一种狐狸逆转录病毒毒株及其应用
阅读说明：本技术 一种狐狸逆转录病毒毒株及其应用 (Fox retrovirus strain and application thereof ) 是由 王玉茂 于 2021-08-23 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种狐狸逆转录病毒毒株及其应用,该毒株的保藏编号为CGMCC No.21898,分类命名为γ逆转录病毒,该狐狸逆转录病毒毒株于2021年06月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,地址：北京市朝阳区北辰西路1号院,邮编：100101；将狐狸逆转录病毒毒株进行应用,具体为制成药物后应用和/或诊断制剂中的应用。通过将该毒株进行应用,使对由狐狸逆转录病毒引起的疾病的预防、治疗等更具目标性,提高检测效率、预防效果和治疗效果。(The invention provides a fox retrovirus strain and application thereof, the preservation number of the strain is CGMCC No.21898, the strain is classified and named as gamma retrovirus, the fox retrovirus strain is preserved in the China general microbiological culture Collection center at 23.06.2021, and the address is as follows: west road No.1, north-west, morning-sun, beijing: 100101; the fox retrovirus strain is applied, in particular to the application after being prepared into a medicament and/or the application in a diagnostic preparation. By applying the strain, the prevention, treatment and the like of diseases caused by the fox retrovirus are more targeted, and the detection efficiency, the prevention effect and the treatment effect are improved.)
技术领域
本发明涉及病毒技术领域，具体涉及一种狐狸逆转录病毒毒株及其应用。
背景技术
狐狸逆转录病毒引起的疾病是一种群感染率达60％的疾病，发病群中感染率在5-10％左右，肾脏肿大，发病后的狐狸生长缓慢、消瘦，毛色变浅且粗糙，产出的皮因面积小、质量差而不具有利用价值；目前由于对狐狸逆转录病毒的认知较少，因此，对该疾病的预防、治疗存在一定的难度。
基因测序并通过仪器设备进行基因比对是确定疾病的一种科学、合理的方法，具体为通过提取基因样本，并对样本的基因序列进行分析，获得基因片段，通过基因片段认识病毒、了解病毒，进而可实现对病毒进行预防和防控。
为增强对狐狸逆转录病毒的认识，提高对该疾病的预防能力，对该逆转录病毒进行基因提取及基因比对以从基因层面对该病毒进行认识具有重要的意义。
发明内容
针对现有技术的上述不足，本发明提供了一种狐狸逆转录病毒毒株及其应用,该毒株的保藏编号为CGMCC No.21898，该毒株的基因序列包括如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的基因片段；将狐狸逆转录病毒毒株进行应用，具体为制成药物后应用和/或诊断制剂中的应用。通过将该毒株进行应用，使对由狐狸逆转录病毒引起的疾病的预防、治疗等更具目标性，提高检测效率、预防效果和治疗效果。通过将该毒株进行应用，可提高对该病毒产生的疾病进行预防和防控，提高治疗的目标性。
本发明的技术方案如下：
一种狐狸逆转录病毒毒株，所述狐狸逆转录病毒毒株为γ逆转录病毒PreXMRV-20，保藏编号为CGMCC No.21898，分类命名为γ逆转录病毒；该狐狸逆转录病毒毒株于2021年06月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院，邮编：100101。
进一步的，该毒株的基因序列包括如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的基因片段，分别如下：
SEQ ID No.1：
TATGGAGTCATGTCGATGAGGAATGATTATATCTGGTTGTCGATCTTTGGCCACGGGGTCAAAGGGGGTGTATATATGGTAGCCTTCCATTAATTTTTCCAGAAAACCTGCCGGCGTCTCATCTTTCCCCTGCACTATAGCACGTACCTTTGCCAAATTGGTGGGGCGTCGCCCTGCCCCTTTAAAACCGCTAGGAGTACCTGGGGATAGAGACGGAGCCGCTCCCTACCAGCAGCAGTGTCGTAGTCCCAGGTCGGGCGAACCAAGGGGAAAACATCCTCAATTTCATTAGGCAACTGAGTGGA；
SEQ ID No.2：
CCGAGTCATGTCGATGAGGAATGATTACATCTGGTTGTCGATCTTTGGCCACGGGGTCAAAGGGGGTGTATATATGGTAGCCTTCCATTAATTTTTCCAGAAAACCTGCCGGCGTCTCATCTTTCCCCTGCACTATAGCACGTACCTTTGCCAAATTGGTGGGGCGTCGCCCTGCCCCTTTAAAACCGCTAGGAGTACCTGGGGATAGAGACGGAGCCGCTCCCTACCAGCAGCAGTGTCGTAGTCCCAGGTCGGGCGAACCAAGGGGAAAACATCCTCAATTTCATTAGGAAACTGAGTGGA；
SEQ ID No.3：
GGGTTCGGGTGGTCCCGACCTGGGACTACGACACTGCATGCTGGTAGGGAGCGGCTCCGTCTCTATCCCCAGGTACTCCTAGCGGGTCTCAAGGGGCAGGGCGATGCCCCACCAATTTGGCAAAGGTACGTGCTATAGTGCAGGGGAAAGATGAGACGCCAGCAGGATTTCTGGAAAAATTAATGGAAGGCTACCATATGTACACCCCCTTTGACCCCTTGGCCAAAGATCGGCAACCAGATGTAATCATGTCCTTCATCGGACAATAGGCCTCGGGTATTTGTAATAAGTTAGAGCGGTTAGAAGA；
该毒株分离自患病狐狸的肾部组织样本。
一种上述狐狸逆转录病毒毒株在制备药物中进行应用。
优选的，所述药物具体为用于预防和/或治疗狐狸逆转录病毒疾病的药物。
优选的，所述药物为该毒株经减毒或灭活后制成的疫苗、高免血清制剂、特免血浆制剂和/或抗体制剂。
狐狸逆转录病毒疾病是由狐狸逆转录病毒引起的狐狸生长缓慢、繁殖障碍、内脏器官肿大、尤其是肾脏肿大的狐狸疾病，这些狐狸疾病严重影响着狐狸养殖。
一种上述狐狸逆转录病毒毒株在制备狐狸逆转录病毒疾病诊断制剂中进行应用。
优选的，所述诊断制剂包括抗原检测试剂盒和抗体检测试剂盒。
优选的，所述的抗原检测试剂盒中的抗原选自病毒株、病毒株的裂解成份、病毒株的基因工程蛋白或病毒株的多肽；所述抗体检测试剂盒中的抗体选自病毒株、病毒株的裂解成份、病毒株的基因工程蛋白或由病毒株的多肽制备的单抗或多抗。
相对于现有技术，本发明的有益效果在于：
1、本发明中，通过对患病狐狸的肾部组织进行基因提取并测序，确定狐狸逆转录病毒毒株的基因序列的三个基因片段(SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3)，该狐狸逆转录病毒毒株的保藏编号为CGMCC No.21898。
2、通过对狐狸逆转录病毒进行基因组测序，提高对狐狸逆转录病毒的认知度，从而从基因层面为狐狸逆转录病毒疾病的预防研究提供方向，减少对狐狸逆转录病毒预防和治疗的盲目性。
3、本发明中提供的毒株，通过将该毒株制备成疫苗药物，可有效的对狐狸逆转录病毒引发的疾病进行预防，通过将该毒株制备成高免血清制剂、特免血浆制剂和/或抗体制剂，可有效的对狐狸逆转录病毒引发的疾病进行治疗。
4、本发明中提供的毒株，通过制成检测制剂，可提高对狐狸逆转录病毒检测的及时性、有效性和准确性，提高对该狐狸逆转录病毒疾病的预防和治疗。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明获得的病毒基因序列与Gene Bank比对构建的系统发育树；
图2为本发明获得的病毒基因序列与已报道γ逆转录病毒比对构建的系统发育树；
图3为电镜下实施例3获得的病毒粒子形态。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
本发明中的实施例中，狐狸逆转录病毒组织样本,取自山东潍坊的患病狐狸，该组织样本的制备方法如下：
(1)取患病狐狸组织，然后使用研磨器研磨，冻融三次，10000rpm离心5min，弃沉淀，取上清，获得样品Ⅰ；
(2)将样品Ⅰ与提取液混合，提取、分离后获得样品Ⅱ；
提取液的组成如下：
200mM Tris-HCl(pH 8.0)，500mM NaCl，5mM EDTA，1％十二烷基磺酸钠(SDS，W/V)，2％的十二烷基硫酸锂(LLS，W/V)和1％的甜菜碱(W/V)；
(3)对样品Ⅱ中的蛋白质进行处理，获得组织样本；
其中，组织样本取自患病狐狸的脑部组织、肾部组织、肝部组织，肺部组织或脾部组织；
患病狐狸具有以下特点：脑积出血水、肾肿大、肝有轻微出血点、眼有分泌物且肺表面轻微隆起。
实施例1
1、获取狐狸逆转录病毒：
狐狸逆转录病毒的分离纯化方法如下：
(1)取患病狐狸的肾部组织，按照狐狸逆转录病毒组织样本的制备方法制备肾部组织样本；
(2)对步骤(1)的肾部组织样本进行基因组提取，收集提取产物；基因组提取过程按照病毒基因组Dna/Rna提取试剂盒说明书(Thermo Fisher Scien tific)进行；将提取产物经1％琼脂糖凝胶电泳检测后，于-20℃保存备用；
(3)取步骤(2)的提取产物，送至石家庄博瑞迪生物技术有限公司进行基因组测序，具体为采用Illumina测序技术对样品的DNA进行Paired-End测序；将获得的序列片段通过MEGAHIT进行序列拼接组装，从组装结果中筛选病毒序列，基因组测序比对病毒数据库结果，发现该病毒与PreXMRV-1proviru s毒株(GenBank登录号NC_007815.2)同源性达82.587％，命名为PreXMRV-20株。测序后，获得狐狸逆转录病毒的基因序列包括三个基因片段，分别如下：
SEQ ID No.1：
TATGGAGTCATGTCGATGAGGAATGATTATATCTGGTTGTCGATCTTTGGCCACGGGGTCAAAGGGGGTGTATATATGGTAGCCTTCCATTAATTTTTCCAGAAAACCTGCCGGCGTCTCATCTTTCCCCTGCACTATAGCACGTACCTTTGCCAAATTGGTGGGGCGTCGCCCTGCCCCTTTAAAACCGCTAGGAGTACCTGGGGATAGAGACGGAGCCGCTCCCTACCAGCAGCAGTGTCGTAGTCCCAGGTCGGGCGAACCAAGGGGAAAACATCCTCAATTTCATTAGGCAACTGAGTGGA；
SEQ ID No.2：
CCGAGTCATGTCGATGAGGAATGATTACATCTGGTTGTCGATCTTTGGCCACGGGGTCAAAGGGGGTGTATATATGGTAGCCTTCCATTAATTTTTCCAGAAAACCTGCCGGCGTCTCATCTTTCCCCTGCACTATAGCACGTACCTTTGCCAAATTGGTGGGGCGTCGCCCTGCCCCTTTAAAACCGCTAGGAGTACCTGGGGATAGAGACGGAGCCGCTCCCTACCAGCAGCAGTGTCGTAGTCCCAGGTCGGGCGAACCAAGGGGAAAACATCCTCAATTTCATTAGGAAACTGAGTGGA；
SEQ ID No.3：
GGGTTCGGGTGGTCCCGACCTGGGACTACGACACTGCATGCTGGTAGGGAGCGGCTCCGTCTCTATCCCCAGGTACTCCTAGCGGGTCTCAAGGGGCAGGGCGATGCCCCACCAATTTGGCAAAGGTACGTGCTATAGTGCAGGGGAAAGATGAGACGCCAGCAGGATTTCTGGAAAAATTAATGGAAGGCTACCATATGTACACCCCCTTTGACCCCTTGGCCAAAGATCGGCAACCAGATGTAATCATGTCCTTCATCGGACAATAGGCCTCGGGTATTTGTAATAAGTTAGAGCGGTTAGAAGA；
将该狐狸逆转录病毒毒株命名为PreXMRV-20，对该毒株进行保藏，保藏信息为：该毒株的保藏编号为CGMCC No.21898，分类命名为γ逆转录病毒；该狐狸逆转录病毒毒株于2021年06月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院，邮编：100101。
分别制备患病狐狸的脑部组织样本、肝部组织样本、肺部组织样本和脾部组织样本，将上述四个不同的组织样本及肾部组织样本共同进行RT-PCR检测，从检测结果可以看出，患病狐狸的脑部组织样本、肝部组织样本、肺部组织样本和脾部组织样本与肾部组织样本的检测结果一致，从而证明在患病狐狸的脑部组织、肝部组织、肺部组织和脾部组织中，同样含有狐狸逆转录病毒PreXMRV-20。
实施例2
宏基因组测序获得的基因片段，利用MEGA7软件处理，与Gene Bank上已公布的基因序列进行基因同源性比对及遗传进化分析。该病毒基因测序进行序列比对，构建遗传进化树，见图1。进化树显示，该病毒与PreXMRV-1同源性最高，与PreXMRV-2和MLV也具有较高同源性。由此说明，该病毒可能与XMRV同为MLV的异种株。与已报道γ逆转录病毒构建遗传进化树如图2所示，结合图2可以看出，该病毒与蝙蝠源RfRV同源性最高，说明该病毒可能源自蝙蝠，该结果有待进一步实验验证。
实施例3
取患病狐肾脏和肺脏组织研磨液，8000rpm离心10min去除组织碎片，取上清液加0.5％磷钨酸溶液，用电镜负染观察其形态学特征，见图3，图3中的A图为肾脏组织中病毒在电镜下的粒子形态图，B图为肺脏组织中病毒在电镜下的粒子形态图。结果显示，肾脏(A图)与肺脏(B图)组织内病毒为无囊膜、多边形结构，直径约90nm，病毒样颗粒与XMRV的形态和大小相符合。
尽管通过参考优选实施例的方式对本发明进行了详细描述，但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换，而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应所述以权利要求的保护范围为准。
SEQUENCE LISTING
<110> 山东省滨州畜牧兽医研究院
<120> 一种狐狸逆转录病毒毒株及其应用
<130> 2021
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 305
<212> DNA
<213> γ逆转录病毒
<400> 1
tatggagtca tgtcgatgag gaatgattat atctggttgt cgatctttgg ccacggggtc 60
aaagggggtg tatatatggt agccttccat taatttttcc agaaaacctg ccggcgtctc 120
atctttcccc tgcactatag cacgtacctt tgccaaattg gtggggcgtc gccctgcccc 180
tttaaaaccg ctaggagtac ctggggatag agacggagcc gctccctacc agcagcagtg 240
tcgtagtccc aggtcgggcg aaccaagggg aaaacatcct caatttcatt aggcaactga 300
gtgga 305
<210> 2
<211> 303
<212> DNA
<213> γ逆转录病毒
<400> 2
ccgagtcatg tcgatgagga atgattacat ctggttgtcg atctttggcc acggggtcaa 60
agggggtgta tatatggtag ccttccatta atttttccag aaaacctgcc ggcgtctcat 120
ctttcccctg cactatagca cgtacctttg ccaaattggt ggggcgtcgc cctgcccctt 180
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gga 303
<210> 3
<211> 307
<212> DNA
<213> γ逆转录病毒
<400> 3
gggttcgggt ggtcccgacc tgggactacg acactgcatg ctggtaggga gcggctccgt 60
ctctatcccc aggtactcct agcgggtctc aaggggcagg gcgatgcccc accaatttgg 120
caaaggtacg tgctatagtg caggggaaag atgagacgcc agcaggattt ctggaaaaat 180
taatggaagg ctaccatatg tacaccccct ttgacccctt ggccaaagat cggcaaccag 240
atgtaatcat gtccttcatc ggacaatagg cctcgggtat ttgtaataag ttagagcggt 300
tagaaga 307
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