阅读说明：本技术 利用混菌发酵提高表面活性素产量的方法 (Method for improving surfactant yield by mixed fermentation ) 是由 程景胜 唐敏慧 元英进 于 2019-10-21 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种利用混菌发酵提高表面活性素产量的方法,包括如下步骤：将解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens HM-618,CGMCC No.7097的种子和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,CGMCC1.12939的种子分别按生物量OD<Sub>600</Sub>为0.1～0.3的接种密度接入发酵培养基中,在35～39℃、转速100～300rpm条件下培养110～130h,得到表面活性素；利用解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens HM-618,CGMCC No.7097和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,CGMCC1.12939共培养能提高表面活性素的产量。(The invention discloses a method for improving the yield of surfactant by mixed fermentation, which comprises the following steps: respectively using seeds of Bacillus amyloliquefaciens HM-618 and CGMCC No.7097 and seeds of Bacillus subtilis and CGMCC1.12939 according to biomass OD 600 Inoculating the strain into a fermentation medium at an inoculation density of 0.1-0.3, and culturing at 35-39 ℃ and a rotation speed of 100-300 rpm for 110-130 h to obtain surfactant; the co-culture of Bacillus amyloliquefaciens HM-618 (CGMCC No. 7097) and Bacillus subtilis (CGMCC 1.12939) can improve the yield of the surfactin.)

利用混菌发酵提高表面活性素产量的方法

技术领域

本发明属于发酵工程技术领域，涉及一种利用混菌提高表面活性素产量的方法。

背景技术

表面活性素由四种氨基酸(缬氨酸、亮氨酸、天冬氨酸、谷氨酸)和脂肪酸链构成，表面活性素具有高表面活性，与化学表面活性剂相比，具有无毒或低毒、可生物降解，不污染环境的特点。它还具有很好的抗菌、抗病毒、抗肿瘤以及抗支原体活性，应用潜能巨大。

目前发现的野生菌株的表面活性素产量几乎都为毫克级，生产、分离和纯化成本极高。

共培养发酵可以提高微生物产物的产量，得到的产物质量更高，但是通过共培养微生物改善表面活性素产量的研究尚未报道。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种利用混菌发酵提高表面活性素产量的方法。

一种利用混菌发酵提高表面活性素产量的方法，包括如下步骤：将解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens HM-618，CGMCC No.7097的种子和枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis，CGMCC1.12939的种子分别按生物量OD₆₀₀为0.1～0.3的接种密度接入发酵培养基中，在35～39℃、转速100～300rpm条件下培养110～130h，得到表面活性素；

所述发酵培养基配方:葡萄糖50～70g/L，酵母粉4～6g/L，NaNO₃ 8～12g/L，K₂HPO₄7～8g/L,KH₂PO₄ 3～5g/L,MgSO₄·7H₂O 2～4g/L,FeCl₂ 0.01～0.03g/L,ZnCl₂ 0.01～0.03g/L,MnCl₂·4H₂O 0.01～0.03g/L，余量为水，pH自然。

本发明的优点

利用解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens HM-618，CGMCC No.7097和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，CGMCC1.12939共培养能提高表面活性素的产量。

具体实施方式

本发明涉及的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，命名为Bacillusamyloliquefaciens HM-618，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号:CGMCC No.7097。保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏时间为2013年1月8日，并存活。

以下各实施例和对照例，将解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)HM-618保藏编号为CGMCC No.7097简称HM-618。

枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，CGMCC1.12939于2016年11月购于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，以下简称枯草芽孢杆菌CGMCC1.12939。

各实施例的HM-618种子是将HM-618在HM-618种子培养基培养获得。

HM-618种子培养基(g/L)：葡萄糖60，酵母粉10，蛋白胨10，NaCl 5，牛肉膏10，pH自然，余量为水。

各实施例的枯草芽孢杆菌CGMCC1.12939种子是将枯草芽孢杆菌CGMCC1.12939在枯草芽孢杆菌CGMCC1.12939种子培养基培养获得。

枯草芽孢杆菌CGMCC1.12939种子培养基(LB培养基)(g/L)：胰蛋白胨10，酵母提取物5，NaCl 10)

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

一种利用混菌发酵提高表面活性素产量的方法，包括如下步骤：

将HM-618的种子和枯草芽孢杆菌CGMCC1.12939的种子分别按生物量OD₆₀₀为0.2的接种密度接入发酵培养基中，在37℃、转速200rpm条件下培养120h，得到含有表面活性素的发酵液；

发酵培养基配方:葡萄糖60g/L，酵母粉5g/L，NaNO₃ 10g/L，K₂HPO₄ 7.5g/L,KH₂PO₄4g/L,MgSO₄·7H₂O 3g/L,FeCl₂ 0.02g/L,ZnCl₂ 0.02g/L,MnCl₂·4H₂O 0.02g/L，余量为水，pH自然。

表面活性素的产量0.995g/L。

对照组1

将HM-618的种子按生物量OD₆₀₀为0.2的接种密度接入实施例1的发酵培养基中，在37℃、转速200rpm条件下培养120h，得到含表面活性素的发酵液。

表面活性素产量是0.674g/L。

实施例2

一种利用混菌发酵提高表面活性素产量的方法，包括如下步骤：

将HM-618的种子和枯草芽孢杆菌CGMCC1.12939的种子分别按生物量OD₆₀₀为0.1的接种密度接入发酵培养基中，在35℃、转速100rpm条件下培养130h，得到含表面活性素的发酵液。

所述发酵培养基配方:葡萄糖50g/L，酵母粉4g/L，NaNO₃ 8g/L，K₂HPO₄ 7g/L,KH₂PO₄3g/L,MgSO₄·7H₂O 2g/L,FeCl₂ 0.01g/L,ZnCl₂ 0.01g/L,MnCl₂·4H₂O 0.01g/L，余量为水，pH自然。

表面活性素的产量0.873g/L

对照组2

将HM-618的种子按生物量OD₆₀₀为0.1的接种密度接入实施例2的发酵培养基中，在35℃、转速100rpm条件下培养130h，得到含表面活性素的发酵液。

表面活性素产量是0.631g/L

实施例3

一种利用混菌发酵提高表面活性素产量的方法，包括如下步骤：

将HM-618的种子和枯草芽孢杆菌CGMCC1.12939的种子分别按生物量OD₆₀₀为0.3的接种密度接入发酵培养基中，在39℃、转速300rpm条件下培养110h，得到含表面活性素的发酵液。

所述发酵培养基配方:葡萄糖70g/L，酵母粉6g/L，NaNO₃ 12g/L，K₂HPO₄8g/L,KH₂PO₄5g/L,MgSO₄·7H₂O 4g/L,FeCl₂0.03g/L,ZnCl₂ 0.03g/L,MnCl₂·4H₂O 0.03g/L，余量为水，pH自然。

表面活性素的产量0.890g/L。

对照组3

将HM-618的种子按生物量OD₆₀₀为0.3的接种密度接入实施例3发酵培养基中，在39℃、转速300rpm条件下培养110h，得到含表面活性素的发酵液。

表面活性素产量是0.665g/L。