),9.69(s,1H,OH),9.27(s,1H,OH),8.82–6.71(m,8H,＝CH-O,CH＝N,ArH),1.34(s,9H,CH₃)；

HRMS(MALDI):m/z＝381.1462,calcd for C₂₁H₂₀N₂O₅[M+H]⁺:381.1450。

化合物I-19

氮’-[(6-硝基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,4-二羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为黄色粉末，产率为67％，熔点203-207℃。

分子式：C₁₇H₁₁N₃O₇；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.75(s,1H,NH),9.65(s,1H,OH),9.25(s,1H,OH),8.92–6.75(m,8H,＝CH-O,CH＝N,ArH)；

HRMS(MALDI):m/z＝392.0478,calcd for C₁₇H₁₁N₃O₇[M+Na]⁺:392.0495.

化合物I-20

氮’-[(6-羟基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,4-二羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为80％，熔点214-217℃。

分子式：C₁₇H₁₂N₂O₆；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.66(s,1H,NH),10.37-8.96(m,3H,OH),8.82–6.72(m,8H,＝CH-O,CH＝N,ArH)；

HRMS(MALDI):m/z＝363.0576,calcd for C₁₇H₁₂N₂O₆[M+Na]⁺:363.0593.

化合物I-21

氮’-[(6-羧基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3,4-二羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为89％，熔点238-240℃。

分子式：C₁₈H₁₂N₂O₇；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ12.95(s,1H,COOH),11.74(s,1H,NH),9.66(s,1H,OH),9.26(s,1H,OH),8.87-6.73(m,8H,＝CH-O,CH＝N,ArH).

HRMS(MALDI):m/z＝391.0555,calcd for C₁₈H₁₂N₂O₇[M+Na]⁺:391.0542.

化合物I-22

氮’-[(6-羧基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-苯甲酰肼制备

所得纯品为黄色粉末，产率为60％，熔点209-211℃。

分子式：C₁₈H₁₂N₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ13.41(s,1H,COOH),11.98(s,1H,NH),8.90–7.48(m,10H,＝CH-O,CH＝N,ArH).

HRMS(MALDI):m/z＝359.0665,calcd for C₁₈H₁₂N₂O₇[M+Na]⁺:359.0644.

化合物I-23

氮’-[(6-羧基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-4-三氟甲基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为65％，熔点244-246℃。

分子式：C₁₉H₁₁F₃N₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ13.36(s,1H,COOH),12.13(s,1H,NH),8.90–7.73(m,9H,＝CH-O,CH＝N,ArH).

HRMS(MALDI):m/z＝405.0686,calcd for C₁₉H₁₁F₃N₂O₅[M+H]⁺:405.0698。

化合物I-24

氮’-[(6-羧基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-4-氟苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为75％，熔点237-239℃。

分子式：C₁₈H₁₁FN₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ13.34(s,1H,COOH),11.94(s,1H,NH),8.83–7.22(m,9H,＝CH-O,CH＝N,ArH).

HRMS(MALDI):m/z＝355.0751,calcd for C₁₈H₁₁FN₂O₅[M+H]⁺:355.0730。

化合物I-25

氮’-[(6-羧基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-4-硝基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为80％，熔点234-236℃。

分子式：C₁₈H₁₁N₃O₇；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ13.39(s,1H,COOH),12.21(s,1H,NH),8.92–7.77(m,9H,＝CH-O,CH＝N,ArH).

HRMS(MALDI):m/z＝382.0689,calcd for C₁₈H₁₁N₃O₇[M+H]⁺:382.0675.

化合物I-26

氮’-[(6-羧基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3-硝基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为82％，熔点227-229℃。

分子式：C₁₈H₁₁N₃O₇；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ13.38(s,1H,COOH),12.23(s,1H,NH),8.92–7.68(m,9H,＝CH-O,CH＝N,ArH).

HRMS(MALDI):m/z＝382.0689,calcd for C₁₈H₁₁N₃O₇[M+H]⁺:382.0675.

化合物I-27

氮’-[(6-羧基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-2-羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为87％，熔点231-234℃。

分子式：C₁₈H₁₂N₂O₆；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ12.89(s,1H,COOH),11.24(m,1H,NH),10.26(s,1H,OH),8.81–6.84(m,9H,＝CH-O,CH＝N,ArH).

HRMS(MALDI):m/z＝375.0579,calcd for C₁₈H₁₂N₂O₆[M+Na]⁺:375.0593.

化合物I-28

氮’-[(6-羧基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3-羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为83％，熔点232-234℃。

分子式：C₁₈H₁₂N₂O₆；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ13.33(s,1H,COOH),11.90(s,1H,NH),9.75(s,1H,OH),8.89–6.87(m,9H,＝CH-O,CH＝N,ArH).

HRMS(MALDI):m/z＝375.0579,calcd for C₁₈H₁₂N₂O₆[M+Na]⁺:375.0593.

化合物I-29

氮’-[(6-羧基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-4-羟基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为83％，熔点243-245℃。

分子式：C₁₈H₁₂N₂O₆；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ13.27(s,1H,COOH),11.77(s,1H,NH),10.14(s,1H,OH),8.93–6.72(m,9H,＝CH-O,CH＝N,ArH).

HRMS(MALDI):m/z＝375.0579,calcd for C₁₈H₁₂N₂O₆[M+Na]⁺:375.0593.

化合物I-30

氮’-[(6-羧基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-3-溴苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为70％，熔点247-249℃。

分子式：C₁₈H₁₁BrN₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ13.37(s,1H,COOH),12.01(s,1H,NH),8.89-7.39(m,9H,＝CH-O,CH＝N,ArH).

HRMS(MALDI):m/z＝414.9949,calcd for C₁₈H₁₁BrN₂O₅[M+H]⁺:414.9930.

化合物I-31

氮’-[(6-羧基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-4-溴苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为82％，熔点245-247℃。

分子式：C₁₈H₁₁BrN₂O₅；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ13.39(s,1H,COOH),12.02(s,1H,NH),8.91-7.65(m,9H,＝CH-O,CH＝N,ArH).

HRMS(MALDI):m/z＝414.9949,calcd for C₁₈H₁₁BrN₂O₅[M+H]⁺:414.9930.

化合物I-32

氮’-[(6-甲基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-4-三氟甲基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为91％，熔点172-174℃。

分子式：C₁₉H₁₃F₃N₂O₃；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ12.10(s,1H,NH),8.86–7.51(m,9H,＝CH-O,CH＝N,ArH),2.44(s,3H,CH₃).

HRMS(MALDI):m/z＝375.0970,calcd for C₁₉H₁₃F₃N₂O₃[M+H]⁺:375.0957.

化合物I-33

氮’-[(6-乙基-4-氧-4氢-色酮-3-)甲烯]-4-三氟甲基苯甲酰肼制备

所得纯品为白色粉末，产率为86％，熔点161-164℃。

分子式：C₂₀H₁₅F₃N₂O₃；

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ12.10(s,1H,NH),8.86–7.53(m,9H,＝CH-O,CH＝N,ArH),2.75(q,J＝7,5Hz,2H,CH₂),1.22(t,J＝7.5Hz,3H,CH₃).

HRMS(MALDI):m/z＝389.1129,calcd for C₂₀H₁₅F₃N₂O₃[M+H]⁺:389.1113.

下面通过实施例2来具体地说明本发明的I式化合物对蓝藻集胞藻PCC6803生长有较好抑制作用的生物活性。

实施例2

对以上合成的33种化合物进行集胞藻PCC6803藻体水平生长抑制试验。集胞藻PCC6803培养于含不同浓度化合物的BG-11(+N)液体培养基中，在人工气候培养箱中培养。控制培养箱温度为28℃±1℃，湿度60％，光强为6000lx，12h(光照):12h(黑暗)，振动模式，另每日人工摇3次。

具体操作如下：

1、预培养一批蓝藻，待生长4-7天到对数期后，测OD680，接种待用；

2、用新鲜的BG-11(+N)培养基稀释上述对数期藻液，获得接种藻液，并控制藻细胞浓度约1×10⁶个/mL；

3、预先称量化合物，用DMSO溶解,配制不同浓度的化合物。向96孔板中的每个孔中加入200μL稀释好的接种藻液，然后再加入1μL一定浓度的化合物。每个浓度的化合物平行做5组，同时设置不含化合物的空白对照和化合物背景对照；

4、在人工气候培养箱中培养7天后用酶标仪测OD680，计算不同浓度化合物的抑制率；

抑制率计算公式：

生长抑制率＝[空白对照组OD680-(实验组OD680-化合物背景对照组OD680)]×100/空白对照组OD680；

5、以化合物的浓度为横坐标，生长抑制率为纵坐标作图，在Origin里用公式logistic拟合，求得33种化合物的EC₅₀值。结果列于表1。

表1通式I的化合物对集胞藻PCC6803抑制的EC₅₀值

表中省略符号的含义：Me甲基，Et乙基，i-Pr异丙基，t-Bu叔丁基。

从上表的EC₅₀值可以看出，以I式为通式的33种化合物对集胞藻PCC6803抑制的EC₅₀值在0.8～29.8μM，说明它们对蓝藻中的集胞藻PCC6803具有较好的抑制作用。

以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。