阅读说明：本技术 一种利用发酵复合菌种制备得到的兔用微生物中药制剂及其制备方法 (Microbial traditional Chinese medicine preparation for rabbits prepared by utilizing fermentation composite strains and preparation method thereof ) 是由 雷春林 余智勇 于 2019-09-29 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种利用发酵复合菌种制备得到的兔用微生物中药制剂及其制备方法,复合菌种为：光滑青霉、草生链霉菌、植物乳杆菌、嗜热链球菌和兔双歧杆菌；其发酵培养基为：红糖、穿心莲、黄芪、大青叶、虎杖、水。本发明的有益效果是：优选多种菌种对复方穿虎散进行发酵,发酵后的复方穿虎散中的纤维素大量降解,有效成分得以释放,也产生了大量小分子化合物,更有利于兔子肠道吸收,同时扩繁的菌群可以辅助兔子的肠道菌群,有效抑制肠道有害菌群的繁殖,达到治疗疾病的目的,是一种完全取代抗生素的无药残、抗菌抗病毒效果极佳的中药微生态制剂；由于复方穿虎散和复合菌的协同作用,因此其抗菌抗病毒能力远远超过其它同类产品。(The invention discloses a microbial traditional Chinese medicine preparation for rabbits, which is prepared by fermenting composite strains, and a preparation method thereof, wherein the composite strains are as follows: penicillium glabratum, streptomyces herbicola, lactobacillus plantarum, streptococcus thermophilus and bifidobacterium rabbit; the fermentation medium is as follows: brown sugar, common andrographis herb, astragalus root, indigowoad leaf, giant knotweed rhizome and water. The invention has the beneficial effects that: the compound chuanxiong powder is fermented by preferably selecting multiple strains, cellulose in the fermented compound chuanxiong powder is degraded in a large amount, active ingredients are released, a large amount of small molecular compounds are also generated, the absorption of rabbit intestinal tracts is facilitated, and meanwhile, the expanded and propagated flora can assist the rabbit intestinal flora and effectively inhibit the propagation of harmful intestinal flora so as to achieve the purpose of treating diseases, so that the microbial ecological preparation is a traditional Chinese medicine microecological preparation which completely replaces antibiotics, has no medicine residues and has excellent antibacterial and antiviral effects; due to the synergistic effect of the compound powder and the compound bacteria, the antibacterial and antiviral abilities of the compound powder are far better than those of other similar products.)

一种利用发酵复合菌种制备得到的兔用微生物中药制剂及其 制备方法

技术领域

本发明涉及禽畜用药技术领域，具体涉及一种利用发酵复合菌种制备得到的兔用微生物中药制剂及其制备方法。

背景技术

抗生素的发现给人类治疗疾病带来了福音，抗生素在预防和治疗细菌性感染上效果明显，但不是所有的抗生素都能使用在兔子身上，兔子的消化系统非常的微妙和脆弱，某些抗生素有可能会给兔子带来严重的肠道问题，像拉黑水、拉果冻便，像肠毒血症等，能危及到生命。究其原因就是抗生素有个致命的问题，通常会连带肠道内的有益菌一起杀死，这不但会破环肠道内菌群的平衡，也令有害菌伺机大量繁殖，而产生致命毒素外，还有可能令正常的菌群数量减少或消失掉，这可比任何疾病都来的严重，因为兔子主要是依赖盲肠中微生物（有益菌）的分解来消化食物，也就是说，吃进去的食物先由肠道中种类繁多的微生物（有益菌）分解之后，兔才可吸收，杀死了这部分细菌，无异于直接杀兔。经常见到兔子吃自己的粪便实际上就是这个原因。复方穿虎散可以提高机体免疫力，迅速治疗肠道疾病，同时它是纯中药制剂，不存在抗生素的弊端，不会影响兔子肠道的菌群；黄芪和虎杖富含纤维素，不利于兔子的消化吸收。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种利用发酵复合菌种制备得到的兔用微生物中药制剂及其制备方法。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种含有中药组分的微生物发酵培养基，所述微生物发酵培养基是由按照重量百分比计的以下原料制备得到的：红糖1～2%，中药组分55～60%，余量为水；所述中药组分是由按照重量份计的以下原料制备得到的：穿心莲90份、黄芪30份、大青叶40份、 虎杖40份。

本发明的第二个目的是提供了一种利用上述微生物发酵培养基发酵复合菌种制备得到的兔用微生物中药制剂，所述复合菌种固态发酵菌种为：CGMCC保藏号为3.15337的光滑青霉、CGMCC保藏号为4.6828的草生链霉菌、CGMCC保藏号为1.12934的植物乳杆菌、CGMCC保藏号为1.3971的嗜热链球菌和CGMCC保藏号为1.2239的兔双歧杆菌，原菌液的接种量为4%，各菌种的接种比例是：光滑青霉15～25%，草生链霉菌15～25%，植物乳杆菌15～25%，嗜热链球菌15～25%，兔双歧杆菌15～25%。

本发明的第三个目的是提供了上述兔用微生物中药制剂的制备方法，包括以下步骤：

1）采用复合菌种固态发酵菌种发酵，发酵菌种为：CGMCC保藏号为3.15337的光滑青霉、CGMCC保藏号为4.6828的草生链霉菌、CGMCC保藏号为1.12934的植物乳杆菌、CGMCC保藏号为1.3971的嗜热链球菌和CGMCC保藏号为1.2239的兔双歧杆菌，原菌液的接种量为4%，各菌种的接种比例是：光滑青霉15～25%，草生链霉菌15～25%，植物乳杆菌15～25%，嗜热链球菌15～25%，兔双歧杆菌15～25%；

2）将提纯后的光滑青霉和草生链霉菌的原菌液，从斜面接入三角瓶中，接种量为4%，振荡培养48小时；

3）将提纯后的植物乳杆菌、嗜热链球菌和兔双歧杆菌的原菌液，从斜面接入克氏瓶中，接种量为4%，温度控制34℃，培养24小时；

4）发酵中药培养基采用红糖、中药组分，各成分重量百分比及加入比例是：红糖1～2%，中药组分55～60%，余量为水，PH值自然，加热至34℃时接种，接种量为1～2% ；

5）发酵条件的控制：采用厌氧发酵，温度34℃，发酵时间48～72小时，当PH值达到4.0时，即为发酵终点，在阳光房中晒干即可得到兔用微生物中药制剂。

进一步的，上述的兔用微生物中药制剂的制备方法，所述步骤1）中，各菌种的接种比例是：光滑青霉20%，草生链霉菌20%，植物乳杆菌20%，嗜热链球菌20%，兔双歧杆菌20%。

本发明所述的中药组分各药物的功能为：穿心莲性味苦寒、无毒,其主要作用是清热解毒、凉血消肿。其活性成分穿心莲内酯、新穿心莲内酯、高穿心莲内酯都有很好的抗菌抗病毒作用；黄芪味甘，性微温；归脾、肺经。主要成分有黄芪多糖、黄芪苷以及多种黄酮。主要功效是补气固表，托毒排脓，利尿，生肌。用于气虚乏力、久泻脱肛、自汗、水肿、子宫脱垂、慢性肾炎蛋白尿、糖尿病、疮口久不愈合；大青叶味苦，性寒。归肝，心，胃，脾经。主要用于用于热病高热烦渴；神昏；斑疹；吐血；衄血；黄疸；泻痢；丹毒；喉痹；口疮；痄腮。虎杖味微苦，性微寒，利湿退黄，清热解毒，散瘀止痛，止咳化痰。用于湿热黄疸，淋浊，带下，风湿痹痛，痈肿疮毒，水火烫伤，经闭，症瘕，趺打损伤，肺热咳嗽。这四种中药组成方剂，具有很好的治疗清热解毒，除湿化滞的功效。

本发明，所述的各种菌的原菌种，均从农业微生物菌种保藏管理中心（ACCC）引进，确保了各菌种的存活和质量。

本发明的有益效果是：本发明优选多种菌种对复方穿虎散进行发酵，发酵过后的复方穿虎散中的纤维素大量降解，有效成分得以释放，也产生了大量小分子化合物，更有利于兔子肠道吸收，同时扩繁的菌群可以辅助兔子的肠道菌群，有效抑制肠道有害菌群的繁殖，达到治疗疾病的目的，此种制剂是一种完全取代抗生素的无药残、抗菌抗病毒效果极佳的中药微生态制剂；由于复方穿虎散和复合菌的协同作用，因此复合菌发酵复方穿虎散生产的兽药其抗菌抗病毒能力远远超过其它同类产品。

具体实施方式

实施例1：

选取药剂中各原料的优选配比是：穿心莲90份、黄芪30份、大青叶40份、 虎杖40份。

发酵复方穿虎散的微生物原种的培养及种子液的培养：将提纯后的光滑青霉和草生链霉菌的原菌液，从斜面接入三角瓶中振荡培养48小时，将提纯后的植物乳杆菌、嗜热链球菌和兔双歧杆菌的原菌液，从斜面接入克氏瓶中，温度控制在34℃，培养24小时，原菌液接种量为4%，按下述比例接种：

光滑青霉 20％

草生链霉菌 20％

植物乳杆菌 20％

嗜热链球菌 20％

兔双歧杆菌 20％

发酵中药培养基的制备方法：

红糖2%，中药组分60%，余量为水，PH值自然，温度加热至34℃接种，接种量为2% 。

发酵条件的控制

采用厌氧发酵，温度34℃，发酵时间48小时，当PH值达到4.0时，即为发酵终点。在阳光房中晒干即可。

实施例2：

选取药剂中各原料的优选配比是：穿心莲90份、黄芪30份、大青叶40份、 虎杖40份。

发酵复方穿虎散的微生物原种的培养及种子液的培养：将提纯后的光滑青霉和草生链霉菌的原菌液，从斜面接入三角瓶中振荡培养48小时，将提纯后的植物乳杆菌、嗜热链球菌和兔双歧杆菌的原菌液，从斜面接入克氏瓶中，温度控制在34℃，培养24小时，原菌液接种量为4%，按下述比例接种：

光滑青霉 25％

草生链霉菌 25％

植物乳杆菌 15％

嗜热链球菌 15％

兔双歧杆菌 20％

发酵中药培养基的制备方法：

红糖1.5%，中药组分55%，余量为水，PH值自然，温度加热至34℃接种，接种量为2% 。

发酵条件的控制

采用厌氧发酵，温度34℃，发酵时间48小时，当PH值达到4.0时，即为发酵终点。在阳光房中晒干即可。

实施例3：

选取药剂中各原料的优选配比是：穿心莲90份、黄芪30份、大青叶40份、 虎杖40份。

发酵复方穿虎散的微生物原种的培养及种子液的培养：将提纯后的光滑青霉和草生链霉菌的原菌液，从斜面接入三角瓶中振荡培养48小时，将提纯后的植物乳杆菌、嗜热链球菌和兔双歧杆菌的原菌液，从斜面接入克氏瓶中，温度控制在34℃，培养24小时，原菌液接种量为4%，按下述比例接种：

光滑青霉 15％

草生链霉菌 15％

植物乳杆菌 25％

嗜热链球菌 25％

兔双歧杆菌 20％

发酵中药培养基的制备方法：

红糖2%，中药组分55%，余量为水，PH值自然，温度加热至34℃接种，接种量为2% 。

发酵条件的控制

采用厌氧发酵，温度34℃，发酵时间72小时，当PH值达到4.0时，即为发酵终点。在阳光房中晒干即可。

实施例4：

体外抑菌效果测定

材料:大肠埃希氏菌ATCC 25922、金黄色葡萄球ATCC 25923、营养琼脂培养基、普通肉汤培养基、复方穿虎散、实施例1制备所得发酵型中药复方穿虎散。

方法:取复方穿虎散及发酵型中药复方穿虎散分别加10倍(重量倍)水浸润2h，文火煎煮30min，取药液，反复煎煮3次，将3次药液合并，浓缩至0.4g/ml，于121℃灭菌20min。

取大肠埃希氏菌ATCC 25922、金黄色葡萄球菌ATCC 25923接种于普通琼脂平板上，37℃培养18h，挑取单个菌落接种于普通肉汤培养基，37℃培养16h，取0.1ml菌液加100ml灭菌肉汤将原菌液稀释成10⁶ cfu/ml作为稀释菌液。将12支灭菌空试管分成2组(复方穿虎散试验组和发酵型复方穿虎散组)，每组6支。先将试管中全部加入1ml稀释菌液，再在每一组的第一支试管中加入复方穿虎散提取液或发酵型复方穿虎散提取液各1ml，混匀后取1ml加入第二支试管中，依次倍比稀释至第五支，药物浓度分别为0.2g/ml、0.1 g/ml、0.05 g/ml、0.025 g/ml、0.0125 g/ml，第六支作为空白对照。将试管密封，置于37℃培养18h后观察结果，见下表1，显示为试验样品对常见细菌的最小体外抑菌浓度(g/ml)。

表1

样品	大肠杆菌	金黄色葡萄球菌
			复方穿虎散	0.10	0.20
发酵型复方穿虎散	0.01	0.02

由表1可以看出，本发明发酵型复方穿虎散与原散剂相比，需要更低的浓度即可达到抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的效果，由此可见微生物发酵处理能够增强中草药的药效，显著提高了其体外抑菌活性。

实施例5：

2018年10月，绵阳市方水镇王某养殖肉兔190只，46日龄，兔群采食量下降，出现发病情况，病兔精神萎顿，食欲废绝，排稀糊状或水样粪，散发恶臭，且混有黏液、脱落的黏膜和未消化完全的草料，***和后肢周围沾污稀粪；腹部蜷缩，胃、肠有不同程度的臌气，肠音响亮；体温基本正常，仅有少数病例可上升到41℃左右。

取本发明实施例1制备所得发酵型中药复方穿虎散200克拌料50斤，连用5天，5天后兔群采食量迅速上升，粪便颜色变黑，稀粪消失。兔群恢复正常。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。