俄色茶和/或俄色茶提取物在制备防治非酒精性肝病和/或非酒精性肝损伤的药品中的应用
阅读说明：本技术 俄色茶和/或俄色茶提取物在制备防治非酒精性肝病和/或非酒精性肝损伤的药品中的应用 (Application of Russian tea and/or Russian tea extract in preparation of medicines for preventing and treating non-alcoholic liver disease and/or non-alcoholic liver injury ) 是由 程桂广 樊志峰 曹建新 杨美莲 赵天瑞 蔡圣宝 于 2019-11-05 设计创作，主要内容包括：本发明提供了俄色茶和/或俄色茶提取物在制备防治非酒精性肝病和/或非酒精性肝损伤的药品中的应用。俄色茶和/或俄色茶提取物对防治非酒精性肝病具备显著的防治作用。通过应用发现,俄色茶提取物能够有效地抑制肝系数的增加,从而抑制非酒精性脂肪肝的产生；俄色茶能够有效的抑制长期高脂饮食所造成的脂肪在肝细胞中的积累。俄色茶和/或俄色茶提取物用于制备防治非酒精性肝病的药品具有以下优势：俄色茶在我国的分布广泛,价格低廉；俄色茶为可食用的天然植物材料,安全性高；俄色茶提取和制备的工艺流程方便简单。(The invention provides application of Russian tea and/or Russian tea extract in preparation of medicines for preventing and treating nonalcoholic liver diseases and/or nonalcoholic liver injury. The Russian tea and/or the Russian tea extract has a remarkable prevention and treatment effect on the non-alcoholic liver disease. Through application, the Russian tea extract can effectively inhibit the increase of the liver coefficient, so that the production of non-alcoholic fatty liver is inhibited; the Russian tea can effectively inhibit the accumulation of fat in liver cells caused by long-term high-fat diet. The Russian tea and/or the Russian tea extract used for preparing the medicine for preventing and treating the non-alcoholic liver disease have the following advantages: the Russian tea is widely distributed in China and is low in price; the Russian tea is an edible natural plant material, and has high safety; the process flow of the extraction and preparation of the Russian tea is convenient and simple.)
技术领域
本发明涉及非酒精性肝病治疗技术领域，尤其涉及俄色茶和/或俄色茶提取物在制备防治非酒精性肝病和/或非酒精性肝损伤的药品中的应用。
背景技术
非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指除酒精和其他明确的损肝因素外所致的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征，与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关的获得性代谢应激性肝损伤。包括单纯性脂肪肝(SFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)及其相关肝硬化。随着肥胖及其相关代谢综合征全球化的流行趋势。
NAFLD除可直接导致代偿期肝硬化、肝癌等疾病，还可影响其他慢性肝病的进展，并参与2型糖尿病和动脉粥样硬化的发病。代谢综合征相关恶性肿瘤、动脉硬化性心脑血管疾病以及肝硬化是影响NAFLD患者生活质量和预期寿命的重要因素。然而目前却没有专门针对NAFLD的临床治疗药物，从而使得NAFLD成为当代医学领域的巨大挑战。
发明内容
本发明的目的在于提供俄色茶和/或俄色茶提取物在制备防治非酒精性肝病和/或非酒精性肝损伤的药品中的应用，俄色茶及俄色茶提取物对非酒精性脂肪性肝病和非酒精性肝损伤有显著的防治作用。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了俄色茶和/或俄色茶提取物在制备防治非酒精性肝病的药品中的应用。
优选的，所述非酒精性肝病包括非酒精性脂肪肝和/或非酒精性脂肪肝并发症。
本发明还提供了俄色茶和/或俄色茶提取物在制备防治非酒精性肝损伤的药品中的应用。
本发明还提供了俄色茶和/或俄色茶提取物在制备保护肝脏和/或抑制肝脏中脂肪颗粒沉积的食品、保健品或药品中的应用。
优选的，所述药品还包括药学可接受的辅料。
优选的，所述药品的剂型包括散剂、颗粒剂、丸剂、片剂、胶囊剂、膏剂或汤剂。
优选的，所述俄色茶提取物包括俄色茶醇提物和/或俄色茶水提物。
优选的，所述俄色茶醇提物采用以下方法制备获得：将俄色茶和乙醇水溶液混合，进行超声提取，得到粗提液，对粗提液进行离心，收集上清得到俄色茶醇提物；所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为75％～85％。
优选的，所述超声提取的温度为20～30℃，时间为25～35min，超声功率为30～40Kw。
优选的，所述俄色茶水提物采用以下方法制备获得：将俄色茶和水混合，于95～105℃条件下煮制0.8～1.5h，得到粗提液，对粗提液进行离心，收集上清得到俄色茶水提物。
本发明的有益效果：本发明提供了俄色茶和/或俄色茶提取物在制备防治非酒精性肝病的药品中的应用。俄色茶和/或俄色茶提取物对防治非酒精性肝病具备显著的防治作用。通过应用发现，俄色茶提取物能够有效地抑制肝系数的增加，从而抑制非酒精性脂肪肝的产生；俄色茶能够有效的抑制长期高脂饮食所造成的脂肪在肝细胞中的积累。俄色茶和/或俄色茶提取物用于制备防治非酒精性肝病的药品具有以下优势：俄色茶在我国的分布广泛，价格低廉；俄色茶为可食用的天然植物材料，安全性高；俄色茶提取和制备的工艺流程方便简单。
附图说明
图1为实施例2中大鼠肝脏病理切片图，其中图1-A为对照组大鼠肝脏病理切片图；图1-B为模型组大鼠肝脏病理切片图；图1-C为醇提取物低浓度组大鼠肝脏病理切片图；图1-D为醇提取物高浓度组大鼠肝脏病理切片图；图1-E为水提取物低浓度组大鼠肝脏病理切片图；图1-F为水提取物高浓度组大鼠肝脏病理切片图；
图2为实施例2中免疫组化的FAS的切片图，其中图2-A为对照组免疫组化的FAS的切片图；图2-B为模型组免疫组化的FAS的切片图；图2-C为醇提取物低浓度组免疫组化的FAS的切片图；图2-D为醇提取物高浓度组免疫组化的FAS的切片图；图2-E为水提取物低浓度组免疫组化的FAS的切片图；图2-F为水提取物高浓度组免疫组化的FAS的切片图。
具体实施方式
本发明提供了俄色茶和/或俄色茶提取物在制备防治非酒精性肝病的药品中的应用；所述非酒精性肝病优选的包括非酒精性脂肪肝和/或非酒精性脂肪肝并发症。
本发明还提供了俄色茶和/或俄色茶提取物在制备防治非酒精性肝损伤的药品中的应用。
本发明还提供了俄色茶和/或俄色茶提取物在制备保护肝脏和/或抑制肝脏中脂肪颗粒沉积的食品、保健品或药品中的应用。
本发明中，所述药品优选的还包括药学可接受的辅料。
本发明中，所述药品的剂型优选的包括散剂、颗粒剂、丸剂、片剂、胶囊剂、膏剂或汤剂。
本发明中，所述俄色茶提取物优选的包括俄色茶醇提物和/或俄色茶水提物。
本发明中，所述俄色茶醇提物采用以下方法制备获得：将俄色茶和乙醇水溶液混合，进行超声提取，得到粗提液，对粗提液进行离心，收集上清得到俄色茶醇提物；所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为75％～85％，优选为80％。
本发明中，俄色茶采自四川省，样本已存入云南省食品安全研究所；所述俄色茶和乙醇水溶液的体积比优选为1:9～11，更优选为1:10；所述超声提取的温度优选为20～30℃，更优选为25℃；所述超声提取的次数优选为3次，每次超声提取的时间优选为25～35min，更优选为30min；所述超声提取的功率优选为30～40Kw，更优选为35Kw；所述离心的转速优选为3000～5000rpm，更优选为4000rpm；所述离心的时间优选5～15min,更优选为10mim；本发明在得到俄色茶醇提物后，优选的还包括对俄色茶醇提物进行冷冻干燥。在此优化条件下，俄色茶纯提取物中多酚黄铜含量最多，抗氧化及抑制细胞凋亡效果最好，保肝效果较为明显。
本发明中，所述俄色茶水提物优选的采用以下方法制备获得：将俄色茶和水混合，于95～105℃条件下煮制0.8～1.5h，得到粗提液，对粗提液进行离心，收集上清得到俄色茶水提物；所述俄色茶和水的体积比优选为1:14～16，更优选为1:15；所述煮制的温度优选为100℃；所述煮制的时间优选为1～1.2h；所述离心的转速优选为3000～5000rpm，更优选为4000rpm；所述离心的时间优选为10min；本发明在得到俄色茶水提物后，优选的还包括对俄色茶水提取进行抽滤和冷冻干燥。在此优化条件下，俄色茶水提取物中多糖含量最高，报告效果较为明显。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1俄色茶提取物的制备方法
1.俄色茶醇提物制备：醇提物采用80％的乙醇溶液进行超声(工作电压:220V/50KHZ v；功率:35Kw)提取，提取温度为25℃，料液比体积为1:10提取时间为30min，滤渣复提三次，然后4000r/min离心10min，取上清液合并上清液后冻干。
2.俄色茶水提物的制备：水提取物主要模拟药典中煎熬的特性，在沸水中煮沸1h，料液比体积为1:15。煮沸以后趁热离心，转速4000r/min，离心10min，上清液进行抽滤，最后冻干(-55℃；真空度200；48h)待用。
实施例2
应用饲喂高脂饲料的方法建立NAFLD的模型，通过动物模型实验观察俄色茶的乙醇和水提取物对NAFLD的防治作用。
1.实验材料
1.1动物、饲料及试剂
SD雄性大鼠，辽宁长生生物技术股份有限公司。高脂饲料，进多丰生物有限公司。试剂盒，南京建成生物科技有限公司、碧云天生物科技公司。
1.2仪器
全自动生化分析仪，深圳雷杜生命科学股份有限公司。
2.方法与结果
2.1造模
雄性大鼠都是4～8周龄的SPF级SD大鼠，体重在200g左右偏差5％左右的体重。实验动物来源于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，大鼠的编号为SCXK(湘)2016-0002。具体是把48只老鼠分成6组(每笼8只)，水、醇提取物各两组。编号如下：
Group K：对照组(蒸馏水灌胃，K)、Group M模型组(蒸馏水灌胃，M)、GroupAL醇提物低剂量组200mg/kg(实施例1制备得到的俄色茶醇提物，AL)、GroupAH醇提物高剂量组600mg/kg(实施例1制备得到的俄色茶醇提物，AH)、Group WL水提物低剂量组200mg/kg(实施例1制备得到的俄色茶水提物，WL)、Group WH水提物高剂量组600mg/kg(实施例1制备得到的俄色茶水提物，WH)。第一次给药前所有动物禁食12h，并且在给药前记录各个老鼠的体重(禁水)。按照标准的大鼠饲养环境饲养大鼠(大鼠购买以后，在该环境下适应七天环境)。造模的方式如下：每天早上9点以5mL/kg的灌胃体积，灌入对应剂量的两类提取物或是蒸馏水。在灌胃以后，各组自由进食高脂饲料。在饲养90天以后，对所有的大鼠禁食12h，使用10％的水合氯醛麻醉大鼠，称重，取血液制成血清待测，随后进行血清生化分析；取肝脏称重，随后取肝左叶，浸没10％的***溶液中，待后续进行H&E染色和免疫组化。
2.2结果
2.2.1俄色茶提取物对非酒精性脂肪肝大鼠体重和肝指数的影响。
表1.俄色茶提取物对非酒精性脂肪肝大鼠肝指数的影响
注：与对照组相比有显著性差异的上标#(p<0.05)；与模型组相比有显著性差异的上标是*(p<0.05)。
由表1可以看出，与对照组相比，经高脂饮食诱导的模型组肝指数显著增加(p<0.05)；而给与俄色茶醇提物和俄色茶水提取物样品的老鼠与模型组相比肝指数显著降低，其中俄色茶乙醇提取物高浓度组(AH)肝脏指数减低最明显，效果最好。可见，俄色茶能够有效地抑制肝系数的增加，从而抑制非酒精性脂肪肝的产生。
2.2.2俄色茶提取物对非酒精性脂肪肝大鼠血脂和肝功能酶的影响
表2俄色茶提取物对非酒精性脂肪肝大鼠血脂和肝功能酶的影响
注：与对照组相比有显著性差异的上标#(p<0.05)；与模型组相比有显著性差异的上标是*(p<0.05)。
从表2中可以看出，对照组相比，模型组血清中的甘油三脂和总胆固醇含量都显著性的上升(p<0.05)。而与模型组相比，俄色茶醇提物组(AL和AH)和水提物组(WL和WH)均可以显著的降低血清中的甘油三脂和总胆固醇的含量，其中醇提物高剂量的效果是最接近对照组。另外，与对照组相比，模型组血清中ALT和AST含量显著升高，说明高脂饮食下，脂质的代谢已经超过了肝的承受量，从而造成了肝的损伤；但是给药组与模型组相比，各给药组的大鼠血清中ALT和AST含量均显著下降，说明俄色茶提取物能够有效防治高脂造成的肝损伤，尤其是高剂量的醇提物效果最好。
2.2.3俄色茶对NAFLD大鼠肝组织病理情况影响的结果
大鼠肝脏病理切片如图1所示，在光镜下观察非酒精性脂肪肝切片，A对照组的大鼠切片中肝细胞的形状正常，细胞核状态正常，且肝细胞中没有脂肪粒的形成。
B模型组中，可以明显的观察到细胞核的聚集和肝细胞的损伤，不仅如此在肝细胞中也有明显的脂肪粒的形成。
C醇提物低浓度组和D醇提物高浓度组中，脂质过氧化对肝造成的损伤大大的减少，且脂肪粒形成的较少。
E水提物低浓度组和F水提物高浓度组抑制脂质过氧化对肝细胞的损伤能力稍稍弱于醇提物，但是仍比模型组好，在切片中也观察不到明显的脂肪粒形成。
从免疫组化的FAS的切片图(图2)可以看出，脂肪酸合成酶在B模型组中的表达量非常的高(呈现出黄色的部分)，但是给药组(C醇提物低浓度组、D醇提物高浓度组、E水提物低浓度组和F水提物高浓度组)中脂肪酸合成酶的含量显著地下降，减少了肝脏中脂肪酸的合成，从而有效地抑制NAFLD的形成。
由上述实施例可以看出，俄色茶能够有效的抑制长期高脂饮食所造成的脂肪在肝细胞中的积累，且能够有效的阻止脂质对肝细胞的损伤(醇提物比水提物效果更好)。俄色茶提取物可以防治NAFLD及肝损伤。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。