阅读说明：本技术 磁珠法血液基因组dna提取试剂盒的使用方法 (Use method of magnetic bead method blood genome DNA extraction kit ) 是由 包文静 金安娜 高伙妮 龚伟 于 2018-08-20 设计创作，主要内容包括：本发明公开了磁珠法血液基因组DNA提取试剂盒的使用方法,包括以下步骤：取100μL血液样品,加入300μL细胞裂解液,混匀后室温孵育5min,12000rpm离心1min,去除上清液；加200μL裂解液和10μL蛋白酶K,混匀后在56℃、800rpm的条件下孵育15min；放置5min后离心,转移上清并在其中加入100μL磁珠混匀孵育5min,离心,放置磁力架上至溶液澄清；移除上清后加入乙醇溶液混匀,放在磁力架上离心去除乙醇溶液后静置至磁珠不反光；加入30μL的无核酸酶水低盐缓冲液,静置后置于磁力架上2min,将上清转移至新的样品管中备用。本方法提取过程不涉及有毒有害试剂,操作安全。(The invention discloses a use method of a kit for extracting blood genome DNA by a paramagnetic particle method, which comprises the following steps: adding 300 mul of cell lysate into 100 mul of blood sample, uniformly mixing, incubating at room temperature for 5min, centrifuging at 12000rpm for 1min, and removing supernatant; adding 200 μ L lysate and 10 μ L proteinase K, mixing, and incubating at 56 deg.C and 800rpm for 15 min; standing for 5min, centrifuging, transferring supernatant, adding 100 μ L magnetic beads, mixing, incubating for 5min, centrifuging, and standing on magnetic frame until the solution is clear; removing the supernatant, adding an ethanol solution, mixing uniformly, placing on a magnetic frame, centrifuging to remove the ethanol solution, and standing until the magnetic beads do not reflect light; adding 30 μ L of nuclease-free water low-salt buffer solution, standing, placing on a magnetic frame for 2min, and transferring the supernatant to a new sample tube for later use. The method has the advantages of no toxic and harmful reagent involved in the extraction process, and safe operation.)

磁珠法血液基因组DNA提取试剂盒的使用方法

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种磁珠法血液基因组DNA提取试剂盒的使用方法。

背景技术

近年来分子生物学技术飞速发展，基因组水平上的研究已成为广大研究者们研究的热点，分子生物学的很多常规实验都需要以提取基因组DNA为前提。全基因组DNA是遗传信息的载体，包括编码序列和非编码序列在内的全部基因信息。从人体或动物的血液中提取高质量的DNA是基因检测、精准医疗及其他分子生物学研究的重要前提。

目前市场上商品化的血液基因组DNA提取方法主要是离心柱法，离心柱型试剂盒较传统的DNA提取方法操作简单，缺点为需要在离心管中操作，需要反复的离心清洗后方可获得DNA产物，操作过程需要将离心柱频繁转出和转入离心管、并配合大量离心工作，导致操作时间随之增加并且需要大量人工，针对一个或几个样品其操作效率可以接受，但针对大规模高通量DNA提取工作依然不理想。

近年来，磁珠法开始应用于不同体系DNA的提纯工作中。利用适宜的磁珠表面及缓冲液中以共聚合及表面修饰等方式引入的基团，制备成带有磁性的亲和吸附剂。在生物样品与这些具有磁性作用的亲和吸附剂共同孵育时，目标分子能够迅速被磁珠捕获，在磁场作用下从液相中吸附下来，经过简单的洗涤，从而分离得到表面结合有目标分子的磁珠复合物。该方法虽可对血液样本进行快速提取，可随着样本增多，由于红细胞的预处理步骤，则提取时间明显增加，实验人员的工作量也相应增加。

发明内容

本发明的目的在于解决上述问题，提供一种磁珠法血液基因组DNA提取试剂盒的使用方法。

为了达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

一种磁珠法血液基因组DNA提取试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取100μL血液样品到样品管中，然后加入300μL细胞裂解液，混匀后室温孵育4-6min，在10000-12000rpm条件下室温离心1-2min，去除上清液；

(2)在得到的沉淀物中按顺序加200μL裂解液和10μL蛋白酶K，混合均匀后在温度为55-57℃、转速800-1000rpm的条件下孵育12-15min；

(3)室温放置5-8min后，在10000-12000rpm条件下室温离心1-2min，将上清液转移至新的样品管中，在样品管中加入100μL磁珠，使用涡旋混匀器涡旋混匀，室温静置孵育5-7min，经过离心后将样品管于磁力架上至溶液澄清；

(4)移除上清液，然后再加入500μL 75％乙醇溶液后继续涡旋混匀，然后放在磁力架上30-40S，重复本步骤一次后进行离心，然后使用移液器将底部残留乙醇溶液去除，室温静置2-5min至磁珠不反光；

(5)加入30μL的无核酸酶水/低盐缓冲液，把样品管从磁力架取下重悬磁珠，室温静置4-6min，再将样品管置于磁力架上2-3min，然后用移液器吸取上清液并将其转移至一个新的样品管中，定量质检后备用。

本发明的有益效果是：本发明的磁珠法血液基因组DNA提取试剂盒的使用方法适用于100μL全血中分离纯化高质量的基因组DNA，其A260/280大于1.8，总量可达1.5-2μg，提取的整个过程不涉及有毒有害试剂，操作过程安全，全程仅需45分钟左右即可完成高质量DNA的提取，方便便捷稳定。通过高效的裂解液体系及独特的磁珠相匹配，样本(全血)通过在高效的裂解液和蛋白酶K的作用下裂解消化，将DNA释放到裂解液中，加入磁珠使其与DNA特异性结合，在一定比例的乙醇溶液中，将该样本体系中的蛋白质和其余杂质去除，只留下磁珠上结合的DNA，最后DNA在水溶液或低盐缓冲液中进行洗脱，得到的DNA可用于高通量测序实验、酶切、PCR扩增、荧光定量PCR等实验。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的技术方案作进一步地说明。

本发明的一种磁珠法血液基因组DNA提取试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取100μL血液样品到样品管中，然后加入300μL细胞裂解液，混匀后室温孵育5min，在12000rpm条件下室温离心1min，去除上清液；

(2)在得到的沉淀物中按顺序加200μL裂解液和10μL蛋白酶K，混合均匀后在温度为56℃、转速800rpm的条件下孵育15min；

(3)室温放置5-8min后，在10000-12000rpm条件下室温离心1-2min，将上清液转移至新的样品管中，在样品管中加入100μL磁珠，使用涡旋混匀器涡旋混匀，室温静置孵育5min，经过离心后将样品管于磁力架上至溶液澄清；

(4)移除上清液，然后再加入500μL 75％乙醇溶液后继续涡旋混匀，然后放在磁力架上30S，重复本步骤一次后进行离心，然后使用移液器将底部残留乙醇溶液去除，室温静置4min至磁珠不反光；

(5)加入30μL的无核酸酶水/低盐缓冲液，把样品管从磁力架取下重悬磁珠，室温静置5min，再将样品管置于磁力架上2min，然后用移液器吸取上清液并将其转移至一个新的样品管中，定量质检后备用。

本发明的磁珠法血液基因组DNA提取试剂盒的使用方法适用于100μL全血中分离纯化高质量的基因组DNA，其A260/280大于1.8，总量可达1.5-2μg，提取的整个过程不涉及有毒有害试剂，操作过程安全，全程仅需45分钟左右即可完成高质量DNA的提取，方便便捷稳定。通过高效的裂解液体系及独特的磁珠相匹配，样本(全血)通过在高效的裂解液和蛋白酶K的作用下裂解消化，将DNA释放到裂解液中，加入磁珠使其与DNA特异性结合，在一定比例的乙醇溶液中，将该样本体系中的蛋白质和其余杂质去除，只留下磁珠上结合的DNA，最后DNA在水溶液或低盐缓冲液中进行洗脱，得到的DNA可用于高通量测序实验、酶切、PCR扩增、荧光定量PCR等实验。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。