阅读说明：本技术 一种从银杏叶提取物生产废液中提取多种活性物质的方法 (Method for extracting multiple active substances from waste liquid of ginkgo leaf extract production ) 是由 何桥 曹春月 王黔阳 陈震 杨明武 陈伟 欧琴 于 2019-10-29 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种从银杏叶提取物生产废液中提取多种活性物质的方法,该方法包括如下步骤：(1)银杏叶提取物生产废液的醇沉；(2)醇沉物加工；(3)醇沉液加工；(4)莽草酸粗晶体再结晶。与现有技术相比较,本发明可有效地连续综合提取银杏叶中银杏叶提取物、银杏叶多糖、银杏叶蛋白及莽草酸4个产品,提高银杏叶药材的综合利用度；综合回收利用银杏叶多糖、银杏叶蛋白及莽草酸,从而降低生产过程中废水处理的成本；洗柱时采用阴离子及活性碳柱双柱串联,洗脱的同时进行脱色处理,减少结晶时二次脱色工序,提高生产效率。适用于银杏叶的综合加工利用。(The invention discloses a method for extracting various active substances from waste liquid in the production of ginkgo leaf extract, which comprises the following steps: (1) alcohol precipitation of waste liquid from ginkgo leaf extract production; (2) processing alcohol precipitation; (3) processing an alcohol precipitation solution; (4) recrystallizing shikimic acid crude crystal. Compared with the prior art, the invention can effectively and continuously extract 4 products of ginkgo leaf extract, ginkgo leaf polysaccharide, ginkgo leaf protein and shikimic acid in ginkgo leaves, and improve the comprehensive utilization degree of ginkgo leaf medicinal materials; comprehensively recycling the ginkgo biloba polysaccharides, the ginkgo biloba proteins and the shikimic acid, thereby reducing the cost of wastewater treatment in the production process; when the column is washed, double columns of anions and activated carbon columns are connected in series, and the decoloring treatment is carried out while the elution is carried out, so that the secondary decoloring procedure during the crystallization is reduced, and the production efficiency is improved. Is suitable for comprehensive processing and utilization of ginkgo leaves.)

一种从银杏叶提取物生产废液中提取多种活性物质的方法

技术领域

本发明涉及废水的多级处理，具体而言，涉及银杏叶提取及其废液综合利用、得到多种活性物质的方法。

技术背景

众所周知，银杏叶为银杏科银杏属植物银杏(Ginkgo biloba L.)的叶。银杏叶提取物具有独特的生理药理作用和治疗价值，特别是银杏内酯是具有高度专属性的PAF(血小板活化因子)受体阻断剂，而备受人们的重视。文献认为银杏叶提取物主要药理作用表现为：对中枢神经系统的作用、抗休克作用、抗过敏作用。对器官移植排斥反应的保护作用，除上述作用外，对细胞的免疫反应、眼睛病变，内毒素所致的循环改变均有抑制作用，对生殖系用也有作用。我国自上世纪70年代就开发出银杏叶的提取物，但对于银杏叶提取废液的综合利用的研究并不多。

目前，中国专利数据库中，涉及银杏叶提取废水的专利申请件有2件：CN106495411A号《银杏叶提取物提取过程中的废水处理ICBB工艺及装置》和CN110002616A号《银杏叶提取银杏黄酮的废水处理循环再利用装置及方法》，这两个方案均为对银杏叶提取废水的处理技术。另外，涉及从银杏叶提取废液中制备莽草酸的专利申请件有3件：CN109593034A号《一种从银杏叶提取废液中制备莽草酸的方法》、CN108191639A号《一种从银杏叶提取物层析废液中制备莽草酸提取物的方法》、CN109369373A号《一种从银杏叶提取物层析废液中制备莽草酸提取物的方法》，均为制取莽草酸的技术方案。目前尚无对于银杏叶提取废液的综合利用的专利申请件。

发明内容

本发明旨在提供一种从银杏叶提取物生产废液中提取多种活性物质的方法，不仅将银杏叶提取物生产废液变废为宝，减少其对环境的污染，而且还能够得到银杏叶多糖、银杏叶蛋白及莽草酸产品，实现综合利用。

发明人提供的从银杏叶提取物生产废液中提取多种活性物质的方法，包括以下步骤：

(1)银杏叶提取物生产废液的醇沉

以依据中国药典制备的银杏叶提取物生产过程中产生的大孔树脂上样残液和水洗液，进行浓缩至料液相对密度约1.1，即为原料液。采用乙醇进行醇沉，得到的白色沉淀物和醇沉液，备用；

(2)醇沉物加工

将白色沉淀物加水溶解，得到的溶液再经过5000或1万分子量超滤，浓缩液进一步真空浓缩成约200L，加入Sevage试剂混合，振荡，离心，得到银杏叶粗蛋白质沉淀，离心液蒸干得到银杏叶粗多糖；

(3)醇沉液加工

将醇沉液浓缩至无醇味，再上处理好的阴离子树脂进行柱层析，将提取液于吸附柱上方缓慢上样，吸附一段时间后，用蒸馏水水洗去杂，去杂完后串联活性碳柱，再用甲酸水溶液洗脱串柱，收集洗脱液，浓缩洗脱液至小体积放置于0℃～25℃环境中结晶，得纯度大于80％莽草酸粗晶体；

(4)莽草酸粗晶体再结晶

将莽草酸粗晶体加甲醇或水溶解后，放置与粗结晶相同的温度环境下进行二次结晶，即可得纯度大于98％的莽草酸晶体。

上述第(1)步中，所述乙醇的质量分数为90％～95％。

上述第(2)步中，所述加水的量为使其料液比在1∶10～1∶20；所述真空浓缩控制的真空度为0.06～0.09MPa；所述Sevage试剂是氯仿与正丁醇的混合物，其中氯仿与正丁醇的体积比为4∶1。

上述第(3)步中，所述上样速度为1～2倍柱体积/h；所述水洗去杂的蒸馏水用量为2～4倍柱体积；所述洗脱串柱的甲酸水溶液质量分数为3％～8％，该甲酸水溶液用量为3～5倍柱体积。

上述第(4)步中，所述加甲醇或水的量为莽草酸粗晶体量的1/5～1/10；所述与粗结晶相同的温度为0℃～25℃。

发明人指出，第(2)步制得的银杏叶粗蛋白质沉淀和银杏叶粗多糖，根据市场的需要，可以采用常规工艺进一步加工提纯，制得纯品。

本发明的创新点：

(1)本发明可有效地连续综合提取银杏叶中银杏叶提取物、银杏叶多糖、银杏叶蛋白及莽草酸4个产品，提高银杏叶药材的综合利用度，使产品综合生产成本较低，有效提高生产厂的市场竞争力。

(2)在银杏叶提取物生产过程中，从废弃的废水中综合回收利用了银杏叶多糖、银杏叶蛋白及莽草酸，从而降低生产过程中废水处理压力。

(3)洗柱时采用阴离子及活性碳柱双柱串联，富集洗脱的同时进行脱色处理，减少结晶时二次脱色工序，提高生产效率。

本发明适用于银杏叶生产银杏叶提取物的综合加工利用。

附图说明

图1为莽草酸晶体图谱，

图2为原料液图谱，

图3为银杏叶中莽草酸图谱。

具体实施方式

实施例1

称取银杏叶1t，加70％乙醇进行回流提取，提取2次；合并提取液浓缩至无醇味，加入料液3倍体积的水搅拌沉淀；过滤得清液，过滤清液上DM130柱层析，2倍柱体积的水洗，收集上柱流出液及水洗液备用；用70％乙醇水溶液洗脱，洗脱液经脱酸树脂脱酸后浓缩烘干得2015版《中国药典》一部项下银杏叶提取物；

收集树脂柱层析上柱流出液及水洗液3吨，将其进行浓缩至料液相对密度1.1，再加入95％乙醇料液体积9倍量进行醇沉，过滤，收集白色絮状沉淀，沉淀进行银杏叶多糖及银杏蛋白分离纯化，滤液进行莽草酸分离。

将醇沉白色沉淀按料液比加入1∶20量水进行溶解后，溶液再经过1万分子量超滤，浓缩液进一步在约0.08MPa真空度下浓缩成约200L，加入Sevage试剂(氯仿与正丁醇的体积比为4∶1)混合，振荡，离心，可得银杏叶粗蛋白质沉淀，离心液蒸干得银杏叶粗多糖，两种产品烘干银杏叶粗蛋白质沉淀约80kg，银杏叶粗多糖约60kg。银杏叶粗蛋白质与银杏叶粗多糖根据用户需要直接应用或进一步加工。

再将醇沉滤液浓缩至无醇味，上处理好约500L阴离子树脂进行柱层析，将提取液于吸附柱上方缓慢上样(上样速度为1倍柱体积/h)，用3倍体积的蒸馏水水洗去杂，去杂完成后将阴离子柱串联300L活性碳柱，再用5倍体积的浓度为4％甲酸水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩洗脱液至80L放置于室温环境结晶，得莽草酸粗晶体，利用真空抽滤抽出粗晶体。将粗晶体加入按料液比1∶5水溶解后，放置相同温度环境下进行二次结晶，即可得纯度大于98％的莽草酸白色粒状晶体，抽滤后烘干得98％莽草酸白色晶体。

实施例2

称取银杏叶1吨，加70％乙醇进行回流提取，提取2次；合并提取液浓缩至无醇味，加入料液4倍体积的水搅拌沉淀；过滤得清液，过滤清液上D101柱层析，3倍柱体积的水洗，收集上柱流出液及水洗液备用；用68％乙醇水溶液洗脱，洗脱液经脱酸树脂脱酸后浓缩烘干得2015版《中国药典》一部项下银杏叶提取物；

收集树脂柱层析上柱流出液及水洗液4t，将其进行浓缩至料液相对密度1.1，再加入95％乙醇料液体积10倍量进行醇沉，过滤，收集白色絮状沉淀，沉淀进行银杏叶多糖及银杏蛋白分离纯化，滤液进行莽草酸分离。

将醇沉白色沉淀按料液比加入1∶15量水进行溶解后，溶液再经过1万分子量超滤，浓缩液进一步在约0.08MPa真空度下浓缩成约150L，加入一定量的Sevage试剂(氯仿与正丁醇的质量比为4∶1)混合，振荡，离心，可得银杏叶粗蛋白质沉淀；离心液蒸干得银杏叶粗多糖，两种产品烘干银杏叶粗蛋白质沉淀约75kg，银杏叶粗多糖约55kg。银杏叶粗蛋白质与银杏叶粗多糖根据用户需要直接应用或进一步加工。

再将醇沉滤液浓缩至无醇味，上处理好约600L阴离子树脂进行柱层析，将提取液于吸附柱上方缓慢上样(上样速度为1倍柱体积/h)，用3倍体积的蒸馏水水洗去杂，去杂完成后将阴离子柱串联300L活性碳柱，再用4倍体积的浓度为4％甲酸水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩洗脱液至80L放置于室温环境结晶，得莽草酸粗晶体，利用真空抽滤抽出粗晶体。将粗晶体按料液比1∶5加入50％甲醇水溶解后，放置相同温度环境下进行二次结晶，即可得纯度大于98％的莽草酸白色粒状晶体，抽滤后烘干得98％莽草酸白色晶体。

表1工艺过程中不同阶段样品莽草酸含量

表2不同生产批次产品质量表：

莽草酸产品质量分析报告

Quality analysis report of shikimic acid