阅读说明：本技术 一种从牛腩中提取亚油酸的方法 (Method for extracting linoleic acid from sirloin ) 是由 谭春萍 黄广君 唐榕 程忠 黄福标 黄春兰 于 2019-10-30 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种从牛腩中提取亚油酸的方法,包括牛腩预处理、酶解、浸提、离心、萃取、结晶、萃取等步骤。本申请首次提出从牛腩中提取亚油酸,并给出了具体的提取方法,使牛腩能够得到充分再利用,为牛腩的研究提供了新思路；且操作简单,亚油酸的提取率高,降低了提取成本。(The invention discloses a method for extracting linoleic acid from sirloin, which comprises the steps of sirloin pretreatment, enzymolysis, leaching, centrifugation, extraction, crystallization, extraction and the like. The application firstly provides the extraction of linoleic acid from sirloin and provides a specific extraction method, so that the sirloin can be fully recycled, and a new idea is provided for the research of the sirloin; and the operation is simple, the extraction rate of the linoleic acid is high, and the extraction cost is reduced.)

一种从牛腩中提取亚油酸的方法

技术领域

本发明属于保健品生产加工技术领域，尤其涉及一种从牛腩中提取亚油酸的方法。

背景技术

亚油酸，一种脂肪酸，学名顺，顺-9，12-十八(碳)二烯酸。亚油酸与其他脂肪酸一起，以甘油酯的形式存在于动植物油脂中，为以甘油酯形态构成的亚麻仁油、棉籽油之类的干性油、半干性油的主要成分。人体不能合成亚油酸，或是合成的量远不能满足需要的脂肪酸，叫做必需脂肪酸。亚油酸是公认的一种必需脂肪酸。由于亚油酸能降低血液胆固醇，预防动脉粥样硬化而倍受重视。研究发现，胆固醇必须与亚油酸结合后，才能在体内进行正常的运转和代谢。如果缺乏亚油酸，胆固醇就会与一些饱和脂肪酸结合，发生代谢障碍，在血管壁上沉积下来，逐步形成动脉粥样硬化，引发心脑血管疾病。

牛腩是指带有筋、肉、油花的肉块，即牛腹部及靠近牛肋处的松软肌肉，是一种统称。若依部位来分，牛身上许多地方的肉都可以叫做牛腩。另外，在里脊肉上层有一片筋少、油少、肉多，但形状不大规则的里脊边，也可以称作牛腩，是上等的红烧部位。牛腱可以算是牛腩的一种，筋肉多、油少，甚至全是瘦肉，一般用来卤，不适合炖汤，更不适合红烧。

牛腩提供高质量的蛋白质，含有全部种类的氨基酸，各种氨基酸的比例与人体蛋白质中各种氨基酸的比例基本一致，其中所含的肌氨酸比任何食物都高；脂肪含量很低，却是低脂亚油酸的来源，还是潜在的抗氧化剂；含有矿物质和维他命B群，包括烟酸、维生素B1和核黄素。牛肉是每天所需要的铁质的最佳来源。牛腩味甘，性平；归脾、胃经；牛肉具有补脾胃、益气血、强筋骨、消水肿等功效。老年人将牛肉与仙人掌同食，可起到抗癌止痛、提高机体免疫功能的效果；牛肉加红枣炖服，则有助肌肉生长和促伤口愈合之功效。

亚油酸是一种不饱和脂肪酸，其提取方法较多，目前从牛身上提取亚油酸的公开文献较少，专利申请CN201910173201.4，公开了一种牛膝叶中亚油酸的提取方法，属于亚油酸的提取技术领域。本发明的技术方案要点为：将牛膝叶晾干粉碎，正己烷浸提后，经皂化处理，在低温下进行尿素包合，即得到亚油酸。本发明所提供的牛膝叶中亚油酸的提取方法，操作简单，亚油酸提取率好，所用试剂价格低廉，来源广泛，易于获得，为亚油酸的生产工艺研究及牛膝叶的开发利用提供了新思路。

多项研究数据显示，亚油酸可以显著降低血液脂肪水平、软化中小血管、缓和血压、增加血液循环、间接恢复神经功能等作用，可预防或减少心脑血管疾病的发病率，特别是对高血压、高血脂、心绞痛、冠心病、动脉粥样硬化、老年性肥胖症等的防治极为有利，能起到防止人体血清胆固醇在血管壁的沉积，有“血管清道夫”的美誉，具有防治动脉粥样硬化及心血管疾病的保健效果。

但是，目前还未发现有文献公开如何从牛腩中提取亚油酸，因此，研制出一种从牛腩中提取亚油酸的方法尤为重要。

发明内容

本发明为解决上述技术问题，提供了一种从牛腩中提取亚油酸的方法。本申请首次提出从牛腩中提取亚油酸，并给出了具体的提取方法，使牛腩能够得到充分再利用，为牛腩的研究提供了新思路；且操作简单，亚油酸的提取率高，降低了提取成本。

为了能够达到上述所述目的，本发明采用以下技术方案：

一种从牛腩中提取亚油酸的方法，包括以下步骤：

(1)牛腩预处理：将牛腩用冷水清洗干净，在70～75℃下烘干至含水量为20～25％，送入超微粉碎机中超微粉碎，得到牛腩粉末；

(2)酶解：向步骤(1)的牛腩粉末中加入其重量0.75～0.85倍的清水，然后加入胃蛋白酶酶解100～120min，微波处理辅助酶解后在65～70℃下灭酶，再加入胰蛋白酶酶解90～100min，超声波处理辅助酶解，离心过滤收集滤渣；

(3)浸提、离心：向步骤(2)的滤渣中加入正己烷溶液，回流浸提，离心过滤除渣，得到牛腩油；

(4)萃取：向步骤(3)的牛腩油中加入NaOH乙醇溶液，在88～95℃下加热搅拌反应115～125min，冷却至室温，搅拌状态下，加入1mol/L盐酸溶液调节pH值为2～3，加入石油醚萃取分离，上层用水洗至中性，旋转蒸发回收溶剂石油醚，然后用无水硫酸钠去除水分，得到混合脂肪酸；

(5)结晶、萃取：取无水乙醇溶液加热至65～70℃，边搅拌边加入尿素，使尿素完全溶于乙醇中，然后加入步骤(4)的混合脂肪酸加热搅拌回流，冷却至室温，冷冻结晶，抽滤，结晶物用正己烷洗涤并萃取，有机相用水洗至无尿素，再用无水硫酸钠去除水分，旋转蒸发回收溶剂有机溶剂，得到亚油酸。

进一步地，在步骤(1)，所述超微粉碎的频率为0.01～0.05KHz，风速1.2～1.5m/s，时间为15～20min，粉碎至物料目粒度为20～25μm。

进一步地，在步骤(2)，所述胃蛋白酶加入量是牛腩粉末重量的2～3％；所述胰蛋白酶加入量是牛腩粉末重量的1.5～2.5％。

进一步地，在步骤(2)，所述微波处理的频率为0.05～0.1KHz，功率为500～550W，时间为80～100min。

进一步地，在步骤(2)，所述超声波处理的频率为0.2～0.3Mpa，功率为500～600W，时间为10～15min，进行超声波处理时，在酶解的90～100min时间里超声波采取运行20～22min暂停1～2min的方式。

进一步地，在步骤(3)，所述回流浸提的温度为65～70℃，时间为7.5～8.5h；所述离心的转速为6000～6500r/min，时间为30～35min。

进一步地，在步骤(4)，所述NaOH乙醇溶液的质量浓度为4～6％，加入量为牛腩油的4.5～5.5倍。

进一步地，在步骤(5)，所述尿素和无水乙醇的质量比＝1:18～20；所述混合脂肪酸与尿素的质量比＝1.5～3:1。

进一步地，在步骤(5)，所述加热搅拌回流的温度为60～65℃，时间为30～35min、搅拌转速为350～400r/min。

进一步地，在步骤(5)，所述冷冻结晶的温度为-10～3℃，时间为10～15h。

由于本发明采用了以上技术方案，具有以下有益效果：

(1)本申请首次提出从牛腩中提取亚油酸，并给出了具体的提取方法，使牛腩能够得到充分再利用，为牛腩的研究提供了新思路；且操作简单，亚油酸的提取率高，降低了提取成本。

(2)我国是继美国和巴西之后，已成为肉牛养殖和牛肉生产世界第三大养殖生产国，且近年来我国肉牛的存栏量一直保持稳定低速增长态势，而目前的牛腩仅仅被用于肉食，其商品价值较低；本申请提取得到的亚油酸具有降低血脂、软化血管、降低血压、促进微循环的作用，可预防或减少心血管病的发病率，特别是对高血压、高血脂、心绞痛、冠心病、动脉粥样硬化、老年性肥胖症等的防治极为有利，因此，通过本申请方法对牛腩进行提取后，提高了牛腩的利用价值。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，但本发明并不局限于这些实施方式，任何在本实施例基本精神上的改进或代替，仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。

实施例1

一种从牛腩中提取亚油酸的方法，包括以下步骤：

(1)牛腩预处理：将牛腩用冷水清洗干净，在70℃下烘干至含水量为20％，送入超微粉碎机中超微粉碎，得到牛腩粉末；所述超微粉碎的频率为0.01KHz，风速1.2m/s，时间为15min，粉碎至物料目粒度为20μm；

(2)酶解：向步骤(1)的牛腩粉末中加入其重量0.75倍的清水，然后加入胃蛋白酶酶解100min，微波处理辅助酶解后在65℃下灭酶，再加入胰蛋白酶酶解90min，超声波处理辅助酶解，离心过滤收集滤渣；

所述胃蛋白酶加入量是牛腩粉末重量的2％；所述胰蛋白酶加入量是牛腩粉末重量的1.5％；所述微波处理的频率为0.05KHz，功率为500W，时间为80min；所述超声波处理的频率为0.2Mpa，功率为500W，时间为10min，进行超声波处理时，在酶解的90min时间里超声波采取运行20min暂停1min的方式；

(3)浸提、离心：向步骤(2)的滤渣中加入正己烷溶液，回流浸提，离心过滤除渣，得到牛腩油；所述回流浸提的温度为65℃，时间为7.5h；所述离心的转速为6000r/min，时间为30min；

(4)萃取：向步骤(3)的牛腩油中加入NaOH乙醇溶液，在88℃下加热搅拌反应115min，冷却至室温，搅拌状态下，加入1mol/L盐酸溶液调节pH值为2，加入石油醚萃取分离，上层用水洗至中性，旋转蒸发回收溶剂石油醚，然后用无水硫酸钠去除水分，得到混合脂肪酸；所述NaOH乙醇溶液的质量浓度为4％，加入量为牛腩油的4.5倍；

(5)结晶、萃取：取无水乙醇溶液加热至65℃，边搅拌边加入尿素，使尿素完全溶于乙醇中，然后加入步骤(4)的混合脂肪酸加热搅拌回流，冷却至室温，冷冻结晶，抽滤，结晶物用正己烷洗涤并萃取，有机相用水洗至无尿素，再用无水硫酸钠去除水分，旋转蒸发回收溶剂有机溶剂，得到亚油酸；所述尿素和无水乙醇的质量比＝1:18；所述混合脂肪酸与尿素的质量比＝1.5:1；所述加热搅拌回流的温度为60℃，时间为30min、搅拌转速为350r/min；所述冷冻结晶的温度为3℃，时间为10h。

实施例2

一种从牛腩中提取亚油酸的方法，包括以下步骤：

(1)牛腩预处理：将牛腩用冷水清洗干净，在75℃下烘干至含水量为25％，送入超微粉碎机中超微粉碎，得到牛腩粉末；所述超微粉碎的频率为0.05KHz，风速1.5m/s，时间为20min，粉碎至物料目粒度为25μm；

(2)酶解：向步骤(1)的牛腩粉末中加入其重量0.85倍的清水，然后加入胃蛋白酶酶解120min，微波处理辅助酶解后在70℃下灭酶，再加入胰蛋白酶酶解100min，超声波处理辅助酶解，离心过滤收集滤渣；

所述胃蛋白酶加入量是牛腩粉末重量的3％；所述胰蛋白酶加入量是牛腩粉末重量的2.5％；所述微波处理的频率为0.1KHz，功率为550W，时间为100min；所述超声波处理的频率为0.3Mpa，功率为600W，时间为15min，进行超声波处理时，在酶解的100min时间里超声波采取运行22min暂停2min的方式；

(3)浸提、离心：向步骤(2)的滤渣中加入正己烷溶液，回流浸提，离心过滤除渣，得到牛腩油；所述回流浸提的温度为70℃，时间为8.5h；所述离心的转速为6500r/min，时间为35min；

(4)萃取：向步骤(3)的牛腩油中加入NaOH乙醇溶液，在95℃下加热搅拌反应125min，冷却至室温，搅拌状态下，加入1mol/L盐酸溶液调节pH值为3，加入石油醚萃取分离，上层用水洗至中性，旋转蒸发回收溶剂石油醚，然后用无水硫酸钠去除水分，得到混合脂肪酸；所述NaOH乙醇溶液的质量浓度为6％，加入量为牛腩油的5.5倍；

(5)结晶、萃取：取无水乙醇溶液加热至70℃，边搅拌边加入尿素，使尿素完全溶于乙醇中，然后加入步骤(4)的混合脂肪酸加热搅拌回流，冷却至室温，冷冻结晶，抽滤，结晶物用正己烷洗涤并萃取，有机相用水洗至无尿素，再用无水硫酸钠去除水分，旋转蒸发回收溶剂有机溶剂，得到亚油酸；所述尿素和无水乙醇的质量比＝1:20；所述混合脂肪酸与尿素的质量比＝3:1；所述加热搅拌回流的温度为65℃，时间为35min、搅拌转速为400r/min；所述冷冻结晶的温度为-10℃，时间为15h。

实施例3

一种从牛腩中提取亚油酸的方法，包括以下步骤：

(1)牛腩预处理：将牛腩用冷水清洗干净，在72℃下烘干至含水量为22％，送入超微粉碎机中超微粉碎，得到牛腩粉末；所述超微粉碎的频率为0.02KHz，风速1.3m/s，时间为16min，粉碎至物料目粒度为22μm；

(2)酶解：向步骤(1)的牛腩粉末中加入其重量0.78倍的清水，然后加入胃蛋白酶酶解105min，微波处理辅助酶解后在66℃下灭酶，再加入胰蛋白酶酶解92min，超声波处理辅助酶解，离心过滤收集滤渣；

所述胃蛋白酶加入量是牛腩粉末重量的2.2％；所述胰蛋白酶加入量是牛腩粉末重量的1.7％；所述微波处理的频率为0.06KHz，功率为520W，时间为85min；所述超声波处理的频率为0.22Mpa，功率为520W，时间为11min，进行超声波处理时，在酶解的92min时间里超声波采取运行20.5min暂停1.2min的方式；

(3)浸提、离心：向步骤(2)的滤渣中加入正己烷溶液，回流浸提，离心过滤除渣，得到牛腩油；所述回流浸提的温度为66℃，时间为7.8h；所述离心的转速为6100r/min，时间为31min；

(4)萃取：向步骤(3)的牛腩油中加入NaOH乙醇溶液，在89℃下加热搅拌反应118min，冷却至室温，搅拌状态下，加入1mol/L盐酸溶液调节pH值为2，加入石油醚萃取分离，上层用水洗至中性，旋转蒸发回收溶剂石油醚，然后用无水硫酸钠去除水分，得到混合脂肪酸；所述NaOH乙醇溶液的质量浓度为4.5％，加入量为牛腩油的4.8倍；

(5)结晶、萃取：取无水乙醇溶液加热至66℃，边搅拌边加入尿素，使尿素完全溶于乙醇中，然后加入步骤(4)的混合脂肪酸加热搅拌回流，冷却至室温，冷冻结晶，抽滤，结晶物用正己烷洗涤并萃取，有机相用水洗至无尿素，再用无水硫酸钠去除水分，旋转蒸发回收溶剂有机溶剂，得到亚油酸；所述尿素和无水乙醇的质量比＝1:18.5；所述混合脂肪酸与尿素的质量比＝2:1；所述加热搅拌回流的温度为61℃，时间为32min、搅拌转速为360r/min；所述冷冻结晶的温度为0℃，时间为11h。

实施例4

一种从牛腩中提取亚油酸的方法，包括以下步骤：

(1)牛腩预处理：将牛腩用冷水清洗干净，在74℃下烘干至含水量为24％，送入超微粉碎机中超微粉碎，得到牛腩粉末；所述超微粉碎的频率为0.04KHz，风速1.4m/s，时间为19min，粉碎至物料目粒度为24μm；

(2)酶解：向步骤(1)的牛腩粉末中加入其重量0.83倍的清水，然后加入胃蛋白酶酶解115min，微波处理辅助酶解后在69℃下灭酶，再加入胰蛋白酶酶解98min，超声波处理辅助酶解，离心过滤收集滤渣；

所述胃蛋白酶加入量是牛腩粉末重量的2.8％；所述胰蛋白酶加入量是牛腩粉末重量的2.3％；所述微波处理的频率为0.09KHz，功率为540W，时间为95min；所述超声波处理的频率为0.28Mpa，功率为580W，时间为14min，进行超声波处理时，在酶解的98min时间里超声波采取运行21.5min暂停1.8min的方式；

(3)浸提、离心：向步骤(2)的滤渣中加入正己烷溶液，回流浸提，离心过滤除渣，得到牛腩油；所述回流浸提的温度为69℃，时间为8.3h；所述离心的转速为6400r/min，时间为34min；

(4)萃取：向步骤(3)的牛腩油中加入NaOH乙醇溶液，在94℃下加热搅拌反应123min，冷却至室温，搅拌状态下，加入1mol/L盐酸溶液调节pH值为3，加入石油醚萃取分离，上层用水洗至中性，旋转蒸发回收溶剂石油醚，然后用无水硫酸钠去除水分，得到混合脂肪酸；所述NaOH乙醇溶液的质量浓度为5.5％，加入量为牛腩油的5.2倍；

(5)结晶、萃取：取无水乙醇溶液加热至68℃，边搅拌边加入尿素，使尿素完全溶于乙醇中，然后加入步骤(4)的混合脂肪酸加热搅拌回流，冷却至室温，冷冻结晶，抽滤，结晶物用正己烷洗涤并萃取，有机相用水洗至无尿素，再用无水硫酸钠去除水分，旋转蒸发回收溶剂有机溶剂，得到亚油酸；所述尿素和无水乙醇的质量比＝1:19.5；所述混合脂肪酸与尿素的质量比＝2.5:1；所述加热搅拌回流的温度为64℃，时间为34min、搅拌转速为390r/min；所述冷冻结晶的温度为-3℃，时间为14h。

实施例5

一种从牛腩中提取亚油酸的方法，包括以下步骤：

(1)牛腩预处理：将牛腩用冷水清洗干净，在73℃下烘干至含水量为23％，送入超微粉碎机中超微粉碎，得到牛腩粉末；所述超微粉碎的频率为0.03KHz，风速1.35m/s，时间为18min，粉碎至物料目粒度为23μm；

(2)酶解：向步骤(1)的牛腩粉末中加入其重量0.80倍的清水，然后加入胃蛋白酶酶解110min，微波处理辅助酶解后在68℃下灭酶，再加入胰蛋白酶酶解95min，超声波处理辅助酶解，离心过滤收集滤渣；

所述胃蛋白酶加入量是牛腩粉末重量的2.5％；所述胰蛋白酶加入量是牛腩粉末重量的2.0％；所述微波处理的频率为0.07KHz，功率为530W，时间为90min；所述超声波处理的频率为0.25Mpa，功率为550W，时间为13min，进行超声波处理时，在酶解的95min时间里超声波采取运行21min暂停1.5min的方式；

(3)浸提、离心：向步骤(2)的滤渣中加入正己烷溶液，回流浸提，离心过滤除渣，得到牛腩油；所述回流浸提的温度为68℃，时间为8.0h；所述离心的转速为6300r/min，时间为33min；

(4)萃取：向步骤(3)的牛腩油中加入NaOH乙醇溶液，在92℃下加热搅拌反应120min，冷却至室温，搅拌状态下，加入1mol/L盐酸溶液调节pH值为2.5，加入石油醚萃取分离，上层用水洗至中性，旋转蒸发回收溶剂石油醚，然后用无水硫酸钠去除水分，得到混合脂肪酸；所述NaOH乙醇溶液的质量浓度为5％，加入量为牛腩油的5倍；

(5)结晶、萃取：取无水乙醇溶液加热至67℃，边搅拌边加入尿素，使尿素完全溶于乙醇中，然后加入步骤(4)的混合脂肪酸加热搅拌回流，冷却至室温，冷冻结晶，抽滤，结晶物用正己烷洗涤并萃取，有机相用水洗至无尿素，再用无水硫酸钠去除水分，旋转蒸发回收溶剂有机溶剂，得到亚油酸；所述尿素和无水乙醇的质量比＝1:19；所述混合脂肪酸与尿素的质量比＝2.2:1；所述加热搅拌回流的温度为63℃，时间为33min、搅拌转速为370r/min；所述冷冻结晶的温度为-7℃，时间为13h。

对比例1

按照专利申请CN201910173201.4中实施例的方法从牛腩中提取亚油酸。

为了进一步说明本发明能够达到所述技术效果，做以下实验：

采用本申请实施例1～5和对比例1的方法从牛腩中提取亚油酸，各方法处理的牛腩重量均为1kg，每个方法做三次平行实验，去平均值作为结果，记录各方法处理所需的成本、提取率，实验结果如下表1所示。

表1

组别	成本kg/元	提取率/％
			实施例1	87.3	86.7
实施例2	91.4	86.3
			实施例3	89.6	87.5
实施例4	90.5	86.9
			实施例5	85.2	88.6
对比例1	168.9	73.7

由表1实验数据可知，本申请方法从牛腩中提取亚油酸，所需的成本较低，成本低至85.2kg/元，且亚油酸提取率较高，高达88.6％。

综上所述，本申请首次提出从牛腩中提取亚油酸，并给出了具体的提取方法，使牛腩能够得到充分再利用，为牛腩的研究提供了新思路；且操作简单，亚油酸的提取率高，降低了提取成本。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在没有背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同含义和范围内的所有变化囊括在本发明的保护范围之内。