脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液及贴敷的制备方法
阅读说明：本技术 脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液及贴敷的制备方法 (Aseptic collagen liquid of adipose-derived stem cell exosome and preparation method of application ) 是由 张伟 胡大海 李超 于 2019-12-27 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液,由脂肪干细胞外泌体和无菌胶原液组成,每毫升无菌胶原液中含有0.5-0.8mg外泌体。其制备方法为：在无菌环境下,将脂肪干细胞外泌体和无菌胶原液混合并搅拌均匀,低温保存即可。本发明还公开了脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液贴敷的制备方法,无菌条件下将脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液压合在两块无纺布中间,再装入铝箔袋中封口低温保存即可。本发明通过将脂肪干细胞外泌体和无菌胶原液相结合制得脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液,能够充分发挥两者的作用,对皮肤损伤修复以及创面修复有更好的治疗效果,且能够缩短创面愈合时间。(The invention discloses sterile collagen liquid of an adipose-derived stem cell exosome, which consists of the adipose-derived stem cell exosome and sterile collagen liquid, wherein each milliliter of the sterile collagen liquid contains 0.5-0.8mg of exosome. The preparation method comprises the following steps: mixing the adipose stem cell exosome and the sterile collagen liquid in a sterile environment, uniformly stirring, and storing at a low temperature. The invention also discloses a preparation method of the adipose-derived stem cell exosome by applying the sterile collagen liquid, which is characterized in that the sterile collagen liquid of the adipose-derived stem cell exosome is pressed between two non-woven fabrics under the aseptic condition, and then the non-woven fabrics are put into an aluminum foil bag to be sealed and stored at low temperature. The invention prepares the aseptic collagen liquid of the adipose-derived stem cell exosome by combining the adipose-derived stem cell exosome with the aseptic collagen liquid, can fully play the roles of the adipose-derived stem cell exosome and the aseptic collagen liquid, has better treatment effect on skin injury repair and wound repair, and can shorten the wound healing time.)
技术领域
本发明涉及无菌胶原液及贴敷制备技术领域，具体地说，涉及一种脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液及贴敷的制备方法。
背景技术
胶原是由三条肽链拧成螺旋形的纤维状的细胞外蛋白质，占全身蛋白质的25%-30%，具有独特的生物活性。胶原富含人体必需的甘氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸等氨基酸，是细胞外基质中最重要的组成部分，具有强的生物活性及生物功能，能参与细胞的迁移、分化和增殖，使骨腱、软骨和皮肤具有一定的机械强度，且由于其微弱的抗原性和良好的生物相容性，在烧伤、创伤、眼角膜疾病、美容、硬组织修复、创面止血等医药卫生领域用途广泛。
外泌体是一种能被大多数细胞分泌的微小囊泡，具有脂质双层膜结构，直径大约30-150nm。外泌体中含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸，能够作为信号分子传递给其他细胞从而改变其他细胞的功能，在免疫抗原呈递、肿瘤的生长于迁移、组织损伤的修复中有重要作用。脂肪干细胞是近年来从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞。主要恢复组织细胞的修复功能，促进细胞的再生，恢复年轻面容的同时，身体机能也得到充分改善，有效改善亚健康、早衰等疾病，由内而外真正的有效抵抗衰老。
目前，关于脂肪干细胞外泌体与无菌胶原液相结合的有效研究较少，使得脂肪干细胞外泌体与无菌胶原液之间结合之后的益处无法得到体现，从而在一定程度上限制了脂肪干细胞外泌体与无菌胶原液产物的作用发挥。
发明内容
有鉴于此，本发明针对现有存在的问题，提供了一种脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液及贴敷的制备方法。
为了解决上述技术问题，本发明公开了一种脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液，由脂肪干细胞外泌体和无菌胶原液组成，每毫升无菌胶原液中含有0.5-0.8mg外泌体。
进一步地，无菌胶原液为鱼皮胶原液。
本发明公开的第二个技术方案是，一种脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液的制备方法，在无菌环境下，将脂肪干细胞外泌体和无菌胶原液混合，其中每毫升无菌胶原液中含有0.5-0.8mg外泌体，并搅拌均匀，低温保存，得到脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液。
进一步地，无菌胶原液为鱼皮胶原液。
本发明公开的第三个技术方案是，一种脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液贴敷的制备方法，具体包括以下步骤：
步骤1，在具备无菌过程控制的环境下，取两块大小规格相同的矩形无纺布，将上述制备的脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液涂覆到其中一块无纺布中间；
步骤2，在涂覆有脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液的无纺布的***涂上一层粘胶然后将两块无纺布粘接起来，使脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液压合在两块无纺布中间，即得无菌胶原液贴敷；
步骤3，将步骤2得到的无菌胶原液贴敷置于铝箔袋中，封口、低温保存即可。
进一步地，步骤1中脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液的涂覆厚度为2-3mm。
进一步地，步骤2中粘胶的厚度为0.5-1mm。
本发明公开的第四个技术方案是，上述制备的脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液贴敷在制备皮肤损伤修复产品、创面修复产品、医疗美容产品或化妆品中的应用。
本发明可以获得包括以下技术效果：
本发明脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液，通过将脂肪干细胞外泌体和无菌胶原液相结合制得脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液，能够充分发挥脂肪干细胞外泌体和无菌胶原液两者的作用，对皮肤损伤修复以及创面修复有更好的治疗效果，且能够缩短创面愈合时间。
本发明脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液贴敷的制备方法，在无菌条件下进行贴敷的制备，减少了后续再进行灭菌的步骤，减少成本的同时有利于胶原保持完好的生物活性。
具体实施方式
以下将配合实施例来详细说明本发明的实施方式，藉此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。
本发明公开了一种脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液，由脂肪干细胞外泌体和无菌胶原液组成，每毫升无菌胶原液中含有0.5-0.8mg外泌体。
其中无菌胶原液为鱼皮胶原液，鱼皮胶原液的加工方法为现有技术。
脂肪干细胞外泌体通过现有方法提取得到。
本发明还公开上述脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液的制备方法，在无菌环境下，将脂肪干细胞外泌体和无菌胶原液混合，其中每毫升无菌胶原液中含有0.5-0.8mg外泌体，并搅拌均匀，低温保存，得到。
本发明脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液，通过将脂肪干细胞外泌体和无菌胶原液相结合制得脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液，能够充分发挥脂肪干细胞外泌体和无菌胶原液两者的作用，对皮肤损伤修复以及创面修复有更好的治疗效果，且能够缩短创面愈合时间。
本发明还公开了上述脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液贴敷的制备方法，具体包括以下步骤：
步骤1，在具备无菌过程控制的环境下，取两块大小规格相同的矩形无纺布，将上述制备的脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液涂覆到其中一块无纺布中间，脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液的涂覆厚度为2-3mm；
步骤2，在涂覆有脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液的无纺布的***涂上一层粘胶，粘胶的厚度为0.5-1mm，然后将两块无纺布粘接起来，使脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液压合在两块无纺布中间，即得无菌胶原液贴敷；
步骤3，将步骤2得到的无菌胶原液贴敷置于铝箔袋中，封口、低温保存即可。
本发明脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液贴敷的制备方法，在无菌条件下进行贴敷的制备，减少了后续再进行灭菌的步骤，减少成本的同时有利于胶原保持完好的生物活性。
实施例1 脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液的制备方法
在无菌环境下，将脂肪干细胞外泌体和无菌胶原液混合，其中每毫升无菌胶原液中含有0.5mg外泌体，并搅拌均匀，低温保存，得到脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液。
其中无菌胶原液为鱼皮胶原液；脂肪干细胞外泌体通过现有方法提取得到。
实施例2 脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液贴敷的制备方法
具体包括以下步骤：
步骤1，在具备无菌过程控制的环境下，取两块大小规格相同的矩形无纺布，将实施例1制备的脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液涂覆到其中一块无纺布中间，脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液的涂覆厚度为2mm；
步骤2，在涂覆有脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液的无纺布的***涂上一层粘胶，粘胶的厚度为0.5mm，然后将两块无纺布粘接起来，使脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液压合在两块无纺布中间，即得无菌胶原液贴敷；
步骤3，将步骤2得到的无菌胶原液贴敷置于铝箔袋中，封口、4°C低温保存即可。
实施例3 脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液的制备方法
在无菌环境下，将脂肪干细胞外泌体和无菌胶原液混合，其中每毫升无菌胶原液中含有0.6mg外泌体，并搅拌均匀，低温保存，得到脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液。
其中无菌胶原液为鱼皮胶原液；脂肪干细胞外泌体通过现有方法提取得到。
实施例4 脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液贴敷的制备方法
具体包括以下步骤：
步骤1，在具备无菌过程控制的环境下，取两块大小规格相同的矩形无纺布，将实施例3制备的脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液涂覆到其中一块无纺布中间，脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液的涂覆厚度为2.5mm；
步骤2，在涂覆有脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液的无纺布的***涂上一层粘胶，粘胶的厚度为1mm，然后将两块无纺布粘接起来，使脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液压合在两块无纺布中间，即得无菌胶原液贴敷；
步骤3，将步骤2得到的无菌胶原液贴敷置于铝箔袋中，封口、4°C低温保存即可。
实施例5 脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液的制备方法
在无菌环境下，将脂肪干细胞外泌体和无菌胶原液混合，其中每毫升无菌胶原液中含有0.7mg外泌体，并搅拌均匀，低温保存，得到脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液。
其中无菌胶原液为鱼皮胶原液；脂肪干细胞外泌体通过现有方法提取得到。
实施例6 脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液贴敷的制备方法
具体包括以下步骤：
步骤1，在具备无菌过程控制的环境下，取两块大小规格相同的矩形无纺布，将实施例5制备的脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液涂覆到其中一块无纺布中间，脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液的涂覆厚度为3mm；
步骤2，在涂覆有脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液的无纺布的***涂上一层粘胶，粘胶的厚度为0.8mm，然后将两块无纺布粘接起来，使脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液压合在两块无纺布中间，即得无菌胶原液贴敷；
步骤3，将步骤2得到的无菌胶原液贴敷置于铝箔袋中，封口、4°C低温保存即可。
实施例7 脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液的制备方法
在无菌环境下，将脂肪干细胞外泌体和无菌胶原液混合，其中每毫升无菌胶原液中含有0.8mg外泌体，并搅拌均匀，低温保存，得到脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液。
其中无菌胶原液为鱼皮胶原液；脂肪干细胞外泌体通过现有方法提取得到。
实施例8 脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液贴敷的制备方法
具体包括以下步骤：
步骤1，在具备无菌过程控制的环境下，取两块大小规格相同的矩形无纺布，将实施例7制备的脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液涂覆到其中一块无纺布中间，脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液的涂覆厚度为2.5mm；
步骤2，在涂覆有脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液的无纺布的***涂上一层粘胶，粘胶的厚度为0.6mm，然后将两块无纺布粘接起来，使脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液压合在两块无纺布中间，即得无菌胶原液贴敷；
步骤3，将步骤2得到的无菌胶原液贴敷置于铝箔袋中，封口、4°C低温保存即可。
上述脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液贴敷可应用于皮肤损伤修复、创面修复，如烧伤创面、烫伤创面、激光美容等等。
细胞毒性检测
对实施例2、4、6、8制备的脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液贴敷进行生物性能检测，结果显示细胞毒性计分小于1，无致敏反应，无皮肉刺激反应或极轻微刺激，无亚慢性全身毒性，且无遗传毒性。
微生物性能检测
对实施例2、4、6、8制备的脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液贴敷进行微生物检测，结果显示无菌。
创面修复作用检测
利用实施例2、4、6、8制备的脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液贴敷治疗浅II度烧伤创面随机、对照临床实验结果：本实验样本量为150例，试验器械为实施例2、4、6、8制备的脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液贴敷，对照器械为凡士林贴敷料和无菌胶原液贴敷料，实验结果显示，相比较于凡士林贴敷料和无菌胶原液贴敷料，实施例2、4、6、8制备的脂肪干细胞外泌体的无菌胶原液贴敷能够较快缩短浅II度烧伤创面的愈合时间，改善局部症状体征，促进创面愈合，提高创面的综合愈合率，从而减轻患者在创面修复过程中的痛苦，值得临床推广应用。
上述说明示出并描述了发明的若干优选实施例，但如前所述，应当理解发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离发明的精神和范围，则都应在发明所附权利要求的保护范围内。