一种多西他赛的分离纯化方法
阅读说明：本技术 一种多西他赛的分离纯化方法 (Separation and purification method of docetaxel ) 是由 陶冶 王希 郁明钧 于 2021-08-27 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种多西他赛的分离纯化方法。本发明的多西他赛的分离纯化方法,包括如下步骤：1)将多西他赛粗品进行溶解、过滤,得到多西他赛溶液；2)将步骤1)得到的多西他赛溶液上样到装有UniSil微球的层析柱中进行层析,采用有机溶剂作为流动相对多西他赛溶液进行洗脱；3)分段收集经步骤2)层析、洗脱后的目的峰值的多西他赛溶液,对符合要求的组份液进行汇总,得到纯化的多西他赛。本发明的分离纯化方法用于多西他赛的深度精纯,仅需一步层析纯化即可满足总纯度>99.5％的要求,纯化收率高而稳定,同时本发明分离方法简单方便,可用于规模化生产,大大降低生产成本。(The invention provides a separation and purification method of docetaxel. The method for separating and purifying docetaxel comprises the following steps: 1) dissolving and filtering a docetaxel crude product to obtain a docetaxel solution; 2) loading the docetaxel solution obtained in the step 1) into a chromatographic column filled with UniSil microspheres for chromatography, and eluting the docetaxel solution by using an organic solvent as a mobile phase; 3) collecting docetaxel solution of the target peak value after chromatography and elution in the step 2) in sections, and collecting component solution meeting the requirements to obtain purified docetaxel. The separation and purification method is used for deep fine purification of docetaxel, can meet the requirement that the total purity is more than 99.5% only by one-step chromatographic purification, has high and stable purification yield, is simple and convenient, can be used for large-scale production, and greatly reduces the production cost.)
技术领域
本发明属于药物纯化技术领域，涉及一种多西他赛的分离纯化方法，尤其涉及一种多西他赛的高效分离纯化方法。
背景技术
多西他赛(Docetaxel)(多烯紫杉醇)作用与紫杉醇(PTX)相同，为M期周期特异性药物，促进小管聚合成稳定的微管并抑制其聚解，从而使小管的数量显著减少，并可破坏微管网状结构。体外实验表明，对多种小鼠及人体肿瘤细胞株有细胞毒作用，抗瘤谱较PTX广。
多西他赛是在对紫杉醇结构改造过程中合成出来的紫杉醇衍生物,生物利用度好,毒副作用小。多西他赛为紫杉醇类抗肿瘤药，通过干扰细胞有丝分裂和分裂间期细胞功能所必需的微管网络而起抗肿瘤作用。多烯他赛可与游离的微管蛋白结合，促进微管蛋白装配成稳定的微管，同时抑制其解聚，导致丧失了正常功能的微管束的产生和微管的固定，从而抑制细胞的有丝分裂。多西他赛与微管的结合不改变原丝的数目。这一点与临床应用的大多数纺锤体毒性药物不同。
多西他赛的结构式如下所示：
CN110305080A公开了一种多西他赛的纯化方法。所述方法包括如下步骤：(1)用乙酸乙酯溶解多西他赛粗产品，再用聚四氟乙烯微孔膜过滤，在所得滤液中加入二氯甲烷和乙酸，边搅拌边加入烷烃，结晶、抽滤得到多西他赛一次纯化产品；(2)用所述乙酸乙酯、所述二氯甲烷和所述乙酸溶解所述多西他赛一次纯化产品，再加入所述烷烃，结晶、抽滤、真空干燥，得到多西他赛二次纯化产品。所述纯化方法得到的所述多西他赛二次纯化产品的纯度达到99.5％以上，且回收率高，操作简单，易于工业化生产。但是该纯化方法需要两次纯化，工艺繁琐，成本较高。
CN109836401A公开了一种多西他赛的纯化方法，其包括在二氯甲烷与甲苯的混合溶液析出多西他赛固体。该发明的纯化方法使多西他赛中各单杂含量大大降低，引入新杂质少，提高了产品纯度，产率高，非常适合工业化大生产，所得产品符合制剂需求，可以直接用于多西他赛注射剂的制备。但是该纯化方法的纯度和收率有待进一步提高。
因此有必要提供一种纯度高、收率高且稳定的多西他赛的分离纯化方法。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种多西他赛的分离纯化方法，仅需一步层析纯化即可满足纯度>99.5％的要求，纯化收率高而稳定，同时本发明分离方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低生产成本。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
一种多西他赛的分离纯化方法，包括如下步骤：
1)将多西他赛粗品进行溶解、过滤，得到多西他赛溶液；
2)将步骤1)得到的多西他赛溶液上样到装有UniSil微球的层析柱中进行层析，采用有机溶剂作为流动相对多西他赛溶液进行洗脱，其中，有机溶剂为二氯甲烷和乙酸乙酯体积比为(8-10):1的混合溶液；
3)分段收集经步骤2)层析、洗脱后的目的峰值的多西他赛溶液，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的多西他赛。
本发明的多西他赛的分离纯化方法，采用装有UniSil微球的层析柱中进行层析，仅需一步层析纯化即可满足纯度>99.5％的要求，纯化收率>95％且稳定，操作简单方便，所用固定相可重复利用，所用流动相量少节约，大大降低了成本。
步骤2)中，所述UniSil微球的型号是正相硅胶UniSil微球。
步骤2)中，所述二氯甲烷和所述乙酸乙酯的体积比为(8-10):1，例如为8:1、9:1或10:1等，优选为9:1。
步骤1)中，所述多西他赛粗品的多西他赛纯度为95-98％，例如为95％、96％、97％或98％等；所述多西他赛溶液的浓度为40-60mg/mL，例如为40mg/mL、41mg/mL、42mg/mL、43mg/mL、44mg/mL、45mg/mL、46mg/mL、47mg/mL、48mg/mL、49mg/mL、50mg/mL、51mg/mL、52mg/mL、53mg/mL、54mg/mL、55mg/mL、56mg/mL、57mg/mL、58mg/mL、59mg/mL或60mg/mL等。
步骤1)中，所述多西他赛粗品采用有机相溶解。
优选地，所述有机相为二氯甲烷或乙酸乙酯。
优选地，步骤2)中，以层析柱中所装填料的体积为1个柱体积算，所述流动相的用量为20-30个柱体积。其中，本发明中填料的体积为490mL，即一个柱体积为490mL。
所述洗脱的具体过程为：采用体积比为(8-10):1的二氯甲烷和乙酸乙酯作为流动相对多西他赛溶液进行洗脱，所述洗脱的时间为200-260min，例如洗脱时间为200min、210min、220min、230min、240min、250、260min等；所述流动相的流速为50-70mL/min，例如为50mL/min、51mL/min、52mL/min、53mL/min、54mL/min、55mL/min、56mL/min、57mL/min、58mL/min、59mL/min、60mL/min、61mL/min、62mL/min、63mL/min、64mL/min、65mL/min、66mL/min、67mL/min、68mL/min、69mL/min或70mL/min等。
步骤2)上样前还包括对层析柱进行柱前处理的步骤。
所述柱前处理的具体过程为：采用乙酸乙酯对层析柱进行除杂，再采用体积比为(8-10):1的二氯甲烷和乙酸乙酯的混合液作为流动相对除杂后的层析柱进行平衡。
步骤1)中，所述过滤采用孔径为0.3-0.5μm的滤膜进行过滤，例如滤膜的孔径为0.3μm、0.35μm、0.4μm、0.45μm或0.5μm等。
作为本发明的优选方案，所述多西他赛的分离纯化方法包括如下步骤：
1)将多西他赛纯度为95-98％的多西他赛粗品用有机相进行溶解，采用孔径为0.3-0.5μm的滤膜进行过滤，得到浓度为40-60mg/mL的多西他赛溶液；
2)采用乙酸乙酯对装有正相硅胶UniSil微球的层析柱进行除杂，再采用体积比为(8-10):1的二氯甲烷和乙酸乙酯的混合液作为流动相对除杂后的层析柱进行平衡，将步骤1)得到的多西他赛溶液上样到经平衡处理的层析柱中进行层析，采用体积比为(8-10):1的二氯甲烷和乙酸乙酯作为流动相对多西他赛溶液进行洗脱，所述洗脱的时间为200-260min，所述流动相的流速为50-70mL/min；
3)分段收集经步骤2)层析、洗脱后的目的峰值的多西他赛溶液，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化的多西他赛。
本发明的目的之二在于提供一种目的之一所述的分离纯化方法得到的多西他赛。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明的多西他赛的分离纯化方法，不仅纯度高、收率高且稳定，而且操作简单方便，所用固定相可重复利用，所用流动相量少节约，大大降低了成本。具体的，仅需一步层析纯化即可满足纯度>99.5％的要求，纯化收率>95％。
附图说明
图1为本发明的实施例1使用的UniSil正相硅胶的扫描电镜照片；
图2为本发明的实施例1纯化前的多西他赛的高效液相色谱分析；
图3为本发明的实施例1纯化后的多西他赛的高效液相色谱分析。
具体实施方式
下面结合附图1-3，并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。
如无具体说明，本发明的各种原料均可市售购得，或根据本领域的常规方法制备得到。
实施例1
1)取纯度为97％的多西他赛粗品，加入二氯甲烷溶解，得到浓度为50mg/mL的多西他赛溶液；待溶液澄清后，用孔径为0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用；
2)采用50×250mm的色谱柱，UniSil正相硅胶(苏州纳微科技股份有限公司生产)作为层析柱填料，装柱体积为490mL；对层析柱进行柱前预处理，先用乙酸乙酯进行除杂，后用体积比为二氯甲烷:乙酸乙酯＝9:1的流动相进行平衡；然后进样，进样液为1)所述滤液；接着采用体积比为二氯甲烷:乙酸乙酯＝9:1的混合溶液作为流动相洗脱240min，流速控制在60mL/min；
3)分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，经高效液相色谱分析，洗脱液中多西他赛的纯度为99.62％，收率为96.6％。
其中，图1为实施例1使用的UniSil正相硅胶的扫描电镜照片，图2为纯化前的多西他赛高效液相色谱分析，可见有一定的杂质。图3为纯化后的多西他赛高效液相色谱分析，可见杂质非常少，杂峰非常小。
实施例2
1)取纯度为97％的多西他赛粗品，加入二氯甲烷溶解，得到浓度为50mg/mL的多西他赛溶液；待溶液澄清后，用孔径为0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用；
2)采用50×250mm的色谱柱，UniSil正相硅胶(苏州纳微科技股份有限公司生产)作为层析柱填料，装柱体积为490mL；对层析柱进行柱前预处理，先用乙酸乙酯进行除杂，后用体积比为二氯甲烷:乙酸乙酯＝8.5:1.5的流动相进行平衡。然后采用体积比为二氯甲烷:乙酸乙酯＝8.5:1.5的流动相进行洗脱240min，流速控制在60ml/min；
3)分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，经高效液相色谱分析，洗脱液中多西他赛的纯度为99.56％，收率为95.7％。
实施例3
本实施例与实施例1的区别之处在于，溶解多西他赛样品的有机溶液为乙酸乙酯，其他的与实施例1的均相同。
分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，经高效液相色谱分析，洗脱液中多西他赛的纯度为99.51％，收率为95.2％。
对比例1
本对比例与实施例1的区别之处在于，层析柱中的填充相为常规的Partisil高纯不定型硅胶，其他的与实施例1的均相同。
分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，经高效液相色谱分析，洗脱液中多西他赛的纯度为99.21％，收率为90.5％。
对比例2
本对比例为常规的多西他赛的纯化方法，直接采用反复结晶除杂的方法。
成品多西他赛的纯度为98.22％。
对比例3
本对比例与实施例1的区别之处在于，平衡处理和洗脱处理所用的流动相为二氯甲烷，其他的与实施例1的均相同。
分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，经高效液相色谱分析，洗脱液中多西他赛的纯度为98.54％，收率为90.1％。
对比例4
本对比例与实施例1的区别之处在于，平衡处理和洗脱处理所用的流动相为乙酸乙酯，其他的与实施例1的均相同。
分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，经高效液相色谱分析，洗脱液中多西他赛的纯度为98.12％，收率为98.5％。
对比例5
本实施例与实施例1的区别之处在于，平衡处理和洗脱处理所用的流动相为体积比为5:1的二氯甲烷和乙酸乙酯，其他的与实施例1的均相同。
分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，经高效液相色谱分析，洗脱液中多西他赛的纯度为98.68％，收率为97.6％。
对比例6
本对比例与实施例1的区别之处在于，平衡处理和洗脱处理所用的流动相为体积比为15:1的二氯甲烷和乙酸乙酯，其他的与实施例1的均相同。
分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，经高效液相色谱分析，洗脱液中多西他赛的纯度为99.12％，收率为93.4％。
本发明用于多西他赛的深度精纯，仅需一步层析纯化即可满足多西他赛纯度>99.5％的要求，纯化收率>95％而稳定，同时本发明分离纯化方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低了生产成本。
本发明通过上述实施例来说明本发明的详细工艺设备和工艺流程，但本发明并不局限于上述详细工艺设备和工艺流程，即不意味着本发明必须依赖上述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。
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